Myocardinfarct en Functional Outcome Assessment in Pigs

Summary

Dit protocol beschrijft varkens myocardiaal infarct (MI)-model met een 90 min gesloten borst coronaire ballon occlusie van de LAD (LAD), gevolgd door reperfusie. Bovendien is het protocol voor meerdere uitkomstparameters, zoals hartfunctie, hemodynamica, microvasculaire weerstand en infarctgrootte, worden ook gepresenteerd.

Abstract

Introductie van nieuw ontdekte Cardiovascular Therapeutics in first-in-man proeven is afhankelijk van een strikt gereguleerd ethische en juridische roadmap. Een belangrijke voorwaarde is een goed begrip van alle verkregen in een groot dier model dat op geldige wijze weerspiegelen de menselijke scenario van myocardinfarct (MI) veiligheid en de efficiëntie. Varkens worden veel gebruikt in dit verband aangezien hun cardiale grootte, hemodynamica en coronaire anatomie dicht bij die van mensen. Hier presenteren we een effectief protocol volgens de varkens MI model met een gesloten kist coronaire ballon occlusie van de LAD (LAD), gevolgd door reperfusie. Deze benadering is gebaseerd op 90 min van myocardiale ischemie, induceren grote linkerventrikel infarct van de voorste, septum inferoseptal wanden. Verder presenteren we protocollen voor verschillende uitkomstmaten die een breed scala van informatie op het hart te bieden, zoals cardiale systolische en diastolische functie, hemodynamics, coronaire stroomsnelheid, microvasculaire weerstand, en de grootte van het infarct. Dit protocol kan gemakkelijk worden aangepast om te voldoen aan studeren specifieke eisen voor de validatie van nieuwe cardioregenerative Biologics in verschillende stadia (dwz direct na de acute ischemische belediging, in de subacute instelling of zelfs in de chronische MI eenmaal littekenvorming is afgerond). Dit model biedt dus een nuttig hulpmiddel om translationeel MI studeren, latere nadelige remodeling, en het potentieel van nieuwe cardioregenerative agenten.

Introduction

Acuut myocardinfarct (AMI) en de lange-termijn gevolgen, zoals chronisch hartfalen (CHF) een diepgaande impact prognose voor de patiënt en de kwaliteit van het leven, laat staan ​​de hoge kosten beperkingen opgelegd aan onze beschikbare middelen in de gezondheidszorg ^1. De prevalentie van CHF in de westerse wereld wordt geschat op 1-2%, waarvan ~ 60% van de gevallen zijn het gevolg van AMI als hoofdoorzaak ^2. In de Verenigde Staten alleen al ongeveer 5,7 miljoen patiënten lijden aan CHF goed voor ongeveer $ 30 miljard aan jaarlijkse kosten voor gezondheidszorg in 2008, met een voorspelde drievoud in de kosten oplopen tot $ 97000000000 per jaar in 2030 ^1. Samen vormen deze cijfers een sterk argument voor de ontwikkeling van nieuwe cardioregenerative behandelingen die, voor een snelle vertaling, rekenen op een reproduceerbare en betrouwbare groot dier myocardinfarct model dat nauwkeurig bootst de menselijke scenario.

Varkens (Sus scrofa) worden steeds vaker gebruikt in cardiovascular onderzoek voor farmacologische en toxicologische testen ^3. Een van de eigenschappen die verantwoordelijk zijn voor dit succes als een translationele research tool is hun gelijkenis in hartfunctie en anatomie van het menselijk hart ^4,5. Zo hebben varkenshartklep tot lichaam gewichtsverhouding, cardiale grootte en coronaire anatomie distributie alle getoonde opmerkelijk vergelijkbaar mens ⁴ zijn. Bovendien hebben cardiomyocyt metabolisme, elektrofysiologische eigenschappen en reactie op een ischemie zoals AMI gemeld aan sterke overeenkomst met de humane situatie ^6,7 vertonen. Uiteindelijk, aan de hierboven beschreven criteria voldoen, een gestandaardiseerd MI-protocol dat produceert robuuste en duurzame MI voor het testen van onderzoeks nieuwe drugs (IND) nodig. Hier presenteren we zo'n standaardmodel dat een 90 min gesloten borst coronaire ballon occlusie van de LAD (LAD) gevolgd door reperfusie gebruikt, waardoor er reproduceerbaar in myocardialefarction voor de anteroapical, septum inferoseptal wanden van de linker ventrikel.

Protocol

Alle in vivo experimenten werden uitgevoerd in overeenstemming met de Gids voor de Zorg en gebruik van proefdieren opgesteld door het Institute of Laboratory Animal Resources. Experimenten werden goedgekeurd door de lokale Dierproevenbesluit Comite.

1. Medicatie, Anesthesie, veneuze Access en intubatie

1. Medicatie en Anesthesie
   1. Premedicatie
      1. Start amiodaron 150 mg / kg 10 dagen voor chirurgie om aritmieën te voorkomen. Verder amiodaron in een dosis van 100 mg / kg op de dag van de procedure tot dag 28. Verlaag de dosering tot 50 mg / kg op dag 29 en tot het einde van de studie.
      2. Start anti-bloedplaatjes therapie, 1 mg / kg clopidogrel vanaf dag 3 voor de operatie en 4,5 mg / kg acetylsalicylzuur 1 dag voor de operatie. Doorgaan clopidogrel 1 mg / kg per dag en acetylsalicylzuur 80 mg / dag.
      3. Start pijnmedicatie 1 dag voorafgaand aan de operatie door Fentanyl pleister, 25ug / uur gedurende ~ 70 kg varkens. Voortzetten van het gebruik van Fentanyl pleisters gedurende 24 uur post-operatief een adequate pijnmedicatie garanderen. Ook dagelijks controleren op tekenen van mogelijke ongemak (bijvoorbeeld gedrag, ademhaling, lichaamshouding, mobiliteit enz.) pijnstillers verhogen.
      4. Snel het dier gedurende 12 uur, behouden onbeperkte toegang tot water.
   2. Anesthesie
      1. Om onnodige stress en ongemak te voorkomen, verdoven het varken in zijn stal door intramusculaire injectie van een mengsel van midazolam 0,4 mg / kg ketamine 10 mg / kg, en atropine 0.014 mg / kg.
      2. Verkrijgen veneuze toegang cannuleren het oor ader met een 18 G iv canule. Laten verdoofd door intraveneuze toediening van 5 mg / kg sodiumthiopental en geef 1000/100 mg amoxicilline / clavulaanzuur om infecties te voorkomen. Het varken zal 1000/100 mg amoxicilline / clavulaanzuur ontvangen de dag na de operatie als behandeling met antibiotica.
      3. Intubate het varken met behulp van een endotrachpaling buis (maat 8,5 voor varkens met een gewicht van ~ 70 kg). Indien nodig voeren ballon-ventilatie met een frequentie van 12/min en transporteren het varken naar de operatiekamer.
      4. Bij aankomst op de operatiekamer, onmiddellijk beginnen met mechanische positieve druk ventilatie met FiO ₂ 0.50, 10 ml / kg ademvolume, en een frequentie van 12/min onder blijft capnografie.
      5. Begin evenwichtige anesthesie voortgezet door intraveneuze infusie van een combinatie van midazolam 0,5 mg / kg / uur, sufentanil 2,5 microg / kg / uur en pancuroniumbromide 0,1 mg / kg / uur. Tijdens de gehele procedure, permanent toezicht ECG, bloeddruk, temperatuur en capnografie diepte van anesthesie meten. Als bijvoorbeeld een sinustachycardie aanwezig is, controleer dan pijnstillers en / of anesthesie toereikend.
      6. Bezielen 4.3 mg / kg amiodaron in venofundin 6% intraveneus 500 ml.
      7. Monitor hartritme door een 5 leidt ECG.
      8. Scheren en reinigen van de hals en achterste limb gebied.
      9. Plaats een Foley katheter.

2. Transthoracale Echocardiografie

1. Plaats het dier in de juiste zijligging. In landras varkens zoals Dalland varkens, kan alleen parasternale uitzicht (lange en korte as) worden verkregen. Door de vorm van de thorax, apicale aanzicht verkrijging niet haalbaar.
2. Orient en het verkrijgen parasternale lange as weergave in 2D (B-mode). Bepaal de LV afmetingen aan het eind diastole en eind systole in M-modus.
3. Draai de echo sonde 90 ° met de klok mee met behoud van haar parasternale positie om de LV korte views as te verwerven op het niveau van de mitralisklep, papillairspier en apex. De korte as aanzicht van de papillaire spier en de apex kan plaatsing van de echo-probe zijn een of twee intercostale ruimten onderste opzichte van de positie van de mitralisklep korte as weergeven.

3. Chirurgische Voorbereiding en Vascular Access

1. Disinfect de chirurgische gebieden met jodium 2% en steriel chirurgisch afdekmateriaal aan de niet-steriele delen van het varken te dekken.
2. Voeg een mediale incisie in de nek. Passeer de linea alba om spierschade te minimaliseren en botweg de aanpak van de halsslagader en de interne halsader naast de luchtpijp.
3. Isoleren van de halsslagader en de interne halsader zorgvuldig. Zorg ervoor dat de nervus vagus is onbeschadigd. Plaats Vicryl 2-0 hechtingen rond beide schepen om controle vat krijgen. Bereiken arteriële toegang cannuleren de interne halsslagader met een 8F schede met de Seldingertechniek. Bevestig de mantel om de slagader, zorg ervoor dat de slagader niet volledig afgesloten door de hechtdraad. Veneuze toegang kan worden verkregen door cannuleren de halsader met een 9F schede ook met behulp van de Seldingertechniek. Alvorens de schede zorg ervoor dat de ader wordt afgebonden. Alternatief kan de femorale slagader ook voor arteriële.
4. Dien 100 IE / kg heparine onmiddellijk na het plaatsen van de mantelhs trombusvorming remmen.
5. Voor een stabiele en constante bloeddruk meting canule een van de kleinere slagaders in een van de achterpoten door een kleine incisie boven de slagader. De slagader is te vinden net onder de huid, kunnen pulsaties worden gevoeld door de huid. Isoleer de slagader van de omringende weefsel. Plaats 2 Vicryl 2-0 hechtingen rond het vat, 1 proximale en distale 1. Ligeren de distale zijde en plaats een 18 G iv canule en zet strak sluit de druk.

4. Invasieve druk Volume Loop Analyse

1. Plaats een Swann-Ganz katheter (SG) via de eerder geplaatste schede in de interne halsader.
2. Sluit een cardiac output apparaat om het deel van de SG die culmineert in het proximale lumen.
3. Injecteer 5 ml 0,9% zoutoplossing in het proximale lumen van de SG en meet cardiac output; Herhaal dit drie keer en het gemiddelde van de indices.
4. Kalibreer de PV-installatie met behulp van de eerderbepaald hartminuutvolume.
5. Plaats de 7F conductantiecatheter via de halsslagader in de linker ventrikel onder fluoroscopische begeleiding.
6. Selecteer het grootste segment in de LV voor volume metingen en het uitvoeren van een baseline scan onder apneu.
7. Na volume kalibratie is voltooid, op te nemen 10-15 beats onder apneu.
8. Verwijder de SG en plaats een ballonkatheter in de inferieure vena cava ter hoogte van het membraan onder fluoroscopische begeleiding.
9. Voer preload reductie door het opblazen van de ballon onder apneu en noteer de bijbehorende PV-Loops.

5. Intracoronary Druk en Flow Measurement

1. Verdun nitroglycerine in een concentratie van 100 ug / ml en verdun adenosine in een concentratie van 30 ug / ml.
2. Plaats een 8F geleidingskatheter in het ostium van de linker kransslagader.
3. Plaats de gecombineerde druk / debiet draad in het proximale gedeelte van de linker coronaire artery.
4. Dien 200 ug nitroglycerine intracoronaire en normaliseren het distale druk (Pd), gemeten door de draad, de arteriële druk.
5. Plaats de draad in het midden gedeelte van de LAD (LAD).
6. Start nulmeting druk en debiet. Laten hyperemie door toediening van 60 ug adenosine intracoronaire spoelen met 2 ml zoutoplossing en meet hyperemic druk en debiet. Wacht tot de stroom te herstellen tot de uitgangswaarden. Herhaal de meting twee keer.
7. Bezielen ander 200 ug nitroglycerine intracoronary en herhaal de stappen 1.6 en 1.7 voor de linker circumflex kransslagader.

6. Inductie van MI

1. Plaats de defibrillatie intracardiale katheter in de rechter ventrikel via de veneuze mantel. Het distale elektroden moet in de top van de ventrikel, de proximale elektroden in het atrium en / of superieure vena cava. Sluit de katheter aan de defibrillator en zet deze op 50J.
2. Meet de diameter van de LAD distaal van de tweede diagonaal (D2) in AP en LAO 30 ° weergeven.
3. Kies een angioplastie ballon met een doorsnede volgens de diameter van de LAD distaal van het D2 (figuur 1).
4. Plaats een voerdraad door de geleidekatheter distaal in de LAD.
5. Vooraf de ballonkatheter over de voerdraad. Plaats de ballon distaal van de D2.
6. Dien 30 IE / kg heparine.
7. Blaas de ballon tot de druk overeenkomt met de juiste diameter van de LAD.
8. Controleer totale occlusie van de LAD door angiografie (figuur 1).
9. Bedek het steriele werkveld en de wond in de hals met steriele doeken doeken. Bevrijd de borst van elke dekking aan het beschikbaar voor hartmassage of transthoracale defibrillatie maken.
10. Controleer de druk in de ballon tijdens de volgende 90 min en de druk indien nodig herstellen.
11. Bij ventriculaire fibrillatie:
    1. Onmiddellijk beginnen met hartmassage met een frequentie van 100/min.
    2. Dien 300 mg amiodaron intraveneus als een snelle bolus (~ 1 min).
    3. Start intracardiale defibrillatie, geven schokken van 50 J.
    4. Na 5 mislukte schokken, start hartmassage. Verander intracardiale defibrillatie te transthoracale defibrillatie en schokken met 150 J. In het geval van onsuccesvol shock, veranderen naar 200 J.
    5. Zo nodig op een andere dosis van 150 mg amiodaron en / of 1 mg adrenaline. Herhaal adrenaline tweemaal met tussenpozen van 3-5 minuten, indien nodig.
    6. Doorgaan hartmassage, afgewisseld met transthoracale defibrillatie

Afwerking van de chirurgische procedure (voor Long Term Follow Up)

1. Na 90 min controle door angiografie als de LAD is nog steeds volledig afgesloten.
2. Dien eens 30 IE / kg heparine en leeglopen van de ballon. Controleer voor reperfusie. Verwijder de leeggelopen ballon met de guiding katheter uit de carotis schede.
3. Verwijder voorzichtig de arteriële sheath en klem de halsslagader onmiddellijk met een anastomose klem (Figuur 1). Gebruik blijft steken (6-0 Prolene) de halsslagader sluiten. Verwijder de klem en controleer op lekkages.
4. Verwijder de interne defibrillatie katheter en verwijder de huls van de interne halsader. Ligeer proximaal van de huls binnenkomst.
5. Sluit de subcutis en de huid van de nek in twee lagen met behulp van 2-0 Vicryl.

7. Cardiac Magnetic Resonance Imaging

1. Plaats het dier op de MRI tafel hoofd eerst in rugligging onder continue verdoving.
2. Plaats een gewijd phased array cardiale coil over de borst van het dier.
3. Voor het plan te krijgen scout afbeeldingen in korte as en uitzicht lange as met twee kamers.
4. Acquire-ECG gated steady-state vrije precessie (SSFP) cine van korte as (van top naar de basis van LV) en twee chamber uitzicht lange as.
5. Late gadolinium enhancement (LGE) kan worden verkregen met behulp van een inversie herstel 3D-turbo-gradiënt-echo-techniek 15 minuten na dubbele dosis iv bolus injectie van een gadolinium gebaseerd contrastmiddel.
6. Voer offline analyse met gevalideerde software functionele parameters. Beoordelen linker ventrikel ejectiefractie (LVEF), LV massa, eind diastolisch volume, eind systolisch volume, slagvolume, het hartminuutvolume en litteken massa.

8. Einde van de studie en grootte van het infarct

1. Aan het eind van de studie, volgen protocollen 1-5 en 7 te volgen metingen verkrijgen.
2. Maak een mediane 30-40 cm incisie net onder de suprasternal inkeping tot een punt net onder de zwaardvormig proces. Vooraf door de linea alba tot aan het borstbeen. Splits de zwaardvormig en gebruik Klinkenberg schaar om het achterste borstbeen te scheiden van het hartzakje met de nodige voorzichtigheid. Na gebruik van de schaar bot blijven verdere scheiding. Voer een sternotomy by bijvoorbeeld met een hamer en Lebsch mes. Beenmerg bloeden wordt geminimaliseerd door te wrijven bot was op het merg. Open de thorax met een borstbeen oprolmechanisme.
3. Voer de 3e pleuraholte en zoek de inferieure vena cava in het mediastinum.
4. Humaan euthanaseren van het dier door het snijden van de inferieure vena cava onder diepe narcose. Verwijder bloed met een zuig-apparaat. Plaats een 9 V batterij op de top om ventriculaire fibrillatie induceren.
5. Na excisie van het hart, snijden de rechter en linker hartkamer in vijf plakken van basis tot top en geïncubeerd in 1% trifenyl-tetrazoliumchloride opgelost in 0,9% zoutoplossing bij 37 ° C gedurende 15 minuten. Vervolgens was de plakjes in 0,9% zoutoplossing en fotograferen de segmenten van beide kanten.

Representative Results

Sterfte en infarctgrootte

In ons centrum, van de 32 varkens (Female Dalland Landrace, 6 maanden oud, ~ 70 kg) die werden onderworpen aan deze MI protocol, vijf (15,6%) overleden als gevolg van refractaire ventriculaire fibrillatie tijdens ischemie. Dit protocol maakt een infarct die ongeveer 10-15% van de linker ventrikel, in het anteroseptaal, septum inferoseptal wanden (Figuur 2A). Als seriële-invasieve evaluatie van infarctgrootte gerechtvaardigd is, kan late gadolinium enhancement (LGE) op CMR worden gebruikt om de niet-levensvatbaar infarct gebied in de tijd (figuur 2B) volgen.

Hartfunctie en Remodeling

Vier weken na MI, moet de mondiale en regionale parameters die de hartfunctie worden verminderd in vergelijking met gezonde uitgangswaarden. Specifiek dienen LV ejectiefractie (LVEF) dalen tot ongeveer ~ 35-45% vier weken post-MI. Naast globale systolische functie,verscheidene parameters die na MI negatieve remodeling kan ook worden gemeten, zoals LV morfologie en diameters met CMR en echocardiografie (Figuren 3A en 3B). Vier weken na MI, een toename eind diastolisch volume (EDV) als teken van ongunstige remodeling kan verwachten (Figuren 3A en 3B).

Coronaire flow en druk parameters

Angiogenese en vorming van nieuwe haarvaten worden vaak beschouwd als belangrijke behandeldoelen bij ischemische hartziekten ^8. Beoordeling van microvasculaire weerstand indirect worden gebaseerd op de gecombineerde meting van intracoronaire druk en stroomsnelheid. Representatieve druk en debiet snelheidsmeting onder normale omstandigheden en maximaal hyperemie wordt getoond in figuur 4. Vier weken na MI, moet de hyperemic microvasculaire weerstand verhoogd in de infarct gerelateerde kransslagader (LAD) vergelekende uitgangssituatie ^8.

. Figuur 1 MI model gebaseerd op LAD occlusie ballon (A) standaard chirurgische uitrusting met: 1.) Handdoek klemmen; 2) muggen; 3) ontleden tang; 4) ronde container; 5) naaldhouders (fijn en grof); 6) Klinkenberg schaar; 7) dissectieschaar (rechte en gebogen); 9) tang (De-Bakey, fijn en grof); 10) slangklem; 11) anastomose clamp; 12) gazen; 13) elektrochirurgische potlood; 14) scalpel houder; 15) Dreesman (zuiging); 16) oprolmechanisme; 17) lamphouders. (B) Linker voorafgaande schuine fluorescopische uitzicht op de LAD en de LCX. (C) Na het visualiseren van de tweede diagonale tak, de positie van de twee radio-opake markers (zie kader, zwarte pijlpunten) van de ballon net distaal van de D2. Inflate en ervoor zorgen dat de coronaire bloedstroom succes wordt geblokkeerd door contrast injectie (zie asterisk). Intracardiale defibrillator lood is te zien in de rechter ventrikel (zie witte pijlpunt). LAD geeft LAD; LCX duidt linker circumflex slagader; LAO geeft linker anterior schuin oog; AP geeft anterior posterior uitzicht; D1 geeft eerste diagonale tak; D2 duidt tweede diagonale tak. Klik hier voor grotere afbeelding.

Figuur 2. Infarctgrootte na MI. (A) 90 min ballon occlusie van de LAD tot uitgebreide myocardiale beschadiging en littekenvorming (witte kleur), gevisualiseerd door kleuring TTC 1 maand opvolging.(B) Schematische infarct verdeling laat zien dat het infarct is gelegen in de voorste, anteroseptaal en inferoseptal segmenten van het hart. (C, D) Korte en lange as late gadolinium versterkte CMR beelden tonen de uitgebreide infarct litteken (wit signaal, zie zwarte pijlpunten) gelokaliseerd in het voorste, anteroseptaal en inferoseptal segmenten van het hart. LGE-CMR duidt late gadolinium versterkte cardiale magnetische resonantie. Schaalbalk duidt 3 cm. Klik hier voor grotere afbeelding.

Figuur 3. Evaluatie van de hartfunctie in ischemische MI modellen. (A) Vertegenwoordiger CMR cine-loop beelden aan het eind diastole en eind systole tonen functionele beperkingen van de infArct litteken segmenten. (B) M-Mode beeld van 2D parasternale lange as door echocardiografie, waaruit LV dilatatie (toename van LVIDd) 1 maand na MI, evenals functionele beperkingen (afwezigheid van septum verdikking). EDV duidt eind diastolisch volume; ESV duidt eind systolisch volume; LVIDd duidt linker ventrikel inwendige doorsnede van diastole en LVIDs duidt linker ventrikel inwendige doorsnede van systole. Klik hier voor grotere afbeelding.

Figuur 4. Intracoronary druk en stroomsnelheid afgeleide parameters. Intracoronary druk en stroomsnelheid opnamen met behulp van de Combowire tonen (A) referentiewaarden voorafgaand aan MI met een hoge response om hyperemie (zwarte pijlpunt). (B) 1 maand na MI, het infarct gerelateerde arterie (LAD) heeft een verminderde hyperemic reactie in coronaire stroomsnelheid (zwarte pijlpunten). Dientengevolge, druk en stroomsnelheid afgeleide parameters (HMR) of stroomsnelheid reserve (CFR) worden verminderd vergeleken met de basislijn. BAPV geeft basale gemiddelde pieksnelheid; pAPV duidt piek gemiddelde pieksnelheid; CFR duidt coronaire stroom reserve; HMR duidt hyperemic microvasculaire weerstand. Klik hier voor grotere afbeelding.

Figuur 5. Overzicht van de verschillende opzet van de studie. (A) Schematische weergave van meerdere mogelijke studie ontwerpen voor onderzoek nieuwe medicijnen te valideren(IND) in verschillende stadia van MI met deze LAD MI varken model. Afhankelijk van de gekozen fase van MI die wordt onderzocht, kan functionele analyse juist vóór de toewijzing behandeling als de uitgangswaarde en de beoordeling van het gebied in gevaar worden uitgevoerd. Klik hier voor grotere afbeelding.

Discussion

Intracoronaire ballon occlusie van de LAD verschaft een reproduceerbare en consistente MI preklinisch model bij varkens die gebruikt kunnen worden om de veiligheid en werkzaamheid van nieuwe cardiovasculaire therapieën die nauw bootst de menselijke situatie te onderzoeken. Zoals getoond in figuur 5, de gepresenteerde ischemie / reperfusie hartinfarctmodel bepaalt het platform dat verder kan worden aangepast aan verschillende fasen van MI en post-MI remodellering onderzoeken terwijl de oorspronkelijke ischemie / reperfusie schade is voor beide.

Het succes van het beschreven protocol hier beschreven is afhankelijk van het myocardiale ischemie als de meest kritische fase van het protocol. Correcte plaatsing van de ballon distaal van de tweede diagonale tak van de LAD is van cruciaal belang voor het bereiken van voldoende grootte van het infarct en tegelijkertijd een hoog overlevingspercentage. Op basis van dit MI-model, werd een ~ 15% sterfte waargenomen, terwijl uitgebreide midden en apicale segmenten van de voorste, septum en mindeof wanden werden geïnfarceerde zoals op CMR TTC kleuring (Figuren 2A en 2B). De duur van de ischemie kan worden afgestemd op de gewenste infarctgrootte. Hoewel we Landrace varkens gebruikt in dit protocol, minivarkens (dwz Göttingen minivarkens) vereisen doorgaans een langere looptijd van myocardiale ischemie (bijv. 150 min occlusie).

Uitkomstanalyse in preklinische en klinische studies MI is vaak gebaseerd op de LVEF. Hoewel de lagere LVEF is stevig in verband gebracht met een verhoogd risico op cardiovasculaire mortaliteit, het blijft afhankelijk van hemodynamische parameters zoals preload ^9. Ongetwijfeld, gezien het feit dat gemiddeld slechts 10-15% van de LV is geïnfarceerde, verschillende conceptuele en praktische beperkingen gerelateerd zijn aan LVEF zijnde een globale maat van LV systolische functie in plaats van rekening houdend met plaatselijke verbetering van ^10. Daarom is de voorgestelde maatregelen van de uitkomsten die in dit model licht werpen op de verschillende aspecten van MI en post-MI remodeling waardoor de onderzoekers de middelen om de doeltreffendheid van nieuwe therapieën op meerdere niveaus nauwkeurig te beoordelen.

De vertaling optimaliseren van preklinische modellen naar klinische praktijk, kiezen we gebruik van grote varkens in plaats van varkens. Hemodynamische metingen medicijndosering en chirurgische apparaten kunnen eenvoudig worden uitgewisseld met klinische praktijk. Vergeleken met minivarkens, grote varkens krijgen relatief veel gewicht. Dit kan leiden tot een probleem in de lange-termijn follow-up, met betrekking tot de vergelijkbaarheid van seriële resultaten. Vrouw Dalland Landrace varkens wegen ongeveer 70 kg op een leeftijd van 6 maanden. Overvloedige gewichtstoename tijdens de follow-up periode te voorkomen, worden gehouden dieren op een dieet. Varkens ontvangen 750 g maat lage calorie voedsel (bevattende: eiwit 15,6%, vet 2,0%, vezels 14,8%, 8,8% as, 0,9% calcium, fosfor 0,57%, 0,29% magnesium en kalium 0.18%) tweemaal per dag krijgen ongeveer 10 kg gewicht in 4 weken.

e_content "> McCall en collega's hebben eerder een soortgelijk protocol voor myocardinfarct gepubliceerd in varkens ^11. aanzienlijke overlap bestaat tussen dit protocol en die van hen, het benadrukken van de voorkeur voor de LAD in plaats van de linker circumflex arterie (LCX) of de rechter kransslagader (RCA ). In onze ervaring, is er een mindere mate van infarct grootte van de totale linker ventrikel met behulp van de LCX terwijl de RCA infarct gaat gepaard met een hogere kans op ongewenste geleidingsstoornissen (dwz disfunctie van de sinusknoop, AV-knoop dysfunctie). Een verschil tussen de twee protocollen betrekking op het gebruik van verhoogde farmacologische remming van bloedplaatjes in dit protocol, zoals we hogere no-reflow gebaseerd op trombusvorming als gevolg van 90 min van hemostase in de verstopte kransslagader hebben waargenomen. Deze waarneming is in overeenstemming met bekend hypercoagulabiliteit waargenomen bij varkens ^12. Hoewel McCall voorgesteld met behulp van een enkele, hoge dosis, bolus heparine, this protocol gebaseerd op het gebruik van heparine in meerdere lagere doseringen verspreid over de operatie om trombotische complicaties te minimaliseren.

Samengevat, presenteren we een varken MI model dat onderzoekers in staat stelt gebruik te maken van een effectieve, reproduceerbare en bovenal praktische grote diermodel voor menselijke ziekte om nieuwe therapieën te bestuderen als een essentiële stap op weg naar een first-in-man klinische trial.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.9% Saline	Braun
6-0 Prolene	Ethicon
Acetylsalicylic acid	Ratiopharm		80 mg
Adenosine	Apotheek UMCU		3 mg/ml
AdVantage PV loop system	Transonic Science
Amiodarone	Cordarone I.V. (Sanofi)
Amiodaron HCl (PCH)
Amoxicilline/clavulaanzuur	Sandoz		500/50 mg
Atropinesulfate	PCH		0.5 mg/ml
Bone Marrow Wax	Syneture
Cardiac Defibrillator	Philips
Clopidogrel	Apothecon B.V.		Clopidrogel 75A
Contrast agent	Telebrix
Endotracheal tube	Covidien
Fentanyl patch	Durogesic (Janssen-Cilag)		25 μg/hr
Fogarty catheter	Edwards Life Sciences
Gadolinium	Gadovist
Guidewire	Abbott
Heparin	Leo
I.V. cannula	Abbocath (Hospira Venisystems)
Iodine	Jodiumtictuur 2% (Eurovet)
Ketamine	Narketan 10 Vétoquinol
Midazolam	Actavis		5 mg/ml
Nitroglycerin	Pohl Boskamp		1 mg/ml
Pancuronium bromide			2 mg/ml
Seldinger vascular sheath 8F	Arrow
Sufentanil	Sufentanil-Hameln		50 μg/ml
Swann-Ganz catheter	Criticath ref 680078 (Argon)
Synolux	Pfizer		250 mg
Tetra-polar catheter	Transonic Science
Thiopental	Inresa		0.5 g
Triphenyl-tetrazolium chloride	Merck
Venofundin	Braun
Vicryl 2-0	Ethicon
Volcano ComboMap system	Volcano