Summary
आहार वसा की मात्रा को प्रभावित करती है ऊर्जा खपत और स्तनधारियों में शरीर में वसा की संरचना दोनों. चुनाव प्रयोगों की एक श्रृंखला में उच्च वसा वाले भोजन के लिए 'चूहों वरीयता की जांच करके, यह उच्च वसा वाले भोजन के लिए उनकी पसंद पर आनुवंशिक मतभेद और औषधीय उपायों का परीक्षण करने के लिए संभव है.
Abstract
मोटापा मोटापे के रूप में वर्गीकृत जनसंख्या का एक तिहाई से अधिक के साथ अमेरिका के संयुक्त राज्य अमेरिका में एक बढ़ती हुई समस्या है. इस multifactorial विकार के लिए योगदान एक पहलू है एक उच्च वसा वाले आहार, गरमी सेवन और शरीर वसा की मात्रा दोनों को बढ़ाने के लिए दिखाया गया है कि एक व्यवहार की खपत है. हालांकि, अन्य खाद्य पदार्थों पर उच्च वसा वाले भोजन के लिए वरीयता के विनियमन तत्वों understudied रहते हैं.
इस घाटे को दूर करने के लिए जल्दी और आसानी से आहार वसा के लिए वरीयता में परिवर्तनों का परीक्षण करने के लिए एक मॉडल विकसित किया गया था. फैट पसंद मॉडल वसा सामग्री के साथ भिन्न खाद्य पदार्थों के बीच विकल्पों की एक श्रृंखला के साथ चूहों प्रस्तुत करता है. इंसानों की तरह, चूहों translational अध्ययन के लिए चूहे मॉडल आदर्श बना रही है, उच्च वसा वाले भोजन लेने की ओर एक प्राकृतिक पूर्वाग्रह है. वरीयता में परिवर्तन आनुवंशिक मतभेद या औषधीय उपायों या तो के प्रभाव के लिए जिम्मेदार माना जा सकता है. इस मॉडल वसा वरीयता और scre के determinates के अन्वेषण के लिए अनुमति देता हैpharmacotherapeutic एजेंट ening कि मोटापे के प्रभाव के अधिग्रहण.
Introduction
मोटापा अमेरिकी वयस्कों के एक से अधिक तीसरे मोटापे से ग्रस्त हैं कि आकलन के रोग नियंत्रण और रोकथाम के लिए केंद्र के साथ, संयुक्त राज्य अमेरिका 1 में एक प्रचलित समस्या है. मोटापा भी टाइप 2 मधुमेह, उच्च रक्तचाप, और उच्च कोलेस्ट्रॉल 2 सहित कई स्वास्थ्य संबंधी चिंताओं, के लिए एक जोखिम कारक के रूप में पहचान की गई है. कई कारकों मोटापे की दर में वृद्धि को प्रभावित करने के लिए दिखाया गया है, macronutrients मोटापा 3,4 में खेलने की भूमिका में चल रहे ब्याज और विवाद है.
मोटापे के लिए एक योगदान कारक उच्च वसा आहार का सेवन 5 है. बढ़ी हुई आहार वसा वृद्धि हुई मानव ऊर्जा की खपत 6 और शरीर में वसा सामग्री 7,8 में उल्लेखनीय वृद्धि के साथ जोड़ा जाता है. इसके अतिरिक्त, आहार वसा के दौरान और खपत 7,9 के बाद दोनों इनाम मूल्य है. इसलिए, उच्च वसा वाले खाद्य पदार्थ के लिए प्रभाव वरीयता क्या कारकों का निर्धारण कर सकते हैं गाइड pharmacotherapeutic देसी दोनोंजीएन और मोटापे का कारण हो सकता है कि अंतर्निहित आहार विकल्पों की समझ को बढ़ावा देने. यहाँ वर्णित फैट पसंद मॉडल 'चूहों वसा की मात्रा अलग से खाद्य पदार्थों के बीच पसंद है, लेकिन इसी तरह के पोषण का महत्व के लिए परीक्षण. विशेष रूप से, इस मॉडल एक साथ इस प्रकार उच्च वसा वाले भोजन छंद कम वसा वाले खाद्य पदार्थों का सेवन किया ग्राम के आधार पर वरीयता की मात्रा का ठहराव सक्रिय करने के दो विभिन्न खाद्य पदार्थों के विकल्प के साथ चूहों प्रस्तुत करता है. औषधीय और आनुवंशिक प्रभाव उच्च वसा सामग्री के साथ भोजन के लिए वरीयता में एक परिवर्तन के रूप में मापा जा सकता है.
फैट पसंद मॉडल व्यापक रूप से इस्तेमाल स्वादिष्ट भोजन का सेवन मॉडल 10 पूरक करने के लिए कार्य करता है, लेकिन यह भी कई लाभ प्रदान करता है. इस मॉडल प्रयोगकर्ता विशेष रूप से दो भोजन विकल्प उपलब्ध हैं, जिसमें एक नियंत्रित वातावरण में खिला व्यवहार का आकलन करने के लिए अनुमति देता है. परंपरागत उच्च वसा खिला मॉडल ही खाना पसंद अध्ययन करने के लिए क्षमता समाप्त जो एक भोजन के रूप में एक महत्वपूर्ण प्रदान करते हैंमानव भोजन का सेवन का पहलू. कुछ assays कई प्रकार के भोजन की पेशकश करते हैं और अक्सर "कैफेटेरिया" प्रकार खिला पढ़ाई 11 के रूप में भेजा जाता है. मानव भोजन अक्सर परख में प्रयोग किया जाता है और अच्छी तरह से कारण पोषक परिवर्तनशीलता के लिए प्रयोगशाला में पर्यावरण के लिए अनुकूल नहीं है क्योंकि ये अध्ययन reproducibility से पीड़ित हैं. हम व्यक्तिगत शुद्ध सामग्री इस प्रकार बहुत तरह के आहार में वसा के रूप में macronutrient सामग्री को बदलने के लिए reproducibility और लचीलेपन में सुधार होते जो परिभाषित आहार का उपयोग करें. मनुष्य के 5 और अधिक वसा वाले खाद्य पदार्थ 12, उच्च वसा वाले खाद्य पदार्थ मोटापे में बहुमूल्य जानकारी प्रदान कर सकते हैं के लिए चूहे की पसंद बदल कि उपचार के लिए प्राकृतिक मानव वरीयता में मोटापे के साथ जुड़े उच्च वसा आहार सेवन के साथ.
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Protocol
सभी प्रयोगात्मक प्रक्रियाओं प्रयोगशाला पशु की देखभाल और उपयोग (प्रयोगशाला पशु संसाधन संस्थान (अमेरिका), 1996) के लिए मार्गदर्शिका के अनुसार और टेक्सास चिकित्सा शाखा के विश्वविद्यालय में संस्थागत पशु की देखभाल और उपयोग समिति के अनुमोदन के साथ हैं.
1. विषय
- 21 डिग्री सेल्सियस पर 225-250 ग्राम वजन एकल हाउस पुरुष Sprague-Dawley चूहों और एक 12 घंटे प्रकाश अंधेरे चक्र के साथ 30-50% सापेक्ष आर्द्रता (6:00 बजे से 6 पर रोशनी: 00 बजे).
- एक कम वसा वाले भोजन (ऊर्जा से 10% वसा) पर चूहों बनाए रखें. पूर्व प्रयोग करने के लिए कम से कम 7 दिनों के लिए भोजन और कॉलोनी कमरे में चूहों आदत डालना. पशु पढ़ाई शुरू करने से पहले तीन दिनों के लिए वाहन की हैंडलिंग और खुराक के आदी रहे हैं. आदी के बाद पहले दिन प्रयोगात्मक दिन 1 है.
2. आधारभूत पसंद
- दिन 1, प्रत्येक पिंजरे के लिए 10% वसा वाले भोजन के साथ, दो स्वच्छ भोजन हॉपर, बी के साथ एक एक और दूसरे के साथ चिह्नित एक भरना. डब्ल्यू(खाद्य) के साथ भोजन हॉपर eigh और पिंजरे में उन्हें जगह, चूहे को सुनिश्चित करने के लिए दोनों का उपयोग किया है.
- दिन 2, पर लगभग एक ही समय भोजन हॉपर दिन पहले पिंजरे में रखा गया था, भोजन हॉपर भार रिकॉर्ड और इस स्थिति पूर्वाग्रह mitigates हॉपर एक और कूदनेवाला बी के पदों पर स्विच. हमेशा की तरह, हॉपर से हटा किसी भी भोजन के लिए घर पिंजरे की जांच यह वजन है, और इसके लिए खाते. भोजन का सेवन दिनों के बीच कूदनेवाला वजन में परिवर्तन से मापा जाता है.
- 3 दिन पहले के रूप में खाद्य कूदनेवाला वजन रिकॉर्ड. प्रत्येक भोजन हॉपर स्थिति और खाद्य हॉपर पहचान (ए और बी) में भस्म भोजन की राशि की जांच करना. इस डेटा स्थिति पूर्वाग्रह और विशिष्ट हॉपर पसंद का एक आधारभूत समझ देता है, और कोई वरीयता का संकेत लगभग 50% की एक वरीयता स्कोर होना चाहिए. शेष भोजन बाहर फेंक दें.
3. फैट पसंद
- 3 दिन, हर पिंजरे के लिए दो स्वच्छ भोजन हॉपर प्राप्त करते हैं. यह स्वच्छ भोजन हॉपर उपयोग करने के लिए महत्वपूर्ण हैपिछले प्रयोगों से confounding scents को रोकने के लिए विभिन्न खाद्य पदार्थों के बीच स्विच जब भी. 15% वसा वाले भोजन (तालिका 1) के साथ 12.5% वसा वाले भोजन और हॉपर बी के साथ कूदनेवाला भरण. प्रत्येक हॉपर की प्रारंभिक वजन रिकार्ड और पिंजरे में दोनों जगह.
- 4 दिन, पिंजरे में उन्हें वापस रखने पर हॉपर एक और कूदनेवाला बी के पदों पर स्विच प्रत्येक हॉपर का भार रिकॉर्ड.
- 5 दिन, प्रत्येक हॉपर का भार रिकॉर्ड. दोनों दिनों पर भस्म प्रत्येक भोजन के ग्राम निर्धारण करने के बाद, चूहा खाना पसंद निर्धारित किया जा सकता है.
- दोहराएँ बढ़ती वसा सामग्री (जैसे पहले 15%, अगले 17.5%, तो 20%, और अन्त में 45% वसा) के साथ खाद्य पदार्थों की तुलना में 12.5% वसा वाले खाद्य पदार्थों का उपयोग कर एक ही जानवरों के साथ 3.1 3.3 के माध्यम से कई बार दोहराएँ.
4. डेटा गणना और विश्लेषण
- भोजन का मूल्य उस जन से खाद्य + हॉपर की अंतिम जन घटाकर प्रत्येक जानवर के लिए दैनिक भोजन का सेवन की गणना+ हॉपर. प्रत्येक भोजन 2 दिनों में मापा जाता है, क्योंकि 2 दिन कुल प्रत्येक% वसा सामग्री के लिए एक साथ जोड़ा जा सकता है.
- प्रत्येक दो दिन की अवधि में कुल खपत भोजन से उच्च वसा वाले खाद्य पदार्थों का सेवन विभाजित करके वसा वरीयता स्कोर की गणना. उदाहरण के लिए, एक चूहा 12.5% वसा आहार और 2 दिनों में 17.5% आहार की 27.5 जी की 8.9 ग्राम खा लिया. इसलिए कि व्यक्ति पशु के लिए वरीयता स्कोर (27.5 36.4 से विभाजित) 76% है.
- औसत और प्रत्येक आहार (15%, 17.5%, 20%, और 45% वसा) (चित्रा 3) के लिए ग्राफ वरीयता स्कोर. कुल भोजन का सेवन भी जानकारीपूर्ण है और आसानी से (चित्रा 4) ग्राम प्लॉट के रूप में किया जा सकता है.
- तालिका 1 में ऊर्जा घनत्व का उपयोग कर कुल ऊर्जा खपत (kilocalories) के एक समारोह के रूप में पसंद स्कोर (चित्रा 5A) और कुल भोजन का सेवन (चित्रा 5 ब) एक्सप्रेस.
- जानवरों के एक से अधिक समूह का उपयोग करते हैं, तो एक दो तरह दोहराने प्रदर्शनएड एनोवा एक Bonferroni बाद परीक्षण द्वारा पीछा उपाय. पावर विश्लेषण समूह प्रति N = 8 पशुओं के उपचार समूहों के बीच 7% की एक अंतर का पता लगाने के लिए उपयुक्त है जो इंगित करता है.
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Representative Results
चूहे वसा सामग्री (तालिका 1) के साथ भिन्न उपलब्ध भोजन चुनने के लिए वरीयता का प्रदर्शन करने के क्रम में दोनों को एक साथ भोजन हॉपर (चित्रा 1) के लिए शारीरिक का उपयोग किया था. चूहा खाना दैनिक तौला गया था और किसी भी खाद्य spillage आसानी से पाया गया था और चित्रा (2) के लिए जिम्मेदार है. ठीक खाद्य कणों की spillage कम हो और काफी डेटा को प्रभावित नहीं करता पाया गया था. फैट पसंद मॉडल का उपयोग करना, 12.5% वसा और उच्च वसा वाले खाद्य पदार्थ युक्त खाद्य पदार्थों के बीच एक स्पष्ट वरीयता मनाया जा सकता है (पी <एनोवा से 17.5%, 20%, और 45% की तुलना में 12.5% से अधिक 0.05 वरीयता, पद अस्थायी परीक्षण के बाद) ( वसा की मात्रा (3B चित्रा) पर निर्भर था जो चित्रा 3). इस डेटा भी प्रकाशन के लिए डेटा प्रस्तुति में एक विकल्प के लिए अनुमति देता है, भोजन के ग्राम (चित्रा 4) या ऊर्जा खपत में (चित्रा 5) के रूप में व्यक्त किया जा सकता है. इन अल्पकालिक खिला अध्ययन में हमेंजानवरों के आहार में वसा सामग्री (चित्रा 5 ब) में वृद्धि करने के लिए उपयोग किया जाता है जब उच्च वसा वाले खाद्य पदार्थ आईएनजी, भस्म कुल ऊर्जा में वृद्धि आम तौर पर मनाया जाता है.
डेटा का सांख्यिकीय विश्लेषण SPSS 20 सॉफ्टवेयर का उपयोग कर प्रदर्शन किया था. पद अस्थायी टी परीक्षण (कोई प्रयोगात्मक गुट नहीं था क्योंकि टी परीक्षण का इस्तेमाल किया गया था) के साथ एक दोहराया उपायों एनोवा महत्वपूर्ण मुख्य प्रभाव, मुख्य प्रभाव की बातचीत, और व्यक्ति खाद्य पदार्थों के लिए वरीयता में मतभेद निर्धारित किया गया था.
चित्रा 1. दो भोजन विकल्प के साथ अपने homecage में एक चूहा. चूहा दो खाद्य हॉपर को और पानी के लिए शारीरिक का उपयोग किया. खाद्य हॉपर दोनों खाद्य पदार्थों को जी भरकर पहुंच सुनिश्चित करने के लिए भर रहे हैं.
चित्रा 2. खाद्य spillage उच्च दिखाई है और के लिए जिम्मेदार हो सकता है. दैनिक भोजन वजन जबकि, हॉपर में निहित नहीं है कि किसी भी खाद्य पाया और तौला जाता है.
चित्रा 3. चूहे चूहे एक महत्वपूर्ण 15% के लिए वरीयता, 17.5%, 20%, और 12.5% की तुलना में 45% वसा वाले खाद्य पदार्थ का प्रदर्शन) उच्च वसा सामग्री. एक साथ भोजन के लिए एक बढ़ती हुई वरीयता प्रदर्शित करता है. (* <0.05 पी, एनोवा पद अस्थायी परीक्षण पीछा द्वारा) वरीयता वसा सी के साथ बदलता है जहां एक 'खुराक पर प्रभाव' की अवस्था में. बी) फैट पसंद विधि परिणामontent 12.5% वसा वाले भोजन की तुलना में. त्रुटि सलाखों के मतलब की मानक त्रुटि का प्रतिनिधित्व करते हैं.
भस्म भोजन की ग्राम प्रयोग के पाठ्यक्रम पर कुल भोजन का सेवन में परिवर्तन के बारे में अतिरिक्त जानकारी प्रदान कर सकते हैं के रूप में उच्च वसा वाले भोजन के लिए 'चूहों वरीयता के ग्राम में चित्रा 4. प्रतिनिधित्व. पसंद जाहिर की. (* <0.05 पी, एनोवा द्वारा पद अस्थायी परीक्षण के बाद). त्रुटि सलाखों के मतलब की मानक त्रुटि का प्रतिनिधित्व करते हैं.
उच्च वसा वाले भोजन के लिए 'चूहों वरीयता की कैलोरी में चित्रा 5. प्रतिनिधित्व.
वसा | कार्बोहाइड्रेट | प्रोटीन | ऊर्जा घनत्व | |||||||
आहार | % ग्राम | % किलो कैलोरी | % ग्राम | % किलो कैलोरी | % ग्राम | % किलो कैलोरी | किलो कैलोरी / ग्राम | |||
10% वसा | 4.3 | 10 | 67.3 | 70 | 19.2 | 20 | 3.85 | |||
12.5% वसा | 5.4 | 12.5 | 65.7 | 67 | 19.5 | 20 | 3.9 | |||
15% वसा | 6.6 | 15 | 64.2 | 65 | 19.8 | 20 | 3.95 | |||
17.5% वसा | 7.8 | 17.5 | 62.5 | 62 | 20.1 | 20 | 4.01 | |||
20% वसा | 9 | 20 | 61 | 60 | 20.3 | 20 | 4.06 | |||
45% वसा | 24 | 45 | 41 | 35 | 24 | 20 | 4.73 |
तालिका 1. प्रायोगिक खाद्य पदार्थों की Macronutrient सामग्री.
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Discussion
फैट पसंद मॉडल खिला व्यवहार का एक जानकारीपूर्ण और प्रदर्शन करने के लिए आसान परख है. यह परख तंत्रिका और मोटापा अनुसंधान का एक महत्वपूर्ण अभी तक understudied क्षेत्र है जो खाना पसंद, आबाद जो आणविक तंत्र की पहचान करने के लिए एक अवसर प्रदान करता है. आनुवंशिक मतभेद या औषधीय जोड़तोड़ से वसा वरीयता में परिवर्तन वरीयता वक्र (3B चित्रा) में दाहिनी ओर या बाई ओर बदलाव के रूप में देखे जा सकते थे. यह वरीयता की अवस्था में किसी भी बदलाव कल्पना करने के लिए मध्य वसा वाले खाद्य पदार्थ (15%, 17.5%, और 20%) शामिल करने के लिए महत्वपूर्ण है. वसा पसंद की अवस्था में बदलाव के विभिन्न दो बोतल चुनाव वरीयता परीक्षण 13,14 व्याख्या कर रहे हैं कि कैसे करने के लिए इसी तरह व्याख्या की जा सकती. चूहों उच्च वसा वाले भोजन खाने की ओर एक पूर्वाग्रह है के रूप में, एक काफी पसंद उच्च वसा वाले भोजन भोजन की संरचना विकल्प में एक संभव pharmacologically प्रासंगिक परिवर्तन का प्रतिनिधित्व करता है की कमी हुई. दरअसल, यू रिसेप्टर 2 अभिव्यक्ति neuromedin हाल ही में मधुमक्खी हैn यह मॉडल 15 का उपयोग कर वसा पसंद बदल दिखाया. रंग भोजन (तालिका 1) दैनिक भोजन (चित्रा 2) के वजन से पहले यह आसान किसी भी spillage निर्धारित करने के लिए बनाता है. इस दैनिक खुराक की सही माप सुनिश्चित करता है. विधि को भी प्रदर्शन करने के लिए जल्दी है और भोजन में वसा की सांद्रता बढ़ाने के साथ दोहराया जा सकता है.
आहार वसा वरीयता के औषधीय और आनुवंशिक जोड़तोड़ के लिए कुछ विशेष विचार कर रहे हैं. इस परख 8 दिन का समय लगता है क्योंकि औषधीय अध्ययनों में, यौगिक जोखिम एक महत्वपूर्ण विचार है. इसलिए, औषधीय यौगिकों आधा जीवन और परीक्षण किया जा रहा प्रत्येक यौगिक की कुल मात्रा के आधार पर प्रति दिन एक या अधिक बार प्रशासित होना पड़ सकता है. आनुवंशिक अध्ययनों में, इस तरह के एक जीन के वायरल पछाड़ना के रूप में उपचार प्रयोगात्मक समय लंबा होगा जो स्थिर अभिव्यक्ति के लिए 14 दिन की आवश्यकता हो सकती.
भोजन की संरचना में
इस विधि के लिए एक सीमा दैनिक तौल और सफाई की आवश्यकता है कि खाद्य हॉपर की बड़ी संख्या है. भाग्यशालीly, इन उच्च श्रम और उपकरण अवधि, (वरीयता परीक्षण प्रति दो दिन) कम कर रहे हैं न्यूनतम प्रशिक्षण की आवश्यकता होती है और जरूरत के रूप में केवल 10% वसा वाले खाद्य पदार्थों का उपयोग के समय के साथ interspersed किया जा सकता है.
इस मॉडल के रूप में अच्छी तरह से कुछ सीमाएं हैं. सबसे पहले, खाद्य पदार्थ एक आदेश प्रभाव उत्पन्न कर सकते हैं, जो वसा सामग्री की एक बढ़ती हुई क्रम में प्रस्तुत कर रहे हैं. हालांकि, इस आदेश खाना पसंद पर उच्च वसा वाले भोजन की खपत की लंबी अवधि के प्रभाव को कम करने के लिए आवश्यक है. लुकास और उनके सहयोगियों शुद्ध या emulsified वसा की है कि चूहे की खपत, 16 चूहे चाउ के अलावा, कम होगा या क्रमश: दिनों से अधिक वृद्धि दिखाई है. इस मुश्किल वसा सामग्री प्रयोगों कम या एक लैटिन वर्ग प्रकार प्रयोग में 45% वसा भोजन के लिए उपयोग निम्न से परिणामों की व्याख्या करने के लिए करना होगा. एक दूसरी सीमा तुलना के लिए एक आधार रेखा के रूप में 12.5% वसा वाले खाद्य पदार्थों के दोहराया का उपयोग है. 12.5% वसा वाले भोजन के लिए एक कम वरीयता वरीयता में एक स्पष्ट वृद्धि का कारण होगाउच्च वसा वाले भोजन के लिए. हालांकि, एक स्थिर आधारभूत खाना करने में नाकाम रहने वसा का सेवन 16 को प्रभावित करने और असंभव वरीयताओं की तुलना कर सकता है. अन्त में, हमारे परिणाम उच्च वसा के लिए कम कार्बोहाइड्रेट और नहीं के लिए एक प्राथमिकता के रूप में व्याख्या की जा सकती. हालांकि, चूहों (कम नहीं) इस व्याख्या की वैधता को कम कार्बोहाइड्रेट सामग्री 14,15 बढ़ती पसंद करते हैं.
अंत में, फैट पसंद मॉडल वसा की मात्रा भिन्न की दो खाद्य पदार्थों के बीच एक चूहे की वरीयता निर्धारित करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. इस परीक्षा में आनुवंशिक पृष्ठभूमि या दवा उपचार एक चूहे की वसा सामग्री वरीयता हेरफेर कर सकते हैं अगर प्रयोगकर्ता निर्धारित करने के लिए अनुमति देता है. एक उच्च वसा आहार के लिए यह वरीयता उत्कृष्ट चेहरा वैधता प्रदान करता है और मनुष्यों में व्यवहार खाने का एक translationally प्रासंगिक मॉडल का प्रतिनिधित्व करता है.
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Disclosures
लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है.
Acknowledgments
लेखकों UL1TR000071 (NCATS), P30DK079638 (NIDDK), P30DA028821 (NIDA) और T32DA07287 (NIDA) से धन स्वीकार करना चाहते हैं.
Materials
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Rodent diet with 10 kcal% fat | Research Diets | D12450B | 10% fat rat food |
Rodent diet with 12.5 kcal% fat | Research Diets | D07040501 | 12.5% fat rat food |
Rodent diet with 15 kcal% fat | Research Diets | D07040502 | 15% fat rat food |
Rodent diet with 17.5 kcal% fat | Research Diets | D07040503 | 17.5% fat rat food |
Rodent diet with 20 kcal% fat | Research Diets | D07040504 | 20% fat rat food |
Rodent diet with 45 kcal% fat | Research Diets | D12451 | 45% fat rat food |
Rat feeders (3.75"W x 2.875"D x 5.25"H) | Labex of MA | 2528 | Food hoppers |
References
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