Summary
Für zukünftige Anwendungen als Patch zu Teil Tränen des vorderen Kreuzbandes (ACL) zu reparieren, wurden menschliche ACL abgeleitet von Zellen während rekonstruktive Verfahren, in vitro erweitert und Tissue Engineering Scaffolds gewachsen erhalten Gewebe isoliert. Zelladhäsion und Morphologie wurde dann durchgeführt, um die Biokompatibilität auf Gerüstoberfläche bestätigen.
Abstract
Eine Verletzung des ACL ist ein häufig auftretendes Problem in aktive Menschen. Selbst eine teilweise Tränen dieser intraartikuläre Kreuzbandriss führen zu biomechanischen Mängel, die Funktion und Stabilität beeinträchtigen. Aktuelle Optionen für die Behandlung von partiellen ACL Tränen reichen von nicht-operative, konservative Behandlung, mehrere chirurgische Optionen, wie: thermische Änderung, Single-Bundle Reparatur, komplette Rekonstruktion und Wiederaufbau des beschädigten Teil der einheimischen Band. Nur wenige Studien, wenn überhaupt, haben jede einzelne Methode für das Management konsequent überlegen gezeigt, und in vielen Fällen Patienten weiterhin anhaltende Instabilität und andere Begleiterkrankungen zu demonstrieren.
Das Ziel dieser Studie ist, um eine mögliche Zellquelle für die Verwendung in der Entwicklung eines mittels Tissue Engineering Patch, der bei der Reparatur einer teilweise abgerissen ACL implementiert werden könnten. Ein neuartiges Protokoll wurde für den Ausbau von Zellen aus patie abgeleitet entwickeltnts ACL-Rekonstruktion unterzogen. Um die Zellen zu isolieren, wurde gehackt während ACL-Rekonstruktion erhalten HACL Gewebe in einer Collagenase-Lösung verdaut. Expansion wurde unter Verwendung von DMEM/F12 Medium mit 10% fötalem Rinderserum (FBS) und 1% Penicillin / Streptomycin (P / S) ergänzt. Die Zellen wurden dann bei -80 º C oder in flüssigem Stickstoff in einem Gefriermedium, bestehend aus DMSO, FBS und dem Expansionsmedium gespeichert. Nach dem Auftauen wurden die HACL abgeleiteten Zellen dann auf ein Gerüst aus Gewebezüchtungen, PLAGA (Poly Milch-co-Glykolsäure) und Steuergewebekultur-Polystyrol (TCPS) ausgesät. Nach 7 Tagen wurde SEM durchgeführt, um die zelluläre Adhäsion zu der PLAGA TCPS gegenüber der Kontrolle zu vergleichen. Zellmorphologie wurde mit Immunfluoreszenzfärbung ausgewertet. SEM (Rasterelektronenmikroskop) Mikroaufnahmen zeigten, dass Zellen wuchsen und auf beiden PLAGA und TCPS Oberflächen haften und wurden von Tag 7 über die gesamten Oberflächen konfluent. Immunfluoreszenzfärbung zeigten normale, unbelastete morphologischenal Muster auf beiden Oberflächen. Diese Technik ist vielversprechend für Anwendungen in der ACL Regeneration und Rekonstruktion.
Introduction
Das vordere Kreuzband (ACL) ist ein häufig verletzt intraartikuläre Bandes des Knies. Rund 200.000 (ACL) Verletzungen werden jährlich in den Vereinigten Staaten berichtet. Über 75% der Patienten mit ACL-Verletzung opt für orthopädische rekonstruktive Chirurgie 1,2,3,4. Der chirurgische Eingriff wird häufig aufgrund einer von Natur aus schlechter Heilungspotential 3 angegeben. ACL-Rekonstruktion wird typischerweise mittels eines autologen oder allogenen Sehnen erreicht. Autograft und Allograft stellen den Goldstandard für die Rekonstruktion, wie sie rühmen, hohe Erfolgsquoten und primäre Naht zu reparieren, die andere Behandlungsoption hat Ausfallraten von bis zu 94% 5,6,7 dargestellt.
Teilweise Tränen der ACL repräsentieren 10% bis 28% aller ACL Tränen 8. In einer prospektiven Studie, Noyes et al. Geschätzt, dass 50% der Patienten mit teilweise Tränen, die mehr als die Hälfte der ACL ACL fortgeschritten Insuffizienz abgeschlossen, nachdem nicht-operativen Behandlung 9. Andere Studien berichten von anhaltenden Instabilität und verminderte Funktion mit weniger als 30% der Patienten in der Lage, ihre vor der Verletzung Aktivität 9,10,11,12,13 zurückzukehren. Die Behandlungsmöglichkeiten sind begrenzt und umfassen konservative Modalitäten, thermische Schrumpfung der restlichen ACL, ACL oder Wiederaufbau. Kürzlich gab, wurde erhöht Zinsen in Augmented primären Reparatur. Diese Techniken verwenden, um Biologika primäre Naht Reparaturen 14 zu verbessern. Die neuere Forschung hat versucht, ernten mesenchymalen artigen HACL Stammzellen zu Transplantat Einschränkungen zu umgehen, 31,32 aber die Gültigkeit und Wirksamkeit dieser Zellen ist noch unbekannt. Die ideale Zellquelle für das Tissue Engineering-Anwendungen scheint nicht mesechymal HACL abgeleitet Fibroblasten-Zellen sein.
Die aktuelle Forschung auf die Identifizierung eines geeigneten Matrixmaterial und Zellquelle für das Gerüst entwickelt, konzentriert. Es ist das übliche Verfahren für einen Kreuzbandriss als su verworfen werdenrgical Abfälle während der Wiederherstellungschirurgie, aber diese beschädigten Band kann eine hochwertige Quelle für den Erwerb von Zellen für die Entwicklung und Verbesserung der ideale Gewebezüchtungen ACL-Ersatz. Unser Labor hat ein Protokoll für die in vitro-Expansion dieser Zellen geerntet HACL abgeleitet entwickelt. Mit einer 2D-Matrix entwickelt, mit HACL abgeleiteten Zellen infundiert haben wir einen Patch, der potenziell verstärken könnte teilweise ACL Reparatur und stärken Bänderriss entworfen.
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Protocol
1. Chirurgische Retrieval
Hinweis: Ein IRB-Zulassung erhalten, um die ACL Stumpf während ACL-Rekonstruktion Chirurgie zu sammeln. IRB-Befreiung gegeben wurde, wie die ACL-Stumpf verwendet wurden, in der Regel als Operationsmüll. 20 Patienten wurden verwendet, um die ACL-Stumpf zu sammeln.
- Verwalten allgemeine Anästhesie und präoperative Antibiotika als Per-Protokoll-Instituts für den Patienten.
- Bewerben Tourniquet und pumpen 100 mg über den systolischen Blutdruck.
- Situate den Patienten in der Rückenlage. Machen Sie eine horizontale anterolaterale Inzision mit Knie in 30-45 ° Beugung für ein 5-mm-Portal und legen Sie die arthroskopische Trokar und Kamera in die Tasche suprapatellaris bei 30 °.
- Führen Sie eine der Routinediagnostik Arthroskopie.
- Geben Sie eine Kerbe und debride die membranöse Gelenkinnenhaut über den Kreuzbandriss.
- Verwenden Sie einen 4,5 mm Rasierer und Ablator die ACL Stumpf zu identifizieren.
- Verwenden Sie einen Entenschnabel gerade bitter, mehrere spe sammelncimens von der verbliebenen ACL-Stumpf.
- Aufrechterhaltung der Probe in normaler Kochsalzlösung in einem sterilen Behälter.
- Senden Sie die Proben zur Pathologie zum Decodieren und Auslieferung an die Laboranlage.
- Recover Patienten und durchzuführen, post-operative Betreuung laut Protokoll Institution.
2. Tissue Verdauung und HACL Isolation
- Übertragung der aus der Pathologie empfangenen ACL menschlichen Gewebes in eine Petrischale mit einer sterilen Kochsalzlösung / PBS (Phosphat-gepufferte Kochsalzlösung).
- Hackfleisch mit sterilen Schere das Gewebe in 1-2 mm 3 Stücke und waschen Sie die zerkleinerte Gewebe mit Kochsalzlösung mindestens 3 Mal.
- Digest des zerkleinerten Gewebes mit 0,4% Collagenase in DMEM/F-12 (50/50, 1x) Medium mit 10% fötalem Rinderserum (FBS) und 1% Penicillin / Streptomycin ergänzt für 4-6 h bei 37 ° C.
- Zentrifugieren der Zellen bei 1000 × g für 5 Minuten und Resuspendieren der Zellen in dem Medium dann.
- Waschen der Zellen mit dem Medium für 2-3 mal und dann seed / Kultur in T-25-Kolben für 2-3 Tage.
3. Cellular Expansion, Einfrieren und Auftauen
- Verwenden eines Lichtmikroskops, die Zellen für 2-3 Tage kultiviert, in einem T-25-Kolben visualisieren.
- Pflegen der Zellen bei 37 ° C in DMEM/F-12 (50/50, 1x) Medium mit 10% fötalem Rinderserum (FBS) und 1% Penicillin / Streptomycin (P / S) ergänzt.
Hinweis: Ändern Sie die Medien, wenn die Zellen zeigen Einhaltung und Standard-Morphologie. Verwenden Sie ein Lichtmikroskop, um die Zellen zu beobachten. - Waschen der konfluenten Zellen mit PBS am Tag 7 (~ 1,3 × 10 6 Zellen / Kolben). Hinzufügen Trypsin (0,5 g / l) und Inkubieren der Zellen bei 37 ° C für 5 min. In Medien suspendierten Zellen Trypsin zu neutralisieren. Teilen Sie die Medien-Zellgemisch zwischen drei T-25-Kolben.
- Waschen der konfluenten Zellen mit PBS, fügen Trypsin (0,5 g / l) und resuspendieren sie in Gefriermedium enthält, DMSO, FBS und das Vollmedium (DMEM/F-12 Medium + 10% FBS + 1% P / S) in der Verhältnis 01.02.07.
- SpeicherDie kryogene Fläschchen bei -80 ° C, wenn die Zellen innerhalb eines Monats verwendet werden und in flüssigem Stickstoff, wenn die Zellen für längere Laufzeiten gespeichert werden.
- Tauen Sie die Fläschchen in einem 37 ° C Wasserbad zur Wiederverwendung.
Hinweis: In der Regel 90-95% der Zellen überleben.
4. Herstellung von Tissue Engineered 2-D-Milch Poly-co-Glykolsäure (PLAGA) Gerüst
- Man löst 1 g PLAGA in 12 ml Dichlormethan in einem 20 ml-Szintillations-Fläschchen und verwirbeln die Lösung für 8 h bei einer konstanten Geschwindigkeit (800 UpM).
Hinweis: Detaillierte Beschreibung in Gupta et al 15. - Übertragen Sie die gelöste Lösung auf eine Glaspetrischale mit Fluorierte Schutzpapier ausgekleidet.
- Legen Sie die Petrischale unter einer Vakuumhaube für 30 min. Verlassen die Petrischale bei 20 ° C über Nacht und dann bei Raumtemperatur. Platzieren Sie die Petrischalen in den Lyophilisator vollständige Verdampfung des Lösungsmittels zu gewährleisten, dünne Filme des Polymers zu erhalten.
- Legen Sie das Polymer fiLMS in einem Exsikkator für 24 Stunden.
- Schneiden Sie die Polymerfilme in 12 mm Durchmesser Kreisscheiben und speichern sie in einem Exsikkator, bis sie benötigt.
5. Rasterelektronenmikroskopie (SEM)
- Waschen Sie die Zellen (50.000 Zellen / Platte) ausgesät auf der Steuer TCPS und dem PLAGA Gerüst mit PBS 7 Tage im Anschluss an Aussaat.
- Verwenden von 1,5% Glutaraldehyd in 0,1 M Cacodylatpuffer, um die Zellen zu fixieren und 2,5% OsO 4 in 0,1 M Cacodylatpuffer für Postfixierung.
- Mit 0,1 M Cacodylatpuffer Waschen der fixierten Zellen. Trocknen der fixierten Zellen mit seriellen Ethanol-Dehydratisierung (50%, 70%, 80%, 90% und 100%) für 15 min jeweils, und ferner trocken in Hexamethyldisilazan (HMDS) über Nacht.
- Entlüften Sie die Kammer des SEM-Sputter-Beschichtungssystem mit Knopfventil und heben Sie die obere Platte.
- Legen Sie die getrockneten Proben in der Kammer. Senken Sie die Deckplatte.
- Schalten Sie den Drehknopf an der Pumpe zu starten Evakuieren der Kammer.
- Offene Argon Leckventil. Warten Siefür das Vakuum auf 0,05 mbar fallen zu lassen.
- Bestreichen Sie die getrockneten Proben mit einer dünnen Schicht (0,13 nm) Gold / Palladium.
- Liefert die Argon Leckventil in seine geschlossene Position.
- Schalten Sie den Steuerknopf auf aus.
- Entlüften Sie die Kammer mit Knopfventil und heben Sie die obere Platte.
- Entfernen Sie die Proben und speichern sie in einem Exsikkator für 24 Stunden.
- Beachten Sie die Proben unter einem Rasterelektronenmikroskop.
6. Immunfluoreszenzfärbungen
- Waschen Sie die Zellen (50.000 Zellen / Platte) ausgesät auf der Steuer TCPS und dem PLAGA Gerüst mit PBS 7 Tage im Anschluss an Aussaat.
- Befestigen Sie die Zellen mit 70% Ethanol (kalt) für 10 min.
- Die fixierten Zellen bei Raumtemperatur in PBS mit 0,05% Triton X-100 für 20 min inkubieren, mit 1% Rinderserumalbumin (BSA).
- Tauchen der Proben in 1% Tween bei Raumtemperatur für 20 min.
- In monoklonalen Maus-Anti-β-Aktin-Antikörper (1:400) und Inkubation der Zellen Overnight bei 4 ° C.
- Mit 0,05% Tween waschen der Zellen. Hinzufügen sekundärer Antikörper (Ziege-anti-Maus-F (ab ') 2-Fragment von IgG mit einer Fluoreszenzsonde, 1:400 konjugiert) zu den Zellen und Inkubation für 1 h bei Raumtemperatur.
- Mit dem PBS Waschen Sie die Zellen. Färben der Zellen mit Kernfärbung und montieren mit 80% Glycerin.
- Beachten Sie die Zellen unter einem konfokalen Mikroskop.
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Representative Results
Das Arbeitsmodell für die chirurgische Wiederherstellung, Gewebe Verdauung und Isolierung des menschlichen vorderen Kreuzbandes (HACL) abgeleiteten Zellen ist in Abbildung 1 dargestellt. Die aus den Explantaten migriert und an die T-25-Kolben eingehalten Zellen. Diese Zellen wurden für 3 Tage und dann wurden unter einem Lichtmikroskop (2) sichtbar gemacht. Ein Monolayer wurde von Tag 7 erhalten. Die Anwesenheit von gesunden, lebensfähigen Zellen zeigten die erfolgreichen Abruf und Kultur HACL abgeleiteten Zellen.
Anheftung von Zellen an die Oberfläche der PLAGA und TCPS wurde qualitativ mittels SEM bestimmt. Fig. 3 zeigt Anhaftung und Proliferation von HACL abgeleiteten Zellen auf jeder Polymeroberfläche. Cellular Zusammenfluss wurde für PLAGA und TCPS beobachtet.
Zellmorphologie und Haftung Analyse wurde mittels Immunfluoreszenzfärbung bestimmt. β-Aktin-Färbung gezeigt, dass HACL abgeleiteten Zellen haftend auf und auf der Oberfläche sowohl PLAGA und TCPS vermehrt. Fig. 4 zeigt Polymerhaftung und extenuates der normalen, unbelasteten Aussehen der HACL Zellen.
Abbildung 1. Eine schematische Darstellung der Schritte in der chirurgischen Wiederherstellung, Gewebe Verdauung und Isolierung von Zellen aus verletzten vorderen Kreuzbandes (ACL) für das Tissue Engineering-Anwendungen. Während der ACL-Rekonstruktion Chirurgie beteiligt sind, wird die verbleibende (chirurgische Abfall) ACL-Stumpf gesammelt und in Kochsalzlösung gespeichert. Die gesammelten ACL Stumpf in 1-2 mm 3 Stücke zerkleinert und mit Kochsalzlösung gewaschen. Das zerkleinerte ACL ist mit 0,4% Collagenase-Lösung in DMEM/F-12-Medium verdaut. Die Zellen werden dann zentrifugiert, resuspendiert und in kultiviertenDMEM/F-12-Medium bei 37 ° C.
Abbildung 2. Menschen vorderen Kreuzbandes abgeleiteten Zellen eingefangen mit einem Lichtmikroskop (10X und 20X bei Zoom). Die Spindel oder länglich geformten Zellen wurden gesehen, wachsen auf der Oberfläche von T-25-Kolben nach 3 Tagen der Kultur.
Abbildung 3. REM-Aufnahmen des menschlichen vorderen Kreuzbandes abgeleiteten Zellen auf Steuer TCPS und PLAGA (bei 100-facher, 300X und 1000-facher Vergrößerung) kultiviert. Die Zellen hafteten, wuchsen und wurden über die gesamte Oberfläche des PLAGA und th konfluentE TCPS steuern.
Abbildung 4. Immunfluoreszenzfärbung Bilder aufgenommen mit einem konfokalen Mikroskop (bei 10x Zoom 3.1). Menschen vorderen Kreuzbandes abgeleiteten Zellen wurden mit β-Aktin (grün) und Kern (blau) eingefärbt. Die adhärierten Zellen wuchsen und zeigte eine normale, nicht-betonte Morphologie sowohl auf der experimentellen (PLAGA) und Kontrolle (TCPS) Oberflächen.
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Discussion
Das primäre Ziel dieser Studie war hACL/2D Gerüst, um die erhaltenen Zellen in einem Patch zu verwenden, um primäre Reparatur von Teil ACL Tränen zu erweitern. Konservative Behandlung von Teil ACL Tränen kann eine kurze Zeit der Ruhigstellung, Verstrebungen, einer fortschreitenden Sanierungsprogramm und regelmäßige Nachuntersuchungen 13,16,17 gehören. Doch viele Studien zeigen, dass die konservative Behandlung bei Sportlern hat mit schlechten Ergebnissen und Versagen in Zusammenhang gebracht. Buckley et al. Bewertet 25 Patienten mit teilweise ACL Tränen bei mittleren Follow-up und festgestellt, dass nur 44% der Patienten wieder an ihren Sport vor der Verletzung, und 72% berichteten, tätigkeitsbezogene Symptome 8. Bak et al. Folgten 56 Patienten mit isolierten Teil ACL Tränen für einen Mittelwert von 5,3 Jahren und nur 30% der Patienten wieder vor der Verletzung 10 Aktivitäten. Fritschy et al. Festgestellt, dass 18 von 43 Patienten mit partiellen ACL Tränen fortgeschritten, um Bruch durch 5-Jahres-Follow-up vervollständigen11. Diese Studien zeigen einen Bedarf an innovativen Techniken zu behandeln und zu reparieren Teil ACL reißen.
Das Ziel dieser Studie war es, ein Protokoll, das eine neue Technik, in denen menschliche ACL (HACL)-Zellen wurden geerntet, kultiviert und zeigten Einhaltung einer konstruierten Gerüst gezeigt zu entwickeln. Diese Technik ist eine reproduzierbare und zuverlässige Weise zu einem potentiellen Zellquelle für eine Vielzahl von künftigen Untersuchungen für ACL-Rekonstruktion bereitzustellen. Einzigartig in früheren Studien 31,32 wurden die HACL abgeleiteten Zellen von chirurgischen Abfällen gewonnen und stellen nicht-mesenchymalen HACL abgeleitet Fibroblasten-Zellen.
In dieser Studie wurden nicht-mesenchymalen Zellen aus HACL abgeleitet während rekonstruktive Verfahren, in vitro erweitert und Tissue Engineering Scaffolds gewachsen erhalten Gewebe isoliert. Zelladhäsion und Morphologie wurde dann durchgeführt, um die Biokompatibilität auf Gerüstoberfläche bestätigen. Zukünftige Studien müssen weiter qua bietenntitative Proliferationsanalyse, wie Echtzeit-Polymerase-Kettenreaktion (PCR) und Fluoreszenz-aktivierte Zellsortierung (FACS), um die isolierten Zellen charakterisieren. Darüber hinaus sollten quantitative Vermehrung Analyse, um welche Klasse von Biomaterialien die isolierten Zellen HACL besten auf zu wachsen bestimmen verwendet werden.
Das Fehlen einer quantitativen Analyse dieser HACL Zellen ist eine wichtige Einschränkung dieser Studie. Dies ist jedoch eine Vorstudie und das Ziel dieser Studie war es, nur zu isolieren, und erweitern Sie die HACL abgeleiteten Zellen. Zukünftige Studien werden die Zellproliferation Studien und Charakterisierung dieser Zellen beinhalten die Verwendung von Echtzeit-PCR und FACS. Eine weitere Einschränkung dieser Studie ist, dass die Zeitdauer der Kultur der Zellen erforderlich und sie in der Patch den Patienten erfordern, um zwei chirurgische Verfahren zu unterziehen. Weiterhin wurde die Fähigkeit dieser Menschen abgeleitet ACL Zellen in der Synovialflüssigkeit überleben nicht nachgewiesen. Zukünftige Studienmuss die Fähigkeit HACL auf einem Gewebe manipulierten Konstrukts in Gegenwart von Synovia vermehren auszuwerten.
Dieses Protokoll wird für die Reparatur von einem teilweise Kreuzbandriss durch Naht-und 2D-Gerüst zu ermöglichen. Dieses Protokoll bietet ein Abgabesystem für HACL Fibroblasten auf die Wundstelle und schützt die Zellen aus der Synovialflüssigkeit gleichzeitig. Dies könnte Funktions Reparatur und Heilung eines Teilriss der ACL erlauben, die Vermeidung der Komorbiditäten mit ACL-Rekonstruktion verbunden. Diese Technik zeigt vielversprechende Ergebnisse und zukünftige Untersuchung wird das Potenzial dieser Technik für die ACL Reparatur und Rekonstruktion anzuzeigen.
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Disclosures
Die Autoren erklären, dass sie keine finanziellen Interessen konkurrieren.
Acknowledgments
Die Autoren möchten die Start-up-Fonds und Abteilung für Chirurgie Forschungsstipendium an der Southern Illinois University, School of Medicine zu bestätigen; und das Memorial Medical Foundation Grant.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Petri dish | Fisher Scientific | 08-757-103C | |
| Phosphate Buffered Saline (PBS) | Fisher Scientific | BP3994 | |
| Collagenase | Gibco | 17018-029 | Store at 4 °C |
| DMEM/F-12 | Cellgro | 10-092-CV | Store at 4 °C. Warm in 37 °C water bath before use. |
| Fetal Bovine Serum (FBS) | Gibco | 10082 | Store at -80 °C |
| Penicillin/Streptomycin | Lonza | 17-602E | Store at 4 °C |
| Centrifuge Tubes- 15 ml | Corning | 430790 | |
| T-25 flasks | BD Falcon | 3013 | |
| Trypsin-Versene mixture | Lonza | 17-161E | Store at 4 °C. Warm in 37 °C water bath before use. |
| DMSO | Fisher Scientific | BP231-100 | Combustible liquid. Can cause skin, eye and respiratory tract irritation. |
| Cryogenic vials | Corning | 430489 | |
| PLAGA | Purac Biomaterials | Purasorb PLG8523 | Store at -80 °C |
| TCPS disks | Fisher Scientific | 12-545-82 | |
| Dichloromethane | Fisher Scientific | AC36423-0010 | Possible cancer hazard. Store in a dry, cool place. |
| Bytac paper | Saint gobin performance plastics | 1420652 | |
| Scintillation vial | Fisher Scientific | 03-339-21G | |
| Bovine Serum Albumin (BSA) | Sigma Aldrich | A7906 | Store at 4 °C |
| Tween | Fisher Scientific | BP337-500 | |
| mouse Anti-β-actin antibody (1° Ab) | Sigma Aldrich | A5441 | Store at -20 °C |
| goat-anti-mouse antibody (2° Ab) | Cell Signaling | 4408 | Store at -20 °C |
| Hoechst dye | Sigma Aldrich | 14530 | Store at -20 °C |
| Glycerol | Fisher Scientific | BP229-1 | |
| Glutaraldehyde | Fisher Scientific | BP2547-1 | Toxic by inhalation and if swallowed. Causes burns by all exposure routes. |
| Hexamethyldisilazane | Fisher Scientific | AC43085-1000 | Flammable liquid and vapor. Causes burns by all exposure routes. |
| Sterile Scissors | McKesson | 25-716 | |
| Centrifuge | Eppendorf | 5804R | |
| Light Microscope | Olympus | CK40 | |
| Water Bath | Thermo scientific | 2845 | |
| Vortex | Labnet | VX-200 | |
| Glass Petri plates | fisher Scientific | S31473 | |
| Acu-Punch | Acuderm Inc. | P1225 | Acu-Punch was used to cut 12 mm disks |
| Cacodylate buffer | Sigma Aldrich | 97068 | Flammable liquid, carcinogen and irritant. |
| Osmium tetraoxide | Sigma Aldrich | 201030 | Highly toxic |
| Triton X-100 | Sigma Aldrich | T8787 | Harmful if swallowed |
| Ethanol | Decon Labs | 2705 | Keep away from heat, sparks, flame and other form of ignition. |
| General/regional Anesthesia | Amphastar pharmaceuticals | 1% Lidocaine, 0.25% Bupivacaine,Anesthetic agents for induction and maintenance | |
| Antibiotics | Hospira | 0409-0805-01 | Ancef 1 g i.v. |
| Arthroscopy trocar | Smith and Nephew | ||
| Arthroscopy Camera | Smith and Nephew | ||
| Arthroscopic grasper and bitter | Arthrex | ||
| 4.5 mm shaver | Arthrex | ||
| Interference Screws | Arthrex | stainless steel screws | |
| Sputter Coater | Polaron | E5400 |
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