Introduction
L'ammoniaca è un sottoprodotto ubiquitario della proteina metabolismo 1. Misurazione ammoniaca può quindi aiutare i medici a valutare varie malattie e stati di benessere 2. Tuttavia, l'ammoniaca è difficile misurare con precisione, attraverso il sangue o soffio, perché è molto reattiva. Anche se comunemente usato, analisi del sangue hanno numerosi inconvenienti, tra cui preoccupazioni fondamentali circa la precisione 3. Ma il problema principale con analisi del sangue è la realtà che sempre e solo episodicamente raccolti. Questo è importante perché ammoniaca fisiologia, molto simile glicemia e molti altri processi metabolici, sono fluide e in continuo cambiamento 4. Al contrario, le analisi del respiro sono completamente non invasivo e rapido, quindi facilmente consentendo misure ripetute. Pertanto, la misurazione ammoniaca respiro è interessante perché può rivolgere un serio bisogno insoddisfatto in un modo unico.
Raccolta Breath, tuttavia, presenta problemi particolari. Considerando che il salasso porta intrinsecamente il JEOPardy di errori in diversi modi imprevedibili (ad esempio, il tempo laccio emostatico, la contaminazione sudore, emolisi dei globuli, ritardo nella misura di laboratorio, ecc 5), i ricercatori di misurazione respiro deve vedersela con un gruppo diverso di nuove sfide: la variabilità nella respirazione, la contaminazione con mucosa orale o ammoniaca batterica, influenza dell'aria ambiente ed apparecchi umidità e temperatura, ecc 6. Infatti, non è saggio sottovalutare il compito di collegare dispositivi sperimentali per gli esseri umani utilizzando procedure sperimentali per scoprire sconosciuti biologia. In parte a causa di questi ostacoli, il respiro di ammoniaca non ha ancora raggiunto il suo potenziale.
Qui, vi presentiamo il nostro protocollo di misura ammoniaca respiro per risultati veloci e accurati. Il nostro protocollo ha la forza in tre aree: il monitor, il campionatore interfaccia, e l'attenzione alle influenze umane. Il monitor è stato costruito dai colleghi della Rice University come descritto in precedenza 7. La base del MEAsurement è una spettroscopia fotoacustica rafforzata quarzo (QEPAS) tecnica che impiega un diapason quarzo piezoelettrico come un trasduttore acustico. Effetto fotoacustico si verifica quando le onde acustiche sono prodotte dall'assorbimento di radiazione laser modulata da gas in tracce bersaglio. Il gas di traccia viene rilevato utilizzando una cella acustico che è acusticamente risonante alla frequenza modulata. Lunghezza d'onda di assorbimento per l'ammoniaca è stata selezionata che è libero da interferenze spettrali da interferire specie respiro. Ai fini della misurazione respiro esalato umano, le principali caratteristiche del monitor comprendono una vasta gamma di misura (da circa 50 parti per miliardo, ppb di almeno 5.000 ppb) e velocità (1 misurazioni sec). La velocità del monitor ha la risoluzione temporale durante il ciclo respiratorio.
Il monitor è accoppiato ad un campionatore respiro appositamente progettato. Il campionatore è costituito da un sensore di pressione e capnografo. Esso mostra e archivia in tempo realemisure di pressione bocca e anidride carbonica, nonché le concentrazioni di ammoniaca determinata dal sensore. Questo campionatore, dunque, consente al tecnico di valutare la qualità dello sforzo respiro come il respiro è raccolto. Questo ci permette di superare le raccomandazioni per analizzare il respiro di ossido nitrico (NO Fe) proposto dalla Task Force della American Thoracic Society / European Respiratory Society (ATS / ERS) 8. Per tutti campionamento di aria espirata, una valvola unidirezionale monouso in linea è stato usato sulla porta bocca del campionatore respiro.
A causa della velocità del monitor e dei controlli di qualità fornito dal campionatore, siamo stati in grado di valutare con attenzione le influenze umane 9. La maggior parte dei soggetti, per esempio, inizialmente iperventilazione quando richiesto per respirare. Altre influenze importanti, come il pH orale e collutori, temperature del campionatore, monitor e tutti i tubi associati, e le modalità di respirazione, sono stati poi studiati, e sono la base for gli esperimenti riportati qui di seguito.
Infine, e forse più significativamente, si deve sottolineare che più gruppi di grande esperienza stanno misurando respiro ammoniaca utilizzando completamente diversi sensori e procedure di misurazione. Queste possono avere importanti vantaggi e validità. Un confronto completo è oltre la portata del presente 10,11,12 lavoro.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Preparazione degli strumenti
- Accendere l'alimentatore esterno per l'ammoniaca piattaforma sensore ottico, un controller per diodo laser, una unità elettronica di controllo personalizzato costruito (CEU), il campionatore respiro, pompa di aria, e computer portatile.
- Verificare che sia lo scarico e ventole di raffreddamento del sensore di ammoniaca sono in funzione. NOTA: Uno si trova nella parte posteriore del sensore, il secondo si trova all'interno del sensore, che è facilmente accessibile.
- Assicurano il modulo di rilevamento acustico e temperatura valvola a spillo sono a 38,0 ° C controllando il display digitale posizionato sul lato della scatola sensore ammoniaca. Attendere circa 35 minuti dal momento in cui il sensore è fornito di alimentazione per la temperatura si stabilizzi.
- Set di tubi e temperatura di ingresso boccaglio a 55 ° C, cliccando sul nome di un icona "ChangeT" che si trova sul desktop del campionatore respiro. La temperatura può essere modificata facendo clic sulla freccia su o giù, seguito cliccando su "Updmangiato Temp ". Fare clic su "Esci" per tornare al desktop. Lasciare che il sistema almeno 5 minuti per la temperatura si stabilizzi. Mantenere la temperatura del campionatore e il tubo a 55 ° C minimizza la perdita superficie di ammoniaca.
- Aprire il software sul computer portatile che controlla il sensore ammoniaca. Il programma può essere raggiunto all'interno di una cartella denominata "NH 3 Breath programma Sensor" sul desktop. All'interno di questa cartella, l'utente deve selezionare l'icona "principali software labview". Questa cartella contiene diverse applicazioni, ma l'utente deve selezionare "Mainsequence.vi" per accedere all'interfaccia desiderata. Selezionare "run" nell'angolo in alto a sinistra dello schermo. NOTA: Questo inizia la linea di blocco sequenza di taratura. Il laser del monitor QEPAS opera su una corrente ottimale, che viene selezionato durante una procedura di linea-bloccaggio automatico. Questo processo richiederà circa 25 min.
- Creare una nuova sessione sul campionatore tale che EAch sessione soggetto ha un proprio file che viene salvato in un flash drive collegata. NOTA: Questa operazione viene eseguita aprendo il programma "Respiro Sampler" che si trova sul desktop del campionatore. C'è spazio per identificare la sessione appropriato. Tutti i dati generati durante la sessione verranno salvati nella flash drive sotto questo identificativo. La data dell'esperimento viene in genere utilizzato come parte del nome del file. L'ingresso e temperatura boccaglio devono essere regolati prima di entrare nel programma respiro-campionamento.
- Inserire un nuovo boccaglio monouso nel tubo di aspirazione. Indossare guanti monouso per evitare di contaminare boccaglio con ammoniaca dalle dita.
2. Breath Raccolta dei campioni
NOTA: La competente Institutional Review Board (Comitato Etico) deve approvare qualsiasi studio che coinvolge soggetti umani. Ci sono molti fattori che possono influenzare drasticamente respiro ammoniaca. Questi fattori possono alterare respiro misurazioni ammoniaca direttamente da unffecting livelli di ammoniaca sistemici o modificando il viaggio di metaboliti respiro dai polmoni alla strumentazione.
- Assicurarsi che i soggetti arrivano al laboratorio in uno stato di digiuno, dopo aver consumato cibo per circa 12 ore all'arrivo e che hanno evitato di esercizio la mattina prima del test.
- Assicurarsi che nessuna sostanza è stato introdotto in bocca per almeno 1 ora prima della raccolta dei dati. Assicurarsi che i soggetti lavano i denti superiori a 1 ora prima del test.
- Sedile oggetto davanti al sensore ammoniaca. Istruire il soggetto a tenere il tubo di aspirazione, e assicurarsi che non tocchino il boccaglio per evitare la contaminazione di ammoniaca.
- Fare clic su "Start" sull'interfaccia campionatore. Hanno il soggetto espirare nel boccaglio a lungo possibile, o fino a quando l'operatore ritiene il campione sia sufficiente. NOTA: Questo è un singolo espirazione completa della durata di almeno 10 sec. Pressione bocca viene misurata in tempo reale come un surrogatoper la portata. Un manometro codice colore aiuta i prodotti tematici e mantenere la pressione di espirazione desiderata di 10 cm di acqua, con un tasso di flusso di espirazione di 50 ml / sec. Questo flusso è stato scelto in quanto è stato adottato dal ATS / ERS per il protocollo per determinare Fe NO. Questo tasso di flusso espiratorio è realizzabile da bambini e adulti. Allo stesso modo tre esalazioni riproducibili devono essere ottenuti che differiscono di meno del 10%.
- Fare clic su "Stop" sull'interfaccia campionatore quando il campione di aria espirata è completata.
3. Campione di respiro misura
- Una volta che un campione di aria espirata è stato analizzato, il tecnico di laboratorio funzionare il monitor ha quindi la capacità di analizzare qualsiasi segmento di tale profilo respiro. La porzione del respiro che è di interesse è il segmento di fase III. Questa è caratterizzata da un "plateau" della concentrazione di anidride carbonica e si trova al centro di fase tardiva della breath.
- Selezionare la fase III porzione del campione trascinando le linee verticali sull'interfaccia campionatore per iniziare quando altipiani di anidride carbonica e fermare subito prima della caduta di pressione del respiro. Vedere la Figura 1 per chiarimenti.
- Salvare i dati sul flash drive cliccando su "Store" sull'interfaccia campionatore touch screen.
- Una volta che i dati sono stati memorizzati respiro, l'utente può selezionare "start" per avviare un nuovo campione di respiro.
4. Illustra gli effetti del Collutorio e del pH sulla Breath Ammoniaca
- Campione 3 respiri per stabilire il livello di ammoniaca di base. Assicurarsi che respiri vanno prelevati almeno 5 minuti l'uno dall'altro.
- Sciacquare accuratamente la bocca con un'aliquota di 30 ml di acqua per 60 sec.
- Raccogliere un campione di respiro entro 60 secondi del risciacquo (sezione 2). Raccogliere campioni di aria espirata nel corso della prossima ora ad osservare la variazione di ammoniaca nel tempo. NOTA: Samples può essere preso come frequentemente come ogni minuto, ma intervalli più lunghi sono tipicamente utilizzati.
- Sciacquare la bocca con una aliquota di 30 ml di soluzione di base (bicarbonato di sodio in acqua) per 60 sec e ripetere 4.2.1.
- Sciacquare la bocca accuratamente con una aliquota di 30 ml di soluzione acida per 60 secondi e ripetere 4.2.1.
5. Illustra gli effetti del Inlet e dei Trasporti tubi Temperature in Breath Ammoniaca
- Esempi tre respiri nel corso di 15 min con la temperatura di ingresso impostati sotto della temperatura corporea, circa 30 ° C.
- Aumentare le temperature di ingresso e tubi di trasporto a 55 ° C, rispettivamente con una icona sul desktop sull'interfaccia touch screen del campionatore respiro. Lasciare che il sistema almeno 5 min per raggiungere lo stato stazionario.
- Esempio 3 respiri, 5 min a parte nella presa riscaldata.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
I soggetti possono essere tenuti a produrre una vasta gamma di livelli basali di ammoniaca respiro. Individui sani possono iniziare la giornata con una misura di ammoniaca soffio di 100-1.000 ppb. Sciacquare la bocca con il liquido cambia immediatamente l'importo delle rilevabile respiro ammoniaca. Liquidi neutri e acidi in genere tagliare la quantità di ammoniaca osservabile di oltre la metà. Questi livelli poi ritornano ai valori basali come gli effetti del risciacquo svanisce. Gli effetti di acqua sembrano dissipare entro 15 minuti, mentre un acido può mantenere rilevabile respiro ammoniaca al minimo per più di 2 ore. Un risciacquo di base, come il bicarbonato di sodio, si raddoppiare o triplicare la quantità di ammoniaca rilevabile respiro prima di tornare al basale nel corso di un periodo di 20 min. In particolare, il perossido di idrogeno non sembra influenzare espirata ammoniaca respiro più di altri risciacqui; così, non sembra che i batteri orali contribuiscono significativamente misurazione ammoniaca respiro.
Come notato unBove, il campionatore accoppiato al sensore ammoniaca fornisce dati continui un tecnico può utilizzare per valutare la qualità di un campione di aria espirata. Pressione bocca e anidride carbonica sono le due caratteristiche di una espirazione utilizzato per convalidare un campione di aria espirata. Pressione bocca serve come surrogato al flusso di aria dai polmoni nel campionatore. Il tecnico deve accertarsi che il soggetto è fornire un sufficiente flusso d'aria alveolare, che contiene il metabolita di interesse, nel monitor. I tecnici dovrebbero aspettarsi un range di normalità della pressione foce del 9-10,5 cm di acqua. L'espirazione dovrebbe essere abbastanza costante nel corso di 10-20 sec, che si manifesta nella deviazione standard di pressione bocca. Una deviazione standard di un respiro qualità dovrebbe essere inferiore a 1 cm di acqua.
Misurazione anidride carbonica è anche importante in quanto permette considerazione maggiori processo di espirazione. Durante la fase I, espirazione viene avviato e la composizione del gas espirato consiste di preprevalentemente anatomico aria spazio morto (~ 21% ossigeno, 0,03% di anidride carbonica, il 78% di azoto, e 0,5% di acqua) cioè., l'aria che si respirava in fase inspiratoria del ciclo respiratorio precedente. Durante la seconda fase, gas alveolare passa nello spazio morto anatomico e si mescola con l'aria spazio morto residua con il risultato che la concentrazione di biossido di carbonio aumenta rapidamente. La concentrazione di anidride carbonica nell'aria espirata continua ad aumentare, anche se più lentamente, nel corso della fase III espirazione e il valore di picco (concentrazione finale di marea) corrisponde alla concentrazione di anidride carbonica nel sangue venoso. Questo progressivo aumento della concentrazione di anidride carbonica nel corso della fase III è dovuto alla miscelazione dei gas alveolari con la restante dell'aria spazio morto ed è dovuto rallentare lo svuotamento di sacchi alveolari. La composizione di respiro alla fine della fase III è circa il 13% di ossigeno, 5% di anidride carbonica, il 78% di azoto, e il 4% di acqua. Livelli di anidride carbonica durante la fase III porzione di breath può variare da 30-40 mmHg. Fase III corrisponde al punto in cui questi livelli di CO 2 plateau (Figure 1A-D).
Figura 1. Campioni Breath che integrano la fase III porzione di dati respiro per varie condizioni. 1a) Un campione respiro tipico che integra la fase III porzione dei dati respiro. Le linee verticali verde e rosso impostare l'intervallo in cui la linea deve essere analizzato. Le prime porzioni di esalazione sono ignorati. 1b) L'effetto di un risciacquo acido trovi sul respiro ammoniaca. La conversione di NH 3 al NH 4 + abbassa drasticamente la quantità di ammoniaca rilevabile. Diminuzione risultati flusso nella riduzione di ammoniaca alveolare nel respiro campionata come visto in 1c. Il flusso diminuito fa not permettere quanta più aria alveolare da campionare. 1d) Un campione respiro che integra le fasi I, II, e III. L'inclusione di fasi I e II nell'analisi abbassa ammoniaca e anidride carbonica considerevolmente. Questa è una riflessione imprecisa di ammoniaca sistemica. Cliccare qui per vedere una versione più grande di questa figura.
La maggior parte dei soggetti sono in grado di produrre un alito accettabile il loro primo tentativo. Tuttavia, alcuni soggetti richiedono una ripetizione del respiro. Inoltre, come pressione e anidride carbonica vengono registrati, questi possono essere considerati nell'analisi dei dati.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
I vantaggi di una procedura non invasiva in grado di rilevare metaboliti traccia in tempo reale sono evidenti. Tuttavia, il campo della ricerca fiato ha lottato per adempiere a tale potenziale. Misurazione Breath è un processo dinamico vulnerabile a molti fattori confondenti. Il nostro approccio ha importanti punti di forza: in particolare, la sensibilità e la velocità del monitor ammoniaca basato Rice QEPAS accoppiato al campionatore respiro ci hanno permesso di valutare ed identificare respiro fattori raccolta germano a misura esatta. Questo approccio è molto affidabile: per esempio, dopo alcuni esperimenti preliminari, ciascuno dei quasi 500 singoli punti dati raccolti respiro per ultimi esperimenti era coerente con il risultato previsto 9.
Fino a quando i vari fattori che influenzano esalato l'ammoniaca respiro sono meglio compresi, è importante fornire istruzioni complete e uniformi per i soggetti prima dell'arrivo. Allo stato attuale, in genere chiediamo soggetti aveloce dopo la mezzanotte per la raccolta del mattino, lavarsi i denti superiori a 1 ora prima della presentazione, ed evitare l'esercizio fisico, il fumo, oppure compilando automobili con combustibili derivati dal petrolio. Anche se abbiamo valutato vari alimenti regimi la sera prima della raccolta dei dati (ad esempio, alta fibra v povera di fibre), non abbiamo dimostrato che la dieta dei dati in modo convincente gli impatti di base la mattina del test. Collezioni mattina minimizzare anche l'impatto delle variazioni giornaliere apparenti, che sembrano verificarsi per motivi sconosciuti 13.
Ci possono essere altri metodi altrettanto validi o superiori per la raccolta di ammoniaca esalato il respiro. È possibile, ad esempio, che un risciacquo normale in un punto di tempo impostato prima della raccolta respiro potrebbe comportare la misura utile di ammoniaca mucosa orale che potrebbe anche riflettere i livelli sistemici. Un altro percorso può abbandonare la cavità orale e misurare ammoniaca nasale o entrambi 10,14. Quest'ultimo approccio potrebbe ovviare alla necessità for il campionatore interfaccia. Indipendentemente da ciò, qualsiasi metodo deve considerare attentamente vari fattori tecnici relativi a questo metabolita volatili inclusi umidità, temperatura, pH, flusso, nonché biologia orofaringeo.
Naturalmente, le ipotesi e le convinzioni circa il metodo di misurazione hanno un'influenza fondamentale sulla analisi dei dati. Noi crediamo che la pressione e anidride carbonica sono aspetto fondamentale del controllo di qualità. Tuttavia, non è certo, per esempio, se l'ammoniaca deve essere segnalato come misurato, o anidride carbonica-regolato, con unità come ppb o picomole. Come sempre l'esperienza e la fiducia sono guadagnati nelle varie fonti di errori tecnici, le considerazioni complesse incombenti in analisi dei dati entrano in una maggiore attenzione e spingerà migliore comprensione di questa biologia molto impegnativo. (Figura 2: errore casuale e non casuale misurare la variabilità biologica Versus A epifenomeni o B Biological respirazione anormale...e orali Fattori / nasale o C e D. Attrezzatura Performance.)
Figura 2. Diagramma del paziente all'interfaccia respiro per un monitor ammoniaca. A) Il paziente deve essere testato ed è anche la parte più imprevedibile del processo di raccolta respiro. Mangiare dei pazienti, esercizio fisico e abitudine al fumo possono avere grandi impatti sulla raccolta dei dati. B) esalazioni Breath sono variabili da persona a persona, quindi un metodo per standardizzare respiri è importante. Fornire un segnale visivo per fornire flusso desiderabile di aria dai polmoni funziona bene per mantenere esalazioni uniforme. C) dispositivo di interfaccia respiro è strettamente legato al fatto che B consistenza respiro è un fattore importante in confronto soggetti. Il campionatore integrazione respirorface permette all'utente di visualizzare i vari parametri del campione respiro in tempo reale. D) monitor ammoniaca possono manifestarsi con diverse tecnologie. Spettroscopia fotoacustica maggiore quarzo ha molti vantaggi intrinseci che si ritiene essere l'ideale per l'analisi del respiro. cliccate qui per vedere una versione più grande di questa figura.
Limitazioni importanti per il presente procedimento devono essere riconosciuti. Mentre il campionatore è relativamente poco costoso e portatile, il monitor ammoniaca, come attualmente configurato, non è né. Di conseguenza, i soggetti devono venire al nostro spazio dedicato di ricerca fiato, come non possiamo spostare facilmente la nostra attrezzatura alla clinica. Questo fattore, insieme con la condizione che il respiro del soggetto espirare un unico respiro lungo, gli impatti che i soggetti possono essere studiati (cioè pazienti malati con cirrosi epatica, una popolazione bersaglio chiave, sono spesso praticheescluso camente). Inoltre, perché abbiamo un solo monitor, stiamo limitata nel numero di soggetti che possono essere realisticamente studiati in un determinato protocollo. A sua volta, questo influisce sulla dimensione del campione e potenza.
Come notato sopra, la raccolta di ossido nitrico è stato standardizzato dallo sforzo congiunto della American Thoracic Society e la European Respiratory Society. Non vi è attualmente alcun accordo equivalente per respirare l'ammoniaca, anche se più gruppi stanno facendo contributi critici al progresso della misurazione dell'ammoniaca respiro. Come la letteratura sulla traccia di respiro misura metabolita in generale e ammoniaca, in particolare, continua ad evolversi 15 ci saranno sicuramente molte modifiche e miglioramenti a venire. I monitor che sono più piccoli, più portatile, e meno costosi sono fondamentali per gli studi clinici multicentrici di successo.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
Gli autori riconoscono un sostegno finanziario da National Science Foundation (NSF) concedere CEE-0.540.832 intitolato "Tecnologie Mid-Infrared per la Salute e l'Ambiente (Mirthe)"
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Rice Ammonia Monitor System | N/A | N/A | Not available for commercial purchase |
| Loccioni Breath Sampler | Loccioni Humancare | N/A | Single breath version |
| Disposable Mouth Piece | WestPrime Healthcare | G011-200 | Manufacturer is AlcoQuant |
| Laptop | Lenovo | N/A | Old model no longer sold by manufacturer |
| Acid Rinse | N/A | N/A | Household acidic drink (coffee, soft drink, citrus juices, etc) |
| Base Rinse | N/A | N/A | Water mixed with a nonexact amount of sodium bicarbonate (Arm & Hammer Baking Soda) |
| Neutral Rinse | N/A | N/A | Water |
References
- Adeva, M. M., Souto, G., Blanco, N., Donapetry, C. Ammonium metabolism in humans. Metabolism: clinical and experimental. 61 (11), 1495-1511 (2012).
- Auron, A., Brophy, P. D. Hyperammonemia in review: pathophysiology, diagnosis, and treatment. Pediatric nephrology. 27 (2), 207-222 (2012).
- Blanco Vela, C. I., Bosques Padilla, F. J. Determination of ammonia concentrations in cirrhosis patients-still confusing after all these years. Annals of hepatology. 10 Suppl 2, (2011).
- Mpabanzi, L., Ol de Damink, S. W. M., van de Poll, M. C. G., Soeters, P. B., Jalan, R., Dejong, C. H. C. To pee or not to pee: ammonia hypothesis of hepatic encephalopathy revisited. European journal of gastroenterology & hepatology. 23 (6), 449-454 (2011).
- Goggs, R., Serrano, S., Szladovits, B., Keir, I., Ong, R., Hughes, D. Clinical investigation of a point-of-care blood ammonia analyzer. Veterinary clinical pathology / American Society for Veterinary Clinical Pathology. 37 (2), 198-206 (2008).
- Huizenga, J. R., Tangerman, A., Gips, C. H. Determination of ammonia in biological fluids. Annals of clinical biochemistry. 31 (Pt 6), 529-543 (1994).
- Lewicki, R., et al. Real time ammonia detection in exhaled human breath with a quantum cascade laser based sensor. 2009 Conference on Lasers and ElectroOptics and 2009 Conference on Quantum electronics and Laser Science Conference. 1, (2009).
- American Thoracic Society. European Respiratory Society. Recommendations for Standardized Procedures for the Online and Offline Measurement of Exhaled Lower Respiratory Nitric Oxide and Nasal Nitric Oxide. American journal of respiratory and critical care medicine. 171 (8), 912-930 (2005).
- Solga, S. F., et al. Factors influencing breath ammonia determination. Journal of breath research. 7 (3), (2013).
- Schmidt, F. M., et al. Ammonia in breath and emitted from skin. Journal of breath research. 7 (1), (2013).
- Spaněl, P., Dryahina, K., Smith, D. A quantitative study of the influence of inhaled compounds on their concentrations in exhaled breath. Journal of breath research. 7 (1), (2013).
- Boots, A. W., van Berkel, J. J. B. N., Dallinga, J. W., Smolinska, A., Wouters, E. F., van Schooten, F. J. The versatile use of exhaled volatile organic compounds in human health and disease. Journal of breath research. 6 (2), (2012).
- Hibbard, T., Killard, A. J. Breath ammonia levels in a normal human population study as determined by photoacoustic laser spectroscopy. Journal of breath research. 5 (3), (2011).
- Wang, T., Pysanenko, A., Dryahina, K., Spaněl, P., Smith, D. Analysis of breath, exhaled via the mouth and nose, and the air in the oral cavity. Journal of breath research. 2 (3), (2008).
- Amann, A., Smith, D. Volatile Biomarkers. 1st Edition. , (2013).
