Summary
מודל פרה קליני, עכברי של גרורות בכבד מבוצע באמצעות טכניקת הזרקת hemispleen.
Abstract
מודלים עכבריים רבים פותחו כדי ללמוד סרטן בבני אדם ולקדם את ההבנה של טיפול בסרטן ובפיתוח. כאן, מודל פרה קליני, עכברי לבלב גידול של גרורות בכבד באמצעות הזרקת hemispleen של תאים סרטניים syngeneic עכבריים לבלב מתואר. מודל זה מחקה רב של המצבים הקליניים בחולים עם מחלה גרורתית בכבד. עכברים לפתח באופן עקבי גרורות בכבד ומאפשר לחקירה של התהליך גרורתי, בדיקת טיפול ניסיוני, ומחקר אימונולוגיה גידול.
Introduction
אדנוקרצינומה ductal הלבלב (PDA) הוא הגורם המוביל הרביעי של מקרי מוות מסרטן הקשורים בארצות הברית 1. ההישרדות של חמש שנים עבור חולים עם מחשב כף יד גרורתי היא 2-12 1%. למרות שטיפול כימותרפי אדג'וונטי וneoadjuvant לסרטן לבלב הוא יעיל יותר היום מאשר אי פעם, עדיין נותר צורך נואש בטיפולים חדשניים.
פיתוח תרופות חדשניות מחייב מודלים של בעלי חיים פרה קליניים אמין. למרות שהמודלים של גידול תת עורי הם קלים לשימוש, חסרונות כוללים את חוסר היכולת של גידולים אלה לשלוח גרורות ולחקות את התקדמות הגידול וmicroenvironments ראתה בסרטן בבני אדם. מודלים מהונדסים גנטי, כגון עכבר המהונדס גנטי המכיל קראס וp53 לדפוק במוטציות סרטניות (מודל KPC) 2 ומודל KPC עם נותב שושלת YFP (מודל PKCY) 3 יאפשר לחקר גידולים מתרחשים באופן טבעי בimmunocompeteעכברי NT. בנוסף, microenvironment הגידול הוא ללא שינוי ודומה יותר לזו שנצפתה בהתקדמות גידול אנושית. לרוע המזל, העיתוי של התפתחות גידולים הוא משתנה בתוך המודלים האלה, שהופך אותו קשים ללמוד טיפולים ניסיוניים. בנוסף, backcrossing של עכברים אלו דורש כמות משמעותית של זמן והתחייבות כספית, וזה לא תמיד אפשרי. לבסוף, מודלים עכבר מחשב כף יד xenograft מושתלים מחייבים דיכוי חיסוני בעכברים, אשר שינו או microenvironments גידול נעדרה. כתוצאה מכך, יעילותם של טיפולים ניסיוניים הוכיחו במודלים פרה אלה הן לעתים קרובות לא לשחזור בניסויים קליניים בבני אדם 4.
מודל עכבר hemisplenectomy זה מנצל תאי גידול Panc02, שהם קו סרטני מאוד, methylcholanthrene מושרה לבלב תאי גידול נגזר מעכברי C57BL / 6 5, 6. בנוסף, שורות תאים אחרות עכבריות מחשב כף יד נובעות ממיקרופון KPCדואר ניתן להשתמש במודל זה. Schulick et al. פתח בעבר טכניקת hemisplenectomy ויצרתי מודל עכבר syngeneic של גרורות סרטן מעי גס 7. מודל hemisplenectomy זה (איור 1) מציע חיסון גידול עקבי ושווה בעכברים עם מערכת חיסון הלוואות עצמו לחקירה של סוכנים טיפוליים חדשניים 7-10.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
כל הניסויים בבעלי החיים תאמו את הנחיות ועדת הטיפול ושימוש בבעלי חיים של אוניברסיטת ג'ונס הופקינס, ובעלי חיים נשמרו בהתאם להנחיות של האגודה להערכה והסמכה של מעבדה טיפול (AAALAC). ההליך כירורגי מבוצע בתנאים סטריליים בחדר ניתוח שעובר מינימום של חמישה עשר החלפות אוויר בשעה. כל המכשירים הם מעוקרים ידי המעוקר לפני ההליך ושוב עם 70% אתנול בין כל עכבר במהלך ההליך. כל העכברים לא צפויים לשרוד את ההליך כירורגי מורדמים תחת CO 2 למשך 3 דקות ואחריו נקע בצוואר הרחם ועדיין תחת הרדמה.
.1 תא הכנה
- Resuspend תאי Panc02 בתרבית שנאגרו מלוח פוספט ב2 x10 7 תאים / מ"ל, ולשמור על קרח.
.2 עכבר הכנה
- לנהל Ketaminדואר intraperitoneally ל8-12 שבוע נקבות עכברי C57BL / 6 ישנים במנות מחולקות (100 מ"ג / קילוגרם) מעורב עם Xylazine (10 מ"ג / קילוגרם).
- בדוק שרפלקס נסיגת קמצוץ הבוהן הוא בוטל על מנת להבטיח שהעכבר הוא בהרדמה מלאה.
- לנהל מינונים נוספים של קטמין (100 מ"ג / קילוגרם) מעורבים עם Xylazine (10 מ"ג / קילוגרם) לפי צורך כדי להרדים באופן מלא העכברים.
- החל Vet המשחה Puralube לעיניים של העכברים כדי למנוע התייבשות ואילו העכברים נמצאים תחת הרדמה.
- לגלח את אזור הניתוח של העכברים, כדי למנוע זיהום של הפצע.
- הכן את שטח subcostal השמאלי של החתך עם 70% אתנול ולאחר מכן יוד.
- מניחים לעטוף כירורגית סביב הבטן כדי לשמור על סטריליות.
.3 Laparotomy
- לעשות חתך subcostal עזב בקנה אחד עם אוזן השמאל דרך העור ודרך הצפק באמצעות אזמל.
- לבטא את הטחול דרך החתך על ידי יישום p הדיגיטלי בו זמניתressure לאורך היבטי גולגולת וזנב של החתך.
- אתר את כלי דם הטחול בסוף הנחות של הטחול.
- מחלקים את הטחול על ידי הצבת שני קליפים ligating גודל בינוני אופק במרכז להיות זהיר, כדי למנוע נזק לכלי דם הטחול בקטבי הטחול הטחול.
- הנח את המוט העליון של הטחול בחזרה לתוך הצפק, כדי למנוע זיהום.
הזרקת .4 גידול
- צייר את 150 μl של בופר פוספט לx 5/8 "מזרק 26 G.
- צייר את של Panc02 100 μl (2 x10 6) תאים לאותו המזרק שמירה על המזרק בתנוחה זקופה בכל העת במהלך ההזרקה.
- טובלים את המחט בפתרון אתנול 70%. המחט טבולה ב70% אתנול על מנת להבטיח סטריליות.
- הזרק תאים לאט לתוך hemispleen נחשף להיות בטוח המזרק נשמר זקוף בכל העת. השיפוע של syrinיש לשים לב ge בכל העת באמצעות הקפסולה הטחול כדי למנוע הזרקת התאים תחת הטחול. ההלבנה של כלי הטחול ודם צריכה להיות שנצפתה על זריקה.
- לרומם את הטחול ולהחיל קליפ האופק הבינוני אחד מתחת לטחול כדי לחסום את כלי דם של טחול.
- החל קליפ אופק אחד קטן להיבט הדיסטלי ביותר של הלבלב וכלי הטחול.
- לקשור את הלבלב וטחול כלי מhemispleen על ידי חיתוך מעל קליפים האופק.
- מניחים את העכבר בצד שלה ", ולהשקות את החתך עם מים מזוקקים.
.5 בטן סגר והתאוששות מן ההרדמה
- סגור את הצפק עם תפר 4-0 ריצה.
- החל 02:58 קליפים עור כדי לסגור את החתך בעור.
- לנהל 0.1 מ"ג / קילוגרם עצירות או 5-10 מ"ג תת עורי / קילוגרם carprofen כדי להקל על כאב שלאחר ניתוח.
- מניחים את העכבר על כרית חימום לrecאוברי עד נייד והעכבר מדגים דפוסי נשימה רגילים. בעלי חיים חזרו רק לחברה של בעלי חיים אחרים לאחר שחלים באופן מלא מההליך כירורגי.
.6 Necropsy בחינה וקצירה של הכבד
- בין 30 60 ימים לאחר הניתוח, עכברים יתחילו להראות תסמינים קליניים של גרורות וידרשו המתת חסד. סימנים של מחלה גרורתית, הדורשות הרדמה הומנית כוללים בטן מוגדלת ופיתוח של מיימת. להרדים עכברים על ידי שאיפה של CO 2.
- בעקבות שאיפה, לבצע נקע בצוואר הרחם.
- לאחר שבעל החיים נקבעו להיות לא מגיב, עושה חתך דרך הצפק לחשוף את הבטן באמצעות מספריים.
- בעזרת מלקחיים ומספריים, בעדינות לחתוך את הכבד מחוץ לבטן.
- מניחים את הכבד במתחם אוקטובר, ובזק להקפיא באמצעות חנקן נוזלי. אחסן את הכבד ב -80 מעלות צלזיוס. לחלופין, בשידור חיr יכול להיות קבוע ב16% ניטראלי שנאגרו פורמלין ב RT ל24 שעות ופרפין מוטבעים.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
תאי גידול Panc02 מוזרקים לתוך hemispleen (איור 1) גרורות בכבד טופס בעכברי 100%, ואילו גרורות ריאות והצפק לא ציינו אם הטכניקה מבוצעת בצורה נכונה. טכניקה זו שבוצעה על יותר ממאה עכברים באמצעות תאי Panc02 בניסויים מרובים, עצמאיים, וreproducibly, כל עכברים שלא טופלו למות עם גרורות בכבד בין 30 60 ימים לאחר הליך hemisplenectomy (איור 2). כדי להשיג מובהקות סטטיסטיות בין הקבוצות שלא טופלו ומטופלים, עשרה עכברים בכל קבוצה יש צורך. עם זאת, מספר זה ישתנה ביחס לשורת התאים ותכנית טיפול בשימוש. כאשר תאי Panc02 משמשים במודל זה, יכול להיות שנצפה גרורות בכבד מרובה על necropsy (איור 3).
תאי גידול KPC, שהם בשורת תאים הסרטניים syngeneic לבלב שנלקחה מעכברים מהונדסים שיש רקמות ספציפיות קראס וp53 לדפוק בגם מוטציות 11, ניתן להשתמש במודל זה. שימוש בתוצאות של תאים אלה בגרורות בכבד דומה (איור 4). עם זאת, בעת הערכת היווצרות גרורות בכבד באמצעות שורת תאים שונה, מספר התאים המוזרקים צריך להיות טיטרציה עד שכל עכברים שלא טופלו לפתח גרורות בכבד. תאי Panc02 יכולים לשמש כביקורת חיובית על מנת להבטיח כי הניתוח בוצע בצורה נכונה. חשוב לציין, בזמן שהיקף ההיווצרות של גרורות בכבד והישרדות יכול להשתנות בהתאם לקו התא משמש, תוך ניסוי אחד, כל עכברים שלא טופלו לפתח גרורות בכבד בניטל דומה, ולמות מגרורות אלה reproducibly בתוך תקופה קצרה של זמן. לכן, נורמליזציה של נטל גידול על ידי אולטרסאונד אין צורך בשימוש בטכניקה זו.
כישלון לגרום לתוצאות גרורות בכבד בכבד נורמלי המופיע על necropsy, אשר עשוי להצביע על כך שההליך לא בוצע כראוי. עם זאת, נכשל או דהיווצרות elayed של גרורות עלולה לגרום לאחר טיפול עם טיפולים המדכאים או לעכב את הצמיחה גרורתי (איור 5), וכתוצאה מכך ההישרדות ממושכת. לכן, מודל זה יכול לשמש כדי להעריך את ההשפעות של סוכנים טיפוליים שונים על צמיחת גידול ויצירת גרורות.
בגלל זה הוא אפשרי מבחינה טכנית כדי להעריך את הכבד על ידי אולטרסאונד, אולטרסאונד חיה קטן (איור 6) 12 ניתן להשתמש כדי להעריך את היווצרות in vivo של גרורות בכבד. בנוסף, ההיווצרות של גרורות ניתן לבדוק עוד יותר על ידי היסטופתולוגיה הבאה necropsy (איור 7).
איור 1 סכמטי של מודל hemisplenectomy, המשמשכדי ליצור גרורות בכבד בלבלב עם תאי גידול Panc02.
איור 2 הישרדות נציג של עכברי C57BL / 6 לאחר שעבר hemisplenectomy Panc02 ביום 0 מוצג בעקומת Kaplan-Meier (n = 10). עכברים הוזרקו תאים סרטניים Panc02 במודל זה כל למות בין 30 60 ימים הבאים הליך אם טיפולי גידולים אנטי לא מנוהלים.
איור 3 בדיקה גולמית של הכבד לאחר ההזרקה של תאי Panc02 לhemispleen מגלה גרורות בכבד (אינדיקהטד בחצים). אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.
איור 4 בדיקה הגולמית של הכבד לאחר הזרקת hemispleen של תאים סרטניים KPC לhemispleen מגלה גרורות בכבד (חיצים שחורים) שיחליפו את parenchyma הנורמלי בכבד (חץ לבן). אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.
>
איור 5 בדיקה הגולמית של הכבד לאחר התערבות טיפולית יעילה. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.
איור 6 בדיקת אולטרה סאונד של כבד באמצעות אולטרסאונד Vevo 660 חיה קטנה על עכבר עם נגע גרורתי גדול בכבד (החץ השחור) לאחר הליך hemisplenectomy. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.
ig7highres.jpg "src =" / קבצים / ftp_upload / 51,677 / 51677fig7.jpg "/>
איור 7 צביעת H & E של גרורות בכבד פרפין מוטבעות נוצרו על ידי תאי Panc02 במודל hemisplenectomy. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
מודל זה פרה קליני עכברי של גרורות בסרטן לבלב בכבד באמצעות טכניקת הזרקת hemispleen הוא הדגם הראשון שתואר, שמשקף רבים של מצבים הקליניים ואימונולוגיים של חולים עם מחלה גרורתית בכבד. מודל זה מציע מספר יתרונות על פני מודלים עכבריים אחרים. ראשית, בניגוד למודלים מהונדסים של סרטן לבלב שבו רק 30% מהעכברים לפתח גרורות בכבד והעיתוי של היווצרות גרורות משתנים מאוד, מודל זה מציע את היתרון של גרורות קבלת באופן עקבי בכבד בעכברים 100% ב זמן אחיד, מאפשר לחוקרים ללמוד מחלה גרורתית בהגדרה זו. בנוסף, מודל זה שומר hemispleen נאיבי, כדי לאפשר ניתוח חיסוני דם היקפי במודל לשחזור. יתר על כן, בהיעדר טיפולים אנטי גידולים, עכברים מתים מהתקדמות גידול בנקודת זמן עקבית בהתאם לעומס הגידול הראשוני, וההישרדות עולה בקנה אחדמניסוי אחד למשנהו. לבסוף, מודל זה יש מגוון רחב של יישומים, כולל המחקר של גרורות בכבד 13, גידול אימונולוגיה 10, ובדיקת טיפול ניסיוני 9.
השלבים הקריטיים של טכניקה זו הם הכנת ההשעיה תא, הזרקת התאים הסרטניים, המיקום של קליפים האופק, ואת המיקום של קליפים העור. כדי להבטיח ניתוח מוצלח ולהימנע מהטיה אפשרית של התוצאות, השינויים של השלבים הקריטיים הבאים עשויים להיות נחוצים. ראשית, במהלך הכנת השעיה תא, קיים הכרח כי השעיה אחד של תאים שתתקבל ומוזרקת לתוך hemispleen. בצעדים כבדים קטין של תאים סרטניים יהיו לחסום את כלי הטחול ולגרום למוות בטרם עת במהלך ניתוח. זה יכול להימנע על ידי resuspending התאים בסוכן declumping ועל ידי הכנת כל מזרק להזרקה מייד לפני ההזרקה. בנוסף, במהלך תקופת ההכנה שלמזרק, זוהי החובה של התאים לא לערבב עם סומק פוספט שנאגרו מלוח. זו יכולה להיות מושגת על ידי ראשון עריכת פוספט שנאגרו מלוח ולאחר מכן ציור מאוד לאט את התאים, כדי למנוע ערבוב, שמירה על המזרק בתנוחה זקופה בכל העת. שנית, במהלך שלב הזרקת תאים הסרטניים, השיפוע של המזרק יש לשים לב בכל העת באמצעות הקפסולה הטחול כדי למנוע הזרקת התאים תחת הטחול. ההלבנה של כלי הטחול ודם צריכה להיות שנצפתה על הזרקה, אשר מציינת כי תאי הגידול כבר הזריקו בהצלחה בטחול. בעכברים צעירים עם טחול קטן יותר, ייתכן שיהיה צורך להזריק נפח קטן יותר של הסומק מאשר סיכון התאים הדולפים מהטחול. אם כל דולף חשוד, להניח את העכברים בצד שלהם ולשטוף את הטחול עם מים מזוקקים לפני תפירת העכברים כדי לסייע להסיר את כל תאים שאולי דלפו במהלך שלב ההזרקה. אי להסיר תאים אלו יביאובצמיחת גידול באזור ההזרקה, אשר עלול לגרום למוות לפני השגת גרורות נאותות. שלישית, את המיקום של קליפים האופק תחת hemispleen הוא חשוב להבטחה כי אין דימום לאחר פינוי hemispleen. קליפים אופק נוספים ניתן להשתמש כדי לחסום כלי לפי צורך. השלב הקריטי הסופי של טכניקה זו הוא המיקום של קליפים העור. אם העכברים שמתבצע הבאים להישרדות, זה עשוי להיות נחוץ כדי לתפור את העור של העכברים ולא באמצעות קליפים עור. מדי פעם, קליפים העור ייפלו לפני הריפוי המלא של הפצע בעור, אשר יכול להפוך את העכברים רגישים לזיהום. תפירה של העור, להיפרד מהצפק, תמנע את הבעיה הזו.
אמנם שיטה זו לא תסולא בפז ללימוד התהליך גרורתי ומחלה גרורתית, מודל זה יש מספר מגבלות. ראשית, אופי השחזור של מודל זה עושה את זה עדיף על מהונדס וorthotopiדגמי ג ללימוד התהליך גרורתי וmicroenvironment הגידול באתרים גרורתי. עם זאת, בגלל האופי של המודל, השלבים הסופיים רק של התהליך, extravasation וקולוניזציה גרורתית, ניתן ללמוד. זה מגביל את התועלת של מודל זה ללימוד התהליך המלא גרורתי ולא מאפשר לחקירה את האותות המעוררים intravasation של תאים סרטניים. שנית, בזמן שהוא חשוב כדי לשמור על תפקוד מערכת חיסון מלא בעכברים אלה על ידי שמירה על מחצית מhemispleen, ניתוח של לימפוציטים בכבד כולל הן לימפוציטים מהכבד הנורמלי, כמו גם לימפוציטים מmicroenvironment הגידול, אשר יכול לגרום לייצוג מוטה במעמד החיסון האמיתי בתוך microenvironment הגידול. השימוש בשורות תאי הסרטן אגרסיביים יותר שיובילו לגרורות נרחבות יותר אל הכבד יכול לעזור להתגבר על מגבלה זו של המודל. בנוסף, אם גרורות הם דמיינו על necropsy, זה עשוי להיות אפשרי!דואר לנתח גרורות מהכבד הנורמלית ולנתח רק לימפוציטים מסוג שנמצאו בגרורות נוספות לעקוף את הבעיה הזו. לסיכום, בעוד שמודל זה יש כמה חסרונות, הוא גם מציע יתרונות רבים על פני דגמים אחרים ולכן צריך לשמש להשלים מודלים אלה כאשר לומדים מחלה גרורתית בכבד.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
אי לנו קונפליקטים רלוונטיים של עניין לחשוף.
Acknowledgments
KF וKO הם שיתוף המחברים הראשונים יחד עם KS
עבודה זו נתמכה בחלקה על ידי AHPBA המלגה (KS), NIH K23 CA148964-01 (LZ), בית הספר לרפואה ג'ונס הופקינס קליני פרס המדען (LZ), Viragh קרן והמרכז דלג Viragh סרטן הלבלב באוניברסיטה ג'ונס הופקינס (EMJ ו LZ), הקרן הלאומית ללבלב (LZ), Lefkofsky קרן המשפחה (LZ), SPORE NCI בCA062924 P50 הסרטן במערכת העיכול (EMJ, LZ), הקרן לוסטגרטן (LZ), ומענקי סול גולדמן לבלב מרכז הסרטן (KS , BHE, LZ).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Cell culture media and components | will vary depending on cell line | ||
| Phosphate Buffered Saline | Gibco by Life Technologies | 10010-023 | |
| 15 ml centrifuge tubes | Corning | 430052 | |
| Curved Operating Scissor | Roboz Surgical Store | RS-6835 | |
| Micro Dissecting Graefe Forceps | Roboz Surgical Store | RS-5130 | |
| Needle holder (regular) | World Precision Instruments, Inc | ||
| 3-0 or 4-0 suture | courtesy of dept of surgery, Johns Hopkins | ||
| Weck Horizon Open Ligating Clip Applier, small, angled | Teleflex | 137085 | |
| Weck Horizon Open Ligating Clip Applier, medium, angled | Teleflex | 237115 | |
| Weck Horizon medium ligating clips | Teleflex | 002200 | |
| Weck Horizon small ligating clips | Teleflex | 001200 | |
| Syringe, 1 cc, tb syringe, 3/8" slip tip | Becton Dickinson | 309625 | |
| Syringe, 1 cc, tb syringe, 5/8" slip tip | Becton Dickinson | 309597 | |
| 9 mm Autoclip Applier | Mikron | 427630 | |
| 9 mm Autoclip | Becton Dickinson | 427631 | |
| Heating pad | Sunbeam | CAT93 | |
| 70% Ethanol | sold by numerous vendors | ||
| Ketamine Hydrochloride | Hospira | 22395DD | |
| Xylazine hydrochloride | Sigma | X1251 |
References
- American Cancer Society. Cancer Facts & Figures. , American Cancer Society. Atlanta. (2013).
- Clark, C. E., Beatty, G. L., Vonderheide, R. H. Immunosurveillance of pancreatic adenocarcinoma: insights from genetically engineered mouse models of cancer. Cancer letters. 279, 1-7 (2009).
- Rhim, A. D., et al. EMT and dissemination precede pancreatic tumor formation. Cell. 148, 349-361 (2012).
- Frese, K. K., Tuveson, D. A.
- Corbett, T. H., et al. Induction and chemotherapeutic response of two transplantable ductal adenocarcinomas of the pancreas in C57BL/6 mice. Cancer research. 44, 717-726 (1984).
- Leao, I. C., Ganesan, P., Armstrong, T. D., Jaffee, E. M. Effective depletion of regulatory T cells allows the recruitment of mesothelin-specific CD8 T cells to the antitumor immune response against a mesothelin-expressing mouse pancreatic adenocarcinoma. Clinical and translational science. 1, 228-239 (2008).
- Jain, A., et al. Synergistic effect of a granulocyte-macrophage colony-stimulating factor-transduced tumor vaccine and systemic interleukin-2 in the treatment of murine colorectal cancer hepatic metastases. Annals of surgical oncology. 10, 810-820 (2003).
- Yoshimura, K., et al. Selective targeting of antitumor immune responses with engineered live-attenuated Listeria monocytogenes. Cancer research. 66, 1096-1104 (2006).
- Yoshimura, K., et al. Live attenuated Listeria monocytogenes effectively treats hepatic colorectal cancer metastases and is strongly enhanced by depletion of regulatory T cells. Cancer research. 67, 10058-10066 (2007).
- Olino, K., et al. Tumor-associated antigen expressing Listeria monocytogenes induces effective primary and memory T-cell responses against hepatic colorectal cancer metastases. Annals of surgical oncology. 19, Suppl 3. 597-607 (2012).
- Hingorani, S. R., et al. Trp53R172H and KrasG12D cooperate to promote chromosomal instability and widely metastatic pancreatic ductal adenocarcinoma in mice. Cancer cell. 7, 469-483 (2005).
- Marion, A., Aoudi, W., Basarab, A., Delachartre, P., Vray, D. Blood flow evaluation in high-frequency, 40 MHz imaging: a comparative study of four vector velocity estimation methods. Ultrasonics. 50, 683-690 (2010).
- Zheng, L., et al. Tyrosine 23 phosphorylation-dependent cell-surface localization of annexin A2 is required for invasion and metastases of pancreatic cancer. PloS one. 6, e19390 (2011).
