Summary
A، نموذج الفئران قبل السريرية الانبثاث الكبدي تنفيذ عبر تقنية الحقن hemispleen.
Abstract
وقد وضعت العديد من نماذج الفئران لدراسة السرطانات البشرية وتعزيز فهم علاج السرطان والتنمية. هنا، يتم وصف وقبل السريرية، نموذج الفئران ورم البنكرياس الانبثاث الكبد عن طريق الحقن hemispleen من الخلايا السرطانية في البنكرياس الفئران مسانج. هذا النموذج يقلد الكثير من الحالات السريرية في المرضى الذين يعانون من المرض المنتشر في الكبد. الفئران تتطور باستمرار الانبثاث في كبد السماح للتحقيق في عملية النقيلي، اختبار العلاج التجريبي، والبحوث ورم المناعة.
Introduction
غدية الأقنية البنكرياسية (PDA) هو رابع سبب لوفيات السرطان ذات الصلة في الولايات المتحدة 1. بقاء خمس سنوات لمرضى PDA النقيلي هو 2-12٪ 1. على الرغم من أن العلاج الكيميائي المساعد والمواد الجديدة المساعدة لسرطان البنكرياس هو أكثر فعالية اليوم من أي وقت مضى، لا يزال هناك حاجة ماسة لعلاجات جديدة.
تطوير علاجات جديدة تستلزم النماذج الحيوانية قبل السريرية موثوقة. على الرغم من أن نماذج ورم تحت الجلد هي واضحة للاستخدام، وتشمل عيوب عدم قدرة هذه الأورام إلى metastasize وتحاكي تطور الورم وmicroenvironments ينظر في السرطانات البشرية. النماذج المعدلة وراثيا، مثل الماوس المعدلة وراثيا تحتوي على البروتين p53 KRAS والضربة القاضية في الطفرات أنكجنيك (نموذج KPC) 2 ونموذج مؤسسة البترول الكويتية مع النسب التتبع YFP (نموذج PKCY) 3 تسمح لدراسة الأورام التي تحدث بشكل طبيعي في immunocompeteالفئران الإقليم الشمالي. بالإضافة إلى ذلك، المكروية الورم هي دون تغيير وتشبه عن كثب ما تشهده تطور الورم البشري. للأسف، توقيت تطوير ورم متغير ضمن هذه النماذج، الأمر الذي يجعل من الصعب دراسة العلاجات التجريبية. بالإضافة إلى ذلك، backcrossing من هذه الفئران يتطلب قدرا كبيرا من الوقت والالتزام المالي، وهي ليست دائما ممكنة. أخيرا، تستلزم نماذج الماوس طعم أجنبي PDA زرع المناعة الفئران، والتي غيرت أو microenvironments الورم غائبة. ونتيجة لذلك، فإن فعالية العلاجات التجريبية أثبتت في هذه النماذج قبل السريرية غالبا ما تكون غير قابلة للتكرار في التجارب السريرية البشرية 4.
هذا نموذج الفأر hemisplenectomy يستخدم الخلايا السرطانية Panc02، والتي هي، ميثيل كولانترين يسببها البنكرياس خط الخلية السرطانية مكون للأورام عالية المستمدة من C57BL / 6 الفئران 5، 6. بالإضافة إلى ذلك، خطوط الخلايا PDA الفئران الأخرى المستمدة من هيئة التصنيع العسكري مؤسسة البترول الكويتيةه يمكن استخدامها في هذا النموذج. Schulick وآخرون قد وضعت سابقا تقنية hemisplenectomy وخلق نموذج الفأر مسانج الانبثاث سرطان القولون 7. هذا النموذج hemisplenectomy (الشكل 1) تقدم ثابت ومتساو التلقيح الورم في الفئران مناعيا الإقراض نفسها إلى التحقيق في العوامل العلاجية رواية 7-10.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
تتفق جميع التجارب على الحيوانات إلى المبادئ التوجيهية للجنة رعاية واستخدام الحيوان في جامعة جونز هوبكنز، وتمت المحافظة على الحيوانات وفقا للمبادئ التوجيهية للجمعية للتقويم والاعتماد للرعاية المختبرات (AAALAC). يتم إجراء العملية الجراحية تحت ظروف معقمة في غرفة العمليات التي يخضع ما لا يقل عن خمسة عشر تبادل الهواء في الساعة. يتم تعقيم جميع الأدوات قبل التعقيم قبل الإجراء ومرة أخرى مع الايثانول 70٪ بين كل الماوس أثناء العملية. يصرح باستخدامها كل الفئران التي لا يتوقع أن يعيشوا العملية الجراحية تحت CO 2 لمدة 3 دقائق تليها خلع عنق الرحم في حين لا يزال تحت التخدير.
1. خلية التحضير
- الخلايا resuspend Panc02 مثقف في الفوسفات مخزنة المالحة في 2 X10 7 خلية / مل، والحفاظ على الجليد.
2. ماوس التحضير
- إدارة Ketaminه (100 ملغ / كلغ) مختلطة مع زيلازين (10 ملغ / كلغ) داخل الصفاق إلى 8-12 أسبوع من العمر C57BL / 6 الفئران الإناث مقسمة على جرعات.
- تحقق لمعرفة أن قرصة أخمص قدميه الانسحاب المنعكس هو إلغاء لضمان أن الفأر هو تخدير كامل.
- إدارة جرعات إضافية من الكيتامين (100 ملغ / كلغ) مختلطة مع زيلازين (10 ملغ / كلغ) حسب الحاجة للتخدير الكامل الفئران.
- تطبيق Puralube الطبيب البيطري مرهم للعيون من الفئران لمنع جفاف في حين أن الفئران تحت التخدير.
- حلق المنطقة الجراحية من الفئران لتفادي تلوث الجرح.
- الإعدادية المنطقة تحت الضلع الأيسر من شق مع الايثانول 70٪ ثم اليود.
- وضع ثنى الجراحية حول البطن للحفاظ على العقم.
3. البطن
- إجراء شق تحت الضلع الأيسر في خط مع الأذن اليسرى عن طريق الجلد وعن طريق الغشاء البريتوني باستخدام مشرط.
- التعبير عن الطحال من خلال شق طريق تطبيق ص الرقمي المتزامنressure على طول جوانب الجمجمة والذيلية من شق.
- تحديد موقع الأوعية الدموية الطحال في نهاية السفلي من الطحال.
- تقسيم الطحال عن طريق وضع اثنين الأفق متوسطة الحجم مقاطع ligating في وسط الطحال والحرص على تجنب إتلاف الأوعية الدموية الطحال في القطبين الطحال.
- وضع القطب العلوي من الطحال العودة الى الصفاق لتجنب التلوث.
4. ورم حقن
- وضع 150 ميكرولتر من الفوسفات مخزنة المالحة الى 26 G س 5/8 "حقنة.
- وضع 100 ميكرولتر من Panc02 (2 X10 6) خلايا في نفس حقنة الحفاظ على حقنة في وضع رأسي في جميع الأوقات خلال الحقن.
- تراجع الإبرة في محلول الإيثانول 70٪. وتراجع إبرة في الايثانول 70٪ لضمان العقم.
- حقن الخلايا ببطء في hemispleen تتعرض يجري التأكد يتم الاحتفاظ حقنة تستقيم في جميع الأوقات. شطبة من syrinينبغي مراعاتها جنرال الكتريك في جميع الأوقات من خلال كبسولة الطحال لتجنب حقن الخلايا تحت الطحال. يجب وحظ تبييض الأوعية الطحال والدم على الحقن.
- رفع الطحال وتطبيق احدة متوسطة الأفق كليب تحت الطحال إلى انسداد الأوعية الدموية الطحال.
- تطبيق مقطع واحد الأفق صغير إلى الجانب الأكثر البعيدة من البنكرياس والطحال السفن.
- Ligate البنكرياس والطحال السفن من hemispleen عن طريق خفض فوق مقاطع الأفق.
- ضع الماوس على 'جانبها، ولري شق بالماء المقطر.
5. إغلاق البطن والشفاء من التخدير
- إغلاق الصفاق مع غرزة 4-0 على التوالي.
- تطبيق 2-3 مقاطع الجلد لإغلاق شق الجلد.
- إدارة 0.1 ملغم / كغم البوبرينورفين أو 5-10 ملغ / كغ كاربروفين تحت الجلد لتخفيف الألم بعد الجراحة.
- ضع الماوس على وسادة التدفئة للتفصيلأوفري حتى المحمول والماوس يوضح أنماط التنفس العادية. يتم إرجاع الحيوانات فقط على الشركة من الحيوانات الأخرى بعد تعافيه تماما من العملية الجراحية.
6. التشريح وفحص حصاد الكبد
- ما بين 30 إلى 60 يوما بعد الجراحة، وسوف تبدأ الفئران لتظهر الأعراض السريرية لورم خبيث، وسوف تتطلب القتل الرحيم. وتشمل علامات المرض المنتشر تتطلب القتل الرحيم إنسانية البطن الموسع وتطوير الاستسقاء. الموت ببطء الفئران عن طريق استنشاق CO 2.
- بعد استنشاق، نفذ خلع عنق الرحم.
- بعد أن تم تحديد الحيوان أن تكون غير مستجيبة، من خلال إجراء شق الصفاق لفضح البطن باستخدام مقص.
- باستخدام ملقط ومقص، وقطع بلطف الكبد من البطن.
- وضع الكبد في أكتوبر المجمع، وفلاش تجميد باستخدام النيتروجين السائل. تخزين الكبد في -80 درجة مئوية. بدلا من ذلك، يعيشص يمكن أن تكون ثابتة في 16٪ من الفورمالين محايدة مخزنة في RT لمدة 24 ساعة وجزءا لا يتجزأ من البارافين.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
خلايا الورم Panc02 حقنها في hemispleen (الشكل 1) الانبثاث الكبد النموذج في 100٪ من الفئران، بينما لا يلاحظ الرئة والانبثاث البريتوني إذا تم تنفيذ هذه التقنية بشكل صحيح. وقد تم تنفيذ هذه التقنية على أكثر من مائة الفئران باستخدام الخلايا في Panc02 متعددة، تجارب مستقلة، وبتكاثر، كل الفئران غير المعالجة يموت مع الانبثاث الكبد بين 30 و 60 يوما بعد إجراء hemisplenectomy (الشكل 2). للحصول على دلالة إحصائية بين المجموعات غير المعالجة والمعالجة، وهناك حاجة إلى عشرة الفئران في المجموعة. ومع ذلك، فإن هذا الرقم تختلف فيما يتعلق خط الخلية وخطة العلاج المستخدمة. عندما تستخدم خلايا Panc02 في هذا النموذج، الانبثاث الكبد متعددة يمكن ملاحظتها على التشريح (الشكل 3).
الخلايا السرطانية مؤسسة البترول الكويتية، والتي هي البنكرياس خط الخلية السرطانية مسانج المستمدة من الفئران المعدلة وراثيا وجود KRAS الأنسجة محددة والبروتين p53 الضربة القاضية فيويمكن أيضا أن الطفرات 11، أن تستخدم في هذا النموذج. باستخدام هذه النتائج الخلايا في الانبثاث الكبد مماثلة (الشكل 4). ومع ذلك، عند تقييم تكوين ورم خبيث في الكبد باستخدام خط خلية مختلفة، ينبغي معاير عدد الخلايا حقن جميع الفئران غير المعالجة حتى تطور الانبثاث الكبد. خلايا Panc02 يمكن استخدامها كعنصر تحكم إيجابية لضمان أن تم إجراء الجراحة بشكل صحيح. الأهم من ذلك، في حين أن مدى تشكيل الانبثاث الكبد والبقاء على قيد الحياة يمكن أن تختلف تبعا لخط الخلية المستخدمة، في تجربة واحدة، كل الفئران غير المعالجة تطوير الانبثاث الكبد في عبء مماثل وتموت من هذه الانبثاث بتكاثر في غضون فترة قصيرة من الزمن. وبالتالي، تطبيع عبء الورم عن طريق الموجات فوق الصوتية وليس من الضروري عند استخدام هذه التقنية.
فشل للحث على النتائج الانبثاث في كبد الكبد الظهور العادي على التشريح، والتي قد تشير إلى أن الإجراء لم يتم تنفيذ بشكل صحيح. ومع ذلك، فشلت أو دتشكيل elayed الانبثاث قد يؤدي بعد العلاج مع العلاجات التي تقمع أو تمنع نمو النقيلي (الشكل 5)، مما أدى إلى بقاء لفترة طويلة. لذلك، هذا النموذج يمكن أن تستخدم لتقييم آثار مختلف العوامل العلاجية على نمو الورم وتشكيل النقائل.
لأنه من الممكن تقنيا لتقييم الكبد عن طريق الموجات فوق الصوتية، والموجات فوق الصوتية الحيوانات الصغيرة (الشكل 6) 12 يمكن استخدامها لتقييم تكوين الجسم الحي في الانبثاث في الكبد. وبالإضافة إلى ذلك، وتشكيل الانبثاث يمكن فحصها بمزيد من التشريح تشريح التالية (الشكل 7).
الرقم 1. تخطيطي للنموذج hemisplenectomy، والذي يستخدملخلق الانبثاث الكبد البنكرياس مع خلايا الورم Panc02.
الشكل 2. بقاء الممثل من C57BL / 6 الفئران بعد خضوعه Panc02 hemisplenectomy يوم 0 يظهر في منحنى كابلان ماير (ن = 10). سوف الفئران حقنها بخلايا الورم Panc02 في هذا النموذج كل يموت ما بين 30 و 60 يوما التالية ل الإجراء إذا لا تدار العلاجات المضادة الورمية.
الرقم 3. الفحص الإجمالي للكبد التالية حقن الخلايا Panc02 في hemispleen يكشف الانبثاث الكبد (إنديكاتيد بواسطة السهام). يرجى النقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.
الرقم 4. الفحص الإجمالي للكبد التالية hemispleen حقن الخلايا السرطانية في مؤسسة البترول الكويتية hemispleen يكشف الانبثاث الكبد (الأسهم السوداء) التي تحل محل لحمة الكبد طبيعية (السهم الأبيض). يرجى النقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.
>
الشكل 5. الفحص الإجمالي للكبد بعد تدخل علاجي فعال. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.
الرقم 6. الموجات فوق الصوتية الكبد باستخدام الموجات فوق الصوتية VEVO 660 حيوان صغير على الفأر مع آفة النقيلي كبيرة في الكبد (السهم الأسود) باتباع الإجراء hemisplenectomy. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.
ig7highres.jpg "SRC =" / الملفات / ftp_upload / 51677 / 51677fig7.jpg "/>
الرقم 7. H & E تلطيخ من البارافين جزءا لا يتجزأ من الانبثاث الكبد شكلتها خلايا Panc02 في النموذج hemisplenectomy. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
هذا نموذج الفئران قبل السريرية لورم خبيث في البنكرياس السرطان إلى الكبد عن طريق تقنية الحقن hemispleen هو النموذج الأول وصف يعكس العديد من الحالات السريرية والمناعية للمرضى الذين يعانون من المرض المنتشر في الكبد. هذا النموذج يقدم العديد من المزايا على نماذج الفئران الأخرى. أولا، على عكس النماذج المعدلة وراثيا من سرطان البنكرياس الذي 30٪ فقط من الفئران تطوير الانبثاث إلى الكبد وتوقيت تشكيل الانبثاث هو متغير تماما، وهذا النموذج يوفر ميزة الحصول باستمرار ورم خبيث في الكبد إلى 100٪ من الفئران في وقت موحد، وتمكين الباحثين لدراسة المرض المنتشر في هذا الإعداد. بالإضافة إلى ذلك، يحتفظ هذا النموذج على hemispleen ساذجة للسماح للتحليل الدم المحيطي المناعة في نموذج استنساخه. وعلاوة على ذلك، في غياب العلاج المضاد للالورمية، والفئران تموت من تطور الورم عند نقطة زمنية متسقة اعتمادا على الورم الأولي، والبقاء يتسقمن تجربة واحدة إلى أخرى. أخيرا، وهذا النموذج لديه مجموعة متنوعة من التطبيقات بما في ذلك دراسة الانبثاث الكبد 13، 10 ورم المناعة، واختبار العلاج التجريبي 9.
الخطوات الحاسمة لهذه التقنية هي إعداد تعليق خلية، وحقن الخلايا السرطانية، ووضع لقطات الأفق، ووضع لقطات الجلد. لضمان عملية جراحية ناجحة وتجنب انحراف محتمل للنتائج، قد التعديلات التالية من الخطوات الحاسمة يكون ضروريا. أولا، خلال إعداد تعليق خلية، لا بد من أن تعليق واحد من الخلايا الحصول على وحقنه في hemispleen. والتثاقل صغيرا من الخلايا السرطانية انسداد الأوعية الطحال ويؤدي إلى الوفاة المبكرة أثناء الجراحة. هذا يمكن تجنبها عن طريق إعادة التعليق الخلايا في وكيل declumping وإعداد كل حقنة للحقن مباشرة قبل الحقن. بالإضافة إلى ذلك، أثناء التحضير للحقنة، لا بد من أن الخلايا لا يختلط مع الفوسفات مخزنة المالحة دافق. ويمكن تحقيق ذلك من خلال الاعتماد أولا المالحة الفوسفات مخزنة ومن ثم رسم ببطء شديد يصل الخلايا لتجنب الاختلاط، والحفاظ على حقنة في وضع رأسي في جميع الأوقات. ثانيا، خلال الخطوة حقن الخلايا السرطانية، ينبغي مراعاة شطبة من الحقنة في جميع الأوقات من خلال كبسولة الطحال لتجنب حقن الخلايا تحت الطحال. يجب وحظ تبييض الأوعية الطحال والدم على الحقن، مما يدل على أن الخلايا السرطانية قد حقن بنجاح في الطحال. في الفئران الأصغر سنا مع الطحال أصغر، قد يكون من الضروري لحقن حجم أصغر من تدفق الخلايا من خطر تسرب من الطحال. إذا اشتبه أي تسرب، وضع الفئران الى جانبهم وغسل الطحال مع الماء المقطر قبل خياطة الفئران للمساعدة على إزالة أي الخلايا التي قد تسربت خلال خطوة الحقن. عدم إزالة هذه الخلايا سيؤديفي نمو الورم في موقع الحقن، والتي قد تسبب الموت قبل تحقيق الانبثاث كافية. ثالثا، وضع لقطات الأفق تحت hemispleen مهم لضمان عدم وجود نزيف بعد إزالة hemispleen. يمكن استخدام لقطات الأفق إضافية لتسد الأوعية عند الضرورة. الخطوة الحاسمة النهائية لهذا الأسلوب هو موضع مقاطع الجلد. إذا كانت الفئران يجري فيما يلي من أجل البقاء، قد يكون من الضروري لخياطة الجلد في الفئران بدلا من استخدام مقاطع الجلد. في بعض الأحيان، فإن مقاطع الجلد تسقط قبل الشفاء الكامل من الجرح الجلد، والتي قد تجعل الفئران عرضة للإصابة. خياطة الجلد، وفصل من الصفاق، ومنع حدوث هذه المشكلة.
في حين أن هذه التقنية لا تقدر بثمن لدراسة عملية النقيلي والمرض المنتشر، وهذا النموذج لديه عدد قليل من القيود. أولا، طبيعة استنساخه من هذا النموذج يجعل من فضل على المعدلة وراثيا وorthotopiج نماذج لدراسة عملية النقيلي والمكروية ورم في مواقع النقيلي. ومع ذلك، بسبب طبيعة النموذج، فقط الخطوات النهائية للعملية النقيلي، التسرب والاستعمار، يمكن دراستها. وهذا يحد من فائدة هذا النموذج لدراسة عملية كاملة والنقيلي لا يسمح للتحقيق في الإشارات التي تحفز دخول الوعاء الخلايا السرطانية. ثانيا، في حين أنه من المهم الحفاظ على الوظيفة المناعية الكاملة في هذه الفئران من خلال الاحتفاظ نصف hemispleen، وتحليل الخلايا اللمفية في الكبد تشمل كلا من الخلايا الليمفاوية من الكبد طبيعية وكذلك الخلايا الليمفاوية من المكروية الورم، مما قد يؤدي إلى تمثيل منحازة من الحالة المناعية صحيح داخل المكروية الورم. استخدام خطوط الخلايا السرطانية أكثر عدوانية التي تؤدي إلى الانبثاث أكثر اتساعا إلى الكبد يمكن أن تساعد في التغلب على هذا القيد للنموذج. بالإضافة إلى ذلك، إذا تم تصور الانبثاث على التشريح، قد يكون من الامكانه لتشريح النقائل من الكبد الطبيعي وتحليل فقط الخلايا الليمفاوية وجدت في الانبثاث مزيد من الالتفاف على هذه المشكلة. باختصار، في حين أن هذا نموذج لديها العديد من العيوب، كما أنه يوفر مزايا عديدة أكثر النماذج الأخرى، وبالتالي ينبغي أن تستخدم تكمل هذه النماذج عند دراسة المرض المنتشر في الكبد.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
الكتاب ليس لديهم الصراعات ذات الصلة التي تهم الكشف عنها.
Acknowledgments
KF وKO وشارك في أول الكتاب إلى جانب KS
وأيد هذا العمل في جزء من زمالة AHPBA (KS)، NIH K23 CA148964-01 (LZ)، وكلية جونز هوبكنز للطب جائزة السريرية عالم (LZ)، ومؤسسة Viragh ومركز السرطان تخطي Viragh البنكرياس في جامعة جونز هوبكنز (EMJ و LZ)، المؤسسة الوطنية البنكرياس (LZ)، وLefkofsky الأسرة مؤسسة (LZ)، وSPORE NCI في الجهاز الهضمي السرطان P50 CA062924 (EMJ، LZ)، ومؤسسة Lustgarten (LZ)، ومنح مركز سول غولدمان سرطان البنكرياس (KS ، BHE، LZ).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Cell culture media and components | will vary depending on cell line | ||
| Phosphate Buffered Saline | Gibco by Life Technologies | 10010-023 | |
| 15 ml centrifuge tubes | Corning | 430052 | |
| Curved Operating Scissor | Roboz Surgical Store | RS-6835 | |
| Micro Dissecting Graefe Forceps | Roboz Surgical Store | RS-5130 | |
| Needle holder (regular) | World Precision Instruments, Inc | ||
| 3-0 or 4-0 suture | courtesy of dept of surgery, Johns Hopkins | ||
| Weck Horizon Open Ligating Clip Applier, small, angled | Teleflex | 137085 | |
| Weck Horizon Open Ligating Clip Applier, medium, angled | Teleflex | 237115 | |
| Weck Horizon medium ligating clips | Teleflex | 002200 | |
| Weck Horizon small ligating clips | Teleflex | 001200 | |
| Syringe, 1 cc, tb syringe, 3/8" slip tip | Becton Dickinson | 309625 | |
| Syringe, 1 cc, tb syringe, 5/8" slip tip | Becton Dickinson | 309597 | |
| 9 mm Autoclip Applier | Mikron | 427630 | |
| 9 mm Autoclip | Becton Dickinson | 427631 | |
| Heating pad | Sunbeam | CAT93 | |
| 70% Ethanol | sold by numerous vendors | ||
| Ketamine Hydrochloride | Hospira | 22395DD | |
| Xylazine hydrochloride | Sigma | X1251 |
References
- American Cancer Society. Cancer Facts & Figures. , American Cancer Society. Atlanta. (2013).
- Clark, C. E., Beatty, G. L., Vonderheide, R. H. Immunosurveillance of pancreatic adenocarcinoma: insights from genetically engineered mouse models of cancer. Cancer letters. 279, 1-7 (2009).
- Rhim, A. D., et al. EMT and dissemination precede pancreatic tumor formation. Cell. 148, 349-361 (2012).
- Frese, K. K., Tuveson, D. A. Maximizing mouse cancer models. Nature reviews. Cancer. 7, 645-658 (2007).
- Corbett, T. H., et al. Induction and chemotherapeutic response of two transplantable ductal adenocarcinomas of the pancreas in C57BL/6 mice. Cancer research. 44, 717-726 (1984).
- Leao, I. C., Ganesan, P., Armstrong, T. D., Jaffee, E. M. Effective depletion of regulatory T cells allows the recruitment of mesothelin-specific CD8 T cells to the antitumor immune response against a mesothelin-expressing mouse pancreatic adenocarcinoma. Clinical and translational science. 1, 228-239 (2008).
- Jain, A., et al. Synergistic effect of a granulocyte-macrophage colony-stimulating factor-transduced tumor vaccine and systemic interleukin-2 in the treatment of murine colorectal cancer hepatic metastases. Annals of surgical oncology. 10, 810-820 (2003).
- Yoshimura, K., et al. Selective targeting of antitumor immune responses with engineered live-attenuated Listeria monocytogenes. Cancer research. 66, 1096-1104 (2006).
- Yoshimura, K., et al. Live attenuated Listeria monocytogenes effectively treats hepatic colorectal cancer metastases and is strongly enhanced by depletion of regulatory T cells. Cancer research. 67, 10058-10066 (2007).
- Olino, K., et al. Tumor-associated antigen expressing Listeria monocytogenes induces effective primary and memory T-cell responses against hepatic colorectal cancer metastases. Annals of surgical oncology. 19, Suppl 3. 597-607 (2012).
- Hingorani, S. R., et al. Trp53R172H and KrasG12D cooperate to promote chromosomal instability and widely metastatic pancreatic ductal adenocarcinoma in mice. Cancer cell. 7, 469-483 (2005).
- Marion, A., Aoudi, W., Basarab, A., Delachartre, P., Vray, D. Blood flow evaluation in high-frequency, 40 MHz imaging: a comparative study of four vector velocity estimation methods. Ultrasonics. 50, 683-690 (2010).
- Zheng, L., et al. Tyrosine 23 phosphorylation-dependent cell-surface localization of annexin A2 is required for invasion and metastases of pancreatic cancer. PloS one. 6, e19390 (2011).
