Summary
Karaciğer metastazlarının klinik öncesi bir sıçangil modeli, hemispleen enjeksiyon tekniği ile gerçekleştirilir.
Abstract
Sayısız fare modelleri, insan kanserleri çalışma ve kanser tedavisi ve kalkınma anlayışı ilerletmek için geliştirilmiştir. Burada, sinjenik mürin pankreas tümörü hücreleri hemispleen enjeksiyon ile karaciğer metastazlarının klinik öncesi, kemirgen pankreatik tümör modeli tarif edilmektedir. Bu model, karaciğere metastatik hastalığı olan hastalarda klinik durumların bir çoğu taklit eder. Fareler sürekli metastatik sürecinin incelenmesi, deneysel tedavi test ve tümör immünoloji araştırma için izin karaciğer metastazı gelişir.
Introduction
Pankreas duktal adenokarsinom (PDA) Amerika Birleşik Devletleri 1 kansere bağlı ölümlerin dördüncü önde gelen nedenidir. Metastatik PDA hastalar için beş yıllık sağkalım% 2-12 1'dir. Pankreas kanseri için adjuvan kemoterapi ve bugün her zamankinden daha etkili olmasına rağmen, hala yeni tedaviler için umutsuz bir ihtiyaç duyulmaktadır.
Yeni tedavilerin geliştirilmesi güvenilir klinik öncesi hayvan modellerinde gerektirir. , Deri altı tümör modelleri kullanmak için basit olmasına rağmen, dezavantajları, insan kanserlerinde görülen tümör ilerlemesi ve mikroçevrelerde metastaz taklit etmek için, bu tümörlerin yetersizlik içerir. Bu p53 ve Kras knock-onkojenik mutasyonların (KMG modeli) 2 ve bir soy YFP izleyicinin (PKCY model) KMG modeli içeren genetik olarak fare gibi genetik olarak modeller, 3 immunocompete doğal olarak oluşan tümörlerin çalışma için izin verirnt farenin. Buna ek olarak, tümör mikro değiştirilmemiş ve daha yakın insan tümör progresyonu görülene benzemektedir. Ne yazık ki, tümör gelişim zamanlaması zor deneysel tedavilerin çalışma yapar, bu model, içinde değişkendir. Ayrıca, bu farelerin geriye dönük melezleştirme zaman ve her zaman mümkün değildir, finansal bağlılık, önemli bir miktarda enerji gerektirmektedir. Son olarak, implante ksenogreft PDA fare modelleri değişmiş fareleri, ya da yoktur tümör mikroçevrelerde immünokompromize gerektirecek. Bunun bir sonucu olarak, bu klinik öncesi modellerinde ortaya deneysel tedavilerin etkinliği sıklıkla insan klinik deneylerinde 4 tekrarlanabilir değildir.
Bu hemisplenectomy fare modeli C57BL / 6 farelerinin 5, 6 türetilmiş bir çok tümörijenik, metilkolantren kaynaklı pankreatik tümör hücre soyu olan Panc02 tümör hücrelerini kullanır. Ayrıca, diğer sıçangil PDA hücre çizgileri KMG mikrofon türetilmişE Bu modelde kullanılabilir. Schulick ve ark. Önce bir hemisplenectomy tekniğini geliştirmiş ve kolon kanseri metastazı 7 genden fare modeli oluşturduk. Bu hemisplenectomy modeli (Şekil 1) yeni terapötik ajanların 7-10 soruşturma için borç verme bağışıklığı farelerde tutarlı ve eşit tümör aşılama sunuyor.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Tüm hayvan deneyleri Johns Hopkins Üniversitesi Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu kurallarına uyduğu, ve hayvanlar Laboratuarı Değerlendirme ve Bakımı Akreditasyon (AAALAC) Derneği kurallarına uygun olarak muhafaza edildi. Cerrahi işlem on beş saatte hava değişim minimum giren bir ameliyathanede steril koşullar altında gerçekleştirilir. Tüm cihazlar, işlem sırasında önce, her bir fare arasında% 70 etanol ile işlem ve tekrar otoklav ile sterilize edilir. Cerrahi prosedürü hayatta beklenmemektedir bütün fareler anestezi altında ise hala sonra servikal dislokasyon yapılmıştır 3 dakika boyunca CO2 altında kurban edilmiştir.
1. Hücre Hazırlanması
- 2 x10 7 hücre / ml fosfat tamponlu tuzlu su içinde kültürlenmiş hücrelerin tekrar Panc02 ve buz üzerinde tutun.
2. Fare Hazırlık
- Ketamin yönetmeXylazine (10 mg / kg) ile karıştırılmıştır E (100 mg / kg) intraperitoneal olarak 8-12 hafta bölünmüş dozlarda C57BL / 6 dişi fareleri kullanıldı.
- Ayak tutam geri çekilme refleksi Fare tamamen uyuşturulduktan sağlamak için kaldırılmıştır olduğunu görmek için kontrol edin.
- Tam fareler anestezi için gerektiği kadar ksilazin (10 mg / kg) ile karıştırılmıştır Ketamin ilave dozda (100 mg / kg) uygulayın.
- Fareler anestezi altında iken kurumasını önlemek için, farelerin gözlerine Puralube Veteriner merhemi uygulanır.
- Yaranın kirlenmesini önlemek için farelerin cerrahi alan tıraş.
- Daha sonra iyot% 70 etanol ile kesi sol subcostal alanı hazırlayın.
- Sterilliği korumak için, karın çevresinde bir cerrahi örtü yerleştirin.
3. Laparotomi
- Deri yoluyla ve bir neşter kullanılarak karın zarı aracılığıyla sol kulakta doğrultusunda sol subkostal kesi yapmak.
- Eşzamanlı dijital p uygulayarak kesiden dalak ifadekesi kranial ve kaudal yönleri boyunca hava basıncı.
- Dalak alt ucunda dalak, kan damarları bulun.
- Dalak kutuplarda dalak, kan damarları zarar vermemek için dikkatli olmak dalak merkezinde iki Horizon orta boy ligatlayıcı klipleri koyarak dalak bölün.
- Kirlenmeyi önlemek için geri periton içine dalak üst kutbunu yerleştirin.
4. Tümör Enjeksiyon
- Bir 26 G x 5/8 "şırınga içine fosfat tamponlu tuzlu su, 150 ul hazırlayın.
- Enjeksiyon sırasında her zaman dik bir pozisyonda şırınga muhafaza aynı enjektöre 100 Panc02 ul (2 x10 6) hücrelerini çizin.
- % 70 etanol çözeltisi içinde iğne batırın. İğne sterilizasyonu sağlamak için% 70 etanol içinde daldırılır.
- Şırınga her zaman dik tutulur emin olarak maruz hemispleen yavaşça hücreleri enjekte edilir. Enjektörler arasında şevge dalak altında hücrelerin enjekte edilmesini önlemek için dalak kapsülü ile her zaman dikkat edilmelidir. Dalak ve kan damarlarının bir beyazlatma enjeksiyonu üzerine dikkat edilmelidir.
- Dalak yükseltmek ve dalak kan damarlarını tıkamak için dalak altında bir orta Horizon klibi geçerlidir.
- Pankreas ve dalak gemilerin en distal yönüne küçük bir Horizon klibi uygulayın.
- Horizon klipleri yukarıdaki keserek hemispleen gelen pankreas ve dalak gemilerin Arter.
- Onun 'yan fare yerleştirin ve distile su ile kesi sulamak.
Anestezi 5. Karın Kapanış ve Kurtarma
- 4-0 çalışan dikiş ile periton kapatın.
- Cilt insizyon kapatmak için iki veya üç cilt klipleri uygulayın.
- Cerrahi sonrası ağrıyı hafifletmek için 0.1 mg / kg buprenorfini veya 5-10 mg / kg Karprofen subkutan yönetmek.
- Rec için bir ısıtma pedi üzerinde fare yerleştirinovery mobil kadar ve fare düzenli nefes desen göstermektedir. Hayvanlar sadece tam cerrahi kurtardıktan sonra diğer hayvanların şirkete iade edilir.
6. Nekropsi Sınav ve Karaciğer Hasat
- Cerrahi sonrası 30 ila 60 gün arasında, farenin metastaz klinik belirtileri göstermeye başlayacak ve ötenazi gerektirir. Insani ötenazi gerektiren metastatik hastalık belirtileri büyütülmüş karınlarını ve assit gelişimi bulunmaktadır. CO 2 Solunduğunda fareler Euthanize.
- Teneffüs ardından, servikal çıkık gerçekleştirin.
- Hayvan duyarlı olmayan olduğu tespit edildikten sonra, makas kullanılarak karın ortaya çıkarmak için karın zarı içinden bir kesik.
- Forseps ve makas kullanarak, yavaşça karın dışına karaciğer kesti.
- OCT bileşiği karaciğer yerleştirin ve flaş sıvı azot kullanılarak dondurmak. -80 ° C de karaciğer saklayın. Alternatif olarak, canlır gömülü 24 saat ve parafin oda sıcaklığında% 16 nötr tamponlu formalin içinde tespit edilebilir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Hemispleen içine enjekte edilen tümör hücreleri Panc02 tekniği doğru yapılması halinde akciğer ve karın zarı metastaz gözlenmez iken (Şekil 1) farelerin% 100'ünde bir şekilde karaciğer metastazı. Bu teknik çok sayıda bağımsız deneylerde Panc02 hücreleri kullanılarak yüz üzerinde fareler üzerinde gerçekleştirilmiştir ve yeniden üretilebilir, tüm tedavi edilmemiş fareler hemisplenectomy prosedür (Şekil 2) takip eden 30 ila 60 gün, karaciğer metastazı ölür. Muamele edilmemiş ve edilmiş gruplar arasında istatistiksel olarak anlamlı elde edilmesi için, grup başına on fare ihtiyaç vardır. Ancak, bu sayı, kullanılan hücre çizgisi ve tedavi programına göre değişir. Panc02 hücreleri bu modelde kullanıldığında, birden çok karaciğer metastazı nekropsi (Şekil 3) sık sık tespit edilebilirler.
Dokuya özel Kras ve P53 içeren transgenik farelerden elde edilen genden pankreatik tümör hücre soyu olan KMG tümör hücreleri, knock-11 mutasyonlar, bu modelde de kullanılabilir. Benzer karaciğer metastazlarında bu hücrelerin sonuçları kullanarak (Şekil 4). Farklı bir hücre çizgisi kullanılarak karaciğer metastazı oluşumunu değerlendirirken, her tedavi edilmemiş fareler, karaciğer metastazları geliştiren kadar ancak enjekte edilen hücrelerin sayısı titre edilmelidir. Panc02 hücreleri cerrahi doğru gerçekleştiğinden emin olmak için bir pozitif kontrol olarak kullanılabilir. Karaciğer metastazlarının ve hayatta kalma oluşumu miktarı bir deneyde kullanılan hücre çizgisi, bağlı olarak da değişebilir başka nokta da, tüm tedavi edilmemiş fareler benzer bir yük karaciğer metastazı oluşan ve yeniden üretilebilir kısa bir süre içinde bu gibi metastaz ölmektedir. Bu tekniği kullanarak, bu nedenle, ultrason ile tümör yükü normalizasyonu gerekli değildir.
Başarısızlık prosedürü düzgün yapılmamıştır gösterebilir nekropsi üzerine normal görünen karaciğer, karaciğer metastazı sonuçları ikna etmek. Ancak, başarısız ya da dmetastaz oluşumu elayed uzun süreli hayatta kalma ile sonuçlanan, bastırılması ya da metastatik büyümesini önleyen tedavilere (Şekil 5) ile tedaviyi takiben neden olabilir. Bu nedenle, bu model, tümör büyümesi ve metastaz oluşumuna çeşitli terapötik maddelerin etkilerini değerlendirmek için kullanılabilir.
Bu ultrason ile karaciğer değerlendirmek teknik olarak mümkün olduğu için, küçük bir hayvan ultrason (Şekil 6) 12 karaciğerde metastaz in vivo oluşumunu değerlendirmek için de kullanılabilir. Buna ek olarak, metastaz oluşumu ayrıca nekropsi (Şekil 7), aşağıdaki histopatolojik olarak incelenebilir.
Kullanılan hemisplenectomy modeli Şekil 1 şematik,Panc02 tümör hücreleri ile pankreas karaciğer metastazı oluşturun.
C57BL / 6 farelerinin hayatta kalma Şekil 2. Örnek 0. günde Panc02 hemisplenectomy geçtikten sonra (n = 10)., Bu modelde, Panc02 tümör hücreleri enjekte edilmiş fareler, tüm takip eden 30 ila 60 gün arasında ölür Kaplan-Meier eğride gösterilmektedir prosedürü anti-neoplastik tedaviler uygulanabilir değilse.
Hemispleen içine Panc02 hücre enjeksiyonunun ardından karaciğer Şekil 3. Kaba inceleme karaciğer metastazı ortaya koymaktadır (indicaoklarla ted). , bu rakamın büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Hemispleen içine KPC tümör hücrelerinin hemispleen enjeksiyonu takiben karaciğer Şekil 4. Brüt muayenesi normal hepatik parankimi (beyaz ok) değiştirin karaciğer metastazlarının (siyah oklar) görülmektedir. , bu rakamın büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.
>
Etkili terapötik müdahale sonrasında karaciğer Şekil 5. Brüt sınav. , bu rakamın büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Şekil 6. hemisplenectomy prosedürü takip karaciğer (siyah ok) büyük bir metastatik lezyonu olan bir fare üzerinde bir Vevo 660 küçük hayvan ultrason kullanılarak Karaciğer ultrasonografisi. , bu rakamın büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.
ig7highres.jpg "src =" / files / ftp_upload / 51677 / 51677fig7.jpg "/>
Şekil 7. hemisplenectomy modelinde Panc02 hücrelerden oluşan parafin gömülü karaciğer metastazlarının H & E boyama. , bu rakamın büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Bir hemispleen enjeksiyon tekniği ile karaciğer, pankreas kanser metastazı bu klinik öncesi fare modeli, karaciğere metastatik hastalığı olan hastaların klinik ve immünolojik hastalıkların birçoğu aynaları tarif edilen birinci modelidir. Bu model, diğer sıçangil modellerinde fazla birkaç avantaj sunar. Farelerin sadece% 30 karaciğer ve metastaz oluşumu zamanlamasına metastazları geliştirir pankreas kanseri transjenik modelleri oldukça değişkendir farklı İlk olarak, bu model, farelerin% 100'ünde karaciğer sürekli olarak elde metastaz avantajını sunar üniforma zamanı, sağlayan araştırmacıların bu ortamda metastatik hastalığı incelemek için. Buna ek olarak, bu model tekrarlanabilir bir modelinde periferik kan immün analiz için saf hemispleen korur. Ayrıca, anti-neoplastik tedavilerin yokluğunda, fareler ilk tümör yüküne bağlı olarak, tutarlı bir zaman noktasında tümör ilerlemesi ölmektedir ve hayatta kalma tutarlıBir deneyde diğerine. Son olarak, bu model, karaciğer metastazı 13, 10, tümör immünolojisini ve deneysel tedavi test 9'un çalışma da dahil olmak üzere çeşitli uygulamalar bulunmaktadır.
Bu tekniğin önemli adımlar hücre süspansiyonu hazırlanması, tümör hücre enjeksiyonu Horizon kliplerin yerleştirme ve deri kliplerin yerleştirme bulunmaktadır. Başarılı bir ameliyat sağlamak ve elde edilen sonuçların muhtemel eğrilme önlemek için, kritik adımlar aşağıdaki değişiklikler gerekli olabilir. İlk olarak, hücre süspansiyonu hazırlanması sırasında, bir hücre süspansiyonu elde edildi ve tek hemispleen enjekte edilmesi şarttır. Tümör hücrelerinin topaklanma küçük damarların tıkanması dalak ve ameliyat sırasında erken ölüm ile sonuçlanır. Bu declumping madde içinde yeniden süspansiyona alınmasıyla hemen önce enjeksiyon için enjeksiyon için, her bir şırınga hazırlanmasıyla önlenebilir. Buna ek olarak, hazırlanması sırasındaşırınga, bu hücreleri değildir, fosfat tamponlu bir tuz akışı ile karıştırmak zorunludur. Bu, ilk olarak fosfat tamponlu tuzlu su hazırlanması ve daha sonra çok yavaş bir şekilde her zaman dik bir konumda muhafaza şırınga, karışmalarını önlemek üzere hücrelerin hazırlanması suretiyle elde edilebilir. İkinci olarak, tümör hücre enjeksiyonu aşaması sırasında, şırınganın konik dalak altında hücrelerin enjekte edilmesini önlemek için dalak kapsülü ile her zaman dikkat edilmelidir. Dalak ve kan damarlarının bir beyazlatıcı, tümör hücrelerinin başarılı dalak içine enjekte edilmiş olduğunu gösterir, enjeksiyonu üzerine dikkat edilmelidir. Daha küçük olan daha küçük olan dalak Farelerde, dalak sızıntı riski daha gömme hücrelerin daha küçük bir hacim enjekte etmek için gerekli olabilir. Herhangi bir sızıntı şüphesi varsa, onların tarafında fareler yatıyordu ve enjeksiyon aşaması esnasında sızmış olabilir herhangi bir hücre kaldırmanıza yardımcı fareler dikilmesi önce distile su ile dalak yıkayın. Neden olur, bu hücrelerin çıkarılması için başarısızlıkYeterli metastaz elde ölüm öncesi neden olabilir enjeksiyon bölgesinde, tümör büyümesi. Üçüncüsü, hemispleen altında Horizon kliplerin yerleştirme hemispleen çıkarılmasının ardından kanama olduğunu sağlamak için önemlidir. Ek Horizon klip gerekli damarları tıkamak için kullanılabilir. Bu tekniğin son kritik adım cilt klip yerleştirilmesidir. Farelerin hayatta olup olmadıkları aşağıda ediliyorsa, oldukça deri klipsler kullanılarak daha farelerin cilt kapatılması için gerekli olabilir. Bazen, deri klipsleri enfeksiyona yatkın hale gelmesine sebep olan fareler deri yaranın tam iyileşme, önce düşecektir. Cilt sütür, bu sorunu önlemek olacaktır, periton ayrı.
Bu teknik metastatik süreci ve metastatik hastalık eğitim için paha biçilmez iken, bu model birkaç sınırlaması vardır. İlk olarak, bu modelin tekrarlanabilir doğası transjenik ve orthotopi göre tercih yaparMetastatik süreci ve metastatik bölgelerinde tümör mikro eğitim c modelleri. Ancak, modelin yapısı nedeniyle, metastaz, damardan kan fışkırtma ve kolonizasyon sadece son adım incelenebilir. Bu, tam metastatik işlemi incelemek için bu modelin kullanımını kısıtlar ve tümör hücrelerinin intravasation uyaran sinyal halinde araştırılması için izin vermez. Bu hemispleen yarısı tutma bu farelerde tam bir bağışıklık fonksiyonu korunması önemlidir İkinci olarak, karaciğerde lenfositlerin analizi yanlı temsil neden olabilir tümörün mikro, hem de normal karaciğer lenfositlerin hem de lenfositlerdir tümörün mikro-ortamı içinde gerçek bir bağışıklık durumunun. Karaciğere daha yaygın metastaz yol daha agresif tümör hücre çizgilerinin kullanılması modeli bu sınırlamanın üstesinden gelmeye yardımcı olabilir. Metastazlar Nekropside üzerine görüntülenmiştir eğer Ayrıca, bu possibl olabilire, normal karaciğer metastazları incelemek ve sadece daha fazla bu sorunu engellemeyi metastaz bulunan lenfositleri analiz etmek. Bu model daha sonra çeşitli dezavantajları vardır ise Özet olarak, bu aynı zamanda, diğer modellere göre birçok avantaj sunar ve bu yüzden karaciğer metastazı üzerinde çalışıldığında, bu modelleri tamamlayıcı kullanılmalıdır.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarlar ifşa ilgi hiçbir ilgili çatışmaları var.
Acknowledgments
KF ve KO KS ile birlikte ilk yazarları co edilir
Bu çalışma AHPBA Kardeşliği (KS), NIH K23 CA148964-01 (LZ), Tıp Johns Hopkins Yüksekokulu Klinik Bilim İnsanı Ödülü (LZ), Virágh Vakfı ve Johns Hopkins Atla Virágh Pankreas Kanseri Merkezi (EMJ ve kısmen desteklenmiştir LZ), Ulusal Pankreas Vakfı (LZ), Lefkofsky Aile Vakfı (LZ), Gastrointestinal Kanserler P50 CA062924 yılında NCI SPORE (EMJ, LZ), Lustgarten Vakfı (LZ) ve Sol Goldman Pankreas Kanseri Merkezi hibeler (KS , BHE, LZ).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Cell culture media and components | will vary depending on cell line | ||
| Phosphate Buffered Saline | Gibco by Life Technologies | 10010-023 | |
| 15 ml centrifuge tubes | Corning | 430052 | |
| Curved Operating Scissor | Roboz Surgical Store | RS-6835 | |
| Micro Dissecting Graefe Forceps | Roboz Surgical Store | RS-5130 | |
| Needle holder (regular) | World Precision Instruments, Inc | ||
| 3-0 or 4-0 suture | courtesy of dept of surgery, Johns Hopkins | ||
| Weck Horizon Open Ligating Clip Applier, small, angled | Teleflex | 137085 | |
| Weck Horizon Open Ligating Clip Applier, medium, angled | Teleflex | 237115 | |
| Weck Horizon medium ligating clips | Teleflex | 002200 | |
| Weck Horizon small ligating clips | Teleflex | 001200 | |
| Syringe, 1 cc, tb syringe, 3/8" slip tip | Becton Dickinson | 309625 | |
| Syringe, 1 cc, tb syringe, 5/8" slip tip | Becton Dickinson | 309597 | |
| 9 mm Autoclip Applier | Mikron | 427630 | |
| 9 mm Autoclip | Becton Dickinson | 427631 | |
| Heating pad | Sunbeam | CAT93 | |
| 70% Ethanol | sold by numerous vendors | ||
| Ketamine Hydrochloride | Hospira | 22395DD | |
| Xylazine hydrochloride | Sigma | X1251 |
References
- American Cancer Society. Cancer Facts & Figures. , American Cancer Society. Atlanta. (2013).
- Clark, C. E., Beatty, G. L., Vonderheide, R. H. Immunosurveillance of pancreatic adenocarcinoma: insights from genetically engineered mouse models of cancer. Cancer letters. 279, 1-7 (2009).
- Rhim, A. D., et al. EMT and dissemination precede pancreatic tumor formation. Cell. 148, 349-361 (2012).
- Frese, K. K., Tuveson, D. A. Maximizing mouse cancer models. Nature reviews. Cancer. 7, 645-658 (2007).
- Corbett, T. H., et al. Induction and chemotherapeutic response of two transplantable ductal adenocarcinomas of the pancreas in C57BL/6 mice. Cancer research. 44, 717-726 (1984).
- Leao, I. C., Ganesan, P., Armstrong, T. D., Jaffee, E. M. Effective depletion of regulatory T cells allows the recruitment of mesothelin-specific CD8 T cells to the antitumor immune response against a mesothelin-expressing mouse pancreatic adenocarcinoma. Clinical and translational science. 1, 228-239 (2008).
- Jain, A., et al. Synergistic effect of a granulocyte-macrophage colony-stimulating factor-transduced tumor vaccine and systemic interleukin-2 in the treatment of murine colorectal cancer hepatic metastases. Annals of surgical oncology. 10, 810-820 (2003).
- Yoshimura, K., et al. Selective targeting of antitumor immune responses with engineered live-attenuated Listeria monocytogenes. Cancer research. 66, 1096-1104 (2006).
- Yoshimura, K., et al. Live attenuated Listeria monocytogenes effectively treats hepatic colorectal cancer metastases and is strongly enhanced by depletion of regulatory T cells. Cancer research. 67, 10058-10066 (2007).
- Olino, K., et al. Tumor-associated antigen expressing Listeria monocytogenes induces effective primary and memory T-cell responses against hepatic colorectal cancer metastases. Annals of surgical oncology. 19, Suppl 3. 597-607 (2012).
- Hingorani, S. R., et al. Trp53R172H and KrasG12D cooperate to promote chromosomal instability and widely metastatic pancreatic ductal adenocarcinoma in mice. Cancer cell. 7, 469-483 (2005).
- Marion, A., Aoudi, W., Basarab, A., Delachartre, P., Vray, D. Blood flow evaluation in high-frequency, 40 MHz imaging: a comparative study of four vector velocity estimation methods. Ultrasonics. 50, 683-690 (2010).
- Zheng, L., et al. Tyrosine 23 phosphorylation-dependent cell-surface localization of annexin A2 is required for invasion and metastases of pancreatic cancer. PloS one. 6, e19390 (2011).
