Modellering Stroke i mus: Permanent Koagulering af den distale Middle Cerebral Artery

Summary

Forskellige murine modeller af midterste cerebral arterie okklusion (MCAO) er meget udbredt i eksperimentel hjerneforskning. Her demonstrerer vi den model af transkraniel permanent distale MCAO der producerer konsekvent kortikal infarkt af en størrelse svarende til skade pålagt af flertallet af de menneskelige iskæmisk slagtilfælde.

Abstract

Slagtilfælde er den tredje hyppigste årsag til død og den vigtigste årsag til erhvervet voksen handicap i de udviklede lande. Kun meget begrænsede terapeutiske muligheder er tilgængelige for en lille andel af patienter med slagtilfælde i den akutte fase. Aktuel forskning intensivt søger efter nye terapeutiske strategier og fokuserer i stigende grad på den sub-akutte og kroniske fase efter slagtilfælde, fordi flere patienter kan være berettiget til terapeutiske indgreb i en længere tid vindue. Disse forsinkede mekanismer omfatter vigtige patofysiologiske veje såsom post-takts inflammation, angiogenese, neuronal plasticitet og regenerering. For at analysere disse mekanismer og efterfølgende evaluere nye lægemiddelkandidater, der eksperimentelle slagtilfælde modeller med klinisk relevans, lav dødelighed og høj reproducerbarhed efterspurgt. Desuden mus er de mindste pattedyr, hvor en fokalt slagtilfælde læsion kan induceres, og for hvilke et bredt spektrum af transgene modeller ertilgængelige. Derfor beskriver vi her musemodel af transkraniel permanent koagulation af den midterste cerebrale arterie via elektrokoagulation distalt af lenticulostriatal arterier, den såkaldte "koagulation model". Den resulterende infarkt i denne model er placeret hovedsageligt i cortex; den relative infarktvolumen i forhold til hjernens størrelse svarer til størstedelen af ​​de menneskelige slagtilfælde. Desuden modellen opfylder de ovennævnte kriterier for reproducerbarhed og lav dødelighed. I denne video viser vi de kirurgiske metoder for slagtilfælde induktion i "koagulation model", og rapportere histologiske og funktionelle analyseværktøjer.

Introduction

Slagtilfælde er den tredje hyppigste årsag til død og en af de vigtigste årsager af erhvervet voksen handicap i de udviklede lande ^1.. Ca. 80% af denne akutte neurologiske sygdom er forårsaget af hjerneiskæmi følge af en obstruktion af cerebral blodstrøm, mens omkring 15% er forårsaget af en intracerebral blødning ^2. Trods igangværende forskning, intravenøs administration af vævsplasminogenaktivator er den eneste godkendte farmakologisk behandling af iskæmisk slagtilfælde indtil videre, og kun tilgængelig for et mindretal af patienter med slagtilfælde på grund af den korte godkendte tidsvindue på 4,5 timer efter strokedebut ^3,4. Da der ikke er in vitro-modeller, som kan ordentligt modellere komplekse samspil mellem hjernen, karsystem og systemiske patofysiologiske mekanismer under slagtilfælde, dyremodeller er afgørende for præklinisk slagtilfælde forskning.

Derfor har flere iskæmisk slagtilfælde modeller er udviklet i en variabelETY af arter. En af de mest almindeligt anvendte takts modeller er "filamenter", hvor en sutur glødetråd transient indføres i arteria carotis interna og videresendes indtil spidsen okkluderer oprindelsen af ​​arteria cerebri media (MCA), hvilket resulterer i et stop af blodgennemstrømningen og efterfølgende hjerne infarkt af subkortikale og i tilfælde af langvarig okklusion også kortikale regioner ^5,6. I photothrombotic modeller af iskæmisk slagtilfælde, er en fotokemisk okklusion af bestrålede kortikale fartøj opnås efter injektion af en photosensitizer resulterer i små, lokalt afgrænsede læsioner ^7. Den permanente okklusion af MCA distale af lenticulostriatal arterier kan opnås ved en ligering af arterien, dets forbigående sammenpresning eller ved permanent koagulation ^8,9. Den resulterende infarkt i denne model overvejende påvirker neocortex ¹⁰ fordi okklusion af MCA i denne model er distal i forhold til lenticulostriatal arterier, der forsyner basalganglierne.

Da hovedparten af de menneskelige slagtilfælde læsioner er beliggende i det område af den midterste cerebral arterie, alle de fælles takts modeller ligne tillukning af MCA eller én af sine filialer ^11. MCA er en af ​​de store arterier, der giver blodtilførsel til hjernen; den hidrører fra den interne halspulsåren, ruter langs sidelinjen sulcus, hvor det så grene og projekter til basalganglierne og de laterale overflader af frontal, parietal og tindingelapperne, herunder den primære motor og sensoriske cortex. Højre og venstre MCA er forbundet til den forreste cerebrale arterier og den bageste kommunikere arterier, der forbinder til de bageste cerebrale arterier, skaber Circle of Willis (figur 1).

Som tidligere rapporteret af Carmichael et al. ^11. infarkter modelleret af den distale cerebri Arteri Okklusion (MCAO) model i mus omfatte omkring 10-15% af den halvkugle, og derved efterligne et flertal af de menneskelige slagtilfælde læsioner, som er placeret i det kortikale MCA territorium ^11,12. I 1981, Tamura et al. Beskrevet en permanent, transkraniel MCAO koagulation model i rotter ^8. Men den model, der er beskrevet af Tamura involverede en proksimal okklusion af MCA med henblik på at omgå de mere distale tvedeling af arterien. Således oprindelige "Tamura-model" inducerer ikke blot corticale men også striatale læsioner, svarende til læsioner opnået ved "filament-model" ^6. Her beskriver vi den permanente distale MCAO modellen ved transkraniel elektrokoagulation i mus. Derudover rapporterer vi relaterede histologiske og funktionelle metoder til analyse af udfald af slagtilfælde i denne model. Alle metoder er baseret på standard operationelle procedurer, der er udviklet og anvendt i vores laboratorier.

Protocol

Etik erklæring

Forsøgene rapporteret i denne video blev gennemført i overensstemmelse med de nationale retningslinjer for brugen af ​​forsøgsdyr og de protokoller, blev godkendt af de tyske statslige udvalg (Regierung von Oberbayern, München, Tyskland). 10 uger gamle han C57BL/6J mus anvendes i denne undersøgelse. Dyrene blev opstaldet under kontrolleret temperatur (22 ± 2 ° C), med en 12 timers lys-mørke-cyklus periode, og adgang til pelleteret foder og vand ad libitum. Smertestillende og beroligende protokoller er beskrevet som godkendt af de lokale statslige udvalg, men kan afvige fra protokoller, der anvendes i andre laboratorier.

1.. Forberedelse af Materiale og instrumenter

1. Slut varme tæppe for at opretholde operationsområdet varme og opretholde musen kropstemperatur under anæstesi (37 ° C).
2. Forbered autoklaveres saks, pincet og bomuld, dexpanthenol øjensalve og suturmateriale. Forbered en sprøjte med saltopløsning (uden nål) for at opretholde operationsområdet hydreret. Forbered anæstesi gas (70% N ₂ O + 30% O ₂ + isofluran).
3. Injicer analgetika intraperitonealt: Metamizol 200 mg / kg, Carprofen 4 mg / kg og buprenorphin 0,1 mg / kg.
4. Placer musen i induktion kammer med en isofluran flow på 4% til bedøver det indtil spontan bevægelse af kroppen og vibrissae stopper.
5. Overfør musen i sideleje med næsen i anæstesi masken og opretholde isofluran-koncentration på 4% for cirka et minut, så reduceres og det ved approx.1.5% for at opretholde passende anæstesi.
6. Påfør dexpanthenol øje salve på begge øjne.

2.. Distal MCAO model

1. Lav en 1 cm incision i huden mellem øret og øjet ved hjælp af små drift saks efter aseptical forberedelse af operationsstedet using hud desinfektionsmiddel.
2. Adskil huden og lokalisere Tindingmusklen.
3. Vælg i den høje frekvens generatoren koagulationssystemet funktion, bipolar tilstand, skal du vælge 12 W og tilslut elektrokoagulation pincet med kablet.
4. Tilføj en dråbe saltvand og bruge pincet til at løsrive Tindingmusklen fra kraniet i sin apikal og rygstykker dermed gør en muskel klap uden helt at fjerne musklen.
5. Identificer MCA under den gennemsigtige kraniet, i rostral del af den tidsmæssige område, dorsal til retro-orbital sinus (figur 2A). Hvis MCA tvedeling er ikke synlig (på grund af en anatomisk normal variation) identificere fartøjet mest rostral.
6. Tilføj nogle saltvand på kraniet og tynde ud i knoglen med boret lige over grenen MCA indtil det har en tynd og gennemskinnelige tekstur (figur 2B).
7. Træk forsigtigt knoglen over arterien med en meget tynd pincet.
8. Vælg bipolar tilstand in højfrekvensgenerator til 7 W. koagulere arterien med elektrokoagulation tang proximale og distalt for forgreningen (figur 2C). Når forgreningen ikke er synlig på grund af en anatomisk variant koagulere korrekt identificeret gren MCA (se ovenfor) ved to steder på ca. 1mm afstand. Det er ikke nødvendigt at gribe arterien med pincet for koagulation, røre arterien forsigtigt med pincet på begge sider fra oven er tilstrækkeligt og inducerer mindre mekanisk beskadigelse.
9. Vent 30 sekunder og forsigtigt røre arterien med et stumpe pincet til at kontrollere for eventuelle blodtilførslen grundet spontan recanalization. I tilfælde af rekanalisering gentage elektrokoagulation gang.
10. Flyt Tindingmusklen til sin holdning, der dækker borehullet.
11. Suturere såret og placere dyret i en sygepleje kasse ved 32 ° C for at komme sig efter anæstesi og returnere det til buret. Generelt tager det 5-10 min for dyret at komme sig AnesthESIA.
12. Injicer postoperativ analgesi (ip) efter 24 timer og derefter dagligt, indtil den femte dag efter operation: Carprofen 4 mg / kg.

3.. Skinoperation

Udfør alle procedurer identisk med operationen er beskrevet ovenfor - herunder udtynding af kraniet og dens fjernelse - med undtagelse af ikke koagulere den udsatte arterie.

4.. Cylinder Test ¹³

1. Placer dyret i en gennemsigtig akryl glas cylinder (diameter: 8 cm, højde: 25 cm) foran to spejle og videobånd i 5 min. Juster kameraets centralt foran de to spejle og cylinderen for at opnå en optimal video (figur 3A).
2. Til vurdering af uafhængige forben brug, score (1) kontakt cylindervæggen med et forben under fuld bagud og (2) landing med kun én forben på gulvet efter fuld bagud. Tæl mindst 20 kontakter til et forben hjælp slowmotion eller billede-for-frame funktion Video Lan Client (VLC) freeware software ( http://www.videolan.org/vlc ).
3. For baseline analyse, før kirurgi: udføre testen to gange om mus, med en 1 hr pause mellem forsøg. Forben brug udtrykkes som et forhold mellem højre / venstre-sidet, uafhængig forben brug.
4. Efter MCA koagulation: udføre testen igen to gange per mus, med en 1 hr pause mellem undersøgelser som angivet ovenfor.

5.. Perfusionen

1. Bedøve dyr (fx af ketamin og xylazin 120/16 mg / kg legemsvægt, henholdsvis).
2. Fastgør dyret i liggende stilling og åbne bughulen med en median snit. Fjern flænger og brystbenet. Lave et lille snit i højre atrium. Indsæt en perfusion kanyle i venstre hjertekammer og langsomt perfuse med 20 ml saltvand.
3. Halshugge dyret åbne calvaria og forsigtigt frigøre hjernen fra bunden af ​​kraniet.

6.. Infarkt volumetrisk

1. Cryosectioning: Skær hjerner serielt på en kryostat til 20 um tykke sektioner hver 400 um på dias og gemme dias ved -20 ° C.
2. Cresylviolet (CV) farvning:
   1. Forbered farvningsopløsningen: Bland 0,5 g CV acetat i 500 ml H ₂ O. Rør og varme (60 ° C), indtil krystallerne er opløst. Lad opløsningen afkøles og opbevares i en mørk flaske. Genopvarmning til 60 ° C og filter før hver brug.
   2. Tør dias ved stuetemperatur i 30 minutter. Derefter placere dem i 95% ethanol i 15 minutter og derefter i 70% ethanol i 1 minut og derefter i 50% ethanol i 1 min.
   3. Anbring dine dias i destilleret vand i 2 min, genopfriske destilleret vand og placere dem i 1 min. Bagefter placere dias i farveopløsning (60 ° C) feller 10 min og vaskes to gange i destilleret vand i 1 min.
   4. Objektglassene anbringes i 95% ethanol i 2 min. Derefter placere dem i 100% ethanol i 5 min, genopfriske 100% ethanol og placere dem i 2 min. Bagefter dække dias med montering medium.
   5. Analyse:
      Scan dias og analysere den indirekte infarktvolumen ved Swanson metode ¹⁴ for at korrigere for ødem:
      (Iskæmisk område) = (Cortex område kontralaterale side) - (ikke-iskæmisk cortex område ipsilaterale side) (figur 4A).

Representative Results

På grund af den korte anæstesi tid og moderat hjerneskade, cirka 10 minutter efter overførsel til deres bure alle dyr var vågen, frit bevæger sig i buret og interagere med søskende. Dødeligheden under MCAO operationen var mindre end 5%, primært som følge af en utilsigtet subaraknoidalblødning eller forkert anæstesi. Dødelighed under de 7 dages observation tid efter slagtilfælde induktion kun forekommer meget sjældent i ca 1-2% af dyrene. I driften serie på 10 dyr til denne rapport alle dyrene overlevede operationen, og de 7 dages observationsperiode, ingen af ​​dem skulle udelukkes på grund af udelukkelseskriterier.

Adfærdsmæssige underskud efter MCA koagulation blev vurderet af cylindertesten ¹³ analysere forepaw brug asymmetri. I denne test er forholdet mellem uafhængige venstre og højre forpote brug målt ved de angivne tidspunkter efter slagtilfælde induktion og i forhold til baseline-værdier opnået 24hr før MCAO (figur 3B). Dyrene præsenteret en betydelig ændring i lemmer brug asymmetri til kombineret væg udforskning i cylinderen test 24 hr (1,72 ± 0,326, p <0,05) og 3 dage (1,36 ± 0,17, p <0,05) efter MCAO. Selvom forholdet forbedret i løbet af 1 uge observationstid, motor asymmetri var stadig betydelig 7 dage efter MCAO (1,35 ± 0,29, p <0,05) i forhold til baseline-værdier.

Vi udførte infarkt volumetri hjælp cresylviolet farves serielle koronale hjernen sektioner 7 dage efter slagtilfælde induktion (figur 4B). Mean infarktvolumen var 15,4 mm ^3, og dermed udgør 12% af den ene hjernehalvdel (figur 4C). Variabilitet denne slagtilfælde model er usædvanlig lav med en standardafvigelse på ca 10%. Læsionsområdet omfatter somatosensoriske og motor cortex med kun mindre hengivenhed af subkortikale strukturer. Desuden lokalisering af infarktOmrådet er meget forudsigelig med kun minimal variation som vist i skematisk fordeling diagram (figur 4D).

Figur 1.. Skematisk repræsentation af Circle of Willis. Den arterielle Circle of Willis er dannet af de midterste cerebrale arterier (MCA) og de ​​forreste cerebrale arterier (ACA), hvilken gren af den interne halspulsåren (ICA), samt ved posterior cerebral arterier (PCA), og den bageste kommunikerer arterier (PComA). MCA løber i den laterale sulcus hvor det grene til hjernebarken. Den dominerende MCA gren leverer den største del af den motoriske hjernebark og en del af den somatosensoriske cortex permanent okkluderet ved påvist model (Acoma = Anterior kommunikere arterie, BA = basilar arterie; Suca = Superior cerebelLAR arterie).

Figur 2. Transkranial vis efter fjernelse af Tindingmusklen og skematisk afbildning af MCA okklusion. (A) Efter fjernelse Tindingmusklen kortikale arterier kan ses gennem den delvist gennemskinnelige mus kraniet (i 8-12 uger gamle mus). Den dominerende MCA filial kan identificeres i den rostral del af den tidsmæssige udsigt samt yderligere kortikale arterier forgrener fra MCA og PSA i caudale del. (B) Skematisk visning på den dominerende MCA filial i sin dominerende variation med en forgrening på den laterale temporalcortex efter boring af et borehul og fjerne kraniet. (C) Sorte firkanter repræsenterer MCA koagulations sites på de proksimale og distale side af forgreningen.

Figur 3.. Analyse af adfærdsmæssige underskud. (A) Cylinder prøveopstilling: musen er placeret i en lodret cylinder og spejle er placeret bag for at registrere alle de bevægelser ved hjælp af et videokamera (B) forben brug asymmetri blev analyseret ved hjælp af cylinderen test.. Venstre / højre forhold for selvstændig forben brug blev beregnet 24 timer før MCAO og på de angivne tidspunkter efter slagtilfælde induktion. N = 10, * p <0,05 mellem angivne tidspunkt og baseline-værdi (kontrol).

Figur 4.. Volumetrisk infarkt analyse og infarkt resultat efter distal MCAO. (A) repræsentant billede af en cresylviolet farves koronale bhi afsnit 7 dage efter MCAO. Den gule linje angiver valg af den kontralaterale (højre) cortex og den røde linje er at vælge den ikke-infarkt (farvet) cortex i ipsilateral hjernen. Den blegt område i den venstre hemisfære afbilder infarcted vævsområde. (B) infarktvolumen analyse af 10 hjerner (hver prik repræsenterer en enkelt hjerne) 24 timer, 3 dage og 7 dage efter distale MCA koagulation. Den vandrette røde linje repræsenterer middelværdien fejlsøjler angiver standardafvigelsen. (C) repræsentant cresylviolet farves koronale hjernesnit hver 400 um ved 7 dage efter MCA koagulation. (D) Skematisk fordeling af infarktområdet hjernevæv 7 dage efter MCAO. Hvert dias viser den akkumulerede oplysninger infarkt distribution (farvekodet som vist) ved en given sektion i forhold til bregma (modificeret billede fra:. Liesz A et al, Brain, 2011; med tilladelse fra Oxford University Press). <a href = "https://www.jove.com/files/ftp_upload/51729/51729fig4highres.jpg" target = "_blank"> Klik her for at se en større version af dette tal.

Discussion

Den nuværende protokol beskriver den eksperimentelle slag model af distal, permanent MCAO ved transkraniel elektrokoagulation - den såkaldte "koagulation-model". Denne model er i mellemtiden blevet en af de hyppigst anvendte dyremodeller i eksperimentel slagtilfælde forskning ^12. Sammenlignet med andre fokale hjerne iskæmimodeller, koagulering model som præsenteret i denne video har den fordel, at en meget kort driftstid på ca 10 minutter, når de udføres af en uddannet videnskabsmand. Derfor kan korte anæstesi tider opnås i denne model, hvilket er et positivt træk af en eksperimentel slagtilfælde model, fordi virkningen af bedøvelsesmidler på neurobeskyttelse og slagtilfælde udfald er velkendt ^15.. Som tidligere beskrevet af Carmichael et al. ^11. Vi bekræfter, at det resulterende infarktvolumen og lokalisering efter distale permanent MCA koagulation svarer til iskæmiske hjernelæsioner i størstedelen af humanestreger i forhold til hjernens størrelse. Humant slagtilfælde er hovedsageligt små i størrelse med læsioner på ca 5-15% af halvkuglen, baseret på tidligere befolkningsundersøgelser og kliniske imaging forsøg ^16-18 i modsætning til omfattende slagtilfælde læsioner med trykstyrke hjerneødem, som forekommer i mindre end 10% af kliniske slagtilfælde ^19. Derved kan slagtilfælde læsioner i MCA område på omkring 12% af den halvkugle opnås ved den præsenterede model betragtes som et translationelt relevant slagvolumen. Det skal dog tages i betragtning, at forskellige musestammer eller brugte anæstesi protokoller kan påvirke den resulterende læsion bind ^20.

Dødeligheden i observationsperioden efter slagtilfælde induktion i denne model er stort set fraværende. Den samlede dødelighed på mindre end 5% hovedsageligt består af dødsfald i drift på grund af anæstesiologisk komplikationer eller offer, fordi opnåelsen af ​​udelukkelseskriterier. For at berettige den lave variability af denne model og dens fremragende reproducerbarhed, foreslår vi følgende udelukkelseskriterier: 1) Enhver subaraknoidalblødning under operationen. 2) Betjening er længere end 15 min. 3) rekanalisering af MCA efter to forsøg for elektrokoagulering med kun forbigående MCAO. Desuden skal undersøges dagligt efter MCAO (grundlæggende fysiologiske adfærd, pels udseende og kropsvægt) til at styre for smerter, ubehag eller sygdom adfærd dyr.

Kunne gennemføres en række foranstaltninger til analyse af slagtilfælde udfald ligesom laser speckle måling, magnetisk resonans, adfærdsmæssige test eller histologisk analyse. I denne protokol giver vi eksemplariske metoder til opførsel analyse og infarktvolumen analyse. Adskillige test for adfærdsanalyse efter fokal hjerneiskæmi er blevet udviklet og anvendt i eksperimentel slagtilfælde forskning. Egnede test for sensomotoriske dysfunktion tidligere brugt af vores gruppe i denne slagtilfælde model ^21,22 vire rotarodtesten ²³ klistermærketest ^24, Hjørne test ²⁵ og den Cylinder test ^13, som er påvist i denne video. Cylinderen test konsekvent skildrer motor asymmetri i den akutte fase efter distal permanent MCAO og registrerer fortløbende genvinde af motorisk funktion også.

På trods af de åbenlyse fordele visse begrænsninger i denne slagtilfælde-modellen skal tages i betragtning. Først er en trepanation af kraniet nødvendig for at koagulere arterien, hvorved der produceres en potentiel adgang for peri-operative infektioner i hjernen, selv om bakterielle infektioner i operationssåret, tidsmæssig muskel eller selve hjernen aldrig blevet opdaget af os selv eller dokumenteret af andre, der bruger denne model. Endvidere kan mekanisk beskadigelse cortex under fremstillingen og koagulering ikke udelukkes, men kan begrænses ved omhyggelig boring og fjernelse af kraniet, konstant befugtning af det kirurgiske sted og minimal ne vendigt elektrokoagulation (se udelukkelseskriterier). Selvom løbet af MCA som afbildet i figur 2 findes i størstedelen af C57BI / 6 mus, beskriver vi i protokollen, hvordan man videre i normale variationer af fartøjet naturligvis at minimere variabilitet model. Desuden foreslår vi brug af flere (3 i tilfælde af forgrening, 2 uden tvedeling af MCA) okklusion sites for at minimere risikoen for en delvis recanalization af MCA, som vores erfaring er en vigtig faktor for variabilitet denne model.

I form af adfærdsmæssige test kan kun mindre adfærdsmæssige mangler påvises i ovennævnte adfærdsmæssige test og funktionel regenerering kan observeres inden for den første uge efter slagtilfælde. Således kan mere avancerede testsystemer med højere følsomhed og kvalitative testparametre som fagmanden nå prøven ²⁷ være mere egnede til at påvise langsigtet funktionelle resultat i denne model.

NDHOLDET "> Endelig, på grund af den permanente koagulation af MCA ingen reperfusion kan opnås, hvilket er en funktion, observeret i en betydelig procentdel af patienter med slagtilfælde på grund af spontan clotlyse eller terapi ^28. imidlertid en tidligere beskrevet tromboembolisk slagtilfælde model ²⁶ tilvejebringer mulighed for en gratis slagtilfælde model med reperfusion af cortical hjerne iskæmi. Tilsammen høj reproducerbarhed, er mulig langvarig observation på grund af minimal dødelighed og sammenlignelige relative infarkt volumen og lokalisering i forhold til den menneskelige slagtilfælde skelne "koagulation model" som en værdifuld model for grundforskning og translationel slagtilfælde forskning.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Camera Canon Eos 500D	Canon		Optics: 18-55 mm; 30 fps; 640 x 480 video function
Mirror	Kristallform	2677089	30 x 30 cm
Transparent acrylic glass cylinder	H&S Kunststofftechnik		Diameter: 8 cm,  height: 25 cm
Heating blanket	FHC DC Temperature Controller
Fine Scissors	FST	15000-00
Mayo Scissors	FST	1410-15
Forceps	FST	11616-15
Cottons	NOBA Verbondmitel Danz	974116
Saline solution	Braun	131321
Bepanthen pommade	Bayer
Isoflurane	Abbot	B506
Anesthesia system for isoflurane	Drager
Stereomikroskop	Zeiss	Stemi DV4
Electrosurgical device	ERBETOM ICC 80/50 HF-Chirurgiegerät
Drill	Proxxon	D-34343
Ketamine	Inresa Arzneimittel GmbH
Xylacine	Albrecht
5ml Syringe	Braun
Phosphate Buffered Saline PH: 7.4	Apotheke Innestadt Uni Munchen	P32799
Isopentane	Fluka	59070
Cryostat	Thermo Scientific CryoStarNX70
Superfrost Plus Slides	Thermo Scientific	J1800AMNZ
Cresyl violet	Sigma Life Science	C5042-10G
Acetic acid	Sigma Life Science	695092
Ethanol 70%	CLN Chemikalien Laborbedorf	521005
Ethanol 96%	CLN Chemikalien Laborbedorf	522078
Ethanol 99%	CLN Chemikalien Laborbedorf	ETO-5000-99-1
Roti-Histokit mounting medium	Roth	6638.1
C57Bl/6J mice	Charles River	000664