Summary
Ulike murine modeller av midten cerebral arterie okklusjon (MCAO) er mye brukt i eksperimentell hjerneforskning. Her viser vi modellen av transkranial permanent distal MCAO som produserer konsistent kortikale infarkt i en størrelse som tilsvarer skader pålagt av de fleste humane iskemisk slag.
Abstract
Hjerneslag er den tredje vanligste dødsårsaken, og en viktig årsak til ervervet voksen uførhet i utviklede land. Bare svært begrensede terapeutiske alternativer er tilgjengelige for en liten andel av slagpasienter i akuttfasen. Aktuell forskning er intensivt søker etter nye terapeutiske strategier og fokuserer i økende grad på den sub-akutt og kronisk fase etter hjerneslag fordi flere pasienter kan være kvalifisert for terapeutiske intervensjoner i et lengre tidsvindu. Disse forsinkede mekanismer omfatter viktige patofysiologiske trasé som post-takts betennelse, angiogenese, nevrale plastisitet og regenerering. For å analysere disse mekanismene og å senere vurdere romanen narkotika mål, er eksperimentelle takts modellene med klinisk relevans, lav dødelighet og høy reproduserbarhet ettertraktet. Videre mus er de minste pattedyr hvor en fokale slag lesjon kan induseres, og som et bredt spekter av transgene modeller ertilgjengelig. Derfor beskriver vi her musemodell av trans, permanent koagulering av den midtre cerebrale arterie via elektrokoagulering distale av de lenticulostriatal arterier, den såkalte "koagulasjon modell". Den resulterende infarkt i denne modellen er plassert hovedsakelig i cortex; den relative infarktvolum i forhold til hjernen størrelse svarer til de fleste humane slag. Videre oppfyller modellen det ovenfor nevnte kriterier for reproduserbarhet og lav dødelighet. I denne videoen viser vi de kirurgiske metodene for hjerneslag induksjon i "koagulasjon modellen" og rapportere histologiske og funksjonelle analyseverktøy.
Introduction
Hjerneslag er den tredje vanligste dødsårsaken, og en av de viktigste årsakene til ervervet voksen uførhet i utviklede land en. Omtrent 80% av denne akutte nevrologiske sykdommen er forårsaket av hjerne-ischemi som følge av obstruksjon av cerebral blodstrøm, mens omtrent 15%, er forårsaket av en intracerebral blødning 2.. Til tross for pågående forskning, intravenøs administrasjon av vevsplasminogenaktivator er den eneste godkjente farmakologisk behandling for iskemisk hjerneslag så langt og kun tilgjengelig for et mindretall av slagpasienter på grunn av den korte godkjent tidsvindu på 4,5 timer etter symptomdebut 3,4. Så det er ingen in vitro modeller, som kan riktig modellere komplekse interaksjoner mellom hjernen, blodkar og systemiske patofysiologiske mekanismer under hjerneslag, dyremodeller er avgjørende for preklinisk hjerneslag forskning.
Derfor har flere hjerneinfarkt modeller er utviklet i et variskjellige arter. En av de mest vanlig brukte slagmodeller er "filament-modellen", hvor en sutur filament blir forbigående føres inn i arteria carotis interna og videresendes til spissen tilstopper opprinnelsen av Middle Cerebral Artery (MCA), noe som resulterer i en stopp av blodstrøm og påfølgende hjerneinfarkt subkortikale og i tilfelle av langvarig okklusjon også kortikale regioner 5,6. I photothrombotic modeller av iskemisk hjerneslag, er en fotokjemisk okklusjon av bestrålt kortikale fartøy oppnås etter injeksjon av et fotosensibiliserende resulterer i små, lokalt avgrensede lesjoner 7. Den permanent okklusjon av MCA distale av de lenticulostriatal arterier kan oppnås ved en ligering av arterien, er det forbigående kompresjon eller ved permanent koagulering 8,9. Den resulterende infarkt i denne modellen hovedsakelig påvirker neocortex 10 fordi okklusjon av MCA i denne modellen er distalt til den stilleståendeulostriatal arterier, som leverer basalgangliene.
Siden flertallet av menneske hjerneslag lesjoner er plassert i territoriet til midten cerebral arterie, alle de vanlige takts modellene ligne occlusions av MCA eller en av dens grener 11. The MCA er en av de store arterier som gir blodtilførsel til hjernen; det oppstår fra den interne carotisar, ruter langs lateral sulcus hvor det da grener og prosjekter til basalgangliene og sideflatene av frontal, parietal og tinninglappene, inkludert den primære motor og sensoriske cortex. Høyre og venstre MCA er koblet til fremre cerebrale arterier og den bakre kommunisere arteriene, som kobles til bakre cerebrale arterier, skape Circle of Willis (Figur 1).
Som tidligere rapportert av Carmichael et al. 11, infarkter modellert etter den distale Middle Cerebral Arriet Okklusjon (MCAO) modell i mus omfatte ca 10-15% av halvkulen, dermed etterligne et flertall av menneskelige slag lesjoner som er plassert i den kortikale MCA territorium 11,12. I 1981, Tamura et al. Beskrevet en permanent, transkranial MCAO koagulasjon modell hos rotter 8. Imidlertid modellen beskrevet av Tamura involvert en proksimal okklusjon av MCA for å omgå de mer distale bifurkasjon av arterien. Således, den opprinnelige "Tamura modellen" induserer ikke bare kortikale men også striatale lesjoner, i likhet med de lesjoner som oppnås ved den "filament-modellen" 6.. Her beskriver vi den permanente distal MCAO modellen ved transkranial electrocoagulation i mus. I tillegg rapporterer vi beslektet histologiske og funksjonelle metoder for å analysere slag resultere i denne modellen. Alle metoder er basert på standard operasjonsprosedyrer utviklet og brukt i våre laboratorier.
Protocol
Etikk uttalelse
Forsøkene som rapporteres i denne videoen ble gjennomført i samsvar med nasjonale retningslinjer for bruk av forsøksdyr og protokollene ble godkjent av de tyske statlige komiteer (Regierung von Oberbayern, München, Tyskland). 10 uker gamle, hann C57BL/6J mus blir brukt i denne studien. Dyrene ble plassert under regulert temperatur (22 ± 2 ° C), med en 12 timers lys-mørke-syklus periode og adgang til pelletert for og vann ad libitum. Analgesi og sedasjon protokoller er beskrevet som er godkjent av den lokale statlig utvalg, men kan være forskjellige fra protokollene som brukes i andre laboratorier.
En. Fremstillingen av materialet og instrumenter
- Koble varmeteppe for å opprettholde operasjonsområdet varme og opprettholde musekroppstemperaturen under anestesi (37 ° C).
- Forbered autoklaveres saks, pinsett og bomull, dexpanthenol øyesalve og sutur materiale. Tilbered en sprøyte med saltoppløsning (uten nål) for å opprettholde driftsområdet hydrert. Forbered anestesigass (70% N 2 O + 30% O 2 + isofluran).
- Injisere analgetika intraperitonealt: Metamizol 200 mg / kg, Carprofen 4 mg / kg og Buprenorphin 0,1 mg / kg.
- Plasser mus inn i induksjonskammeret med en isofluran strømningshastighet på 4% for å bedøve det før spontan bevegelse av kroppen og vibrissae stopper.
- Overfør musen i sideleie med snuten inn i anestesi maske og vedlikeholde isofluran konsentrasjon på 4% for omtrent et minutt, deretter redusere og det på omtrent 1,5% for å opprettholde riktig anestesi.
- Påfør Dexpanthenol øyesalve på begge øynene.
2. Distal MCAO Model
- Lag en 1 cm snitt i huden mellom øret og øyet med liten operasjon saks etter aseptical forberedelse av operasjonsstedet using hud desinfeksjonsmiddel.
- Separer huden og lokalisere den timelige muskelen.
- Velg i høy frekvens generator koagulering funksjon, bipolar modus, velger 12 W og koble Elektrokoagulasjon tang med kabelen.
- Legg en dråpe saltvann og bruke tang for å løsne den time muskel fra skallen i sin apikale og dorsal del, og dermed gjør en muskel klaff uten helt å fjerne muskelen.
- Identifiser MCA under den gjennomsiktige skallen, i rostral delen av tinningområdet, dorsal til retro-orbital sinus (Figur 2A). Dersom MCA bifurkasjon ikke er synlig (på grunn av en anatomisk normal variasjon) identifisere beholderen mest rostral.
- Tilsett litt saltvann på skallen og tynne ut beinet med bore rett ovenfor MCA grenen inntil det har en tynn og gjennomsiktig struktur (figur 2B).
- Trekk forsiktig opp beinet over pulsåren med en svært tynn tang.
- Velg bipolar modus in den høyfrekvente generator 7 W. koagulere arterien ved elektrokoagulering tangens proksimal og distal til forgreningen (figur 2C). Når forgreningen ikke er synlige på grunn av en anatomisk variant, koagulerer fullstendig identifisert MCA gren (se ovenfor) på to steder på ca. 1mm avstand. Det er ikke nødvendig å ta tak i arterien med pinsett for koagulasjonen, berøre arterie omhyggelig med pinsett på begge sider ovenfra er tilstrekkelig og induserer mindre mekanisk skade.
- Vent 30 sekunder og trykk forsiktig arterien med en avstumpet tang for å sjekke for eventuelle blodstrømmen på grunn av spontan recanalization. Ved recanalization gjenta elektrokoagulering gang.
- Flytt den temporale muskelen til sin posisjon, dekker Burr hullet.
- Sutur såret og plassere dyret i en pleie-boksen på 32 ° C for å komme seg fra anestesi og returnere det til buret. Generelt tar 5-10 minutter for dyret å komme seg fra anesthESIA.
- Injiser postoperativ analgesi (ip) etter 24 timer, og deretter daglig inntil den femte postoperative dag: carprofen 4 mg / kg.
Tre. Sham Operation
Utfør alle prosedyrer identisk til den operasjonen som er beskrevet ovenfor - herunder tynning av skallen og fjerning - med unntak for ikke koagulere den eksponerte arterie.
4. Cylinder Test 13
- Plasser dyret i en gjennomsiktig akrylglassylinder (diameter 8 cm, høyde: 25 cm) i front av to speil og videobånd i 5 min. Juster kameraet sentralt foran de to speil og sylinderen for å oppnå en optimal video (figur 3A).
- For vurdering av uavhengig bruk forbena, stillingen (1) kontakt av sylinderveggen med en forbena ved full bakre og (2) landing med bare én forbena på gulvet etter full bakre. Telle minst 20 kontakter for ett forbena bruker sakte film eller bilde-for-frame funksjon av Video Lan Client (VLC) freeware programvare ( http://www.videolan.org/vlc ).
- For baseline analyse før kirurgi: utføre testen to ganger per mus, med en 1 hr pause mellom forsøkene. Forbena bruk er uttrykt som et forhold mellom høyre / venstre-sidig, selvstendig bruk forbena.
- Etter MCA koagulasjon: utføre testen på nytt to ganger per mus, med en 1 hr pause mellom forsøkene som angitt ovenfor.
5. Perfusjons
- Anaesthetize dyrene (for eksempel ved ketamin og xylazin 120/16 mg / kg kroppsvekt, henholdsvis).
- Fix dyret i en liggende stilling og åpne bukhulen med en median kutt. Fjern rips og sternum. Lag et lite snitt i høyre forkammer. Sett i en perfusjon kanyle i den venstre ventrikkel og langsomt perfuse med 20 ml saltvann.
- Halshogge dyret, åpne calvaria og forsiktig løsne hjernen fra bunnen av hodeskallen.
6. Infarktet Volumetry
- Frysesnitt: Skjær hjernen serielt på en kryostat til 20 mikrometer tykke seksjoner hver 400 mikrometer på lysbilder og lagre lysbilder ved -20 ° C.
- Cresyl fiolett (CV) farging:
- Forbered flekker løsning: Bland 0,5 g CV acetat i 500 ml H 2 O. Omrør og varme (60 ° C) inntil krystallene er oppløst. La løsningen kjølig og lagre i en mørk flaske. Varm opp til 60 ° C og filter før hver bruk.
- Tørk de slides ved RT i 30 min. Deretter plasserer dem i 95% etanol i 15 min, og deretter i 70% etanol i 1 min og deretter i 50% etanol i 1 min.
- Plasser lysbildene i destillert vann i 2 min, oppdatere destillert vann og legg dem i 1 min. Etterpå legger lysbildene i farging løsning (60 ° C) feller 10 min og vaskes to ganger i destillert vann i 1 min.
- Legg objektglassene i 95% etanol i 2 min. Deretter plasserer dem inn i 100% etanol i 5 min, oppdaterer du 100% etanol og plassere dem i 2 min. Etterpå dekke lysbilder med monteringsmedium.
- Analyse:
Skanne lysbilder og analysere indirekte infarktvolum ved Swanson metode 14 for å korrigere for ødem:
(Ischemic område) = (Cortex område på motsatt side) - (ikke-ischemisk cortex område av ipsilateral side) (figur 4A).
Representative Results
På grunn av den korte anestesi tid og moderat hjerneskade, ca 10 min etter overføring til burene alle dyrene var våken, fritt beveger seg i buret og i samspill med kullsøsken. Dødeligheten under MCAO operasjonen var mindre enn 5%, hovedsakelig som følge av utilsiktet subaraknoidalblødning eller feil anestesi. Dødelighet i løpet av syv dagers observasjons tid etter hjerneslag induksjon forekommer svært sjelden i ca 1-2% av dyr. I driften serie på 10 dyr for denne rapporten alle dyrene overlevde drift og 7 dagers observasjonsperioden, og ingen av dem måtte utelukkes på grunn av eksklusjonskriterier.
Atferdsmessige underskudd etter MCA koagulasjon ble vurdert av sylinderen test 13 analysere forlabben bruk asymmetri. I denne testen, er forholdet mellom uavhengige venstre og høyre bruk med forpotene måles ved de indikerte tidspunkter etter hjerneslag induksjon og sammenlignet med grunnlinjeverdier oppnådd 24hr før MCAO (Figur 3B). Dyrene presenterte en signifikant endring i legemsdelen bruk asymmetri for kombinert vegg leting i sylinderen test 24 timer (1,72 ± 0,326, p <0,05), og 3 dager (1,36 ± 0,17, p <0,05) etter MCAO. Selv om forholdet forbedret i løpet av en uke observasjonstid, motor asymmetri var fremdeles signifikant 7 dager etter MCAO (1,35 ± 0,29, p <0,05) sammenlignet med grunnlinjeverdier.
Vi utførte infarktet volumetry hjelp cresyl fiolett farget serie koronale hjernen seksjoner 7 dager etter hjerneslag induksjon (Figur 4B). Mean infarktvolum var 15,4 mm 3, og dermed representerer 12% av en hjerne halvkule (Figur 4C). Variabiliteten av denne slagmodell er usedvanlig lav med et standardavvik på omkring 10%. Lesjonen Området omfatter somatosensoriske og motor cortex med bare mindre hengivenhet subkortikale strukturer. Videre lokalisering av infarktOmrådet er svært forutsigbare med bare minimal variasjon som vist i den skjematiske fordelingsdiagrammet (figur 4D).
Figur 1. Skjematisk fremstilling av Circle of Willis Den arteriell Circle of Willis er dannet av de midterste cerebrale arterier (MCA) og fremre cerebrale arterier (ACA) som gren fra arteria carotis interna (ICA), samt av den. posterior cerebral arterier (PCA) og posterior kommunisere arteriene (PComA). Den MCA går inn i lateral sulcus der det grener til hjernebarken. Den dominerende MCA gren forsyne store deler av motoren cortex og en del av somatosensoriske cortex er permanent occluded av den påviste modell (Acoma = Anterior kommunisere arterie, BA = Basilaris arterie; SUCA = Superior cerebelLar arterie).
Figur 2. Transkranial vis etter fjerning av den temporale muskel og skjematisk riss av MCA okklusjon. (A) Etter å ha fjernet den timelige muskelen kortikale arterier kan sees gjennom den delvis gjennomsiktig muse skallen (i 8-12 uker gamle mus). Den dominerende MCA gren kan identifiseres i den rostral del av den timelige utsikten samt ytterligere kortikale arterier forgrening fra MCA og PCA i haledelen. (B) Skjematisk visning på den dominerende MCA gren i sin dominerende variant med en todeling på den laterale temporal cortex etter. (C) bore en Burr hull og fjerne skallen svarte firkanter representerer MCA koagulasjon sider proksimale og distal sider av bifurkasjon.
Figur 3.. Analyse av atferdsmessige underskudd. (A) Cylinder test satt opp: musa er plassert i en vertikal sylinder og speil er plassert bak for å registrere alle bevegelser ved hjelp av et videokamera (B) forbena bruk asymmetri ble analysert ved hjelp av sylinder-test.. Venstre / høyre forholdstall på uavhengig bruk forbena ble beregnet 24 timer før MCAO og på de angitte tidspunkter etter hjerneslag induksjon. N = 10, * p <0,05 mellom angitte tidspunkt og baseline (kontroll) verdi.
Figur 4 volumet infarktet analyse og infarktet utfallet etter distal MCAO.. (A) Representant bilde av en cresyl fiolett farget koronale BHi § 7 dager etter MCAO. Den gule linjen indikerer utvalg av kontralaterale (høyre) cortex og den røde linjen er valg av ikke-infarcted (beiset) cortex av ipsilaterale hjernen. Den bleke område i den venstre hjernehalvdelen viser infarkt vevsområdet. (B) infarktvolum analyse av 10 hjernen (hver prikk representerer en enkelt hjerne) 24 timer, 3 dager og 7 dager etter distal MCA koagulering. Den horisontale røde linjen representerer gjennomsnittlig, feilfelt indikerer standardavvik. (C) Representant cresyl fiolett farget koronale hjernen seksjoner hver 400 mikrometer på 7 dager etter MCA koagulasjon. (D) Skjematisk fordeling av infarkt hjernevev 7 dager etter MCAO. Hver side viser den akkumulerte informasjon av infarktfordeling (fargekodet som vist) ved den gitte seksjon i forhold til bregma (endrede bildet fra:. Liesz A et al, Brain 2011, med tillatelse av Oxford University Press). <a href = "https://www.jove.com/files/ftp_upload/51729/51729fig4highres.jpg" target = "_blank"> Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Discussion
Den nåværende protokollen beskriver det eksperimentelle slag modell av distal, permanent MCAO ved transkranial electrocoagulation - den såkalte "koagulasjon modellen". Denne modellen har i mellomtiden blitt en av de mest brukte dyremodeller i eksperimentell hjerneslag forskning 12. Sammenlignet med andre fokale hjerne ischemi modeller, har koagulasjon modellen som presenteres i denne videoen fordelen av en svært kort driftstid på ca 10 min når utført av en utdannet vitenskapsmann. Derfor kan korte anestesi tider oppnås på denne modellen, som er et gunstig trekk ved en eksperimentell slagmodell fordi virkningen av anestetika for neurobeskyttelse og strek resultatet er velkjente 15. Dessuten, som tidligere beskrevet av Carmichael et al. 11. bygge vi at den resulterende infarktvolum og lokalisering etter distal permanent MCA koagulering tilsvarer iskemiske hjerneskader hos flertallet av humanslag i forhold til hjernestørrelse. Humant slag er hovedsakelig små i størrelse med lesjoner på omtrent 5-15% av halvkulen, basert på tidligere populasjons studier og kliniske studier avbildnings 16-18, i motsetning til omfattende slag lesjoner med trykkhjerneødem som forekommer i mindre enn 10% av klinisk slag 19. Dermed kan hjerneslag lesjoner i MCA territorium på rundt 12% av halvkulen oppnås ved presenterte modellen anses som en translationally relevant slagvolum. Imidlertid må det tas hensyn til at ulike musestammer eller brukte anestesiprotokoller kan påvirke den resulterende lesjon volum 20.
Dødelighet i løpet av observasjonsperioden etter hjerneslag induksjon i denne modellen er nesten fraværende. Den totale dødeligheten på mindre enn 5% består hovedsakelig av dødsfall i løpet av drift på grunn av anestesiologisk komplikasjoner eller offer fordi nå av eksklusjonskriterier. For å rettferdiggjøre den lave variability av denne modellen og dens utmerket reproduserbarhet, foreslår vi følgende eksklusjonskriterier: 1) Enhver subaraknoidalblødning under operasjonen. 2) Bruk tid lenger enn 15 min. 3) recanalization av MCA etter to forsøk for electrocoagulation med bare forbigående MCAO. Videre dyr må undersøkes daglig etter MCAO (grunnleggende fysiologiske atferd, pels utseende og kroppsvekt) for å kontrollere for smerte, ubehag eller sykdom atferd.
Flere tiltak kan iverksettes for analyse av hjerneslag utfall som laser speckle måling, magnetisk resonans imaging, atferdsmessige tester eller histologisk analyse. I denne protokollen gir vi eksemplarisk metoder for atferdsanalyse og infarktvolum analyse. Flere test for adferdsanalysen etter fokal iskemi hjernen har blitt utviklet og anvendt i eksperimentell slag forskning. Egnede tester for sensorimotor dysfunksjon tidligere brukt av vår gruppe i denne slagmodell 21,22 vire Rotarod test 23, klistrelappen test 24, Corner test 25 og Cylinder test 13, noe som er demonstrert i denne videoen. Sylinderen test gående fremstiller motor asymmetri i den akutte fasen i det distale permanent MCAO og også detekterer sammenhengende gjenvinne av motorisk funksjon.
Til tross for de åpenbare fordeler, noen begrensninger av dette slag modellen må tas i betraktning. Først blir en trepanasjon av skallen nødvendig for å koagulere arterien, for derved å frembringe et potensial tilgang for peri-operative infeksjoner i hjernen, selv om bakterielle infeksjoner i operasjonssåret, temporale muskel eller selve hjernen har aldri blitt detektert av selv eller dokumentert av andre som bruker denne modellen. Videre kan mekaniske skader på cortex under forberedelse og koagulering ikke utelukkes, men kan reduseres ved omhyggelig boring og fjerning av skallen, kontinuerlig fukting av det kirurgiske stedet, og minimal ne vendig electrocoagulation (se eksklusjonskriterier). Selv om det i løpet av MCA som avbildet i figur 2 er funnet i de fleste C57Bl / 6 mus, beskriver vi i protokollen hvordan å gå videre i normale variasjoner av fartøyets kurs for å minimalisere modellvariasjoner. Videre foreslår vi bruk av flere (tre i tilfelle bifurcation; to uten bifurcation av MCA) okklusjon sider for å minimere risikoen for delvis recanalization av MCA, som i vår erfaring er en viktig faktor for variasjonen av denne modellen.
I form av adferdstester, kan bare små adferdsmessige mangler påvises i de ovennevnte atferdstester og funksjonell restitusjon kan observeres i løpet av den første uken etter hjerneslag. Således kan mer avanserte testsystemer med høyere følsomhet og kvalitative prøveparametre som den dyktige nådde test 27 være mer egnet for å detektere langvarig funksjonelt resultat i denne modellen.
ontent "> Til slutt, på grunn av den permanente koagulering av MCA uten reperfusjon kan oppnås, noe som er en funksjon observert i en vesentlig prosentandel av slagpasienter på grunn av spontan sammenklumpningslysing eller terapi 28. gir imidlertid en tidligere beskrevet tromboembolisk slag-modell 26 muligheten for en gratis hjerneslag modell med reperfusjon av kortikale hjerne iskemi. Tatt sammen, den høye reproduserbarhet, mulig langsiktig observasjon på grunn av minimal dødelighet og sammenlign relative infarktvolum og lokalisering i forhold til menneskelig slag skille "koagulasjon modellen" som en verdifull modell for grunnforskning og translasjonsforskning hjerneslag forskning.Disclosures
Forfatterne har ingen konkurrerende interesser å avsløre.
Acknowledgments
Dette arbeidet ble finansiert av fortreffelighet klynge av det tyske forskningsstiftelsen "München Cluster for Systems Neurology (synergi)" og ved Daimler-Benz fundament til AL
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Camera Canon Eos 500D | Canon | Optics: 18-55 mm; 30 fps; 640 x 480 video function | |
| Mirror | Kristallform | 2677089 | 30 x 30 cm |
| Transparent acrylic glass cylinder | H&S Kunststofftechnik | Diameter: 8 cm, height: 25 cm | |
| Heating blanket | FHC DC Temperature Controller | ||
| Fine Scissors | FST | 15000-00 | |
| Mayo Scissors | FST | 1410-15 | |
| Forceps | FST | 11616-15 | |
| Cottons | NOBA Verbondmitel Danz | 974116 | |
| Saline solution | Braun | 131321 | |
| Bepanthen pommade | Bayer | ||
| Isoflurane | Abbot | B506 | |
| Anesthesia system for isoflurane | Drager | ||
| Stereomikroskop | Zeiss | Stemi DV4 | |
| Electrosurgical device | ERBETOM ICC 80/50 HF-Chirurgiegerät | ||
| Drill | Proxxon | D-34343 | |
| Ketamine | Inresa Arzneimittel GmbH | ||
| Xylacine | Albrecht | ||
| 5ml Syringe | Braun | ||
| Phosphate Buffered Saline PH: 7.4 | Apotheke Innestadt Uni Munchen | P32799 | |
| Isopentane | Fluka | 59070 | |
| Cryostat | Thermo Scientific CryoStarNX70 | ||
| Superfrost Plus Slides | Thermo Scientific | J1800AMNZ | |
| Cresyl violet | Sigma Life Science | C5042-10G | |
| Acetic acid | Sigma Life Science | 695092 | |
| Ethanol 70% | CLN Chemikalien Laborbedorf | 521005 | |
| Ethanol 96% | CLN Chemikalien Laborbedorf | 522078 | |
| Ethanol 99% | CLN Chemikalien Laborbedorf | ETO-5000-99-1 | |
| Roti-Histokit mounting medium | Roth | 6638.1 | |
| C57Bl/6J mice | Charles River | 000664 |
References
- Donnan, G. A., et al. Stroke. Lancet. 371, 1612-1623 (2008).
- Di Carlo, A., et al. Frequency of stroke in Europe: A collaborative study of population-based cohorts. ILSA Working Group and the Neurologic Diseases in the Elderly Research Group. Italian Longitudinal Study on Aging. Neurology. 54, 28-33 (2000).
- Hacke, W., et al. Thrombolysis with alteplase 3 to 4.5 hours after acute ischemic stroke. N. Engl. J. Med. 359, 1317-1329 (2008).
- Jauch, E. C., et al. Guidelines for the early management of patients with acute ischemic stroke: a guideline for healthcare professionals from the American Heart Association/American Stroke Association. Stroke. 44, 870-947 (2013).
- Longa, E. Z., et al. Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats. Stroke. 20, 84-91 (1989).
- Engel, O., et al. Modeling stroke in mice - middle cerebral artery occlusion with the filament model. J. Vis. Exp. (47), e2423 (2011).
- Zhang, Z., et al. A new rat model of thrombotic focal cerebral ischemia. J. Cereb. Blood Flow Metab. 17, 123-135 (1997).
- Tamura, A., et al. Focal cerebral ischaemia in the rat: 1. Description of technique and early neuropathological consequences following middle cerebral artery occlusion. J. Cereb. Blood Flow Metab. 1, 53-60 (1981).
- Chen, S. T., et al. A model of focal ischemic stroke in the rat: reproducible extensive cortical infarction. Stroke. 17, 738-743 (1986).
- Tureyen, K., et al. Infarct volume quantification in mouse focal cerebral ischemia: a comparison of triphenyltetrazolium chloride and cresyl violet staining techniques. J. Neurosci. Methods. 139, 203-207 (2004).
- Carmichael, S. T. Rodent models of focal stroke: size, mechanism, and purpose. NeuroRx. 2, 396-409 (2005).
- Howells, D. W., et al. Different strokes for different folks: the rich diversity of animal models of focal cerebral ischemia. J. Cereb. Blood Flow Metab. 30, 1412-1431 (2010).
- Schallert, T., et al. CNS plasticity and assessment of forelimb sensorimotor outcome in unilateral rat models of stroke, cortical ablation, parkinsonism and spinal cord injury. Neuropharmacology. 39, 777-787 (2000).
- Swanson, R. A., et al. A semiautomated method for measuring brain infarct volume. J. Cereb. Blood Flow Metab. 10, 290-293 (1990).
- Kitano, H., et al. Inhalational anesthetics as neuroprotectants or chemical preconditioning agents in ischemic brain. J. Cereb. Blood Flow Metab. 27, 1108-1128 (2007).
- Effect of intravenous recombinant tissue plasminogen activator on ischemic stroke lesion size measured by computed tomography. NINDS; The National Institute of Neurological Disorders and Stroke (NINDS) rt-PA Stroke Study Group. Stroke. 31, 2912-2919 (2000).
- Sowell, E. R., et al. Mapping cortical change across the human life span. Nat. Neurosci. 6, 309-315 (2003).
- Brott, T., et al. Measurements of acute cerebral infarction: lesion size by computed tomography. Stroke. 20, 871-875 (1989).
- Hacke, W., et al. Malignant' middle cerebral artery territory infarction: clinical course and prognostic signs. Arch. Neurol. 53, 309-315 (1996).
- Majid, A., et al. Differences in vulnerability to permanent focal cerebral ischemia among 3 common mouse strains. Stroke. 31, 2707-2714 (2000).
- Liesz, A., et al. Boosting regulatory T cells limits neuroinflammation in permanent cortical stroke. J. Neurosci. 33 (44), 17350-17362 (2013).
- Liesz, A., et al. Inhibition of lymphocyte trafficking shields the brain against deleterious neuroinflammation after stroke. Brain. 134, 704-720 (2011).
- Jones, B. J., Roberts, D. J. A rotarod suitable for quantitative measurements of motor incoordination in naive mice. Naunyn Schmiedebergs Arch. Exp. Pathol. Pharmakol. 259, 211 (1968).
- Bouet, V., et al. The adhesive removal test: a sensitive method to assess sensorimotor deficits in mice. Nat. Protoc. 4, 1560-1564 (2009).
- Zhang, L., et al. A test for detecting long-term sensorimotor dysfunction in the mouse after focal cerebral ischemia. J. Neurosci. Methods. 117, 207-214 (2002).
- Orset, C., et al. Mouse model of in situ thromboembolic stroke and reperfusion. Stroke. 38, 2771-2778 (2007).
- Farr, T. D., Whishaw, I. Q. Quantitative and qualitative impairments in skilled reaching in the mouse (Mus musculus) after a focal motor cortex stroke. Stroke. 33, 1869-1875 (2002).
- Kassem-Moussa, H., Graffagnino, C. Nonocclusion and spontaneous recanalization rates in acute ischemic stroke: a review of cerebral angiography studies. Arch. Neurol. 59, 1870-1873 (2002).
