Summary
Isolerte bukspyttkjertelen acini beholde sin in vivo morfologi og aktivitet og tilby effektive måter for å overvåke og manipulere sekresjon. Dette arbeidet viser hvordan acini kan bli isolert fra muse bukspyttkjertelen, og hvordan deres sekretoriske kapasiteter kan vurderes.
Abstract
Bukspyttkjertelen akinærceller produsere og skille ut fordøyelsesenzymer. Disse cellene er organisert som en klynge som danner og deler en felles lumen. Dette arbeidet viser hvordan den sekretoriske evne av disse cellene kan bli vurdert ved dyrking av isolerte acini. Oppsettet er fordelaktig, siden isolert acini, som beholde mange karakteristikker av intakt eksokrin pankreas kan manipuleres og overvåkes lettere enn i hele dyret. Riktig isolering av pankreatisk acini er en viktig forutsetning for at den ex vivo-kultur vil representere in vivo natur acini. Protokollen viser hvordan du isolere intakt acini fra musen bukspyttkjertelen. Deretter blir to komplementære fremgangsmåter for evaluering av pankreatisk sekresjon presenteres. Den amylase sekresjon assay tjener som et globalt mål, mens direkte avbildning av pankreatisk sekresjon tillater karakterisering av sekresjonen ved en sub-cellulær oppløsning. Kollektivt, teknikker preseted her, lar et bredt spekter av eksperimenter for å studere eksokrin sekresjon.
Introduction
Den eksokrin pancreas utgjør mesteparten av massen av pattedyr bukspyttkjertelen og er dedikert til produksjon og sekresjon av fordøyelsesenzymer en. Den funksjonelle enhet av eksokrin bukspyttkjertelen, acinus, er en klynge av epitelceller som danner og deler en felles lumen. Ved hormonell eller neuronal stimulering, blir vesiklene er fylt med enzymer transportert til den apikale celleoverflaten, sikring med den og utvise deres innhold inn i hulrommet 1-3. De utskilte enzymer blir deretter drenert av et koalescerende sett med kanaler inn i tynntarmen, hvor de katalyserer nedbrytingen av maten til næringsstoffer.
Denne videoen viser hvordan intakt acini er isolert fra hele bukspyttkjertelen og hvordan deres sekretorisk kapasitet kan vurderes. Ved hjelp av dette oppsettet er pankreatisk sekresjon kvantifiseres ved å måle den relative mengde av amylase som ble frigjort etter stimulering. Alternativt kan sekresjon avbildes lever ved bruk av forskjelligesensorer og fargestoffer.
Den ex vivo oppsett av pankreatisk acini er fordelaktig, siden isolert acini, som beholde mange egenskaper ved de intakte bukspyttkjertelen, kan manipuleres og overvåkes lettere enn i hele dyret 4-6. Dette oppsettet ble opprinnelig utviklet på slutten av 1970-tallet og var siden utvidet for studiet av flere eksokrine vev som spytt og brystkjertler 3-7. Spesielt, innrømmer det studiet av sekresjon med minimal forstyrrelse for de komplekse cellulære organisasjoner av disse polariserte epitel.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
MERK: prosedyrer som involverer dyr fag har blitt godkjent av Institutional Animal Care og bruk komité (IACUC) ved Weizmann Institute of Science.
1. Prøvepreparering
- Isolering av bukspyttkjertelen acini
- Forbered 300 ml frisk Krebs-Ringer bikarbonat HEPES (KRBH) medium før start. Bland 140 mM NaCl, 4,7 mM KCl, 1,16 mM MgCl2, 1 mM CaCl 2, 11 mM glukose, 10 mm HEPES. Legg bovint serumalbumin (BSA) og 0,1 mg / ml soyabønne trypsin-inhibitor (STI) (resuspensjon medium). Forbered 5 - 10 ml av resuspensjon medium supplert med Collagenase (~ 0,75 mg / ml) (fordøyelse medium).
- Oxygenate KRB medium for ~ 30 min. Legg BSA etter oksygenering for å hindre bobler. Ta resuspensjon og fordøyelse medier til 37 ° C. MERK: Oksygen mediet reduserer dødeligheten celle og forbedrer reaksjonsevne til secretagogues. Effekten av oksygenering er tydelig i det minste i 6 timer.
MERK: For å unngå forurensning, autoklavere disseksjon verktøy og vannet som brukes til KRBH medium før bruk. Filter KRBH medium gjennom et 0,2 mikrometer filter. Før eksisjon av bukspyttkjertelen skyll disseksjon verktøy med 70% etanol og gjennomføre disseksjon på en ren benk. Utfør virusinfeksjoner i en nivå 3 bio-sikkerhetskabinett. Legg antibiotika til O / N dyrking medium (Se punkt 4).
- Innsnitt mye abdominal hud og underhud laget. Identifiser lever, mage, tarm, bukspyttkjertel og milten (figur 1). MERK: I de neste trinnene, håndtere pankreasvevet forsiktig og unngå å bruke for mye mekanisk force for å hindre auto-fordøyelse av vevet og celledød.
- Ved å bruke to butte pinsett, trekke ut tynntarmen. Start på tynntarmen proksimale enden, i nærheten av avkjørselen fra magen. Separer bukspyttkjertelen fra tarmen og beholde den i kroppens hulrom. Når nå tykktarmen, merker en rosa / hvit bindevev. Ikke bland det med bukspyttkjertelen.
- Fjern så mye pankreatisk vev som mulig uten å samle fett eller bindevev. Fjern bukspyttkjertelen ved å løsne den fra milten og mage og kutte mage blodkar under den (figur 1A-C).
MERK: Siden utbyttet av pankreatisk acini fra et enkelt dyr er høy, kan man avstå fra å samle alle de pankreatisk vev for å hindre oppsamling andre vev.
- Skyll bukspyttkjertelen et par ganger i resuspensjon medium oppvarmet til 37 ° C og fjerne gjenværende deler av ikke-pankreatiskvev. Fordyp bukspyttkjertelen i ~ 5 ml forvarmet fordøyelse medium i en 20 ml scintillasjonsglass. Finhakk bukspyttkjertelen til stykker av 1-3 mm. Plasser den i et oppvarmet vannbad (optimalt under omrøring på ~ 100 rpm). Å akselerere fordøyelsen, pipette fordøyd vevet opp og ned en gang i noen minutter.
MERK: Varigheten av kollagenase fordøyelsen er avhengig hovedsakelig på kollagenase konsentrasjonen og av mengden av mekanisk kraft som utøves på vevet. Bruk av 0,75 mg / ml kollagenase i omtrent 15 min og pipettering av vevet med en 5 ml pipette polystyren med en 2 mm dyse hver 3 - 5 minutter, noe som resulterer i acini av 10 - 30 celler. Etter fordøyelsen, vises suspensjon grumset som inneholder synlige biter av vev. Siden kollagenaser effektivitet varierer mellom ulike kommersielle typer og mye, bestemme tidspunktet for fordøyelsen empirisk. - Vasking og filtrering
- Overfør fordøyd vevet inn i en 50 ml tube og avslutte graveestion ved tilsetning av 45 ml av resuspensjon medium. Filtrer suspensjonen gjennom en grov (~ 1 mm) av metall mesh i et nytt rør. Sentrifuger gjennomstrømnings ved 100 x g i 3 min.
- Kast supernatanten og resuspendert fordøyd bukspyttkjertelen i 50 ml resuspensjon medium. Filtrer suspensjonen gjennom en 70 eller 100 mikrometer nylonmesh. Centrifuge som før.
- For å fjerne flytende, skadet acini Kast supernatanten og resuspender pankreasvevet i 3 - 5 ml av resuspensjon medium. Påfør 1 ml porsjoner av pankreatisk acini inn i 15 ml koniske rør fylt med 7 ml av resuspensjon medium. La acini til takke med 2 - 3 min. Samle acini som har slått seg ned på bunnen av røret med en 1 ml-pipette, og gjenta dette trinnet 2 - 3 ganger.
- Vis bukspyttkjertelen acini under et lys eller dissekere mikroskop for å teste deres tilstand. I figur 2 observere renheten av isolasjon og skader påført cellene During isolasjon. Bruk disse acini umiddelbart, eller kultur for opp til 20 timer.
2. Amylase Secretion analysen
MERK: amylase sekresjon analysen fungerer som et globalt mål for sekretorisk kapasitet av bukspyttkjertelen acini. Dette oppnås ved å samle mediet hvori pankreatisk acini ble inkubert, og bestemmelse av amylase-aktivitet i mediet, vanligvis ved å bruke et kommersielt kit.
- Bestem antall eksperimentelle forhold som skal undersøkes (f.eks ikke-stimulert vs stimulert). Bruk minst tre gjentak for hver tilstand. I tillegg, tilsett et sett av replikater for å bestemme det totale cellulære amylase innhold ("totalt" prøve) og et sett for amylase-aktivitet i mediet ("null" prøve). Etikett en multi-brønn plate i hvilken analysen vil bli utført, og to sett av mikrorør for hver av de replikater som skal brukes.
MERK: 12 eller 24-brønns plates kan brukes til å overvåke en og 0,5 ml acinar suspensjoner, hhv. - Vask acini to ganger i 30 ml KRBH resuspensjon medium og inkuber dem i medium resuspensjon i 30 min ved 37 ° C. Til den multi-brønn plate legge til en 10 pl dråpe av secretagogue å nå den riktige sluttkonsentrasjon.
- Bukspyttkjertelen acini svare på en gradient av secretagogue i en tofasepillen måte. Konsentrasjonene med optimale sekresjon verdier er 50 - 100 pM av Cholecystokinin (CCK) og 1 iiM av Carbachol (figur 3A) 5.
- Vask og resuspender acini i resuspensjon medium. Pass på at acini fordeles homogent i hjuloppheng og aliquot like mengder suspensjon i fler brønn plate og inn i 'total' merkede mikrorør. Inkuber platen i 30 minutter ved 37 ° C. (Fortrinnsvis i et vann-bad i henhold til mild omrøring (~ 50 min)).
MERK: Det nøyaktige antallet acini kan variere mellom experiments, men bør være lik i replikater innenfor hvert forsøk. Dermed er presis aliquoting av acini suspensjon kritisk for å sammenligne mellom ulike replikater og betingelser. - I løpet av inkubasjonen, produserer den "totale" og "null" prøver. Sentrifuger "totalt" mikrorør for noen sekunder på 5000 × g og fjerne 50 mL fra supernatanten inn i "zero' merkede mikrorør og plassere dem ved 4 ° C. Lyse den acini i 'totale' samples ved tilsetning av Triton X-100 til mikrorør for å nå en sluttkonsentrasjon på 1%. Vortex mikrorør kraftig.
MERK: Aliquote den "totalt" replikerer ligner på replikater av eksperimentet. Lysering av acini, fører til frigjøring av det totale innhold amylase. Alternativt kan samle acini ved hver tilstand og lyse ved slutten av forsøket, for å bestemme den cellulære innholdet i hver replikat. - Samle det meste av acinar suspensjon infor det første settet av de forhånds merket mikrorør. Sentrifuger mikrorør i noen sekunder ved 5000 × g. Overfør supernatanten til det andre sett av de forhåndsmerkede mikrorør.
- Analysere supernatanten for amylase-aktivitet med et kommersielt kit. Beregne hvor stor andel av amylase skilles.
MERK: Det er viktig å lese amylase aktivitet på sitt lineære område. Tilstede prosentandelen av amylase sekrert som den prosent av amylase frigjøres fra innledende totale innhold. Trekk fra bakgrunnen amylase nivået av mediet fra hver triplikat og dele det ved tilsvarende normaliserte utgangs totalt innhold.
3. Levende Imaging av bukspyttkjertelen Secretion
Sekret fra bukspyttkjertelen acini kan overvåkes direkte av levende bildebehandling. Ved hjelp av forskjellige fluorescerende fargestoffer og sensorer, tillater direkte avbildning karakterisering av sekresjonen ved en sub-cellulær oppløsning.
- Forbered friskt og oksygenrikt resuspensjon medium som jegn trinn 1.1 og bringe den til 37 ° C. Sett mikroskop, og hvis utstyrt med en temperaturregulator, justere den til 37 ° C.
- Vask akinærceller i 30 ml resuspensjon medium og plassere dem i et glass eller plast lysbilde. Merk: Hvis lipofile fargestoffer skal brukes til å merke For plasma membran merket med lipofile fargestoffer, beis acini for ikke mer enn 5 min å forhindre merking av interne membraner ved endocytose. Gjennom arbeidet, håndtere acini forsiktig og unngå overdreven pipettering.
- Når på mikroskopet, er bilde acini hvis morfologi klar, og unngå avbildning av acini som viser basolateral blebs eller intracellulær vakuoler. Legg secretagogue dråpe klokt eller ved hjelp av en perfusjon kammer, enten under eller umiddelbart før oppstart av imaging.
MERK: En høy forstørrelse objektiver med høy numeriske åpninger (f.eks × 63 / 1.4 eller × 100 / 1.4) anbefales å observere subcellulære strukturer.
4. O / N Culture of bukspyttkjertelen acini (Alternate Cell Culture Technique)
MERK: O / N dyrking er ofte brukt for Adeno virusinfeksjon. Infeksjon er utført ved 10 6 -10 7 pfu / ml i 9-16 timer før undersøkelsen.
- Kultur bukspyttkjertelen acini for opp til 20 timer. Resuspendert acini oppnådd fra en enkelt bukspyttkjertelen i 25 ml dyrkningsmedium (DMEM supplert med føtalt kalveserum (FCS) (5%), natrium-pyruvat (1%), antibiotika (1%), L-glutamin (0,5%), BSA (10 mg / ml) og STI (0,2 mg / ml), og oppdelt til fem 10 cm plater. Infisere acini med virus i et nivå 3 bio-sikkerhetsskap.
- Inkuberes bukspyttkjertelen acini ved 37 ° C i en 5% CO 2 fuktet luft. Tillat acini å komme i oksygenrikt resuspensjon medium i 30 min før neste undersøkelse 3,8.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Bukspyttkjertelen acini som ble isolert skikkelig vise en stereotyp morfologi sett lyset. Deres basolateral domener skal vises rundt og blottet for blebs. Den apikale domenet er omgitt av hundrevis av sekretoriske vesikler og er mørkere i fargen (Figur 2A, B). Kjernene er plassert basal til vesikulært området. Cellerester og komponenter av pankreatisk duktalt systemet og i det endokrine pankreas, som kan detekteres på et tidlig stadium av acini isolert (figur 2C, D), bør være fraværende fra den endelige acinar suspensjonen (figur 2A, B). Feil isolering kan resultere i generering av basolateral blebs og brekker av celler som utflod deres fordøyelsesenzymer inn i mediet (Figur 2E, F).
Amylase frigjøring fra pankreatisk acini viser en bi-fasisk kurve når plottet mot konsentrasjonen av secretagogues (figur 3A). Without stimulering ca 5% av det opprinnelige innhold frigjøres i løpet av 30 min med inkubasjon. Etter stimulering, er dette tallet økt med opptil 5 ganger. Acini som ble dyrket O / N, vise en lavere ratio av stimulert vs basal amylase utgivelsen i forhold til fersk isolert acini. Viktigere, kultivert acini som ble smittet av adeno virus vise en høy basal amylase sekresjon og en sensitivisert stimulert sekresjon (Figur 3B, C). Det er således viktig å infisere kontroll acini med en lignende dose av kontrollvirus.
Live-avbildning av acini bør tillate klar identifisering av de basolateral og apikale domener av akinærceller. Lipofile fargestoffer kan være medvirkende til å skille mellom den smale apikal domenet og de laterale og basolateral aspekter av cellene (figur 4). Under fysiologisk stimulering blir sekresjon rettet utelukkende til den apikale overflaten 1,9. Bruk av F-aktin probe Lifeact-GFPtillater levende visualisering av sekretoriske vesikler, siden bukspyttkjertelen zymogen vesikler gjennomgå aktin belegg kort tid før eksocytose (figur 4).
Figur 1. Lokalisering av bukspyttkjertelen og tilstøtende organer. (AC) Bukspyttkjertelen og tilstøtende organer etter snittet av abdominal hud og underhud lag (A), før og etter bukspyttkjertelen separasjon fra naboorganer, (B) og (C), henholdsvis. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2. Isolering av bukspyttkjertelen acini. (A) og (B) i bukspyttkjertelen acini isolert skikkelig vise en stereotyp morfologi; deres basolateral domener vist rund og blottet for blebs, mens deres apikale domene er omgitt av hundrevis av sekretoriske vesikler og er mørkere i farge (pil). (C) og (D) cellerester og komponenter er av den pankreatiske duktalt systemet kan bli detektert på tidlige stadier av acini isolasjon (pilen peker på en eksokrin kanal). (E) og (F) feilaktig isolasjon resulterer i generasjonen av basolateral blebs (E, pil), og brekker av celler, som utflod deres fordøyelsesenzymer inn i mediet ( F, pil). Scale barer representerer 100 mikrometer. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet. 
Figur 3. Måling av amylase utgivelse fra isolerte acini. (A) Amylase utgivelse fra bukspyttkjertelen acini viser en bifasisk kurve når plottet mot konsentrasjonen av en secretagogue. Acini ble isolert og venstre for å komme seg i 30 minutter før stimulering med de indikerte konsentrasjoner av Cholecystokinin (CCK). Resultatene representerer gjennomsnittet og SEM av tre uavhengige eksperimenter. (B) acini som ble dyrket O / N, vise en lavere ratio av stimulert vs basal amylase utgivelsen i forhold til fersk isolert acini. Cultured acini som ble smittet av adeno virus vise en høy basal amylase sekresjon og en sensitivisert stimulert sekresjon. (C) Ikke-oksygen kultur forhold føre til overdreven diutladning av amylase, som maskerer den stimulerende effekt av secretagogue.
Figur 4. Live-avbildning av bukspyttkjertelen sekresjon. Lever stimulert akinærceller, uttrykker Lifeact-GFP (LA, grønt, grått) og farget med lipofile fargestoff FM4-64 (rød). Bruk av Lifeact sonde tillater levende visualisering av enkelt fusion hendelsene i aktin-belagt vesikler (piler). Celler ble infisert O / N med adenovirus-Lifeact-GFP (Ad-Lifeact-GFP), farget og stimulert kort med 100 pM CCK før oppstart av imaging. Scale bar representerer 5 mikrometer. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Foruten den ex vivo-kultur, alternativt oppsett for studiet av eksokrin sekresjon omfatter intravital mikroskopi og måling av fluider fra bukspyttkjertelkanalen. Intramikroskopi ble vist seg å fungere godt i musen spyttkjertler 10. Denne metoden kan ta opp sekresjon i sanntid i intakte dyr, men er begrenset i sin oppløsning og ved at innretningen for å manipulere det eksokrine vev. Vurdere sekresjon ved å samle væske fra bukspyttkjertelen duct ble oppnådd i bedøvede rotter 11. Imidlertid, siden kanylering av pankreasgang er ekstremt vanskelig, er denne metoden blir sjelden brukt.
Sammenlignet med disse oppsett, er den ex vivo kultur av pankreatisk acini enkel, hurtig og tillater adgang til innretninger for å overvåke og manipulering av celler, uten å forstyrre organiseringen av intakt vev 4,5. Likevel har dette oppsettet sine mangler. Bukspyttkjertelakinærceller er delikate karakter og meget følsom for variasjoner i dyrkningsbetingelser. Siden cellene er lastet med proteolytiske enzymer, er de utsatt for lysering og celledød. Som en konsekvens, er denne kulturen kortvarig og vanligvis ikke varer mer enn 20 timer.
Det er alltid best å identifisere og løse problemer som de oppstår. Nøkkelen metodiske skritt er å isolere intakt bukspyttkjertelen acini uten betydelige tegn til celleskader og dødelighet. Slike skilt er åpenbar, og inkluderer overdreven celleavfall og acini med basolateral blebs eller intracellulær vakuoler. I amylase sekresjon analysen, vil celleskade føre til en lav stimulert / ikke-stimulert sekresjon forhold. For å unngå slik skade, er det anbefalt å behandle vevet forsiktig, tilsett BSA og STI til mediet, og for å berike den med oksygen. For eksempel, uten oksygenering, overdreven celle utslipp av amylase maskerer den stimulerende effekt av secretagogue (figur3C). Likevel, som følge av skjørheten av den eksokrine vev, er noe vevsskade nesten uunngåelig - slike preparater må kasseres.
For sekresjon amylase-analysen, supernatanten som inneholder det utskilte amylase, men er fri for celler, kan holdes ved 4 ° C i 1-2 dager. Denne supernatant bør deretter analysert ved et kommersielt kit. Mange tilgjengelige kits stole på en spaltning av en kunstig amylase substrat og den etterfølgende frigjøring av en kromofor. Således høyere amylase konsentrasjoner føre til en raskere endring av løsningens farge. Siden det utskilte amylase vil til slutt frigjøre all kromofor fra substratet, er det viktig å følge reaksjonen i løpet av tiden, og bare bruke de data som er samlet i løpet av den lineære fase.
Live-avbildning av bukspyttkjertelen acini kan være en frustrerende opplevelse for forskeren. Noen cellepreparater, spesielt de av infisert acini, ikke kan være egnet for liveavbildning som følge av svekket morfologi av acini eller utilstrekkelige nivåer av de fluoriserende sensorer. Selv i egnede preparater, kan det ta tid å finne egnede prøver. Dermed bildebehandling kan kreve betydelig tid. Lifeact-GFP, en F-aktin sonde, er bemerkelsesverdig 12. Dette verktøyet tillot oss å følge av dynamikken i F-aktin under pankreatisk sekresjon i opp til 16 timer etter infeksjon, på et nivå av oppløsning som ikke kunne oppnås i faste acinar prøver. I tillegg, bruk av Lifeact probe aktivert sporing av enkelt eksocytose hendelser, som bukspyttkjertelen zymogen vesikler gjennomgå aktin belegg kort tid før eksocytose 3,13.
Kollektivt, når mestret, teknikkene som er beskrevet her tilbyr forskeren betyr å evaluere bukspyttkjertelen sekresjon, og ved å utnytte den til å identifisere nye deltakere i denne multi-stegs prosess. I tillegg, i lys av de strukturelle og funksjonelle likheter mellom pankreas og andre eksokrine organerdisse teknikkene kan bli anvendt til andre eksokrine vev så vel 3.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
Dette arbeidet ble finansiert av et stipend fra US-Israel BSF til B og EDSBS er en incumbent av Hilda og Cecil Lewis professor stol i Molecular Genetics.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| ICR mice | Harlan | Any strain will do | |
| HBSS | Sigma Aldrich | H8264 | Can substitude for KRB |
| BSA | Sigma Aldrich | A7906 | Fraction V |
| Trypsin inhibitor | Sigma Aldrich | T9003 | |
| Collagenase XI | Sigma Aldrich | C0130 | |
| Nylon mesh | BD Falcon | 352360 | 70-100µm |
| Amylase infinity reagent | Thermo | TR25421 | |
| CCK | Sigma Aldrich | C2175 | |
| FM4-64 | Lifetechnologies | F34653 | Diluted to 16µM |
| 20mL scintillation vial | Sigma Aldrich | Z190527 | |
| DeltaVision system | Applied Precision | Consisting of an inverted microscope IX71 equipped with 60x/1.4 or 100x/1.3 objectives (Olympus) | |
| Zeiss 510 or 710 confocal microscope | Zeiss | 60x/1.4 or 100x/1.4 objectives | |
| Ultra Microplate reader | BioTek | ELx808 |
References
- Williams, J. A. Regulation of pancreatic acinar cell function. Current Opinion in Gastroenterology. 22, 498-504 (2006).
- Schnekenburger, J., et al. The role of kinesin, dynein and microtubules in pancreatic secretion. Cellular and Molecular Life Sciences : CMLS. 66, 2525-2537 (2009).
- Geron, E., Schejter, E. D., Shilo, B. Z. Directing exocrine secretory vesicles to the apical membrane by actin cables generated by the formin mDia1. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110, 10652-10657 (2013).
- Amsterdam, A., Jamieson, J. D. Structural and functional characterization of isolated pancreatic exocrine cells. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 69, 3028-3032 (1972).
- Williams, J. A., Korc, M., Dormer, R. L. Action of secretagogues on a new preparation of functionally intact, isolated pancreatic acini. The American journal of physiology. 235, 517-524 (1978).
- Jerdeva, G. V., et al. Actin and non-muscle myosin II facilitate apical exocytosis of tear proteins in rabbit lacrimal acinar epithelial cells. Journal of Cell Science. 118, 4797-4812 (2005).
- Menozzi, D., Jensen, R. T., Gardner, J. D. Dispersed pancreatic acinar cells and pancreatic acini. Methods in Enzymology. , 192-271 (1990).
- Bi, Y., Williams, J. A. A role for Rho and Rac in secretagogue-induced amylase release by pancreatic acini. Am J Physiol Cell Physiol. 289, C22-C32 (2005).
- Palade, G.
- Masedunskas, A., et al. Role for the actomyosin complex in regulated exocytosis revealed by intravital microscopy. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108, 13552-13557 (2011).
- Petersen, H., Grossman, M. I. Pancreatic exocrine secretion in anesthetized and conscious rats. The American Journal of Physiology. 233, E530-E536 (1977).
- Riedl, J., et al. Lifeact: a versatile marker to visualize F-actin. Nat Methods. 5, 605-607 (2008).
- Porat-Shliom, N., Milberg, O., Masedunskas, A., Weigert, R. Multiple roles for the actin cytoskeleton during regulated exocytosis. Cellular and Molecular Life Sciences : CMLS. 70, 2099-2121 (2013).
