Introduction
Zebra balığı (Danio rerio) davranışsal 1 ve tıbbi araştırma 2,3 için yararlı bir model organizmadır Hindistan'da menşeli küçük bir teleost türdür. Balığı, sık davranışı üzerindeki etkilerini karakterize etmek amacıyla, çeşitli farmakolojik maddeler test kullanılır. Çeşitli dozlarda ve ilaç programları gibi uyarıcılar 4, anksiyolotikler 5 ve etanol 6-8 gibi bileşiklerin uygulanmasından sonra zebrafish davranışlarını araştırmak için kullanılmıştır.
Bizim laboratuvar da yaygın scototaxic deneyi olarak adlandırılan iyi valide açık / koyu tahlil 9, 20, zebrafish anksiyete ve lokomosyon etanol idarenin programları farklı etkilerini araştırmıştır. Etanol uygulama yeni bir yöntem uzun bir zaman periyodu (21 gün) üzerinde 6 tekrarlayan, günlük uygulama için verimliliğini artırmak için geliştirilmiştir 12/10 ve uygun bir karışım ihtiva eden başka bir tanka aktarılır. Bu yöntem yaygın olarak kabul iken, Zebra balığı örgü tanıtmak ve ilaç çözeltisinden balık kaldırmak için alınan zaman içinde değişkenlik artabilir. Bu nedenle, söz konusu bileşik için tam maruz tekrarlanan doz içeren bir deney boyunca değişebilir. Taşıma zamanlarda değişkenlik kaynaklanan hata kaynaklarını azaltan bir yöntem arzu edilir. Bizim yöntemi ile her balık özdeş dozlama süresi sonuçlanan, aynı anda tüm balık hareket edebiliyoruz. (Burada anlatıldığı gibi), etanol maruz kalmasını takiben, zebra balığı bir numbe test edilebilirkaygıyı ölçmek de dahil olmak üzere davranışsal deneyleri, r. Yeni yöntemi kullanarak balık grupları dozaj doğru çoğaltmak ve balık grupları konular arasında ve genelinde dozlama standardize etmek yeteneği ötesinde pratik kullanımları vardır. Araştırmacılar kendi deneylerde tekrarlanabilirliği ve doğruluğunu sağlamak için yöntemler kullanabilir görebilirsiniz seferde birden fazla balık takibi için izin verir, yeni yazılım gelişi. Davranışsal sinirbilim için bir model organizma olarak zebrafish yaygın kullanımı göz önüne alındığında, bu yöntem gelecekte farmakolojik çalışmalarda verimlilik ve pratiklik artacak.
Mevcut paradigmada, tekrarlanan doz çizelgesi yaklaşık insan içme programları yansıttığının istihdam edildi. Kontrolü, günlük-orta, ya da haftalık-alem: Balık rastgele bir üç gruba ayrıldı. Dozlama çizelgesi önemli ölçüde önceki çalışmalarda 7 pozlama süreleri aşması nedeniyle seçilmiş, süresi 21 gün idi. Kontrol balık sıfır Alco aldıhol, günlük-orta balık günde bir kez% 0.2 alkol aldı ve haftalık-tıkınırcasına balık haftada% 1.4 alkol kez aldı. Açık / koyu bir görev geri çekilmesinden 2 gün sonra anksiyete değerlendirmek için kullanıldı. Bu bir tarafta duvar beyaz ve diğer tarafta 9 karanlık olan bir dikdörtgen arena kullanan yönetmek için basit bir testtir. Yetişkin Zebra balığı sağlam kontrol koşulları 6,9,13 altında arena karanlık tarafını tercih ederim. Artan anksiyete operasyonel karanlık bölgede harcanan önemli ölçüde daha fazla zaman olarak tanımlanan ve balık ışık bölgesi harcanan nispeten daha fazla zaman harcıyor zaman anksiyete kabul edilebilir azalmıştır. Hareket-izleme yazılımı ile, diğer bilgilendirici değişkenler de ortalama hız, hareketsizlik, kıvrımlı dahildir, miktarı ve bölge 14 geçişler olabilir.
Laboratuvarda geliştirilen dozajlama metodu suda çözünür bileşikler, bir veya daha fazla zebrafi için tatbik edilen herhangi bir araştırma için geçerli olabilirsh. Bu metodoloji yararlanabilecek diğer birçok farmakolojik ajanlar da zebrabalıkları test ediliyor. Genel olarak test bileşikleri, etanol benzer bir şekilde içinde çözülür nikotin, klordiazepoksid, buspiron ve skopolamin, yer alır; su içine kimyasal uygun bir miktarda karıştırarak. Bu nedenle, bu işlemin genel kapsamı çok daha geniş ve etanol ile sınırlı değildir. Ayrıca, birden fazla gün boyunca ilaç verilmesinden sonra, açık / koyu bir görev kullanılabilirdi birçok davranış testleri sadece bir tanesidir. İlaç uygulamasından sonra veya çekilme sırasında, kullanılabilir diğer popüler deneyler yeni tankı dalış testi 15 ve 16 shoaling gibi sosyal davranış testlerini kapsamaktadır. Aşağıdaki prosedür tekrar tekrar ilgi farmakolojik bileşiği içeren çözümler balık ya da bireysel balık gruplarının nakledilmesi etkili bir yöntem açıklayacağım. Buna ek olarak, ışık / karanlık testi ile test anksiyete süreciAlkol tatbikat uzun programları maruz bırakıldıktan sonra geri çekme olan balık gruplar olarak tarif edilecektir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Tüm prosedürler ve davranışsal test bakımı ve deney hayvanlarının kullanımı için Hayvan Bakım kurallarına için Kanadalı Konseyi ile uyumlu olduğunu protokol numarası 06-11-12 altında MacEwan Üniversitesi Hayvan Araştırmaları Etik Kurulu tarafından onaylanmıştır.
1. Doz Tankları, Çözümler ve Yönetim takvimi hazırlayın
- Hayvanlar aynı ortamda ve görsel uyaranlara zaman ya da itme düzeneğinin herhangi bir boşa önlemek için günün aynı süre içinde dozlanır şekilde bir uygulama program hazırlanması.
- Grup boyutları sayısı için gerektiği kadar özdeş, 1.5 L, şeffaf polipropilen yumurtlama tankları edinin. Balık 2 grup sağlar tank başına 8 balık, kullanımı grupları prosedürü daha sonra günde test edilmesi (basamak 3). Bir tutma tankı ve grup başına bir dozlama tankı (grup 2x toplam sayısı) kullanın.
- Tüm tanklarında 400 mikron yumurtlama yerlefltirmede. Fhasta yaşam su veya doğru sıcaklıkta osmoz su ters ile tankları (Zebra balığı için, 25-28 ° C) sıcaklık balık ile tutarlı normalde yer alırlar.
Not: bazı ilaçların ve tamponlanmış yaşam suyun kimyasal bileşenleri arasında istenmeyen kimyasal etkileşimler olabilir. Bu durumda, ters ilaç verilmesi için en az bir ya da akvaryum tuzları ile tamponlanmış ozmoz su, yanı sıra kontrol gruplar kullanılır. - Tanklar dozlama sırasında dış görsel uyaranlara klima balık önlemek için nötr ortamda olduğunuzdan emin olun.
- Tüm tanklarında 400 mikron yumurtlama yerlefltirmede. Fhasta yaşam su veya doğru sıcaklıkta osmoz su ters ile tankları (Zebra balığı için, 25-28 ° C) sıcaklık balık ile tutarlı normalde yer alırlar.
- İlaç çözeltisi hazırlayın. Yumurtlama tanklarda yaşam su ile ilacın uygun miktarda karıştırın. Su 1497 ml olan yüksek seviyede dereceli etanol (% 95 denatüre edilmiş etanol) 3 ml birleştirerek% 0.2 etanol çözeltisi hazırlayın. Su 1479 ml etanol ve 21 ml birleştirerek% 1.4 etanol çözeltisi hazırlayın.
2. netleştirilmesine Balık ve Et-metanol Yönetimi Prosedürü
- Dikkatle net habitat tanklardan balık ve yumurtlama parçayı içeren uygun tutma tankına transferi. İdeal olarak, tamamen örgü ortadan kaldırmak için yumurtlama ekine balık ev.
- Kendi tutma tanklardaki tüm balık, hafifçe yumurtlama tankından dışarı yerleştirin ve uygun ilaç solüsyon tankı (Şekil 1A) içine yerleştirin kaldırın.
- Gerektiği gibi dozaj zamanını kaydedin. Burada tarif edilen prosedüre için etanol çözeltisi içinde 30 dakika kullanın.
- Mümkünse, asistanlar hassas dozlama süresi sağlamak için aynı anda ilaç çözüm tüm deney gruplarının transferi ile yardım var. Alternatif olarak, bir seferde bir grup transferi ve bireysel grupların dozaj kez (Şekil 1A) izlemenize.
- Gerekli dozaj lama dönemi sonunda, dikkatli bir şekilde yumurtlama inserti kaldırarak etanol çözeltisinden balık kaldırmailaç solüsyonu ve nazikçe geri tutma tankına yerleştirerek dışarı.
- Tutma tankları balık ve sonraki zamanlanmış dozlama süresi kadar geri onların yaşam alanlarına yerleştirmek, ya da yumurtlama filelere ortadan kaldırmak için geri tutma tankına eklemek yerleştirin yavaşça net.
- Hayvan barınma ekipman, ev tutma tankı olarak kullanılan aynı tankı ve yumurtlama astar içinde hayvanlar parametreleri içinde, daha önce, mümkünse de belirtildiği gibi. Bu uygulama prosedürü sırasında tamamen filelere ortadan kaldıracaktır.
3. Hareket Testleri
- Uzun 55 cm ve beyaz bir su geçirmez kat (Şekil 1B) ile derin 9.5 cm 9.5 cm genişliğinde bir aydınlık / karanlık arena edinin. Arenada beyaz kaplı ve yarı siyah kaplı yarısı, cırt kullanarak arena iç duvarları beyaz ve siyah su geçirmez yansıtıcı olmayan kağıt yapıştırmayın. 25-28 ° C arasındaki bir sıcaklıkta yaşam su ile 5 cm derinliğe kadar arena doldurun. BakımTest boyunca bu sıcaklık değilim.
- Arena içinde yer alan için bir beyaz üç-taraflı muhafaza oluşturarak dış görsel uyaranlara minimalize. Test alanı su yüzeyinde yansımaları neden olmaz üstten ışıklandırma yaygın olan, henüz yeterince hareket izleme yazılımı, ya da yazı için parlak olduğundan emin olun video görüntüleri -hoc manuel sayısallaştırma.
- Muhafazaya arena yerleştirin ve davranış izleme yazılımı kayıt ve hareket analiz parametrelerini ayarlamak. Araştırma sorusu bağlı olarak, 5-15 dakika için deneme süresini ayarlayın.
NOT: Burada, biz 5 dakika kullanılır. - Balık grup yaşam tankında araştırma alanına test edilecek ulaşım ve arena muhafazanın dışında koyun. 10 dakika süre ile balık alıştırıldı.
- Açık / koyu arena merkezinde uygun grup ve yerden yavaşça net bir balık, bu Avo için arena uzun eksenine paralel olduğunda balık açıklaması için emin olmakışık veya karanlık bölgeye balık kutuplama kimliği.
- Hayvan yayımlandıktan hemen sonra kayıt davranışı başlar. Balık izleme veya balık atlama veya dondurulması için herhangi bir yazılım sorunları için izleyin. Konuların yarısı nedeniyle arena sonu muhafazanın açık ucuna doğru yönlendirilmiş olan kaynaklanan önyargıları herhangi boşa önlemek için test edildikten sonra, Arena 180 ° döndürün.
- Deneme, hafifçe net sona erdi ve bir tanktan ya da yaşam tankına arenada balık çıkarın sonra.
4. Analiz
- Karanlık bölgelerde ışığa karşı harcanan zamanı inceleyin. Her yaş grubu ve her balık için, ışık ve karanlık bölgelerinde harcanan göreli bir zaman alması ve bir örnek t-testi kullanılarak analiz (veya Wilcoxon parametrik veriler için rank testi imzalı; fark, toplam deneme süresinin (yarım) 150 sn den) gruplar arasında anlamlı diğeri üzerinde bir bölgesini tercih olmadığını belirlemek için.
- Bir prefe hesaplamak, tercihlerini karşılaştırmak içinkaranlık bölgede harcanan zaman ışık bölgesinde geçirdi ve gruplar arasındaki farklılıkları karşılaştırmak zaman çıkarılarak rekürensinden indeksi. t testleri iki grup karşılaştırmak için kullanılabilir. Tukey HSD post hoc testi kullanılarak varyans tek yönlü analizi ile birden fazla grubu karşılaştırmak gerektiğinde (Dunn çoklu karşılaştırma parametrik olmayan veriler için post hoc testi ile ya da Kruskal-Wallis testi).
- Gruplar arasında hız, kıvrımlı bölge geçişler, sayısı ve hareketsizlik karşılaştırın. Tukey HSD post hoc testi kullanılarak varyansın tek-yönlü analizi kullanın gerektiğinde (Dunn çoklu karşılaştırma parametrik olmayan veriler için post hoc testi ile ya da Kruskal-Wallis testi).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Yukarıda tarif edildiği gibi sürekli olarak ve doğru bir zaman etanol tatbikat süresi önemlidir zebrabalıkları farmakolojik çalışmalarda doğruluk ve kontrolü sağlamak için. Bizim prosedür dozlama prosedürünün kolaylığı ve verimi artırabilir. Haftalık-aşırı ya da günlük orta derecede ya da zamanlama etanol yönetim kontrol grubu ile karşılaştırıldığında, aydınlık / karanlık testi ile ölçülen değiştirilmiş anksiyete, sonuçlandı. Iki gün son dozdan sonra test edildiğinde, (alkol aldı, ama yine de dozlama tankları taşındı) kontrol grubunda Zebra balığı (arena karanlık tarafında kumanda balık harcamaları önemli ölçüde daha fazla zaman davranış beklenen desen görüntülenir Diğer çalışmalarda 6,9,13 naif zebrabalıkları benzer Şekil 2A). (Şekil 2B son etanol uygulamasından sonra iki gün test edildiğinde haftalık tıkınırcasına grubunda balık görev açık veya koyu ya da bölgeler için hiçbir tercih gösterdi (Şekil 2C) hafif yan tercih edilmektedir; Kontrol grubunun tersine. Tercih indeksi kontrol ve günlük-orta grup (Şekil 2D) arasında anlamlı bir fark göstermiştir. Orada grup (Tablo 1) arasında anlamlı bir yüzme hız farklılıkları ve hareketsizlik olduğu ve bu nedenle, bu etkinin balık bir motor zararla bağlı değildir.
Şekil 1:. Transferi Prosedürü ve Işık / Karanlık arena Bu fotoğraflar transfer prosedürü göstermektedir (A) Öncelikle, balık transfer tankı (solda) yer almaktadır.. Etanol ihtiva eden depo dozaj etanol çözeltisine transfer tankından gelen balık hareket etmesi (sağ). (BC), resimde resea gerektirirrcher transfer tankının dışına ve etanol çözeltisi tankına yumurtlama parçayı kaldırmak için. (D) ışık / karanlık arena derin 9.5 cm ve uzun 55 cm 9,5 cm genişliğinde ölçülen resimli olarak. Beyaz zemin ışık ve karanlık bölge oluşturarak, diğer yarısında Arena (solda) ve beyaz duvarlar yarısı siyah duvarları ile birlikte kullanılır.
Şekil 2: Temsilcisi sonuçları ve 2 gün geri çekilmesinden sonra zebrabalıkları üç gruba etanol doz prosedürü trackplots. (A) 5 dakika aydınlık / karanlık deney boyunca bir kontrol zebra balığı hareket yolunun bir temsilcisi trackplot. Aşağıda balık her pikselin temsil yere harcanan zamana dayalı yargılama boyunca Zebra balığı hareketinin renkli bir temsilidir İlgi haritası, olarak temsil aynı Zebra balığı trackplot olduğunu. (B) A repres5 dakika açık / koyu görevi boyunca haftalık-tıkınırcasına grubundan tek bir zebrabalıkları entative trackplot. Aşağıda aynı zebrafish heatmap olduğunu. (C) 5 dakika açık / koyu yargılama boyunca günde tek-orta zebrabalıkları hareketin temsilcisi trackplot. Aşağıda da aynı zebrabalıkları gelen ısı haritası olan. (D) tercih endeksi koyu bölgedeki harcanan zaman ışık bölgesi içinde harcanan zaman çıkarılarak tüm gruplar için hesaplandı. Negatif sayılar karanlık bölge için tercihinizi belirtiniz. Pozitif sayılar ışık bölgesi için tercihinizi belirtiniz. Sonuçlar kontrol ve 2 gün çekilmesi * p <0.05 (tek-yönlü ANOVA) günlük-orta gruplar arasında tercih anlamlı bir fark göstermemiştir. Kontrol grubundaki karanlık için önemli bir tercih, p <0,05 (0 ilâ bir numune t-testi, fark) ve günlük orta grupta ışık için önemli bir tercih, p <0,05 (bir örnek de vardır Not <em> t-testi, 0'dan farkı). Bu rakamın büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.
| Hız | Hareketsizlik | |
| (Cm / sn) | (Sn) | |
| 2-günler WD | 2-günler WD | |
| Kontrol grubu (n = 13) | 9.1 ± 0.6 | 1.9 ± 0.6 |
| Aşırı (n = 14) | 9.8 ± 0.5 | 0.8 ± 0.2 |
| Kronik (n = 15) | 10.3 ± 0.5 | 2.5 ± 1.0 |
Tablo 1: aydınlık / karanlık testi sırasında ortalama hız ve hareketsizlik. Ortalama yüzmek hızı (cm / sn) ve geri çekilme 2 gün sonra zebrabalıkları oluşan bir temsilci gurup durması (sn) (ortalama ± SEM). Burada, hız ya da hareketsizlik ya anlamlı bir farklılık bulundu. Holcombe ark dan izni ile kullanılır., (2013).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Zebra balığı ilaç verilmesini içeren önceki çalışmalarda sadece ilaç solüsyonu 12,16 içine kendi tankından onları taşımak için balık filelere dayanmıştır. Netleştirme her zaman tutarlı değildir ve genellikle nedeniyle önemli bireysel değişkenlik zebrabalıkları, bir kaçış tepkisi beklenenden daha uzun sürer. Geleneksel transfer yöntemleri, yararlı ise de, balık, su dışında geçirmek toplam süreyi azaltarak, hem de hayvanlar arasındaki aktarım süresi değişkenlik miktarını azaltarak üzerine geliştirilebilir. Pratiklik geliştirmeye ek olarak, bu yöntem, araştırmacılar aynı zamanda kesin bir miktar için bir çözelti içinde balık büyük gruplar doza olanağı verir. Önceki metotları, ya bir tek balık dozlama, veya aynı anda balık gruplarını tam net teşebbüs gerektirir. Ikincisi de bir garip ve zor bir iştir oysa eski, yavaş ve verimi azalır. Ayrıca, hareket izleme sistemleri, bu cBir bu yöntemin hassasiyet yararlanabilir defada birden fazla balık davranışlarını değerlendirmek. Balık tüm balıklar için arena aynı anda maruz kalınması yakın sağlayacak sığlaşma arenaya yumurtlama insert, doğrudan transfer edilebilir.
21 günlük bir süre boyunca zebrabalıkları üç grup ile uygulandığı takdirde de bu yöntemi kullanarak önemli sonuçlar. Kontrol balık alkol, günlük-orta balık günde bir kez alkol küçük bir miktar Alınan ve haftalık-alemleri balık 21 günlük süre boyunca haftada bir kez alkol büyük bir doz aldı. Açık / koyu bir görev olarak, dozlama işlemi kontrol koşulları altında karanlık bir bölge için zebrabalıkları normal tercih değişmedi. Ancak, etanol geri çekilmesinden 2 gün sonra, günlük-orta grupta zebrabalıkları arena ışık bölgesini, bir tercih tersine tercih. İstatistiksel analizler bölge tercihi önemli bir değişiklik onaylar. Bu mümkün olduğu dozaj procedunedeniyle parlak dozlama alanına göreli benzerliği nedeniyle balık arayan etanol (İştah açıcı uyaran) ve beyaz bölgeyi tercih ile bir şartlı yer tercihi (CPP), davranışı isteyen etanol sonuçlandı yeniden. Son araştırmalar zebrabalıkları etanol 17,18 ile doz nerede CPP zebrabalıkları ve alanlarda meydana gelebilir ortaya koymaktadır. Haftalık tıkınırcasına balık 2 gün etanol sonrası hiçbir tercihi gösterdi ve bu bulgunun muhasebe nöral mekanizmalar hakkında kanıt eksikliği olmasına rağmen, bu alkol seyrek ama büyük dozlarda muhtemelen bölgeler arasında ayrım yapamaz balık bırakarak, beyin zarar olasıdır.
Bu dozaj prosedür araştırmacılar kazandıran bir diğer avantajı genelleştirilebilirliği olduğunu. Tarif edildiği gibi, işlem zebrabalıkları açık ve faydalı sonuçlar verir. Bununla birlikte, bu prosedür, sadece zebrabalıkları ile sınırlı değildir. Prosedürüyle üzerindeki kısıtlar, boyutu ve dozlama tankları, hayvan ve Testi sınırları ile ilgilidirng aparatı yanı sıra, verileri analiz etme yeteneği. Hareket izleme yazılımı kullanımı ile, son çalışmalar bir yargılama boyunca birçok ek değişkenleri araştırdık. Beyaz beyaz bölge için gecikme kaçınma alışma geçti kareler, hareket alışkanlık, düzensiz yüzme, thigmotaxis (arena duvarları yakınında harcanan zaman), ve risk değerlendirmesi de 14 belirlenebilir. Bu hoşgörü ve geri çekilme 19 rolünü araştırmak için daha önce kullanılmış olan Japon balığı gibi diğer model organizmalar, bu yordamı kullanmak düşünülebilir. Diğer farmakolojik ajanların veya çevresel toksinlerin etkilerini araştırmak için umut Araştırmacılar, diğer davranış deneyleri veya diğer deniz ve tatlı su hayvanlarının kullanımı da bu temel yöntemi kullanmaya başladı.
Bu protokol kullanılarak basit ve etkilidir. Sonuçlar beklendiği değil gibi Ancak, uygun veri toplama sağlamak için hareket izleme sistemi sorun giderme düşünün. Izliyorumg çalışmalar boyunca düzgün ve doğru olmalıdır. İzleme sistemi, tüm zamanlarda balık vücuda merkezinin hareketini kayıt edilmelidir. Izleme herhangi bir atlama veya düzensiz hareket nedeniyle böyle su dalgaların ışık yansımaları, ya da sonuçları yanıltabilecek uygunsuz izleme ayarları gibi görsel eserler, için nokta. Sonuçlarda bazı farklılıklar arenada tasarım veya dozlama ortamlarda küçük farklılıklar ortaya çıkabilir. Çoğaltma emin olmak için, arena gibi zebrabalıkları izleme verimliliği maksimize etmek için beyaz bir zemin kullanarak özellikle ilgili olarak, tarif edilmelidir. Rengi daha açık olan diğer balık ile, koyu renkli bir zemin hareket izleme yardım etmek için kullanılmalıdır. Benzer şekilde, balık önyargı belki olabilir, herhangi bir görsel uyaranlardan arındırılmış bir ortamda balık dozlama son derece önemlidir. Balık hissedilir Herhangi farklı bir renk, desen veya renk tonu sonuçları bulandırabilir olabilir. Konut sisteminde benzer bir nötr, açık renkli arka tavsiye edilir. </ P>
Bu balık diğer türler için gerekli olduğu gibi, bu yöntem değiştirmek mümkün olsa da, sonuçlar doğal ışık / karanlık tercih 20-21 açısından değişebilir. Yine de bir stres neden olmaktadır Ayrıca, burada açıklanan prosedüre bile dikkat etmek önemlidir. Netleştirme önemli ölçüde azaltılmış olsa da, prosedür hala balık muhtemelen bir stres yanıtı uyaran, su dışında olması ve zaman çok kısa bir dönemi kapsamaktadır. Ramsay ve arkadaşları 22 ağlı zebrabalıkları düşülen olmadığını kıyasla kendi vücut kortizol en az iki düzeylerine sahip oldukları saptandı. Kortizol stres 11 bağlı bir hormon olduğundan, bu ölçülür davranışsal yanıtı değiştirebilir. Bizim yöntem örgü azaltır, onu ortadan kaldırmaz. Ancak, araştırmacılara onlar yumurtlama ekler konut zebrabalıkları tarafından arzu örgü insidansını ortadan kaldırmak için fırsat verir. Gelecek çalışmalar araştırmak gerekmediğini yumurtlama inser kullanımıbalık transferi için t örgüye Stres tepkisi göreli azaltabilirsiniz. Ayrıca, hassas dozlama zamanları korumak ve gruplar arasında kez transfer için son derece önemlidir. Zamanında kez ya da büyük farklılıkları dozlama değişiklikler sonuçlarını değiştirebilecek su dışında geçirdi. Mümkün sirkadiyen etkisini azaltmak için, aynı zamanda günün benzer zamanlarda balık doz için çok önemlidir. Mevcut denemeniz balık verildi ve 10:00-2:00 test. Bu işlemin doğru ve güvenilir bir çoğaltma hassas protokolü tekrar dayanır.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarlar Şekil 1 için kullanılan onun fotoğraf ekipmanı kullanımı için Joshua Gallup kabul. Bu çalışma (TJH için) Doğal Bilimler ve Mühendislik Araştırma Konseyi (NSERC) Kanada Discovery hibe ile desteklenmiştir.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Three shelf benchtop housing system |  Aquatic Habitats |
N/A | |
| 1.5 L Spawning tank w/400 μm baffle | Aquatic Habitats |
N/A | |
| Pure Grain Ethanol | Luxco, INC |
N/A | |
| Ethovision XT Motion tracking software | Noldus Information Technology |
||
| Pipette | Eppendorf Canada |
||
| Light/Dark Arena | Custom | Construct as per procedure description. 9.5 cm wide, 9.5 cm deep, 55 cm long. |
References
- Spence, R., Gerlach, G., Lawrence, C., Smith, C. The behaviour and ecology of the zebrafish, Danio rerio. Biological Reviews. 83 (1), 13-34 (2008).
- Langheinrich, U. Zebrafish: A new model on the pharmaceutical catwalk. BioEssays. 25 (9), 904-912 (2003).
- Santoriello, C., Zon, L. I. Hooked! Modeling human disease in zebrafish. Journal of Clinical Investigation. 122 (7), 2337-2343 (2012).
- Miller, N., Greene, K., Dydinski, A., Gerlai, R. Effects of nicotine and alcohol on zebrafish ( Danio rerio) shoaling. Behavioural brain research. , (2012).
- Bencan, Z., Sledge, D., Levin, E. D. Buspirone, chlordiazepoxide and diazepam effects in a zebrafish model of anxiety. Pharmacology Biochemistry and Behavior. 94 (1), 75-80 (2009).
- Holcombe, A., Howorko, A., Powell, R. A., Schalomon, M., Hamilton, T. J. Reversed Scototaxis during Withdrawal after Daily-Moderate, but Not Weekly-Binge Administration of Ethanol in Zebrafish. PLoS ONE. 8 (5), (2013).
- Mathur, P., Guo, S. Differences of acute versus chronic ethanol exposure on anxiety-like behavioral responses in zebrafish. Behavioural Brain Research. 219 (2), 234-239 (2011).
- Dlugos, C., Rabin, R. Ethanol effects on three strains of zebrafish: model system for genetic investigations. Pharmacology Biochemistry and Behavior. , (2003).
- Maximino, C., et al. Scototaxis as anxiety-like behavior in fish. Nature Protocols. 5 (2), 209-216 (2010).
- Gerlai, R., Lee, V., Blaser, R. Effects of acute and chronic ethanol exposure on the behavior of adult zebrafish (Danio rerio). Pharmacology Biochemistry and Behavior. 85 (4), 752-761 (2006).
- Egan, R. J., et al. Understanding behavioral and physiological phenotypes of stress and anxiety in zebrafish. Behavioural brain research. 205 (1), 38-44 (2009).
- Gebauer, D. L., et al. Effects of anxiolytics in zebrafish: Similarities and differences between benzodiazepines, buspirone and ethanol. Pharmacology Biochemistry and Behavior. 99 (3), 480-486 (2011).
- Serra, M. C., Mattioli, R. Natural preference of zebrafish (Danio rerio) for a dark environment. Braz J Med Biol Res. 32 (12), 1551-1553 (1999).
- Maximino, C., et al. Behavioral and neurochemical changes in the zebrafish leopard strain. Genes Brain Behav. 12 (5), 576-582 (2013).
- Levin, E. D., Bencan, Z., Cerutti, D. T. Anxiolytic effects of nicotine in zebrafish. Physiology & Behavior. 90 (1), 54-58 (2007).
- Gerlai, R., Chatterjee, D., Pereira, T., Sawashima, T., Krishnannair, R. Acute and chronic alcohol dose: population differences in behavior and neurochemistry of zebrafish. Genes, Brain and Behavior. 8 (6), 586-599 (2009).
- Mathur, P., Berberoglu, M. A., Guo, S. Preference for ethanol in zebrafish following a single exposure. Behavioural Brain Research. 217 (1), 128-133 (2011).
- Renninger, S. L., et al. Investigating the genetics of visual processing, function and behaviour in zebrafish. Neurogenetics. 12, 97-116 (2011).
- Crawshaw, L. I., et al. Tolerance and withdrawal in goldfish exposed to ethanol. Physiology & Behaviour. 87 (3), 460-468 (2006).
- Hamilton, T. J., Holcombe, A. Tresguerres, M.CO2-induced ocean acidification increases anxiety in rockfish via alteration of GABAA receptor functioning. Proceedings of the Royal Society B. , (2014).
- Ramsay, J. M., Feist, G. W., Varga, Z. M., Westerfield, M., Kent, M. L., Schreck, C. B. Whole-body cortisol response of zebrafish to acute net handling stress. Aquaculture. 297 (1-4), 157-164 (2009).
- Hamilton, T. J., Paz-Yepes, J., Morrison, R. A., Palenik, B., Tresguerres, M. Exposure to bloom-like concentrations of two marine Synechococcus cyanobacteria (strains CC9311 and CC9902) differentially alters fish behaviour. Conservation Physiology. 2 (1), (2014).
