Summary
Neurala näthinnan av en mus i åldern 8 dagar är på toppen av en 4% gelatinblocket. Efter isolering av ljusmätare lagret (200 nm) genom vibratome är de fotoreceptorer seedade efter mekanisk och enzymatisk dissociation för kultur. Den fotoreceptorskiktet kan användas för molekylära, biokemiska analyser eller transplantation.
Abstract
Näthinnan är en del av det centrala nervsystemet som har organiserat arkitektur, med nervceller i skikt från fotoreceptorer, både stavar och koner i kontakt med näthinnans pigmente epitel i den mest avlägsna delen på näthinnan väger riktning av ljus, och ganglieceller i den mest proximala avstånd. Denna arkitektur möjliggör isolering av fotoreceptorskiktet av vibratome sektione. Den dissekerade neurala näthinnan av en mus i åldern 8 dagar är platt-inbäddade i 4% gelatin ovanpå en skiva av 20% gelatin ljusmätare skikt nedåt. Med användning av en vibratom och ett dubbelt edged rakblad är 100 | im tjockt inner näthinnan sektionerad. Det här avsnittet innehåller ganglieceller och det inre lagret med framför allt de bipolära cellerna. En förmedlare sektion av 15 ^ m är kasseras innan 200 | im hos den yttre näthinnan innehållande fotoreceptorema utvinnes. Gelatinet avlägsnas genom upphettning vid 37 ° C. Bitar av det yttre skiktet är incubated i 500 pl av Ringers lösning med två enheter av aktiverat papain under 20 min vid 37 ° C. Reaktionen stoppas genom tillsats av 500 | il 10% fetalt kalvserum (FCS) i Dulbeccos modifierade Eagles medium (DMEM), är då 25 enheter av DNas I tillsatt före centrifugering vid RT, tvättades flera gånger för att avlägsna serum och cellerna återsuspenderas i 500 | il av DMEM och såddes vid 1 x 10 5 celler / cm 2. Cellerna odlas till 5 dagar in vitro och deras livskraft värderade med hjälp av levande / döda analys. Renheten av kulturen bestäms först genom mikroskopisk observation under experimentet. Renheten sedan valideras genom sådd och fixering celler på en histologisk bild och analysera med hjälp av en kanin polyklonala anti-SAG, en ljusmätare markör och mus monoklonal anti-RHO, en stång ljusmätare specifik markör. Alternativt kan fotoreceptorskiktet (97% stavar) användas för gen- eller proteinuttrycksanalys och för transplantation.
Introduction
Näthinnan är en integrerad del av det centrala nervsystemet som har en bevarad arkitektur bland ryggradsdjur. Nervceller av neurala näthinnan är organiserade i skikt, med de mest avlägsna för det infallande ljuset, fotoreceptorskiktet i nära kontakt med det retinala pigmenterade epitel (RPE) i bakre delen av ögat. Rod och kon photorecptors är ljuskänsliga celler som är beroende av opsin känsliga molekyler för foton capture. Dessa molekyler är inneslutna på skivmembran hos en cellulär struktur, som ligger på den yttre segment av fotoreceptor som pekar i den riktning i RPE 1. Denna struktur, som oftast drabbas mycket tidigt i fall av fotoreceptor degeneration, förnyas i en takt av 10% varje dag. Den så kallade inre skiktet innehåller de flesta av de andra nervceller som beräknar den mottagna signalen från de fotoreceptorer, den bipolära, amakrina och horisontella celler såväl som de ganglieceller. Dessa senare med sina axonerbildar en stråle som är synnerven. Denna skiktning är så bevarad att biologerna har använt termen förskjuts amakrina celler när cellerna finns utanför den inre plexiform lagret 2. Lager av nervceller är fördelade inom en armatur för radiell Müller gliaceller. Bipolära celler länka fotoreceptorer till ganglieceller. De är belägna mellan det yttre plexiformskiktet och innerplexiformskiktet. De ganglieceller bilda den inre plexiform skiktet i samband med de bipolära cellerna. De amacrin cellerna namnges som föreningens celler belägna i det inre plexiform lagret mellan bipolära celler och ganglieceller. Det yttre plexiformskiktet innehåller horisontella celler. Denna unika arrangemang av neuronala lager av det centrala nervsystemet tillåter isolering av fotoreceptorskiktet från den inre cellskiktet genom skärning flatmonterade näthinnan med hjälp av en vibratome.
Ursprungligen var denna teknik för att isolera fotoreceptorer för transplantation i ögat av RD1 mus, en modell av mänsklig retinitis pigmentosa (RP) 3. Den RD1 musen bär en recessiv mutation i Pde6b genen som kodar för stav specifikt fosfodiesteras betasubenhet. Recessiva mutationer av denna gen resultatet i RP hos människor 4. Efter spö fotoreceptorer har urartat, förlorar patienten mörkerseende, och förvånansvärt kon fotoreceptorer, som inte uttrycker den muterade genen, urartar i ett andra steg. Eftersom konerna krävs för färgseende och synskärpa, patienterna blir successivt blinda och en effektiv behandling för sjukdomen har ännu inte utvecklats. Genom ympning fotoreceptorskiktet från en vild typ mus konen degeneration av värd musen fördröjs 3,5. Stavarna förlorade i stav kon degenerativ modellen kunde inte ersättas av en transplantation eftersom det synaptiska förbindelsen mellan stavar och bipolära celler endast kan erhållas i ett visst skede av retinal utveckling, präglad av uppkomsten av Nrl uttryck 6. Skiktet av fotoreceptorer införes genom kirurgi i sub-retinala utrymmet hos den stav mindre RD1 näthinnan, mellan RPE och den yttre näthinnan motsvarar endast 3% av de återstående fotoreceptorer, konerna. Två veckor efter operationen, 40% av konerna från djuret transplanteras med en normal ljusmätare skikt levde jämfört med djuret transplanteras med ett normalt lager av inre retinala celler, eller till skenopererade djur. Topografin av kon överlevnad, sprids ut över hela ytan av den muterade näthinnan belägen vid läget för den transplanterade vävnaden indikerar att den skyddande effekten beror på ett diffunderbart molekyl 7.
Därefter använde vi en samodlingssystemet liksom konditionerade odlingsmedier för att validera det faktum att den skyddande effekten är beroende av sekretionen av ett protein av stänger 8,9. Vår hypotes är att detta protein kommer att ExprEssed kontinuerligt och specifikt av stavar och att deras död under den första fasen av sjukdomen kommer att utlösa sekundära kon degeneration av förlusten av en skyddande signal från stavar i en icke-cell självständigt 10. På grund av betydelsen av konen medierad centrala seendet hos primater denna förmodade protein kommer att bli en mycket relevant terapeutiskt verktyg för RP. Bevara konerna i RP skulle teoretiskt förhindra totalt 1,5 miljoner patienter världen över för att bli blinda 11. Vi har använt en hög halt screening eller kon berikad kulturmodell för att identifiera ett cDNA som kodar Rod-härledda Cone Viability Factor (RdCVF) från en retinal-cDNA-bibliotek 12. RdCVF är skarvade produkten av NXNL1 gen som är intressant homolog den gen som kodar för thioredoxin proteiner involverade i redox homeostas 13. Den andra splitsade produkten av genen, är RdCVFL ett enzym som skyddar sitt mål, den TAU-protein mot oxidativ dAmage 14. Administration av RdCVF förhindrar sekundär degeneration av kottar och förlusten av deras visuella funktion i ett recessivt och dominant modell av RP 12,15. Detta visar två viktiga aspekter av denna innovativa behandlingsstrategi 16. För det första kan det tillämpas på de flesta av de RP fallen i en gen-oberoende sätt. För det andra, är i strid med konkurrerande faktor CNTF, RdCVF överlevnad i samband med underhåll av synfunktionen 17. Frånvaron av funktionell effekt kan förklara orsaken till frånvaron av kliniska nyttan av administrationen av CNTF till RP patienter 18. RdCVF är mest sannolikt en av de viktiga överlevnadssignalen mellan stavar och koner eftersom kon räddning in vitro hämmas av RdCVF immunotömning 12. Dessutom avbrottet i stavhärledda kon livskraft genen leder till fotoreceptor dysfunktion och mottaglighet för oxidativ stress 19.
Användningen avljusmätare lagret är till grund för identifieringen av RdCVF och av en ny redox signal inblandad i neurodegenerativa sjukdomar 20. Detta manuskript beskriver det protokoll som används för att isolera och odla celler från fotoreceptorskiktet att karakterisera aktiviteten hos RdCVF. De fotoreceptorer kan bibehållas i odling under 5 till 7 dagar 21. Denna teknik kan också användas för att studera uttrycket av fotoreceptor specifika gener.
Protocol
OBS: Proceduren godkändes av den etiska kommittén Darwin från University Pierre och Marie Curie (CE5 / 2009/048)
1. Beredning av gelatinlösning, Instrument, Vibratome, kultur media och kultur Plate
- Bered en 20% gelatinlösning åtminstone en dag före experimentet.
- Under huven, tillsätt 500 ìl av gentamycin [10 mg / ml] till en 500 ml flaska med CO2 oberoende medium (CO 2 -i).
- I en separat bägare, tillsätt 20 ml CO2-I (från steg 1.1.1) och värm vid 95 ° C på ett värmeblock med konstant omrörning under 15 min. Beakta en färgändring till gult, vilket indikerar att lösningen är klar för vidare användning.
- Väg 4 g gelatin och gradvis fattiga till den lösning som framställts ovan (steg 1.1.2) med ökad omröring och värmning vid 95 ° C under 45 min, för att erhålla en gul färglösning. Låt gelatinlösningen svalna underhuven för cirka 5 minuter.
- Häll 4 ml av gelatinlösningen in i en 35 mm diameter odlingsskålar utan att införa luftbubblor. Håll skålen vid 21 ° C under 30 minuter. Täck rätter med plastfilm, och vänd rätter upp och ned. Eventuellt lagra rätter på 4 ° C i upp till 2 månader före användning.
- Förbered en 4% gelatinlösning.
- Under huven, tillsätt 25 ml av CO 2 -i medium i en steril plastbehållare, och värm vid 42 ° C på ett värmeblock. Avlägsna mediet från värmeblocket och gradvis lägga ett g gelatin till det varma mediet och rör om. Snabbt tillbaka behållaren på värmeblocket (42 ° C) och håll den varm under processen.
- Inrättande vibratome apparaten:
- Avlägsna skålar innehållande 20% gelatinlösning lagrades vid 4 ° C. Skär gelatinet med en skalpell. Vänd på gelatin slice och klistra in den på den svarta stödskivan av vibratome med hjälp av en droppe super lim.
- Bryt ett rakblad i två halvor, och sätt ena halvan i vibratome hålla kärlet. Sätt i den svarta stödskivan på vibratome apparaten. Slå på den svarta ratten på höger sida. Fäst hålla kärlet på huvudet av vibratome. Tillsätt tillräcklig mängd CO 2 -i medium i vibratome tanken för att täcka gelatinblocket.
- Slå på vibratome och skär tre 100 ìm skivor gelatinblocket. Håll gelatinblocket för vidare användning.
- Förbered 40 ml odlingsmedium:
- Förbered Dulbeccos modifierade Eagle-medium (DMEM) med 10% av fetalt kalvserum (FCS) under huven. Bered en mg / ml poly-D-lysin med användning av fosfatbuffrad saltlösning (PBS), pH 7,4.
- I en 96-brunnars platta, lägg 2 ^ g / cm 2 av poly-D-lysin för att belägga botten av brunnarna. Inkubera plattan under 45 min vid 37 ° C inom 5% CO2 inkubator. Efter inkubation, ta bort PBS och ersätta med 200 ^/ Brunn DMEM och plats igen vid 37 ° C i 5% CO2 inkubator före användning.
2. Dissekering av hela Retina
- Enucleate musen:
- Offra musen enligt det europeiska direktivet 2010/63: genom halsdislokation. Skär huvudet med böjda-sax och placera den i en 100 mm diameter petriskål efter desinficeras ögat med desinfektionsmedel.
- Ta ögat efter att ha lossnat synnerven genom sektione det mycket försiktigt med en böjd grepp. Placera sedan båda ögonen i en 35 mm petriskål med steril CO2 -i medium vid 21 ° C.
- Borttagning näthinnan:
- Gör ett hål i nivå med ögat-lem med hjälp av en 18 G nål för att kunna införa saxen i ögat världen. Införa raka sax inuti hålet och försiktigt skära sklera nedanför irisen på hela omkretsen av den okulära globen för att avlägsna ciliarkroppen.
- Uppgången ögongloben och skala den som en "orange". Lossa näthinnan från sklera och retinal pigmente epitel (RPE). Lösgör näthinnan fortfarande fäst vid nivån av synnerven mycket noga med fina krökta-sax.
- Lossa den återstående glaskroppen från periferin mot centrum av näthinnan med två fina grepp. Kontrollera att alla glaskroppen är helt borttagen för att tillåta plattning av näthinnan.
- Klipp änden av en plast pipett och överföra näthinnan till en 35 mm diameter petriskål med CO2 -i medium med plastpipetten.
3. Tätning av Flat-mounted Retina in Gelatin Block
- Ta bort 20 - 30 ml CO2 -i medium från vibratome tanken (gelatinblocket är gratis) för att tillåta tätning av platta monterade näthinnan.
- Överför näthinnan till en glasskiva med hjälp av en plast pipett och tillsätt en droppe CO2 -i medium innan överföring till gelatin skiva med fotoreceptor nedåt på gelatin skiva.
- Fäst näthinnan till gelatinblocket genom att försiktigt injicera värmt 4% gelatin på en sida av blocket mellan retinan och gelatinblocket och samtidigt driver ut varm gelatin på den andra sidan.
- Sug 4% gelatin med en pasteurpipett. Vänta 10 minuter för att tillåta total tätning. Lägg CO2 -i medium för att fördjupa blocket och bladet helt.
4. Sektione Retina
OBS: Detta steg är avgörande för att få ett lager av fotoreceptorceller utan de andra retinala celler (figur 1).
- Börja uppifrån på gelatinblocket, skär 100 um seriella sektioner för att nå näthinnan. Skär sedan 100-120 um sektioner av det inre skiktet. Beroende på program, kan detta skikt kasseras eller förvaras i flytande kväve. Se till att hastigheten på vibratome är mycket långsam (vid en eller två) under sektionering av det inre skiktet eller fotoreceptorer skikt.
- Utför mellanliggande 15 um sektioner av näthinnan som motsvarar gränssnittet mellan den inre och den yttre näthinnan. Observera detta avsnitt under ett mikroskop. Frånvaron av blodkärl indikerar att den yttre näthinnan har nåtts.
- Skär 200 nm av den yttre näthinnan (den ljusmätare lagret) med gelatin och överföra den till en maträtt diameter 35 mm fylld med 3 ml CO2 -i medium. Håll det på is tills alla sektioner de ljusmätare skikt av alla näthinnor erhålls.
5. dissociera fotoreceptorceller
- Ta skålen (es) innehållande fotoreceptorskiktet (-skikten) och placera den (dem) i en inkubator vid 37 ° C under 10 min.
- Använd pincett separerar försiktigt ljusmätare lagret från gelatin och överföra den i en ny maträtt fylld med 3 ml Ringers lösning. Upprepa detta steg (5,2) för varje ljusmätare skikt beredning.
- Inkubera 2 enheter av papain med 25 ul av aktivator-lösning (1,1 mM EDTA; 5,5 mM L-cystein; 60 pM β-merkaptoetanol) i en 5 ml polypropylen sterilt rör och inkubera det 30 min vid 37 ° C inom 5% CO2 inkubator . Aktiveringen av papain uppnås vid 37 ° C. Under denna inkubation, skär ljusmätare lagret i 2 mm 2 stycken (inte alltför små) och överför dessa bitar i en 5 ml rör.
- Skölj näthinnan två gånger med 1,5 ml lösning Ringers lösning följt av gravitationssedimentering. Ta bort alla återstående Ringers lösning från röret med provet.
- Lägg 475 pl av Ringers lösning till röret innehållande aktiverat papain och mix. Tillsätt denna lösning till röret innehållande näthinnan.
- Inkubera röret med näthinnan under 20 min vid 37 ° C inom 5% CO2 inkubator. Stoppa reaktionen genom att tillsätta 1 ml av 10% FCS i DMEM. Lägg 25 U deoxiribonukleas I (DNAs I) till diger DNA från dödsceller. Försiktigt homogenisera cellsuspensionen med hjälp av en 1 ml-pipett. Spin vid 50 xg under 6 min vid RT.
- Kasta bort supernatanten för att avlägsna spår av serum och lägg DMEM-medium med tillskott (se tabell över specifik reagents_equipment) till cell pelleten och resuspendera noggrant cellsuspensionen med en 1 ml pipett. Spin vid 50 xg under 6 min vid RT. Upprepa detta steg (5,7) en gång till.
6 Odling fotoreceptorceller
- Den fotoreceptor skikt av en mus på PN8 innehåller ca 1 till 1500000 celler med användning av denna teknik. Seed fotoreceptorcellerna vid 1x 10 5 celler / cm 2 i en odlingsplatta med odlingsmedium och odla cellerna under 5 dagar vid 37 ° C inom 5% CO2 inkubator. På dag 5, fortsätt till immunkemi och västra blotting studie efter metoder som tillhandahålls av leverantörerna antikropps.
OBS: Åtgärder för att stoppa den kultur och preliminära tester beskrivs i referens 21.
Representative Results
Bortsett från transplantation, har fotoreceptorskikten också använts för att studera cellsignalering genom ympning celler för framställning av fotoreceptorkulturer 12,22. Dessutom används de för att studera genuttryck och dygnsrytm 23,24. Vi har använt cellfotoreceptorskiktet från en vildtyp mus vid postnatal dag 8 för att framställa fotoreceptor kulturer i frånvaro av FCS och underhålls cellerna under 5 dagar vid 37 ° C i en inkubator med 5% CO2 (figur 1E ). Cellerna fixerades sedan med användning av 4% paraformadehyde och fortsatte sedan för immunocytokemisk analys med användning av metoder som tillhandahålls av leverantörerna antikropps antingen med mus-monoklonal anti-RHO (1: 250, Millipore Mab5316) eller kanin-polyklonal anti-SAG (1: 200, en generös gåva Igal Gery och David Hicks). Vi använde anti-RHO och anti-SAG (även om anti-SAG etikett koner och stavar) på grund av det faktum att anti-SAG är ett tidigare markör, än anti-Rho. Andelen cells positiva för anti-RHO antikropp är lägre än de positiva för anti-SAG antikroppar (Figur 2). Detta kan förklaras av det faktum att SAG, stången arrestin uttrycks också av koner som gör 3% av fotoreceptorer i den isolerade skiktet, eller alternativt genom det faktum att under postnatal mognad av näthinnan, föregår uttrycket av SAG att av RHO 25,26.
Den fotoreceptor Skiktet också användas för att övervaka specifika uttryck av gener genom fotoreceptorer av vildtyp näthinnan och hjärnan hos djur på högst 35 dagar RNA framställdes med användning CsCl ultracentrifuge 27 och hybridiserade till mus DNA-chip Array. Budbärare för rodopsin (RHO), är S-arrestin (Sag) och kon-transducin (Gnat2) uttrycks specifikt i näthinnan i jämförelse med hjärnan (figur 3A). Uttrycket är framträdande i ljusmätare lagret (PR) än i hela näthinnan som omfattardet inre retinaskiktet visar att dessa gener uttrycks faktiskt av fotoreceptorer. För Gnat2, det relativa uttrycket jämfört med Rho och Sag visar att det uttrycks av koner som finns i den isolerade fotoreceptorskiktet. Expressionen av recoverin (Rcvrn) i fotoreceptorskiktet i jämförelse med hela näthinnan ökas (figur 3B).
Den fotoreceptor-skiktet också användas för att övervaka uttrycket av RHO och GNAT2 användning av Western blotting efter metoder som tillhandahålls av leverantörerna antikropp och att jämföra med det inre retinaskiktet (Figur 4). Lägg märke till avsaknaden av RHO och GNAT2 28 markörer av stavar och tappar respektive i hela näthinnan och i näthinnan av RD1 musen på postnatal dag 35.
Figur 1. Schematisk bild av vibratome sektionering av mus näthinnan. (A) Installation av den platta monterade näthinnan med fotoreceptorn nedåt på gelatin slice. (B) avsnitt av inner näthinnan med vibratome bladet. (C) Avsnitt av den yttre näthinnan sätts av gelatin. (D) Kontroll av närvaron av fotoreceptorn vid kanten av fragmentet av näthinnan efter isoleringen av fotoreceptorskiktet. Skala bar används för grön fluorescens används av ett vitt ljusmikroskop. De fotoreceptorer är belägna i kanten av bilden. (E) Odlade fotoreceptorceller (post-fem dagar). (F) Högre förstoring av panel E.
Figur 2. Differentiell expression av RHO och SAG i mus fotoreceptor kultur. (A) Färgning av kärnor (blått), (B) SAG-färgning (grön), (C) RHO färgning (röd). (D) sammanslagna bilden. Eftersom färgning av SAG uttrycks tidigare än RHO färgning, är endast två celler dubbel märkt SAG och RHO (se *). Skala bar:. 23 um klicka Vänligen här för att se en större version av denna siffra.
Figur 3. Jämförelse av uttrycket av tre gener i hjärnan och hela näthinnan och fotoreceptorer hos vildtyp djur på högst trettiofem dagar. (A) Rhodopsin (Rho), S-arrestin (Sag) och kon-transducin (Gnat2). (B) Calbindin (Calb1) och Recoverin (Rcvrn). Uppgifterna visas som relativa uttrycket. Den relativa uttryck är ett uttryck värdeerhållits från microarray data efter normaliszation med programvaran Robust Multi-array Average (RMA) finns i kunskapsdatabasen KBaSS (http://kbass.institut-vision.org/KBaSS/).
Figur 4. Redovisning av RHO och GNAT2 i yttre näthinnan från en vild typ näthinnan vid postnatal dag 35. Avsaknad av deras uttryck i den inre näthinnan och i näthinnan av RD1 musen på postnatal dag 35. ACTB, beta aktin. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Cytidine 5′-diphosphocholin* | Sigma-Aldrich | C0256 | 4.7 µM Cytidine 5′-diphosphocholin |
| Cytidine 5′-diphosphoethanolamine* | Sigma-Aldrich | C0456 | 2.7 µM Cytidine 5′-diphosphoethanolamine |
| Linoleïc acid/ bovine serum albumin (BSA)* | Sigma-Aldrich | L8384 | 100 µg/ml linoleïc acid/ bovine serum albumin (BSA) |
| Triiodo-L-thyronine* | Sigma-Aldrich | T6397 | 0.03 µM Triiodo-L-thyronine |
| 96-well plates | Greiner bio-one | 655-095 | |
| Binocular microscope | Leica | MZ-75 | |
| CO2 independent (CO2-i) | Life Technologies | 18045054 | |
| DMEM | Life Technologies | 41966029 | |
| Forceps n°5 Dumont | Bionic | 11254-20 | |
| Gelatin from porcin skin type A | Sigma-Aldrich | G2500 | |
| GeneChip | Affymetrix | U74v2 | |
| Gentamicin solution | Life Technologies | 15710049 | |
| Hydrocortison* | Sigma-Aldrich | H0888 | 0.55 µM hydrocortison |
| Insulin* (I) | Sigma-Aldrich | I1884 (ITS) | 0.86 µM insulin (I) |
| Papain | Worthington-biochem | WOLS03124 | |
| Poly-D-lysine | Sigma-Aldrich | P-6407 | |
| Progesterone* | Sigma-Aldrich | P7556 | 2.0 µM progesterone |
| Prostaglandin* | Sigma-Aldrich | P5172 | 0.28 µM prostaglandin |
| Putrescine* | Sigma-Aldrich | P5780 | 182 µM putrescine |
| Scalpel Albion | EMS | 72000 | |
| Scissor | Moria | 15396-00 | |
| Sodium pyruvate* | Sigma-Aldrich | S8636 | 1 mM sodium pyruvate |
| Sodium selenite* (S) | Sigma-Aldrich | I1884 (ITS) | 0.29 µM Na2SeO3 (S) |
| Taurine* | Sigma-Aldrich | T8691 | 3 mM taurine |
| Transferrin* (T) | Sigma-Aldrich | I1884 (ITS) | 0.07 µM transferrin (T) |
| Vibratome apparatus | Leica | VT1000-S | |
| * Supplements | |||
References
- The Organization of the Retina and Visual System. Webvision. Kolb, H., Nelson, R., Fernandez, E., Jones, B. , (2014).
- Perez De Sevilla Muller, L., Shelley, J., Weiler, R. Displaced amacrine cells of the mouse retina. J Comp Neurol. 505 (2), 177-189 (2007).
- Mohand-Said, S., et al. Photoreceptor transplants increase host cone survival in the retinal degeneration (rd) mouse. Ophthalmic Res. 29 (5), 290-297 (1997).
- Daiger, S., Sullivan, L., Bowne, S. RetNet, the Retinal Information Network. , The University of Texas Health Science Center. Houston, TX. Available from: https://sph.uth.edu/retnet (2014).
- Mohand-Said, S., Hicks, D., Dreyfus, H., Sahel, J. A. Selective transplantation of rods delays cone loss in a retinitis pigmentosa model. Arch Ophthalmol. 118 (6), 807-811 (2000).
- MacLaren, R. E., et al. Retinal repair by transplantation of photoreceptor precursors. Nature. 444 (7116), 203-207 (2006).
- Yang, Y., et al. Transplantation of photoreceptor and total neural retina preserves cone function in P23H rhodopsin transgenic rat. PLoS One. 5 (10), (2010).
- Mohand-Said, S., et al. Normal retina releases a diffusible factor stimulating cone survival in the retinal degeneration mouse. Proc Natl Acad Sci USA. 95 (14), 8357-8362 (1998).
- Fintz, A. C., et al. Partial characterization of retina-derived cone neuroprotection in two culture models of photoreceptor degeneration. Invest Ophthalmol Vis Sci. 44 (2), 818-825 (2003).
- Cronin, T., Leveillard, T., Sahel, J. A. Retinal degenerations: from cell signaling to cell therapy; pre-clinical and clinical issues. Curr Gene Ther. 7 (2), 121-129 (2007).
- Wright, A. F.
- Leveillard, T., et al. Identification and characterization of rod-derived cone viability factor. Nat Genet. 36 (7), 755-759 (2004).
- Lillig, C. H., Holmgren, A. Thioredoxin and related molecules--from biology to health and disease. Antioxid Redox Signal. 9 (1), 25-47 (2007).
- Fridlich, R., et al. The thioredoxin-like protein rod-derived cone viability factor (RdCVFL) interacts with TAU and inhibits its phosphorylation in the retina. Mol Cell Proteomics. 8 (6), 1206-1218 (2009).
- Yang, Y., et al. Functional cone rescue by RdCVF protein in a dominant model of retinitis pigmentosa. Mol Ther. 17 (5), 787-795 (2009).
- Bennett, J. Strategies for delivery of rod-derived cone viability factor. Retina. 25 (8 Suppl), S47 (2005).
- Komaromy, A. M., et al. Transient photoreceptor deconstruction by CNTF enhances rAAV-mediated cone functional rescue in late stage CNGB3-achromatopsia. Mol Ther. 21 (6), 1131-1141 (2013).
- Birch, D. G., Weleber, R. G., Duncan, J. L., Jaffe, G. J., Tao, W. Randomized trial of ciliary neurotrophic factor delivered by encapsulated cell intraocular implants for retinitis pigmentosa. Am J Ophthalmol. 156 (2), 283-292 (2013).
- Cronin, T., et al. The disruption of the rod-derived cone viability gene leads to photoreceptor dysfunction and susceptibility to oxidative stress. Cell Death Differ. 17 (7), 1199-1210 (2010).
- Leveillard, T., Sahel, J. A. Rod-derived cone viability factor for treating blinding diseases: from clinic to redox signaling. Sci Transl Med. 2 (26), 26ps16 (2010).
- Fontaine, V., Hicks, D., Dreyfus, H. Changes in ganglioside composition of photoreceptors during postnatal maturation of the rat retina. Glycobiology. 8 (2), 183-190 (1998).
- Fontaine, V., Kinkl, N., Sahel, J., Dreyfus, H., Hicks, D. Survival of purified rat photoreceptors in vitro is stimulated directly by fibroblast growth factor-2. J Neurosci. 18 (23), 9662-9672 (1998).
- Reichman, S., et al. The homeobox gene CHX10/VSX2 regulates RdCVF promoter activity in the inner retina. Hum Mol Genet. 19 (2), 250-261 (2010).
- Sandu, C., Hicks, D., Felder-Schmittbuhl, M. P. Rat photoreceptor circadian oscillator strongly relies on lighting conditions. Eur J Neurosci. 34 (3), 507-516 (2011).
- Dorrell, M. I., Aguilar, E., Weber, C., Friedlander, M. Global gene expression analysis of the developing postnatal mouse retina. Invest Ophthalmol Vis Sci. 45 (3), 1009-1019 (2004).
- Brooks, M. J., Rajasimha, H. K., Roger, J. E., Swaroop, A. Next-generation sequencing facilitates quantitative analysis of wild-type and Nrl(-/-) retinal transcriptomes. Mol Vis. 17, 3034-3054 (2011).
- Delyfer, M. N., et al. Transcriptomic analysis of human retinal surgical specimens using jouRNAI. J Vis Exp. (78), (2013).
- Ying, S., et al. A CAT reporter construct containing 277bp GNAT2 promoter and 214bp IRBP enhancer is specifically expressed by cone photoreceptor cells in transgenic mice. Curr Eye Res. 17 (8), 777-782 (1998).
