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चूहे में मुताबिक़ रक्त के थक्के के साथ ischemic स्ट्रोक के लिए embolic मध्य मस्तिष्क धमनी रोड़ा (MCAO)

Published: September 17, 2014 doi: 10.3791/51956
Automatic Translation
1, 1, 1
1Vascular Biology and Stroke Research Laboratory, Department of Neurosurgery, Louisiana State University Health Science Center, Shreveport

ERRATUM NOTICE

Abstract

पुनः संयोजक ऊतक plasminogen उत्प्रेरक (टीपीए) के उपयोग के साथ चिकित्सकीय, थ्रांबोलिटिक चिकित्सा तीव्र इस्कीमिक स्ट्रोक के लिए सबसे प्रभावी उपचार बनी हुई है. हालांकि, टीपीए का उपयोग अपने संकीर्ण चिकित्सकीय खिड़की से और रक्तस्रावी परिवर्तन का खतरा बढ़ द्वारा सीमित है. इस्कीमिक स्ट्रोक के इलाज के लिए नई थ्रांबोलिटिक एजेंटों और रणनीतियों का अध्ययन करने के लिए उपयुक्त स्ट्रोक मॉडल विकसित करने की तत्काल आवश्यकता है. Intraluminal सीवन MCAO और embolic MCAO: वर्तमान में, इस्कीमिक स्ट्रोक मॉडल के दो प्रमुख प्रकार चूहों और चूहों में विकसित किया गया है. Intraluminal सीवन तकनीक के माध्यम से MCAO मॉडल व्यापक रूप से तंत्र संचालित स्ट्रोक अनुसंधान में इस्तेमाल किया गया है, इन सिवनी मॉडल नैदानिक ​​स्थिति की नकल नहीं और थ्रांबोलिटिक अध्ययन के लिए उपयुक्त नहीं हैं. इन मॉडलों के बीच, embolic MCAO मॉडल बारीकी से मानव इस्कीमिक स्ट्रोक mimics और थ्रांबोलिटिक चिकित्सा के पूर्व नैदानिक ​​जांच के लिए उपयुक्त है. इस embolic मॉडल पहले ओवर से चूहों में विकसित किया गया था1992 में. एट अल 1 ergaard और आगे झांग एट अल द्वारा होती. 1997 में 2. embolic MCAO ध्यान में वृद्धि हासिल की है हालांकि, कई प्रयोगशालाओं द्वारा सामना की तकनीकी समस्याएं हैं. थ्रांबोलिटिक अनुसंधान के लिए बढ़ती जरूरतों को पूरा करने के लिए हमने एमसीए क्षेत्र के भीतर एक उम्मीद के मुताबिक रोधगलितांश मात्रा विकसित कर सकते हैं, जो चूहे में embolic MCAO की एक अत्यधिक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य मॉडल प्रस्तुत करते हैं. संक्षेप में, एक संशोधित पीई 50 ट्यूब धीरे एमसीए की उत्पत्ति पहुँचता कैथेटर की नोक तक आंतरिक मन्या धमनी (आईसीए) के लुमेन में बाह्य मन्या धमनी (ईसीए) से उन्नत है. कैथेटर के माध्यम से, एक भी मुताबिक़ खून का थक्का एमसीए के मूल में रखा गया है. एमसीए रोड़ा की सफलता की पहचान करने के लिए, क्षेत्रीय मस्तिष्क रक्त प्रवाह नजर रखी थी, न्यूरोलॉजिकल घाटा और रोधगलितांश मात्रा में मापा गया. इस पत्र में प्रस्तुत तकनीक स्ट्रोक अनुसंधान के लिए इस मॉडल की स्थापना के लिए तकनीकी समस्याओं को दूर करने के लिए जांचकर्ताओं की मदद करनी चाहिए. </ P>

Introduction

स्ट्रोक संयुक्त राज्य अमेरिका में मृत्यु का तीसरा प्रमुख कारण है, लेकिन तीव्र स्ट्रोक के लिए इलाज के विकल्प सीमित रहते हैं. वर्तमान में, रक्त के थक्के को भंग करने के लिए पुनः संयोजक ऊतक plasminogen उत्प्रेरक (टीपीए) की नसों में जान फूंकना तीव्र इस्कीमिक स्ट्रोक के लिए सबसे कारगर उपचार है. हालांकि, टीपीए का उपयोग अपने संकीर्ण चिकित्सकीय खिड़की से और intracerebral नकसीर का खतरा बढ़ द्वारा सीमित है. इसलिए, थ्रांबोलिटिक अनुसंधान के लिए उपयुक्त स्ट्रोक के एक मॉडल की तत्काल जरूरत है.

मध्य मस्तिष्क धमनी (एमसीए) सबसे अधिक बार मानव में स्ट्रोक में occluded धमनी है. इस धमनी पर ध्यान केंद्रित, इस्कीमिक स्ट्रोक के कई पशु मॉडल स्थापित किया गया है. वर्तमान में, एमसीए occluding द्वारा कृंतक फोकल ischemia के मॉडल के दो प्रमुख प्रकार विकसित किया गया है: सीवन MCAO मॉडल और embolic MCAO मॉडल. Intraluminal सीवन तकनीक के माध्यम से MCAO मॉडल व्यापक रूप से तंत्र संचालित स्ट्रोक अनुसंधान में इस्तेमाल किया गया है, इन सिवनी मॉडल नहीं करतेमानव स्ट्रोक के 80% अप करने के लिए के रूप में नकल मानव स्ट्रोक, घनास्त्रता या दिल का आवेश के कारण होता है. हालांकि, रक्त के थक्के का उपयोग embolic स्ट्रोक मॉडल बारीकी से मानव स्ट्रोक mimics और थ्रांबोलिटिक अध्ययन के लिए उपयुक्त माना जाता है. इस embolic मॉडल पहले 1992 में OVERGAARD ​​एट अल. 1 से चूहों में विकसित और आगे झांग एट अल द्वारा विशेषता थी. 1997 में 2 और DiNapoli एट अल द्वारा. 2006 3 में. Embolic MCAO बढ़ती ध्यान प्राप्त किया है, का सामना करना पड़ा तकनीकी समस्याएं हैं कई प्रयोगशालाओं द्वारा.

इस अनुच्छेद में, हम एमसीए क्षेत्र के भीतर एक उम्मीद के मुताबिक रोधगलन विकसित कर सकते हैं, जो वयस्क चूहे में मुताबिक़ रक्त के थक्के के साथ embolic MCAO उत्पादन के लिए एक मानक विधि प्रदर्शित करता है. इस लेख में प्रस्तुत तकनीक जांचकर्ताओं स्ट्रोक अनुसंधान के लिए इस मॉडल की स्थापना के लिए तकनीकी समस्याओं को दूर करने के लिए मदद करनी चाहिए.

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Protocol

आचार विवरण: (330-380 ग्राम वजन) नर वयस्क Sprague-Dawley चूहों इस प्रोटोकॉल में इस्तेमाल किया गया. इस प्रोटोकॉल LSU स्वास्थ्य विज्ञान केंद्र-Shreveport में संस्थागत पशु की देखभाल और उपयोग समिति (IACUC) ने मंजूरी दे दी है और (आठवें संस्करण, नेशनल एकेडमी ऑफ साइंसेज, 2011 'की देखभाल और प्रयोगशाला पशुओं के उपयोग के लिए गाइड' के अनुपालन में किया गया था ).

संशोधित पीई 50 ट्यूब के 1. तैयारी

  1. धीरे धीरे ट्यूब नरम, हाथ से एक गैस आग के ऊपर एक 30 सेमी लंबा पीई 50 ट्यूब पकड़ो. धीरे ट्यूब खिंचाव.
  2. एक डिजिटल कैलिपर (चित्रा 1) का उपयोग बढ़ाकर ट्यूब पर एक बिंदु का चयन करें, यह चिह्न, और (व्यास के बाहर: 0.30-0.34 मिमी) एक 1 सेमी लंबी टिप के साथ एक 25 सेमी लंबे खंड में संशोधित पीई 50 ट्यूब काटा.

मुताबिक़ रक्त के थक्के के 2. तैयारी

  1. 70% एन 2 हे और 30% हे में isoflurane (प्रेरण के लिए 5%, रखरखाव के लिए 2-3%) के साथ चूहे anesthetize <रक्त संग्रह करने से पहले एक चेहरे नकाब से उप> 2. एक पैर की अंगुली चुटकी द्वारा संज्ञाहरण की पुष्टि करें.
  2. प्रकाशित विधि 4 के साथ एक दाता चूहे की ऊरु धमनी केन्युलेशन प्रदर्शन और एक 20 सेमी लंबा पीई 50 ट्यूब में सीधे ऊरु धमनी रक्त हस्तांतरण. थक्का रक्त के लिए कमरे के तापमान पर 2 घंटे के लिए ट्यूब प्लेस, और फिर 4 डिग्री सेल्सियस पर 22 घंटे के लिए ट्यूब बरकरार रहती है. नोट: cannulation कदम 3.1 में वर्णित के रूप में सड़न रोकनेवाला तकनीक का उपयोग किया जाता है. दाता चूहे आगे नमूना लेने के लिए बरामद किया है.
  3. 50 मिमी खंडों में पीई 50 ट्यूब कट और सामान्य नमक युक्त एक बाँझ पेट्री डिश में ट्यूब से थक्का बाहर निकलवाने.
  4. एक 60 मिमी लंबा पीई 10 ट्यूब में 50 मिमी लंबा थक्का स्थानांतरण और 23 जी सुई के साथ सामान्य नमक युक्त 1 मिलीलीटर सिरिंज से जुड़े एक 20 सेमी लंबा पीई 50 ट्यूब पीई 10 ट्यूब के प्रत्येक के अंत कनेक्ट (चित्रा 2) .
  5. से रक्त कोशिकाओं को हटा सकते हैं, जो 5 मिनट के लिए दूसरे के लिए एक सिरिंज से निरंतर बारी आंदोलन से थक्का शिफ्टथक्का और आतंच कोर में बाधा पहुँचा के बिना, extravascular coagulated थक्का के कमजोर को कम.
  6. एक 40 मिमी लंबा खंड में थक्का कट और सड़न रोकनेवाला शर्तों के तहत कदम 1.2 में वर्णित के रूप में एक संशोधित पीई 50 कैथेटर में थक्का खंड हस्तांतरण. नोट: सभी पीई ट्यूबिंग ethylene ऑक्साइड के साथ निष्फल है.

3 embolic मध्य मस्तिष्क धमनी रोड़ा (चित्रा 3 ए, बी)

  1. (न्यूनतम 121 डिग्री सेल्सियस, 15 मिनट के लिए 15 साई) autoclaving द्वारा सभी सर्जिकल उपकरणों जीवाणुरहित. 70% इथेनॉल का उपयोग सर्जरी मेज और जुड़े सर्जिकल उपकरण sanitize.
  2. कदम 2.1 में वर्णित के रूप में isoflurane के साथ चूहे anesthetize. दोनों पीछे के पैर पर एक पैर की अंगुली चुटकी प्रदर्शन से संज्ञाहरण की गहराई का परीक्षण, और (पंजा वापस लेने) किसी भी मनाया आंदोलन पशु सर्जरी करना पर्याप्त anesthetized नहीं है कि इंगित करता है. संज्ञाहरण के तहत जबकि सूखापन को रोकने के लिए दोनों आंखों पर पशु चिकित्सक मरहम की एक छोटी राशि लागू करें. उदर गर्दन और सिर पुन फर दाढ़ीबिजली कतरनी के साथ gions त्वचा क्षेत्रों को बेनकाब करने के लिए.
  3. एक हीटिंग पैड पर लापरवाह स्थिति में चूहे रखें. एक गुदा जांच, नियंत्रण डालें और एक homeothermic कंबल नियंत्रण इकाई का उपयोग 36.5-37.5 डिग्री सेल्सियस के बीच शरीर का तापमान बनाए रखने के लिए.
  4. 70% इथेनॉल के द्वारा पीछा 10% povidone आयोडीन के साथ मुंडा त्वचा और आसपास के फर कीटाणुरहित.
  5. एक विदारक खुर्दबीन के नीचे गर्दन पर एक 2 सेमी लंबे midline चीरा बनाओ. शल्य चिकित्सा क्षेत्र को बेनकाब और सही आम मन्या धमनी (सीसीए), बाह्य मन्या धमनी (ईसीए), आंतरिक मन्या धमनी (आईसीए), और pterygopalatine धमनी (पीपीए) के आसपास के नसों और प्रावरणी (चित्रा 3) से मुक्त काटना retractors का प्रयोग करें. नोट: कोई सहायक पशु तैयार करने में मदद करता है अगर सर्जरी से पहले, बाँझ दस्ताने बदल जाते हैं.
  6. (Vagal तंत्रिका चोट के बिना) के आसपास के नसों से सीसीए मुक्त काटना और धमनी के तहत एक बाँझ 5-0 रेशम सिवनी जगह है. एक पर्ची गाँठ (# 1) टाई और एक छोटे Hemos का उपयोग सिवनी काबूगूंथना और शरीर की ओर सिखाया खींचो.
  7. ईसीए और इसकी दो शाखाएं, पश्चकपाल धमनी (OA) और बेहतर थायराइड धमनी (एसटीए) काटना. एक पशु चिकित्सा Electrosurgical यूनिट का उपयोग दो शाखाओं जमना. ईसीए के तहत बाँझ 6-0 रेशम sutures के दो टुकड़े रखें.
  8. धमनी, सिर की ओर एक टुकड़ा (बाहर का अंत) और शरीर के प्रति अन्य अंतर्गत रखा दो रेशम अलग करें. (# 2) सिर के लिए निकटतम तरफ, छोटे hemostats के साथ रेशम समझ और सिर की ओर सिखाया खींच एक तंग संयुक्ताक्षर टाई. बाद में उपयोग करने के लिए अन्य रेशम के साथ एक ढीली गाँठ (# 3) तैयार करें.
  9. (Vagal तंत्रिका चोट के बिना) के आसपास के नसों से आईसीए और पीपीए काटना. एक 6-0 सीवन (# 4) के साथ पीपीए बाँधो. आईसीए (# 5) के आसपास 6-0 सीवन के साथ एक पर्ची गाँठ बनाओ. वैकल्पिक रूप से, एक microvascular क्लिप का उपयोग आईसीए क्लिप.
  10. एक Vannas शैली वसंत कैंची से तंग (# 2) और ढीला (# 3) संयुक्ताक्षर के बीच ईसीए में एक छोटा सा छेद (माध्यम 1/2) काटें. संशोधित पीई 50 टब डालेंसीसीए के बंटवारे को चीरा और अग्रिम में खून का थक्का युक्त ई. (3 #) अभी काफी लुमेन आसपास में रहने वाली ट्यूब की गतिशीलता बनाए रखने के लिए सुरक्षित करने के लिए ढीला संयुक्ताक्षर कस.
  11. स्टंप मुक्त और ईसीए और आईसीए के विभाजन के नीचे स्टंप की स्थिति के लिए छोटे छेद के स्थल पर ईसीए काट; इस संशोधित ट्यूब आसानी आईसीए में स्लाइड की अनुमति देगा. आईसीए खोलें और कैथेटर की नोक एमसीए के मूल तक पहुँच जाता है जब तक धीरे (~ विभाजन से 17 मिमी) आईसीए में ईसीए के लुमेन से ट्यूब अग्रिम. नोट: इससे पहले कि ईसीए, 70% इथेनॉल के साथ ट्यूब की बाँझ बाहरी सतह में ट्यूब की नोक डालें, और फिर बाँझ सामान्य नमक से धो लें.
  12. एक 100 μl हैमिल्टन सिरिंज (चित्रा 3 बी) का उपयोग कर 10 सेकंड से अधिक खारा के 10 μl के साथ संशोधित पीई 50 कैथेटर के माध्यम से थक्का इंजेक्षन.
  13. 5 मिनट बाद में ईसीए से कैथेटर वापस ले लें. ईसीए टाई और सीसीए फिर से खोलना. गर्दन पर चीरा टांका.

4 निगरानी क्षेत्रीय मस्तिष्क रक्त प्रवाह (rCBF)

  1. पहले एमसीए रोड़ा करने के लिए, खोपड़ी की हड्डी का पर्दाफाश करने के लिए खोपड़ी में एक 1.2 सेमी लंबे midline चीरा बनाने. एक दंत खुरचनी और बाँझ कपास स्वैप के साथ खोपड़ी की हड्डी पर ऊतकों निकालें. नोट: सर्जरी से पहले, उजागर खोपड़ी क्षेत्र और आसपास के फर 70% इथेनॉल द्वारा पीछा 10% povidone आयोडीन के साथ कीटाणुरहित कर रहे हैं.
  2. 2 मिमी पीछे और एक 0.7 मिमी गोलाकार स्टेनलेस स्टील गड़गड़ाहट (चित्रा 4) का उपयोग शीर्षस्थान के लिए 5 मिमी पार्श्व में स्थित एक 1.5 मिमी व्यास गड़गड़ाहट छेद ड्रिल.
    नोट: बरकरार ड्यूरा रखें.
  3. जांच ड्यूरा सतह से ऊपर 0.5 मिमी रखें. 0 (आधारभूत) में rCBF, 5, 15, 30, 60, 90 मॉनिटर, और embolization के बाद 120 मिनट और कम से जारी रखने के लिए 5, 15, 30, 45, और टीपीए की नसों में प्रशासन के बाद 60 मिनट. RCBF के अंतिम माप के बाद, खोपड़ी चीरा सिवनी से बंद हो गया है. नोट: गर्दन चीरा करने से पहले हम एमसीए occlus से पहले आधार रेखा के रूप rCBF उपायआयन. पोस्ट एमसीए रोड़ा हम गर्दन चीरा के सिवनी बंद होने के बाद rCBF उपाय. इस प्रकार, गर्दन चीरा बाँझ रखा है.

5 पोस्ट ऑपरेटिव देखभाल

  1. निर्जलीकरण को रोकने और तुरंत सर्जरी और दर्द से राहत के लिए जरूरत के रूप में हर 6-12 घंटे के बाद Buprenex (0.05 मिलीग्राम / किग्रा, अनुसूचित जाति) इंजेक्षन खारा समाधान subcutaneously की 2.5 मिलीलीटर इंजेक्षन.
  2. Isoflurane संज्ञाहरण बंद करो. एक 37 डिग्री सेल्सियस पशु चिकित्सा वसूली कक्ष में चूहे प्लेस (पशु गर्म रखने) और अवलोकन रखना. चूहे संज्ञाहरण से उबरने के लिए यह आम तौर पर 10 मिनट लगते हैं. फिर, एक निष्फल पिंजरे में पशु डाल पिंजरे में एक पेट्री डिश में कुछ गीला भोजन जगह है, और पशु नसबंदी के कमरे में पिंजरे वापसी.
  3. स्ट्रोक के बाद 24 घंटा, सोडियम pentobarbital (100 मिलीग्राम / किग्रा शरीर के वजन, आईपी) की अधिक मात्रा के साथ चूहा euthanize.

6 स्नायविक घाटे स्कोर

  1. पहले और embolization के बाद 2 घंटे में Bederson स्कोर प्रदर्शन करना. एक ग्रेडिंग एस का प्रयोग करें0-3 की केल के रूप में पहले 5 में वर्णित है: पूंछ से चूहे को ऊपर उठाने, 0, फर्श करने के लिए दोनों forelimbs विस्तार और कोई अन्य घाटे का प्रदर्शन जानवर (सामान्य आंदोलन); 1, पूंछ से चूहे को ऊपर उठाने, contralateral forelimb फ्लेक्स; 2, चक्कर बिना पार्श्व धक्का (और forelimb बल) के लिए प्रतिरोध की कमी हुई; 3, चक्कर के साथ ग्रेड 2 के रूप में ही व्यवहार.
    नोट: embolization के बाद 2 घंटे में Bederson स्कोर = 0 (कोई घाटा) दिखा चूहे आगे के अध्ययन से बाहर रखा गया है.

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Representative Results

लेजर डॉपलर Flowmetry (एलडीएफ) मस्तिष्क ischemia 6,7 के शामिल होने के दौरान rCBF नजर रखने के लिए इस्तेमाल किया गया था. हमारी प्रयोगशाला सहित कई प्रयोगशालाओं सफल एमसीए रोड़ा साथ जानवरों की पहचान के लिए rCBF उपयोग किया गया है, लेकिन आधारभूत की थ्रेसहोल्ड माप की साइट से जुड़े हुए हैं जो प्रयोगशालाओं के बीच विविध. एलडीएफ की जांच 2 मिमी पीछे में तैनात है और पहले 6 वर्णित के रूप में 5 मिमी शीर्षस्थान के लिए पार्श्व. rCBF 0 पर नजर रखी थी 5, 15, 30, 60, 90, और 120 मिनट का थक्का के इंजेक्शन के बाद. इस डेटा के आधार पर, rCBF में एक कमी है कि प्रदर्शन केवल पशु> आधारभूत का 70% एमसीए की सफल embolic रोड़ा (चित्रा 5) माना जाता है. थक्का के इंजेक्शन के बाद 2 घंटे में, टीपीए (10 मिलीग्राम / किग्रा) 7,8 के एक मानक चूहे खुराक एक सिरिंज आसव पंप 7,8 का उपयोग कर 30 मिनट से अधिक नसों के एक 10% सांस और 90% निरंतर प्रेरणा के साथ दिलाई. हम rCBF स्तर धीरे धीरे बढ़ाने मनायाएड टीपीए चिकित्सा के 30 मिनट के भीतर आधारभूत की> 70% (चित्रा 5).

Embolization के बाद 24 घंटे में, जानवरों euthanized थे और transcardially intravascular खून निकालने के लिए पीबीएस के 200 मिलीलीटर के साथ perfused. पिछले अध्ययनों 2,3,7,8 और हमारे डेटा (चित्रा 6) embolization के बाद 24 घंटे में उत्पादन काफी बड़ा ऊतक infarctions पता चला है. दिमाग एकत्र और तस्वीरें ले रहे थे. खारा इलाज समूह में, खून का थक्का आसानी से एमसीए और एसीए के मूल में कल्पना की गई थी, लेकिन थक्का लगभग पूरी तरह से टीपीए का इलाज समूह (चित्रा 6A) में भंग कर दिया गया. उसके बाद, मस्तिष्क बर्फ पर एक चूहा मस्तिष्क मैट्रिक्स के साथ सात 2 मिमी राज्याभिषेक वर्गों में कटा हुआ था. 30 मिनट 9,10 के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर 2% 2,3,5-triphenyltetrazolium क्लोराइड (टीटीसी) में मस्तिष्क के स्लाइस सेते हैं. टीटीसी धुंधला करने के बाद राज्याभिषेक वर्गों एक थाली पर रखा और (चित्रा 6B) फोटो खींच रहे थे. inf के क्षेत्र प्रत्येक टुकड़ा में arction कम्प्यूटरीकृत छवि विश्लेषण प्रणाली (स्वास्थ्य छवि के राष्ट्रीय संस्थान) द्वारा निर्धारित किया गया था, और औसत रोधगलितांश मात्रा वर्गों के बीच की दूरी गुणा करके गणना की गई. Neocortex और स्ट्रिएटम क्षेत्रों (चित्रा 6B) के रूप में देखा यह embolic स्ट्रोक मॉडल एमसीए राज्यक्षेत्र के भीतर ऊतक रोधगलन का उत्पादन किया. प्रारंभिक reperfusion embolization के बाद 2 घंटे में टीपीए की नसों में प्रशासन द्वारा स्थापित किया गया था, रोधगलितांश मात्रा में काफी (394.2 ± 68.2 मिमी खारा इलाज समूह के साथ तुलना में टीपीए का इलाज समूह (229.1 ± 45.7 मिमी 3, एन = 12) में कम हो गई थी 3, एन = 9) (पी <0.01). 24 घंटा मृत्यु दर 16% (4/25) है.

चित्रा 1
एक डिजिटल कैलिपर का उपयोग कर संशोधित पीई 50 ट्यूब के बाहर व्यास के चित्र 1 मापन.

NT "के लिए: रखने together.within पृष्ठ =" हमेशा "> चित्रा 2
एक पीई 10 ट्यूब में चित्रा 2 वॉशिंग खून का थक्का. खून का थक्का वैकल्पिक पीई 50 ट्यूब के अंत से जुड़े दो सीरिंज जोर से धोया था.

चित्रा 3
चित्रा 3 (ए) चूहे की योजना सरलीकृत सही गोलार्द्ध पृथक संशोधित पीई 50 ट्यूब की शुरूआत तैयार करने के लिए लगातार टांके दिखा धमनियों. चूहे के मस्तिष्क में धमनियों वास्तुकला (बी) योजना, और ईसीए से उन्नत कैथेटर चूहे की आईसीए. एक ही खून का थक्का (काला) ट्यूब में निहित था.

चित्रा 4
चित्रा 4 बू2 मिमी पीछे और 5 मिमी पर स्थित आरआर छेद (1.5 मिमी व्यास) शीर्षस्थान के लिए पार्श्व.

चित्रा 5
5 क्षेत्रीय मस्तिष्क रक्त प्रवाह (rCBF) एक लेजर डॉपलर प्रवाहमापी (एलडीएफ) का उपयोग कर मापा गया था चित्रा. थक्का इंजेक्शन आधारभूत मूल्य की> 70% rCBF कमी करने के लिए नेतृत्व किया. टीपीए टीपीए उपचार के 30 मिनट के बाद आधारभूत के करीब थक्का इंजेक्शन बहाल rCBF के बाद 2 घंटे में इलाज (10 मिलीग्राम / किग्रा). डेटा मतलब ± एसडी के रूप में व्यक्त किया गया था.

चित्रा 6
चित्रा 6 (ए) के मध्य मस्तिष्क धमनी (एमसीए) के मूल में खून के थक्के (काला तीर) दिखा और स्ट्रोक के बाद 24 घंटे में मस्तिष्क धमनी (एसीए) पूर्वकाल प्रतिनिधि चित्र. खारा इलाज चूहे, छोड़ दिया; ठीक है, चूहे, बार = 5 मिमी टीपीए का इलाज.

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Discussion

इस अध्ययन में, हम एमसीए की उत्पत्ति एक आतंच अमीर थक्का द्वारा occluded है जिसमें चूहा, में एक embolic MCAO स्ट्रोक मॉडल के प्रदर्शन के लिए एक मानक विधि का प्रदर्शन किया. इस मॉडल का बड़ा लाभ यह है: एक आतंच युक्त रक्त का थक्का के साथ एमसीए के तने की आड़ में मानव में thromboembolic स्ट्रोक के समान है, embolic स्ट्रोक मॉडल fibrinolytic चिकित्सा के पूर्व नैदानिक ​​जांच के प्रदर्शन के लिए उपयुक्त है, और इस मॉडल विकसित कर सकते हैं कि एमसीए द्वारा आपूर्ति क्षेत्र के भीतर एक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य है और उम्मीद के मुताबिक रोधगलितांश मात्रा.

Embolic MCAO मॉडल प्रदर्शन के लिए, थक्का परिचय, स्थिरता और ख़ेमा रोधगलितांश आकार में बदलाव और प्रभावित मस्तिष्क क्षेत्रों 2,3 की ओर जाता है, जो प्रबंधन के लिए मुश्किल हैं. पिछले अध्ययनों में बाधा डालने के थक्के एमसीए 2,3 के स्टेम में बंद हैं जब एमसीए क्षेत्र में प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य इस्कीमिक घावों ही प्राप्त किया जा सकता है कि प्रदर्शन किया. ठीक थक्का दर्ज करने के लिए औरएक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य embolic स्ट्रोक मॉडल का उत्पादन, इस अध्ययन में, हम एक संशोधित पीई 50 ट्यूब और कैसे एमसीए की उत्पत्ति और कैसे एमसीए में एक आतंच अमीर थक्का इंजेक्षन करने के लिए संशोधित ट्यूब की नोक शुरू करने की तैयारी के लिए कैसे प्रदर्शित करता है. पिछली रिपोर्ट 2 के अनुरूप, इंजेक्शन खून का थक्का आसानी से (एन = 9) लेकिन मोटे तौर पर सभी टीपीए का इलाज चूहों में भंग कर दिया गया (n = 12) 24 घंटा में सभी के बाद खारा इलाज चूहों में एमसीए के मूल में कल्पना की गई थी embolization.

MCAO की सफलता का मूल्यांकन करने के लिए, rCBF, न्यूरोलॉजिकल घाटा, और पैटर्न और मस्तिष्क घावों के वितरण का आकलन किया गया. थक्का इंजेक्शन के बाद, rCBF आधारभूत का 30% तक की कमी की गई थी और rCBF की इस कमी पिछली रिपोर्टों 6,7 के साथ संगत embolization के बाद कम से कम 2 घंटे के लिए बनाए. Embolization के बाद 2 घंटे में टीपीए के साथ उपचार के बाद, rCBF के स्तर टीपीए उपचार के 30 मिनट के बाद आधारभूत के करीब बहाल कर रहे थे. न्यूरोलॉजिकल स्कोर 10 मिनट मापा गया थाMCAO की सफलता का मूल्यांकन करने में मदद करने के लिए संशोधित Bederson स्कोर का उपयोग दवा इलाज से पहले. इस स्नायविक स्कोरिंग स्ट्रोक की तीव्र चरण में वैश्विक स्नायविक समारोह का पता लगाने के लिए एक सरल और त्वरित तरीका है. सामान्य व्यवहार (स्कोर = 0) दिखा पशु दवा उपचार और आगे के विश्लेषण से बाहर रखा गया. इसके अलावा, हम ऊतक घाव काफी स्ट्रोक के बाद 24 घंटे में रोधगलन आकार कम ज्यादातर neocortex और स्ट्रिएटम क्षेत्रों में देखा, और टीपीए उपचार (2 घंटे में) के रूप में एमसीए क्षेत्र में उत्पादन किया गया था कि प्रदर्शन किया. साथ में, हमारे डेटा इस काम में प्रस्तुत embolic स्ट्रोक मॉडल एमसीए क्षेत्र के भीतर एक उम्मीद के मुताबिक रोधगलितांश मात्रा विकसित कर सकते हैं कि प्रदर्शन किया.

अंत में, हम embolic MCAO मॉडल की सफलता को प्रभावित कर सकता है कि कई तकनीकी चिंताएं हैं कि ध्यान दें. Embolic MCAO मॉडल प्रदर्शन में आई एक आम समस्या embolization के बाद जल्दी सहज reperfusion है. सहज reperfusion मैं की घटनाextravascular coagulated थक्का के कमजोर और एमसीए 2,3,10 रोक देना करने के लिए इस्तेमाल थक्का की लंबाई के साथ जुड़े होने की संभावना है. हम खून का थक्का तैयार करने के लिए हम वर्णित विधि (चरण 2) extravascular coagulated थक्का के कमजोर को कम करेगा. एमसीए रोक देना करने के लिए इस्तेमाल एक खून का थक्का की लंबाई 50 मिमी लंबाई 2,3,6-8,10 के लिए 25 मिमी के बीच प्रयोगशाला के लिए प्रयोगशाला से विविध. हम एक 35-40 मिमी लंबे थक्का का उपयोग आदर्श एमसीए occluded और अत्यधिक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य रोधगलितांश मात्रा का उत्पादन किया है कि पाया. 0.30-0.34 मिमी के बीच नोक व्यास के साथ पीई 50 ट्यूब संशोधित करना. टिप व्यास> 0.34 मिमी है, यह एमसीए के मूल तक नहीं पहुँच सकते. टिप व्यास है <0.30 मिमी, संशोधित पीई 50 ट्यूब के अंदर थक्का टिप के माध्यम से जाने के लिए मुश्किल है. मृत्यु दर बारीकी से गंभीर मस्तिष्क में सूजन और intracerebral नकसीर से संबंधित है. (; प्रतिनिधि परिणाम देखने 4/25), और सब मर चूहों गंभीर मस्तिष्क प्रफुल्लित दिखाया इस काम में, 24 घंटा मृत्यु दर 16% हैहम intracerebral नकसीर (संभवतः कारण सीमित नमूना आकार के लिए) नहीं देखा था, हालांकि आईएनजी. एक नियंत्रणीय मृत्यु दर कारक सर्जरी के दौरान शरीर का तापमान है. संज्ञाहरण से पूरी वसूली तक सर्जरी की शुरुआत से 36.5-37.5 डिग्री सेल्सियस के बीच शरीर के तापमान को नियंत्रित करने में. शरीर का तापमान काफी मस्तिष्क ऊतकों को नुकसान की हद पर प्रभावित करता है. हाइपोथर्मिया कम हो जाती है और अतिताप रोधगलितांश मात्रा 11,12 बढ़ जाती है. अत्यधिक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य रोधगलितांश आकार का निर्माण करने के क्रम में प्रोटोकॉल के अनुसार एक कम समय अवधि (लगभग 20-25 मिनट) में सर्जरी प्रदर्शन. संक्रामक जटिलताओं तीव्र स्ट्रोक 13 के साथ रोगियों में मृत्यु का एक प्रमुख कारण हैं. संक्रामक जटिलताओं की घटनाओं को कम करने और स्ट्रोक के बाद जीवित रहने की दर बढ़ाने के लिए, सड़न रोकनेवाला तकनीक शल्य चिकित्सा के दौरान प्रयोग किया जाना चाहिए.

अंत में: इस लेख में प्रस्तुत तकनीक वें स्थापना के लिए तकनीकी समस्याओं को दूर करने के लिए जांचकर्ताओं की मदद करनी चाहिएस्ट्रोक अनुसंधान के लिए मॉडल है.

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Materials

Name Company Catalog Number Comments
rh-tPA Chemical Genentech
2,3,5-triphenyltetrazolium chloride Chemical Sigma T8877
Anesthesia vaporizer Equipment Soma Technology Drager Vapor 19.1  
Rechargeable high speed micro drill Equipment Fine Science Tools 18000-17
Curved scissors Equipment Fine Science Tools 14117-14
Dumont forceps (Medical #7) Equipment Fine Science Tools 11270-20
Dumont forceps (Medical #5) Equipment Fine Science Tools 11251-35
Vannas-style spring scissors Equipment Fine Science Tools 15000-03
Veterinary recovery chamber  Equipment  Peco Services  V1200  
Genie plus syringe pump Equipment Kent Scientific Corporation
Rat brain matrix Equipment Kent Scientific Corporation RBMA-310C
Digital caliper  Equipment World Precision Instruments 501601
Dissecting microscope Equipment World Precision Instruments PZMTIII-BS-LWD
Hamilton syringe Equipment Hamilton model 710
Homeothermic blanket control unit Equipment Harvard Apparatus
Electric clipper Equipment Braintree Scientific CLP-9931
Veterinary electrosurgical unit Equipment MACAN Manufacturing Company MV-9
Blood flowmeter Equipment Adinstruments
PowerLab 4/30 Equipment Adinstruments
LabChart 7.2 software Adinstruments
1 ml syringe Consumable Becton, Dickinson and Company 309659
23 G needle Consumable Becton, Dickinson and Company 305143
30 G needle Consumable Becton, Dickinson and Company 305106
PE-50 tubing Consumable Becton, Dickinson and Company 427517
PE-10 tubing Consumable Becton, Dickinson and Company 427400
6-0 Silk suture Consumable Harvard apparatus 723287
5-0 Silk suture Consumable Harvard Apparatus 517607

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References

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चिकित्सा अंक 91 इस्कीमिक स्ट्रोक मॉडल एम्बोलुस मध्य मस्तिष्क धमनी रोड़ा थ्रांबोलिटिक चिकित्सा

Erratum

Formal Correction: Erratum: Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats
Posted by JoVE Editors on 11/01/2014. Citeable Link.

A correction was made to Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats. The institution information was updated.

The institution "Louisiana State University Health Science Center" was changed to "Louisiana State University Health Science Center, Shreveport".

चूहे में मुताबिक़ रक्त के थक्के के साथ ischemic स्ट्रोक के लिए embolic मध्य मस्तिष्क धमनी रोड़ा (MCAO)
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Jin, R., Zhu, X., Li, G. Embolic… More

Jin, R., Zhu, X., Li, G. Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats. J. Vis. Exp. (91), e51956, doi:10.3791/51956 (2014).

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