Embolisk cerbri arterieokklusion (MCAO) for iskæmisk slagtilfælde med Homologe Blodpropper i rotter

Abstract

Klinisk thrombolytisk terapi med anvendelse af rekombinant vævsplasminogenaktivator (tPA) er fortsat den mest effektive behandling af akut iskæmisk slagtilfælde. Imidlertid er anvendelsen af ​​tPA begrænset af dens snævre terapeutiske vindue og ved øget risiko for hæmoragisk transformation. Der er et presserende behov for at udvikle passende takts modeller til at studere nye thrombolytiske midler og strategier til behandling af iskæmisk slagtilfælde. På nuværende tidspunkt har to store typer for iskæmisk slagtilfælde modeller er udviklet i rotter og mus: intraluminalt sutur MCAO og embolisk MCAO. Selvom MCAO modeller via intraluminale sutur teknik er ofte blevet brugt i mekanisme drevet slagtilfælde forskning, har disse sutur modellerne ikke efterligne den kliniske situation og er ikke egnede til trombolytisk studier. Blandt disse modeller den emboliske MCAO model nøje efterligner human iskæmisk slagtilfælde og er egnet til præklinisk undersøgelse af trombolytisk terapi. Denne embolisk model blev først udviklet i rotter ved Overgaard et al. ¹ i 1992 og yderligere karakteriseret af Zhang et al. 1997 ^2. Selv embolisk MCAO har fået stigende opmærksomhed, der er tekniske problemer, som mange laboratorier står over for. For at imødekomme stigende behov for trombolytisk forskning, vi præsenterer en meget reproducerbar model af emboliske MCAO i rotter, der kan udvikle en forudsigelig infarktvolumen i MCA område. I korte træk er en modificeret PE-50 rør forsigtigt frem fra den ydre carotidarterie (ECA) i lumen af ​​det indre carotidarterie (ICA), indtil kateterspidsen når oprindelsen af ​​MCA. Gennem kateteret, er en enkelt homolog blodprop placeret ved oprindelsen af ​​MCA. At identificere succes MCA-okklusion blev regional cerebral blodgennemstrømning overvåget blev neurologiske underskud og infarktvolumener målt. De teknikker, der præsenteres i dette dokument skal hjælpe efterforskerne at overvinde tekniske problemer for udarbejdelsen af ​​dette model for slagtilfælde forskning. </ P>

Introduction

Slagtilfælde er den tredjestørste årsag til dødsfald i USA, men behandlingsmuligheder for akut slagtilfælde fortsat begrænset. På nuværende tidspunkt, intravenøs infusion af rekombinant vævsplasminogenaktivator (tPA) at opløse blodpropper er den mest effektive behandling for akut iskæmisk slagtilfælde. Imidlertid er anvendelsen af ​​tPA begrænset af dens snævre terapeutiske vindue og ved øget risiko for intracerebral blødning. Derfor er en model af slagtilfælde egnet til trombolytisk forskning presserende behov.

Den midterste cerebrale arterie (MCA) er arterien oftest okkluderet ved slagtilfælde hos mennesker. Fokuseret på denne arterie, er blevet etableret mange dyremodeller af iskæmisk slagtilfælde. På nuværende tidspunkt har to hovedtyper af gnaver fokal iskæmi modeller af okkludering MCA blevet udviklet: sutur MCAO model og embolisk MCAO modellen. Selvom MCAO modeller via intraluminale sutur teknik er ofte blevet brugt i mekanisme drevet slagtilfælde forskning, disse sutur modeller gør ikkeefterligner menneskelige slagtilfælde, som op til 80% af de menneskelige slagtilfælde skyldes trombose eller blodprop. Men embolisk slagtilfælde model med blodpropper nøje efterligner den menneskelige slagtilfælde og er fundet egnet til trombolytisk undersøgelse. Denne embolisk model blev først udviklet i rotter ved Overgaard et al. ¹ i 1992 og yderligere karakteriseret af Zhang et al. I 1997 ² og ved Dinapoli et al. 2006 ^3. Selv embolisk MCAO har fået stigende opmærksomhed, er der tekniske problemer, man støder af mange laboratorier.

I denne artikel viser vi en standard metode til fremstilling af emboliske MCAO med homologe blodpropper i voksne rotter, som kan udvikle en forudsigelig infarkt i MCA område. De teknikker, der præsenteres i denne artikel bør hjælpe efterforskerne med at overvinde de tekniske problemer med at opstille denne model for slagtilfælde forskning.

Protocol

Etiske retningslinjer: mandlig voksen Sprague-Dawley rotter (der vejer 330-380 g) blev anvendt i denne protokol. Denne protokol blev godkendt af Institutional Animal Care og brug Udvalg (IACUC) på LSU Health Science Center-Shreveport og er i overensstemmelse med vejledningen til pleje og anvendelse af forsøgsdyr «(ottende udgave, National Academy of Sciences 2011 ).

1. Fremstilling af modificeret PE-50 Tube

1. Hold en 30 cm lang PE-50 rør over en gas brand ved hænder, efterhånden blødgøre røret. Forsigtigt strække røret.
2. Vælg et punkt på strakte rør ved hjælp af en digital skydelære (figur 1), markere det og skære det modificerede PE-50 rør i et 25 cm langt segment med en 1 cm lang spids (ydre diameter: 0,30 til 0,34 mm).

2. Fremstilling af Homologe Blodpropper

1. Bedøve rotte med isofluran (5% til induktion, 2-3% til vedligeholdelse) i 70% N ₂ O og 30% o <sub> 2 ved en ansigtsmaske før indsamling af blod. Bekræft anæstesi ved en tå knivspids.
2. Udfør femoral arteriel kanylering af en donor rotte med publiceret metode ⁴ og overføre lårarterien blod direkte ind i en 20 cm lang PE-50 rør. Placer røret i 2 timer ved stuetemperatur til at størkne blod, og derefter fastholde røret i 22 timer ved 4 ° C. Bemærk: Kanylerings udføres ved hjælp af aseptisk teknik som beskrevet i trin 3.1. Donoren rotte genvindes til yderligere prøveudtagning.
3. Skær PE-50 rør i 50 mm segmenter og skyl den blodprop fra røret i en steril petriskål indeholdende normalt saltvand.
4. Overfør 50 mm lang blodprop i en 60 mm lang PE-10 rør og forbinde hver ende af PE-10 rør til en 20 cm lang PE-50 rør er forbundet til 1 ml sprøjte indeholdende normalt saltvand med 23 G kanyle (figur 2) .
5. Skift blodproppen ved kontinuerlig vekslende bevægelse fra den ene sprøjte til den anden for 5 min, hvilket kan fjerne blodceller frablodproppen og minimere den skrøbelige af ekstravaskulære koaguleret koagel, uden at forstyrre fibrin kerne.
6. Skær blodprop i et 40 mm langt segment og overføre blodprop-segment i en modificeret PE-50 kateter som beskrevet i trin 1.2 under aseptiske betingelser. Bemærk: Alle PE slangen er steriliseret med ethylenoxid.

3. embolisk cerbri arterieokklusion (figur 3A, B)

1. Sterilisere alle kirurgiske redskaber ved autoklavering (minimum 121 ° C, 15 psi, 15 min). Desinficere operationen bordet og tilhørende kirurgisk udstyr ved hjælp af 70% ethanol.
2. Bedøver rotte med isofluran som beskrevet i trin 2.1. Test anæstesidybden ved at udføre en tå knivspids på begge bagben, og eventuelle observerede bevægelse (tilbagetrækning af poten) viser, at dyret ikke er tilstrækkelig bedøvet til at gøre kirurgi. Påfør en lille mængde af dyrlægen salve på begge øjne til at forebygge tørhed, mens under anæstesi. Barbere pelsen på den ventrale hals og hoved reregioner med elektriske klippere ved at udsætte huden områder.
3. Placer rotte i liggende stilling på en varmepude. Indsæt en rektal sonde, kontrol og opretholde kroppens temperatur mellem 36,5-37,5 ° C med en homeotermisk tæppe styreenhed.
4. Desinficere barberet hud og omgivende pels med 10% povidon-iod, efterfulgt af 70% ethanol.
5. Lav en 2 cm lang midtlinieincision på halsen under et dissektionsmikroskop. Brug retraktorer at eksponere det kirurgiske område og dissekere den højre, fælles carotidarterie (CCA), ydre carotidarterie (ECA), indre carotidarterie (ICA), og pterygopalatinarterien (PPA) fri fra omgivende nerver og fascia (figur 3A). Bemærk: Før kirurgi, ændre sterile handsker, hvis der ikke assistent hjælper til at forberede dyret.
6. Dissekere CCA fri fra de omgivende nerver (uden at skade vagusnerven), og placere en steril 5-0 silkesutur under arterien. Bind en skridsikker knude (# 1) og tag fat i suturen hjælp af en lille Hemostat og Pull undervist mod kroppen.
7. Dissekere Revisionsretten og dens to grene, occipital arterie (OA) og den overlegne skjoldbruskkirtlen arterie (STA). Koagulere to grene ved hjælp af en veterinær elektrokirurgiske enhed. Læg to stykker af sterile 6-0 silkesuturer under Revisionsretten.
8. Adskil de to silke henført under arterie, et stykke mod hovedet (distale ende) og den anden mod kroppen. Bind en stram ligatur (# 2) på den side tættest på hovedet, tage fat i silke med små hemostats og træk undervist mod hovedet. Forbered en løs knude (# 3) med den anden silke til senere brug.
9. Dissekere ICA og PPA fra de omkringliggende nerver (uden at skade vagusnerven). Bind PPA med en 6-0 sutur (# 4). Lav en skridsikker knude med 6-0 sutur rundt ICA (# 5). Alternativt klip ICA ved hjælp af en mikrovaskulær klip.
10. Skær et lille hul (1/2 thru) ind Revisionsretten mellem den stramme (2 #) og løs (# 3) ligaturer med et Vannas-stil foråret saks. Sæt den modificerede PE-50 badekare indeholdende blodprop i snittet og gå videre til tvedeling af CCA. Spænd den løse ligatur (# 3) omkring lumen lige nok til at sikre bevare mobiliteten for den iboende rør.
11. Skær Revisionsretten på stedet for lille hul for at frigøre stumpen og placer stub under tvedeling af Revisionsretten og ICA; dette vil give den modificerede rør nemt glide ind i ICA. Åbn ICA og forsigtigt videre røret fra lumen af ​​ECA i ICA, indtil spidsen af ​​kateteret når oprindelse MCA (~ 17 mm fra forgreningen). Bemærk: Før spidsen af ​​røret i Revisionsretten, steril den ydre overflade af rør med 70% ethanol, og derefter vaske med sterilt saltvand.
12. Injicer blodproppen via modificerede PE-50 kateter sammen med 10 pi saltvand over 10 sek ved anvendelse af en 100 pi Hamilton-sprøjte (figur 3B).
13. Træk kateteret fra Revisionsretten 5 minutter senere. Bind Revisionsretten og genåbne CCA. Suturere snit på halsen.

4. Overvågning Regional Cerebral Blood Flow (rCBF)

1. Forud for MCA-okklusion, gør en 1,2 cm lang midtlinieincision i hovedbunden for at blotlægge kraniet. Fjern væv på kraniet med en dental skraber og sterile bomuld swaps. Bemærk: Før operationen, er det eksponerede hovedbunden området og omgivende pels desinficeres med 10% povidon-iod efterfulgt af 70% ethanol.
2. Bor et 1,5 mm borehul placeret på 2 mm posteriort og 5 mm lateralt for bregma ved hjælp af en 0,7 mm rustfrit stål sfæriske grat (figur 4).
   BEMÆRK: Hold dura intakt.
3. Placer sonden 0.5 mm over dura overflade. Overvåg rCBF ved 0 (baseline), 5, 15, 30, 60, 90 og 120 minutter efter embolisering og fortsætte på 5, 15, 30, 45, og 60 minutter efter intravenøs administration af tPA. Efter den sidste måling af rCBF er hovedbunden incision af sutur. Bemærk: Før halsincision måler vi rCBF som baseline før MCA occlusion. Indlæg MCA-okklusion måler vi rCBF efter sutur lukning af hals snit. Således er halsincision holdes steril.

5. Postoperativ pleje

1. Injicer 2,5 ml saltvandsopløsning subkutant for at undgå dehydrering og injicere Buprenorfin (0,05 mg / kg, SC) umiddelbart efter kirurgi og hver 6-12 timer efter behov til smertelindring.
2. Stop isofluran anæstesi. Placer rotte i et 37 ° C veterinær opsving kammer (holde animalske varm) og holde observation. Det tager normalt 10 min for rotten at komme fra anæstesi. Derefter aflive dyret i en steriliseret bur, placere nogle vædede mad i en petriskål i buret, og returnere bur til dyr sterilisering værelse.
3. 24 timer efter slagtilfælde, aflive rotten med en overdosis af natriumpentobarbital (100 mg / kg legemsvægt, IP).

6. neurologisk deficit Score

1. Udfør Bederson score før og ved 2 timer efter embolisering. Brug en klassificering sCale 0-3 som tidligere beskrevet ^5: 0, hæve rotte ved halen dyret strække begge forbenene til gulvet og udviser ingen andre underskud (normal bevægelse); 1, hæve rotte ved halen vride kontralaterale forben; 2, nedsat resistens over for sideværts tryk (og forben fleksion), uden kredser; 3, den samme adfærd som grad 2 med cirkelbevægelser.
   BEMÆRK: Rotter viser Bederson score = 0 (ingen underskud) på 2 timer efter embolisering er udelukket fra yderligere undersøgelse.

Representative Results

Laser-Doppler-flowmetri (LDF) blev anvendt til at overvåge rCBF under induktion af cerebral iskæmi ^6,7. Mange laboratorier, herunder vores laboratorium har brugt rCBF at identificere dyr med vellykket MCA-okklusion, men tærskelværdierne i baseline varierede mellem laboratorier, som er relateret til stedet for målingen. Sonde LDF er placeret ved 2 mm posteriort og 5 mm lateralt for forissen som beskrevet tidligere ^6. rCBF blev overvåget ved 0, 5, 15, 30, 60, 90 og 120 minutter efter injektion af blodproppen. På grundlag af disse data er det kun dyr, der udviser en reduktion i rCBF> 70% af baseline er betragtet som en succes embolisk okklusion af MCA (figur 5). Ved 2 timer efter injektion af blodprop, blev en standard rotte dosis af tPA (10 mg / kg) ^7,8 administreret intravenøst ​​med en 10% bolus og 90% kontinuerlig infusion i løbet af 30 minutter under anvendelse af en sprøjte infusionspumpe ^7,8. Vi observerede, rCBF niveauer gradvist i stigendeed at> 70% af baseline inden for 30 min af tPA terapi (figur 5).

Ved 24 timer efter embolisering blev dyrene aflivet, og transcardialt perfunderet med 200 ml PBS for at fjerne intravaskulære blod. Tidligere undersøgelser ^2,3,7,8 og vores data (figur 6) har vist væsentligt større væv infarkter produceret på 24 timer efter embolisering. Hjernerne blev opsamlet og taget billeder. I saltvand-behandlede gruppe blev blodprop let visualiseret på oprindelsen af MCA og ACA, men blodproppen var næsten helt opløst i tPA-behandlede gruppe (figur 6A). Derefter blev hjernen skåret i syv 2 mm koronale sektioner med en rottehjerne matrix på is. Inkubér hjerneskiver i 2% 2,3,5-triphenyltetrazoliumchlorid (TTC) ved 37 ° C i 30 minutter ^9,10. Efter TTC-farvning blev kronafsnit anbragt på en tallerken og fotograferet (figur 6B). Arealet af inf arction i hver skive blev bestemt ved edb billedanalysesystem (National Institutes of Health Billede), og den gennemsnitlige infarktvolumen blev beregnet ved at multiplicere afstanden mellem sektioner. Denne embolisk slagtilfælde model fremstillet væv infarkt inden MCA område som set i neocortex og striatum regioner (figur 6B). Tidlig reperfusion blev etableret ved intravenøs administration af tPA ved 2 timer efter embolisering blev infarktvolumener signifikant reduceret i tPA-behandlede gruppe (229,1 ± 45,7 mm ^3, n = 12) sammenlignet med saltvand behandlede gruppe (394,2 ± 68,2 mm ^3, n = 9) (P <0,01). Den 24 timers dødeligheden er 16% (4/25).

Figur 1. Måling af den udvendige diameter af det modificerede PE-50 rør ved hjælp af en digital skydelære.

nt "FO: keep-together.within-page =" altid ">
Figur 2. Vask blodprop i et PE-10 rør. Blodproppen blev vasket ved alternativ skubbe de to sprøjter er forbundet til udgangen af PE-50-rør.

Figur 3. (A) Forenklet ordning for rotte højre hemisfære isolerede arterier, der viser successive suturer at forberede indførelsen af modificeret PE-50 rør. (B) til det arterielle arkitektur i rotte hjernen, og kateteret frem fra Revisionsretten til ICA i rotten. En enkelt blodprop (sort) var indeholdt i røret.

Figur 4. burr hul (diameter 1,5 mm), der ligger ved 2 mm posteriort og 5 mm lateralt for forissen.

Figur 5. Regional cerebral blodgennemstrømning (rCBF) blev målt ved hjælp af en laser Doppler flowmåler (LDF). Blodproppen injektion førte til> 70% rCBF reduktion af baseline-værdi. tPA (10 mg / kg) behandlet ved 2 timer efter blodproppen injektion genoprettet rCBF tæt på basislinien efter 30 min tPA behandling. Data blev udtrykt som gennemsnit ± SD.

Figur 6. (A) Repræsentative billeder viser blodpropper (sorte pile) i oprindelsen af den midterste cerebrale arterie (MCA) og anterior cerebral arterie (ACA) ved 24 timer efter slagtilfælde. Venstre, saltvandsbehandlede rotte; Højre tPA-behandlede rotter, bar = 5 mm.

Discussion

I denne undersøgelse viste vi en standard fremgangsmåde til udførelse af et embolisk MCAO slagtilfælde model i rotten, hvor oprindelsen af ​​MCA okkluderes ved en fibrinrig størkne. Den største fordel ved denne model er: okklusion af stilken af ​​MCA med en fibrinrig blodprop ligner thromboembolisk slagtilfælde i mennesker er embolisk slagtilfælde model er egnet til at udføre prækliniske undersøgelser af fibrinolytisk terapi, og at denne model kan udvikle en reproducerbar og forudsigelig infarktvolumen i leveres af MCA område.

For at kunne udføre den emboliske MCAO modellen er svære at håndtere, hvilket fører til variationer i infarktstørrelse og de ​​berørte områder af hjernen ^2,3 blodproppen introduktion, stabilitet og indleveringen. Tidligere undersøgelser viste, at reproducerbare iskæmiske læsioner i MCA område kun kunne opnås, når de blokerer blodpropper er indgivet i stilken af MCA ^2,3. Til præcist at indgive blodproppen ogfrembringe en reproducerbar embolisk slagtilfælde model i denne undersøgelse viser vi, hvordan man forbereder en modificeret PE-50 rør, og hvordan til at indføre spidsen af ​​den modificerede rør til oprindelsen af ​​MCA og hvordan du indsprøjter en fibrinrig blodprop i MCA. I overensstemmelse med den foregående rapport ² blev injiceret blodprop let visualiseret på oprindelsen af MCA i alle saltvandsbehandlede rotter (n = 9), men blev stort set opløst i alle tPA-behandlede rotter (n = 12) ved 24 timer efter embolisering.

For at evaluere succes MCAO blev rCBF, neurologiske udfald, og mønsteret og distribution af cerebrale læsioner vurderes. Efter blodprop injektion blev rCBF faldt til 30% af baseline og dette fald på rCBF varet i mindst 2 timer efter embolisering, er i overensstemmelse med tidligere rapporter ^6,7. Efter behandling med tPA ved 2 timer efter embolisering blev niveauerne af rCBF genoprettet tæt på basislinien efter 30 min tPA behandling. Neurologisk score blev målt 10 minfør lægemiddelbehandling anvendelse af den modificerede Bederson score for at hjælpe evaluere succesen af ​​MCAO. Denne neurologisk scoring er en enkel og hurtig måde at opdage den globale neurologiske funktion i akutte fase af slagtilfælde. Dyr, som udviser normal adfærd (score = 0) blev udelukket fra behandling og yderligere analyse. Desuden har vi påvist, at vævsbeskadigelse blev fremstillet meste inden MCA område som set i neocortex og striatum regioner og tPA-behandling (ved 2 timer) reducerede signifikant den infarkt-størrelse ved 24 timer efter slagtilfælde. Sammen vores data påvist, at embolisk slagtilfælde præsenterede model i dette arbejde kan udvikle en forudsigelig infarktvolumen inden MCA område.

Endelig bemærker vi, at der er flere tekniske problemer, der kan påvirke succes emboliske MCAO modellen. Et fælles problem, i at udføre emboliske MCAO model er tidlig spontan reperfusion efter embolisering. Forekomsten af ​​spontan reperfusion Is sandsynligvis være forbundet med den skrøbelige af ekstravaskulære koaguleret blodprop og længden af blodproppen anvendes til at okkludere MCA ^2,3,10. Vi mener, at den metode, vi beskrevet (trin 2) at udarbejde blodprop ville minimere den skrøbelige af ekstravaskulære koaguleret blodprop. Længden af en enkelt blodprop bruges til at okkludere MCA varierede fra laboratorium til laboratorium mellem 25 mm og 50 mm længde ^2,3,6-8,10. Vi fandt, at anvendelse af et 35-40 mm lang blodprop ideelt okkluderet MCA og produceret meget reproducerbar infarktvolumen. Ændring af PE-50 rør med spidsen diameter på mellem 0,30-0,34 mm. Hvis spidsen diameter er> 0,34 mm, kan det ikke nå oprindelsen af ​​MCA. Hvis spidsen diameter er <0,30 mm, er vanskeligt at gå gennem spidsen blodproppen inde i modificeret PE-50 rør. Dødeligheden er tæt knyttet til svær hjerne hævelse og intracerebral blødning. I dette arbejde, den 24 timers dødeligheden er 16% (4/25, se repræsentative resultater), og alle døde rotter viste svær hjerne svulmeing selvom vi ikke se intracerebral blødning (muligvis på grund af begrænset stikprøvestørrelse). Et styrbart dødelighed faktor er kropstemperaturen under operationen. Ved at styre temperaturen krop mellem 36,5-37,5 ° C fra starten af ​​operationen indtil fuld bedring efter anæstesi. Kropstemperatur væsentlig grad påvirker af omfanget af skade på hjernevæv. Hypotermi nedsætter og hypertermi øger infarktvolumen ^11,12. Udførelse af kirurgi i et kort tidsrum (ca. 20-25 min) ifølge protokollen for at fremstille meget reproducerbar infarktstørrelse. Infektiøse komplikationer er en førende dødsårsag hos patienter med akut apopleksi ^13. For at reducere forekomsten af ​​infektiøse komplikationer og forbedre overlevelse efter slagtilfælde, bør aseptisk teknik anvendes under operationen.

Som konklusion: de teknikker præsenteres i denne artikel bør hjælpe efterforskerne med at overvinde de tekniske problemer for oprettelse ther model for slagtilfælde forskning.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
rh-tPA	Chemical	Genentech
2,3,5-triphenyltetrazolium chloride	Chemical	Sigma	T8877
Anesthesia vaporizer	Equipment	Soma Technology	Drager Vapor 19.1
Rechargeable high speed micro drill	Equipment	Fine Science Tools	18000-17
Curved scissors	Equipment	Fine Science Tools	14117-14
Dumont forceps (Medical #7)	Equipment	Fine Science Tools	11270-20
Dumont forceps (Medical #5)	Equipment	Fine Science Tools	11251-35
Vannas-style spring scissors	Equipment	Fine Science Tools	15000-03
Veterinary recovery chamber	Equipment	Peco Services	V1200
Genie plus syringe pump	Equipment	Kent Scientific Corporation
Rat brain matrix	Equipment	Kent Scientific Corporation	RBMA-310C
Digital caliper	Equipment	World Precision Instruments	501601
Dissecting microscope	Equipment	World Precision Instruments	PZMTIII-BS-LWD
Hamilton syringe	Equipment	Hamilton	model 710
Homeothermic blanket control unit	Equipment	Harvard Apparatus
Electric clipper	Equipment	Braintree Scientific	CLP-9931
Veterinary electrosurgical unit	Equipment	MACAN Manufacturing Company	MV-9
Blood flowmeter	Equipment	Adinstruments
PowerLab 4/30	Equipment	Adinstruments
LabChart 7.2	software	Adinstruments
1 ml syringe	Consumable	Becton, Dickinson and Company	309659
23 G needle	Consumable	Becton, Dickinson and Company	305143
30 G needle	Consumable	Becton, Dickinson and Company	305106
PE-50 tubing	Consumable	Becton, Dickinson and Company	427517
PE-10 tubing	Consumable	Becton, Dickinson and Company	427400
6-0 Silk suture	Consumable	Harvard apparatus	723287
5-0 Silk suture	Consumable	Harvard Apparatus	517607