Abstract
Alopesi erkek tipi saç dökülmesi, polikistik over sendromu ve alopesi areata gibi birçok farklı koşullar, oluşabilir saç dökülmesi yaygın bir şeklidir. Alopesi Kanser hastalarının kemoterapinin bir yan etkisi olarak ortaya çıkabilir. Bu çalışmada, amacımız araştırmacılar doğru değerlendirmek ve alopesi bu çeşitli formları için yeni tedavi yaklaşımları karşılaştırmak sağlayacak farelerde saç dökülmesi, ölçmek için tutarlı ve güvenilir bir yöntem geliştirmektir. yöntem fare üzerinde siyah (veya gri) saç miktarına kaba orantılı olarak meydana hafif emilimini, ölçme, farelerin görüntüleri elde etmek ve süreç standart bir jel görüntüleyici kullanır. Bu şekilde sayısal edilmiştir Veriler daha sonra standart istatistiksel teknikler (örneğin, ANOVA, t-testi) kullanılarak analiz edilebilir. Bu metodoloji, balmumu gelen kemoterapi kaynaklı alopesi, alopesi areata ve alopesi fare modellerinde test edilmiştir. Bu raporda, ayrıntılı protokol pres olduğunuodaklılık doğrulama C57BL / 6 veri ve C3H / farelerin HeJ suşları da dahil olmak üzere bu ölçümleri, gerçekleştirmek için. Bu yeni teknik, göreceli uygulama basitliği, çoğu araştırma laboratuarlarında hazır olan ekipman güven ve objektif uygulayarak, subjektif değerlendirmeler daha sağlamdır nicel değerlendirmesi dahil bir dizi avantaj sunmaktadır. Farelerde tüylerin miktarının gelişmeler alopesi modellerinin çalışma artırmak ve klinik öncesi çalışmalarda umut verici yeni tedavilerin değerlendirilmesi kolaylaştıracaktır.
Introduction
Alopesi (saç dökülmesi) çok farklı nedenlere bağlı bir psikolojik ve duygusal sıkıntı olay olabilir. Erkek tipi kellik 35 yaş 1 ile erkeklerin yaklaşık üçte ikisini etkileyen alopesi en sık nedenidir. Saç dökülmesi benzer bir model polikistik over sendromlu kadınlarda görülebilir. Bu hastalıkların her ikisinde de, saç dökülmesi aracılı androjen. Alopesi zamanda nüfusun 2 1.7% etkileyen bir otoimmün hastalık, alopesi areata gibi oluşabilir. Alopesi kemoterapi 3 gibi bazı tıbbi tedaviler, bir yan etkisi olarak ortaya çıkabilir. Kemoterapi hastalarının büyük bir oranı (% 65-85) alopesi 4,5 ölçüde deneyim. saç dökülmesi psikolojik sonuçları iyi kemoterapi ortamda incelenmiştir. Kemoterapi kaynaklı alopesi anksiyete, depresyon, olumsuz beden imgesi, alçaltılmış benlik saygısı ve 6,7 refah azaltılmış anlamda neden olabilir. Yüksek pekadın kanser hastalarının rcentage (47-58%) kemoterapinin en travmatik yönü olarak saç dökülmesi düşünün ve% 8 düşüş tedaviye kadar saç dökülmesi 4,6 korkusuyla. Saç dökülmesi 8,9 psikolojik ve hatta tıbbi sonuçlarını azaltmak için tedavi desteklemek için androjenik alopesi kanıtlar da vardır. Aynı şekilde, Alopesi areata ciddi psikolojik sonuçları 2 olduğu rapor edilmiştir ve saç dökülmesi yamalı doğası saç dökülmesi çoğu diğer nedenleri daha tatsız kozmetik sonuç yol açabilir.
Hafif anti-androjenik etkileri (örneğin, spironolakton) sahip ilaçlar alopesi için bir tedavi olarak sınırlı başarı ile kullanılmış iken, alopesi için birinci etkin bir ilaç minoksidil 10 idi. Bu antihipertansif saç büyümesine neden gözlenen bir yan etkisi vardır ve şimdi alopesi pek çok biçimi için topikal bir tedavi olarak kullanılır. Ancak, tepkiler, bazı konular yalnızca yavaş gösteren, genellikle eksikGerçek büyütme 10 yerine saç dökülmesi ing. Finasterid kısmi sistemik androjen blokajı pahasına androjenik alopesi iyileştirmeler sonucunda, dihidrotestosteron için testosteron bloke dönüşüm II 5α-redüktaz tip rekabetçi bir antagonistidir. Uzun vadeli (10 yıl) tedavisi ile yanıt oranı% 50 civarında 11 vardır. Genel olarak, bu alandaki önemli araştırma rağmen, hala saç dökülmesi için yeterli tedavinin yoktur.
On yıllardır, bilim adamları ve klinisyenler klinik denemelerde derisi saç büyümesini ölçmek için yöntemler araştırılmıştır. Alopesi tedavi ilaçların geliştirilmesi ile, saç büyüme ve tedaviye özellikle, tepki ölçme, güvenilir, ekonomik ve minimal invaziv aracı için daha büyük bir ihtiyaç olmuştur. Saç dökülmesi bozukluğu olan hastalarda saç yoğunluğu kesin bir ölçümü için görüntü analizi tekniği techniqu kullanarak çeşitli geçmişte, tutarlı ve geçerli sonuçlar eldedijital görüntü 12 analizi, tek tek kılların görüntü analizi ve cilt 13 lezyonlar, ve tanımlanmış bir kafa derisi bölgesi 14 saç kütlesi ölçmek için mikroskobik tarama dahil olmak üzere, es.
Yukarıdaki yöntemler, saç klinik deneylerde müdahaleler büyüme teşvik etmek için etkinliğinin gelişmiş bir değerlendirme temin ederken, ne yazık ki, bu yöntemler, klinik öncesi araştırmalarda kemirgen çalışmaları uygulanmamıştır. Amacımız araştırmacılar daha doğru değerlendirmek ve alopesi çeşitli formları için yeni tedavi yaklaşımları karşılaştırmak sağlayacak farelerde saç dökülmesi, ölçmek için tutarlı ve güvenilir bir yöntem geliştirmektir. Biz kahverengi veya siyah saçlı farelerde saç yoğunluğu hızlı ve güvenilir ölçümü sağlayacak en laboratuvarlarda hazır ekipman kullanarak bir metodoloji geliştirdik. Bu metodoloji waxin gelen kemoterapi kaynaklı alopesi, alopesi areata ve alopesi fare modellerinde test edilmiştirörn. Ayrıntılı bir protokol doğrulama C57BL / 6 veri ve C3H / farelerin HeJ suşları da dahil olmak üzere bu ölçümleri, performans sunulmuştur. Bu teknik saç gövdesine pigmentlerden ışık emiliminin tespit dayandığı için, beyaz fareler veya Albino farelerde saç büyümesi tespit etmek için kullanılamaz.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Etik Beyanı: hayvanları içeren tüm çalışmalar kurumun IACUC tarafından onaylanmış olması gerekir (aşağıdaki veriler için, protokoller Montefiore IACUC, protokol # 11-6-240 ve # 13-7-100 tarafından onaylanmıştır). Fotoğraf sırasında hareketsiz tutarak tek bir amaç için belirtilen Hayvanlar hafif anestezi sağlanır, bu protokol için gerekli hiçbir acı prosedürler vardır.
Fotoğraf 1. kazanılması
- Basılı metin ile kağıt kullanılarak jel görüntüleyici için görüş Set odak ve saha. Fotoğraflandı bölgede ışık kaynağının tekdüzelik doğrulayın. , Bütünlüğü sağlamak bir yansıtıcı fotoğrafçılık için ışık kaynağı yerleşik bir jel görüntüleyici kullanmanıza yardımcı olmak için. Bu daha gri tonlama analiz için uygun değildir hayvanın bir siluet yaratacak gibi, bir transillüminasyonu ışık kaynağı kullanmayın.
NOT: Bu biraz ilgi (ROI) bölgede optik ortalamasının sağlayan odak, dışarı fare koyun ve olacak olacakÇevrede çok küçük (yani, <10 piksel) bölgeler için quantal hataları azaltmaya yardımcı olur. Ilgi büyük bölgeleri ayarı odaklanarak bu reşit etkilenmez, ne de hayvanın büyüklüğüne farklılıklardan etkilenecektir. - Ketamin (100 mg / ml) / ksilazin (20 mg / ml) ile hayvanların anestezisi (2: 1), bu hızlı anestezi etkisi ve hızlı bir iyileşme sağlar ve çok sayıda hayvan çekim için en uygun olarak.
NOT: Hayvan hala fotoğraf izin için yeterli zaman Anestezi teyit edilir. Hayvanlar genellikle 10-15 dakika içinde bu ışık anestezi kurtarmak gibi, veteriner göz merhem kullanılmasını tavsiye etti. - (Yakın olarak mümkün paralel) dikey hizalama jel görüntüleyici üzerinde anestezi hayvanları yerleştirin.
- Dorsal fotoğrafları için, genişletilmiş uzuvları ile yüzüstü pozisyonda hayvanları yerleştirin.
- Ventral fotoğrafları için, hayvanlar yanal döndürülmüş değil özen, yatar pozisyonda hayvanları yerleştirin.
- Fotoğraflanan bölgede gri tonlama standart yerleştirin.
- Erişim kapağını kapatın. Önemli: Ortam ışığı maruz varyasyonları tanıtabilirsiniz.
- Edinimi lineer aralığında ilgi bölgeyi yerleştirir bir pozlama F-stop Set (F-stop okuma).
NOT: Görüntü doymuş nerede En sistem gösterecektir. - Fotoğraf çekmek.
- Değişim artan ya da standart ve ilgi bölgesi hem satın alma (referans bir lineer aralıkta kalması, 1 F-stop azaltarak lineer aralığında ilgi bölgeyi yerleştirir başka pozlama ayarı F-stop F- dur).
- Fotoğraf çekmek.
- Fotoğrafçılık tamamlandıktan sonra, bir ısınma masaya hayvanları yerleştirin ve sternum yatma korumak kadar monitör. Kafeslerine hayvanları dönün. Kez tüm hayvanlar tamamen iyileşti vivaryum hayvanların grubu döndürür.
Işık Emme 2. sayısallaştırılması </ P>
- Hayvanların görüntülerde ilgi Mark bölgeleri jel görüntüleyici yazılımı sağlanan kullanarak.
- Bütün hayvan dorsal görünümü için, mümkün olduğunca yanal kadar uzanan, alt ekstremite, üst ekstremite uzanan dikdörtgen ya da oval bir görüntü kullanın şekilde Şekil 1A gösterildiği gibi kutunun hiçbir kısmı hayvanın arkasına ötesine uzanır.
NOT: Bir de bir serbest elle çizim aracını kullanarak ilgi alanı işaretlemek olabilir. - Pelvik bölgeyi kapsayan bir ve Şekil 1B gösterildiği gibi göğüs bölgesini kapsayan bir: Bütün hayvan ventral görünüm için, 2 dikdörtgenler kullanın.
- Uygun faiz, yani, ilaç uygulama yeri, işareti daha küçük bir bölge için.
- Bütün hayvan dorsal görünümü için, mümkün olduğunca yanal kadar uzanan, alt ekstremite, üst ekstremite uzanan dikdörtgen ya da oval bir görüntü kullanın şekilde Şekil 1A gösterildiği gibi kutunun hiçbir kısmı hayvanın arkasına ötesine uzanır.
- Gri tonlama emme standart faiz Mark bölge (ler).
- Ilgi işaretli bölgelerin her Tutanak emilim.
3. Analiz
Emme seviyeleri obtaineilgi alanlarının d fotoğrafları arasında karşılaştırma için arka standart normalize edilmesi gerekebilir. emilim maruz kalma ilişkisi log-log (yani, ilişki günlüğü (maruziyet arasındaki lineer) ve log (emme)) 'dir. Bu ilişkiyi kullanarak, ilgi bölgenin emme emilimleri farklı zaman noktalarında (bir çalışma protokolü kapsamında, yani seri ölçümler) alınan da dahil olmak üzere farklı fotoğraf arasında doğrudan karşılaştırılmasına olanak sağlayacak bir standart arka plan değerine normalize olabilir. Bu düzeltmeleri gerçekleştirmek için prosedür isteğe adımlar 3.1 ve 3.2 ayrıntılı.
- Gri tonlama emme standart elde edilen değerleri kullanarak günlük (absorpsiyon) vs log (maruziyet) ve (İsteğe bağlı) Arsa eğrisi.
- Aşağıdaki gibi (İsteğe bağlı) Her fotoğrafın standart varyasyonları için ayarlayın:
- S belirlenen (referans için ve F-stop (adım 1.6 belirlendiği gibi) okumak için F-Stop seçin) 1.8 TEP.
- Okuma F-durağında tüm fotoğraflarda standart ortalama emilimini hesaplayın. Bu ortalama Referans Standart Değeri (RSV) 'dir.
- (Delta-YG-1, delta-YG-2 ... ..delta-YG-X) standardına (delta-S) ve her tanımlanmış ROI için her fotoğrafta okuma ve referans F-stop ayarları arasında emilim farkı hesaplayın
- Aşağıdaki gibi her ROI için düzeltilmiş emilimi hesaplayın: Düzeltilmiş emilimini (ROI-X) = Emilimini (ROI-X) okuma F-durağında + (RSV - standardın emilimi okuma F-durdur) * (delta-ROI-X / ö = S)
- Deneysel verileri derlemek ve sürekli değişkenler için standart istatistiksel teknikler kullanılarak veri analizi yapmak (yani, ANOVA, t-testi).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Bu teknik C3H / HeJ engrafted fareler, 16 areata alopesi fare modeli kullanılarak valide edildi. Bu hayvanlar zamanla ilerler küresel saç kaybı gelişebilir. Ancak, saç dökülmesi yamalar oluşur ve önemli değişkenlik tanıtan ve nitel değerlendirmeler engellemekle, bir fare diğerine değişebilir. Bu model geçerliliği bir değerlendirme olarak fare üzerinde farklı konumlarda optik yoğunluk ölçümleri arasındaki ilişkiyi test etmek için bir fırsat sağladı.
Aynı fare korelasyon ilk soru önlemleri örtüşmeyen alanlarda YG sınır farklı pozlama, varyasyonları kullanarak ve ROI eğer. Anlamlı bir korelasyon (p <0.0001) fare (Şekil 4A) dorsal yüzeyinde vs dikdörtgen, oval standartlarına göre tanımlanan İB'leri karşılaştıran görüldü oldu. Benzer şekilde yüksek korelasyon hayvan ve sorumluluk yönün farklı sitelerde görüldümaruz kalma düzeylerini kira (gösterilmemiştir). Bu durum, bu ölçümlerde hassas bir yüksek bir dereceyi gösterir. Absorpsiyon arasında anlamlı bir korelasyon vardı dikdörtgen İB'leri kullanarak arka (p <0.0001, Şekil 4B) dorsal yüzeyinde 2.0 VS. 1.2 F-stop. Aynı farenin (p <0.0001, Şekil 4C) dorsal ve ventral yüzeyi arasındaki emme ölçümleri karşılaştırırken belirgin bir korelasyon da gözlenmiştir. Bu veriler C3H beklendiği gibi aynı hayvan üzerinde farklı sitelerden alınan absorpsiyon ölçümleri, ilişkili olduğu kanıt / HeJ fare modeli engrafted ve bu korelasyonlar saç dökülmesi geniş bir yelpazede doğrusal kalır. Bu gri tonlama ölçümlerin geçerliliğini kurmak yardımcı olur ve aynı zamanda görüntü elde etme ve analiz tekniği değişikliklere Bu tekniğin sağlamlığını kurar.
İkinci soru alınan seri ölçümler arasındaki tutarlılık varsa olduFarklı zaman noktalarında aynı hayvanın. Bu değerlendirme için, görüntü C3H elde edilmiştir / HeJ 3 hafta boyunca haftalık olarak fareler nakledilmiş. C3H / HeJ aşılanan fare, bu süre içinde kademeli olarak saç dökülmesi görüntülemek için beklenir. Ventral yüzeyi (göğüs bölgesi, kutu şeklindeki ROI) Gri tonlamalı analizi sonraki (Şekil 5) bir zaman noktasında tutarlı düşüş eğilimi ile, bu beklenen saç kaybı gösterdi. Notun, C3H / HeJ engrafted farelerin sadece% 80 saç kaybını gösterir ve en yüksek gri tonlama değerleri olan bu düşüş gösteriyor, oldukça deneysel dönem boyunca tutarlı sonuçlar göstermezler. Hiçbir saç kaybı olan hayvanlarda ölçü Bu kıvamın C57BL / 6 fare 19'da doğrulanmıştır. ventral yüzeyi uyluk bölgeye ve dorsal yüzeyi üzerinde gerçekleştirilen aynı analiz süresi boyunca benzer sonuçlar verdi (gösterilmemiştir).
C3H bu tekniğin uygulama bu cesaretlendirici sonuçlar / HeJ, hayvanlar engrafteddaha ileri araştırmalar başka bir hayvan modeli, kemoterapi kaynaklı alopesi ve bir yürütülmüştür. Siklofosfamid 3 haftalık ders almak C57BL / 6 fareler değişken küresel saç incelmesi ve depigmentasyon gelişecektir. Burada tarif edilen gri tonlama analiz tekniği bu değişiklikleri ölçmek için, ve terapötik müdahaleler 17 yanıtı değerlendirmek için kullanılmıştır. Bu modelde, gri tonlama analiz saç ceket kemoterapi kaynaklı değişikliklerin kantitatif değerlendirmeler sağlayan güçlü bir araç olduğunu kanıtladı, ve istatistiksel analiz ile tedavi etkilerinin doğrulama izin. Kemoterapi alopesi başka modelde, bu gri tonlama analizi kullanan özel zorluklar vardı. Bu modelde, hayvanlar daha sonra, saç köklerinin senkronize etmek için, dorsal yüzeyi üzerinde mumlu saç köklerinin anajen VI aşamasına giren ve kemoterapi 18 maksimum duyarlı olan 9 gün sonra siklofosfamidin bir tek doz ile işlemden geçirildi. mumluBölgeyi çalışma için ilgi alanı olmakla birlikte, balmumu alan farklı boyutlarda olabilir. Mumlu bölgede ROI kısıtlama siklofosfamid uygulaması 19 sonra kayıp ve saç büyütme hem de miktarının izin verir. Ayrıca, bu teknik, bir deney terapisinin yanıt olarak doza bağımlı farklılıkların doğru değerlendirilmesine olanak tanımaktadır. Bu uygulama, bu teknik yatırımın geri tanımlanmasında esnekliğe sahip olan avantajlarını göstermektedir.
Daha C57BL / 6 haftalık siklofosfamid yönetiminin protokolü kullanan bir devam eden çalışmanın bir ara veri analizi yukarıda belirtilen koşuluyla bu tekniğin uygulanmasını göstermek için. 8 haftalık fareler 3 haftalık bir araç veya 50 mg / kg / hafta siklofosfamid ile tedavi edildi. Araç ile tedavi edilen hayvanlar, normal saç kaplama (Şekil 6A) vardı Kemoterapi ile tedavi edilmiş fareler, 2 ay sonra görsel olarak belirgin saç kaybı göstermiştir. Gri tonlama analiz başına olduKemoterapi farelerde ve araç kontrol (Şekil 6B) arasında önemli (p <0.05) farkı gösteren, yukarıda belirtildiği gibi, oluşturulan.
Şekil 1: dorsal ve ventral C3H yüzeyinde saç değişiklikleri Brüt görünümü / HeJ fareler, alopesi areata fare modelini engrafted hayvanlar zamanla ilerler küresel saç kaybı gelişebilir Not (A) dorsal görünümü, temsilci sınır ile.. Gri tonlu analiz, bir bakımlı alana tekabül eden bir ungroomed alanda, ya da uyluk gelen göğüs gri tonlama analizi için farklı ilgi bölgelerinde, oval ya da belirtildiği gibi dikdörtgen. (B) Ventral görünüm için ilgi (ROI) bölgeleri.
Şekil 2:.. Piksel düzeyinde vs Tiffen numarası, bir Tiffen numarası standardı vs gri tonlama analiz Piksel seviyesi standart Tiffen en grafik belirtilen F-duraklarında bir jel görüntüleyici üzerinde fotoğraflandı (A) Grafik logaritmik bir ilişki beklenen göstererek (B. ) logaritmik dönüşümü, bu aralıkta bir doğrusal olmayan bir ilişkiye izlemeye devam etmektedir.
Şekil 3:. F-stop vs gri tonlama analiz Piksel seviyesi standart Tiffen en grafik belirtilen F-duraklarında bir jel görüntüleyici üzerinde fotoğraflandı. F-stop vs birkaç farklı Tiffen standartları için görülen piksel seviyesinde farklılıklar vardır çizilen. Düzeltmeler photogra arasındaki standartlarının uyumlaştırılması için olduğunu belirten çizgiler paralel unutmayınPHS ayrı ilgi her bölge için hesaplanan gerekir.
Şekil 4:. Gri tonlama analizinde farklı fotoğraf teknikleri ve ilgi bölgeler arasındaki korelasyon aynı C3H alınan belirtilen ölçüm teknikleri arasındaki korelasyon gösterilmiştir / HeJ aynı zaman noktasında fare engrafted vs oval bölge dikdörtgenin (A) Korelasyon. dorsal görünümü faiz. F (B) Korelasyon ilgi dikdörtgen bölgesini kullanarak 2.0 vs 1.2 dur. dorsal ve ventral manzaralı, ilgi dikdörtgen bölgesinden gri tonlama değerleri (C) Korelasyon. Lineer regresyon analizi (p <0.0001) ile belirlenen tüm istatistiksel olarak önemli olmuştur.
Şekil 5: C3H gri-analizi kullanılarak absorp-siyondaki değişimin zaman seyri / HeJ fareleri nakledilmiş Renkler farelerden tek tek seri ölçümleri göstermektedir.. Bir zaman noktasından sonraki her bir fare için tutarlılık edin.
Şekil 6:.. Kemoterapi kaynaklı alopesi 6 haftalık C57BL6 / J farelerinde Gri Ton analizi (n = 6), (n = 6) ya da siklofosfamidin 3 haftalık dozları (50 mg / kg), araç ile tedavi edilmiştir (A) Tedavi gruplarının her birinden 3 farelerin Temsilcisi grup, kemoterapi başladıktan sonra 2 ay fotoğraflandı. (B) Derlenen verilerin gri tonlama analiz her gruptan gösteren siklofosfamid idaresi (p <0.05) ile emiliminin azalması. Görünür saç arasındaki korelasyonu NotPanel A kaybı ve panel B'de emiliminde anlamlı azalmalar
| Aşağıdaki gibi emilim değerleri şunlardır: | |||
| Fotoğraf | F-Stop | YG | Emme |
| 1 | 2 | Standart | 90 |
| 1 | 2 | YG-1 | 100 |
| 1 | 2 | YG-2 | 200 |
| 1 | 3 | Standart | 150 |
| 1 | 3 | YG-1 | 160 |
| 1 | 3 | YG-2 | 230 |
| 2 | 2 | Standart | 110 |
| 2 | 2 | YG-1 | 120 |
| 2 | 2 | YG-2 | 210 |
| 2 | 3 | Standart | 160 |
| 2 | 3 | YG-1 | 170 |
| 2 | 3 | YG-2 | 235 |
| F-durdurmak 2.0 olarak seçilmiştir Okuma, Referans F-durdurmak 3.0 olarak seçilmiştir. | |||
| Referans Standart Değeri (RSV) = bir fotoğrafın 1 ve fotoğraf 2 standart emilimi ortalama 2.0 F-stop, RSV = ortalama (90, 110) = 100 | |||
| Fotoğrafta 1: | |||
| Delta-S, = 150-90 = 60 | |||
| Delta-YG-1 = 160-100 = 60 | |||
| Delta-YG-2 = 230-200 = 30 | |||
| ROI-1 için düzeltildi emme = 100 + (100-90) * (60/60) = 110 | |||
| Fotoğrafta 2 için: | |||
| Delta-S = 160-110 = 50 | |||
| Delta-YG-1 = 170-120 = 50 | |||
| Delta-YG-2 = 235-210 = 25 | |||
| ROI-1 için düzeltildi emme = 120 + (100-110) * (50/50) = 110 | |||
| ROI-2 için düzeltildi emme = 210 + (100-110) * (25/50) = 205 | |||
Tablo 1:. Fotoğraflarla arasındaki maruz farklılıkları düzeltmek için örnek hesaplama tablosu fotoğrafları arasında standartlarına (opsiyonel adım 3.2) emilimini ufak farkları dengelemek için nasıl bir örnek gösterilmektedir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Bu raporda ayrıntılı bir açıklama kemirgenlerde saç dökülmesi ölçülmesi için yeni bir teknik sağlanmaktadır. Bu teknik, en laboratuvarlarda hazır olan görüntü elde etme ve analiz, ekipman için bir jel görüntüleyici kullanır. ölçümler teknikte küçük varyasyonlar (Şekiller 4-5), tutarlı olduğu gösterilmiştir ve tedavi modelleri görme saç kaybı (Şekil 6) bir dereceye kadar iyi bir korelasyon vardır. Bu teknikler başarıyla alopesi 17 deneysel tedavilerin değerlendirilmesinde kullanılmaktadır.
Kemirgenlerde saç büyümesini değerlendirmek için bir nicel araç alopesi için terapötik araştırma ilerleyen çok değerli olabilir. Alopesi için birçok fare modelleri zor terapötik müdahalelerin öznel değerlendirmelere sonuçları temel yapar içsel değişkenlik var. Şeklinde bir sonuç sağlar Benzer şekilde, kantitatif bir değerlendirmeSürekli tedbirin grup ortalamaları ve standart sapma / standart hata ile özetlenebilir ve standart istatistiksel teknikler (ANOVA, t-testi) kullanılarak test edilebilir. Bu nicel değerlendirme zaman noktalarında bir seri tepkilerini ölçmek için kullanılabilir, ve bir test bileşiği için bir doz-yanıt eğrisi oluşturmak için kullanılan edilebilir. Kantitatif analiz böylece geliştirme aşamasındadır terapötiklerinin etkinliğinin kanıta dayalı değerlendirmeler için izin verir.
Bu teknik, pek çok fare soylarında saç kaplama ve cilt mevcut arasındaki renk farkından yararlanır. Koyu saçlı fareler için, saç büyük yoğunluk, optik absorpsiyon büyük bir miktar. Bu optik absorpsiyon western blot analizinde proteini miktarını belirlemek için bir ilgi, belirli bir bölgede optik absorpsiyon değerlendirmek için tasarlanmıştır, bir jel görüntüleme cihazı kullanılarak ölçülebilir. Western blot analizine benzer şekilde, elde edilen absorpsiyon ölçümleri, Anal olabilirfarelerin gruplar arasında saç yoğunluğu (yani, kontrol vs tedavi) karşılaştırmak için standart istatistiksel yöntemler kullanılarak yzed.
Batı benek analizi, genel olarak bu görüntü üzerinde temin standartlarına göre analiz edilir, tek bir görüntü üzerinde gerçekleştirilir. Ancak, bu uygulama ile, farklı zamanlarda alınabilir farklı görüntüler arasında karşılaştırmalar yapmak için gerekli olur. Çok tutarlı fotoğraf tekniği ile, fotoğrafları arasındaki farklılıklar en aza indirilebilir. Fotoğrafların arasında maruz kalınan küçük varyasyonlar telafi edilebilir, ancak deney uygulama için, yararlıdır. Böylece, bir gri tonlama standart fotoğrafta yer alması önemlidir (yani, Tiffen en gri tonlama grafik 15). Bununla birlikte, emme ve maruziyet arasındaki ilişki hedefi (Şekil 2A), optik yoğunluğuna bağlı olarak değişmektedir. Böylece, gri tonlama, standart ta farklı bir optik yoğunluk varsarYer, gerekli düzeltmeler farklı olabilir. Logaritmik düzeltmeler yararlı, ancak bu sorun (Şekil 2B) için mükemmel bir çözüm sağlamaz. 2 farklı F-durur fotoğraf alarak, bir gri tonlama standart ve fotoğraf her hedef için bir doğrusal yaklaşım hesaplamak, ve böylece bireysel hedefler için düzeltme uygun ölçeklendirme sağlamaktadır. Şekil 3 farklı optik ile nasıl hedefleri göstermektedir yoğunlukları 2 farklı F-durur her hedefin emilimi farklılıklardan interpolasyona farklı düzeltme faktörleri, sahip olacaktır. Bir 150 değerine standart normalize etmek istemesi halinde Böylece, optik yoğunluk Tiffen 19, bir hedef Tiffen 18 az bir böylece Tiffen 17 140, tek bir 119 olacak olacak ve 148 olacaktır. Aksine grafiksel bu düzeltmeleri çözme yerine, bir gri tonlama standart ve hedef arasındaki arasındaki yamaçlar oranını kullanabilirsiniz 2 fo düzeltme hesaplamak için F-dururr, her bir hedef, verilen örnekte açıklandığı gibi (Tablo 1).
Tüm teknikler gibi, gri tonlama analizi yoluyla tüylerin kantitatif analiz çeşitli sınırlamalar vardır. Birincisi ve en önemlisi, bu tekniğin uygulanmasında önemli hesaplama karmaşıklığı yoktur. Bu jel kameralar için analiz yazılımı ayrı bir deney olarak her rakam analiz için optimize edilmiş olmasından kaynaklanmaktadır. Böylece, elle görüntüleri arasında poz herhangi bir değişiklik düzeltmek için bir gereklilik yoktur. Bu tür düzeltmeler için doğrusallaşmış yaklaşım bu süreci basitleştirmek yardımcı olur. Bir örnek Tablo 1'de verilmiştir: çekilen fotoğrafların 2 setleri, Simüle veriler ortak bir standarda sahip, 2.0 ve 3.0 F-stop. Fotoğrafların Her set setleri arasında karşılaştırıldı gereken 2 ROI'leri vardır. Fotografik koşullarda ufak varyasyonlar ikinci sette biraz daha fazla maruz kalma sahip fotoğrafların ilk seti neden olmuş, evident ortak bir standart emiliminde küçük farklılıklarla.
örnek fotoğraf koşullarda küçük farklılıklar belirli bir yatırım getirisi de emilimi belirgin farklılıklar yaratabilir nasıl gösterir, ancak bu görüntülerin 2 takım arasında farklılık yok ROI de bu emilimini gösteren bu durumda, bir referans standardı kullanılarak düzeltilebilir.
Her zaman doğrudan saç kaybı ya da saç büyümesi için yanlış olabilir saç depigmentasyon veya diğer renk değişiklikleri miktarına ilişkili değildir ışık emişi bu değişikliği dikkat etmek önemlidir. Karşılaştırmak için hiçbir altın standart bulunmuyor, çünkü ne yazık ki, bu tekniğin doğruluğu değerlendirilemez. Bariz saç dökülmesi olduğu yerde Ancak tekniği beklenen sonuçları (Şekil 6) üretmek yok. Son olarak, şu anda bu tekniği kullanarak sonuçları potansiyel terapötik klinik çalışmalarda sonuçları ile ilişkili olmadığını değerlendirmek için hiçbir veri yoktur.
<p class = "jove_content"> alopesi çeşitli şekillerde saç dökülmesi ölçülmesi için gri tonlama analiz rafine ve alopesi modellerini karakterize ve potansiyel terapötiklere test yanıtları için yöntemler standardize için bir fırsat oluşturmaktadır. Bu tekniğin uygulanması alopesi için daha etkili tedavilerin belirlenmesi ve gelişimini arttırmak gerekir.Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| KODAK Gel Logic 100 Imaging System | Eastman Kodak Company, Rochester, NY, USA | Gel imager for obtaining and analyzing photographs, must have built in light source for reflective photography. | |
| The Kodak/Tiffen Q-13 Gray Scale |  Imatest |
Greyscale standard | |
| C57BL/6J Mice | Jackson Laboratories, Bar Harbor, Maine | Mice for representative study | |
| C3H/HeJ engrafted mouse | Jackson Laboratories, Bar Harbor, Maine | Mice for representative study |
References
- McAndrews, P. J. American Hair Loss Association. , http://www.americanhairloss.org/men_hair_loss/introduction.asp (2011).
- Safavi, K. H., Muller, S. A., Suman, V. J., Moshell, A. N., Melton, L. J. 3rd Incidence of alopecia areata in Olmsted County, Minnesota, 1975 through 1989. Mayo Clin Proc. 70 (7), 628-633 (1995).
- Hussein, A. M. Chemotherapy-induced alopecia: new developments. South Med J. 86 (5), 489-496 (1993).
- Trueb, R. M. Chemotherapy-induced hair loss. Skin Therapy Lett. 15 (7), 5-7 (2010).
- Sato, N., Leopold, P. L., Crystal, R. G. Effect of adenovirus-mediated expression of Sonic hedgehog gene on hair regrowth in mice with chemotherapy-induced alopecia. J Natl Cancer Inst. 93 (24), 1858-1864 (2001).
- McGarvey, E. L., Baum, L. D., Pinkerton, R. C., Rogers, L. M. Psychological sequelae and alopecia among women with cancer. Cancer Pract. 9 (6), 283-289 (2001).
- Baxley, K. O., Erdman, L. K., Henry, E. B., Roof, B. J. Alopecia: effect on cancer patients' body image. Cancer Nurs. 7 (6), 499-503 (1984).
- Stough, D. Psychological effect, pathophysiology, and management of androgenetic alopecia in men. Mayo Clin Proc. 80 (10), 1316-1322 (2005).
- Ogunmakin, K. O., Rashid, R. M. Alopecia: the case for medical necessity. Skinmed. 9 (2), 79-84 (2011).
- Olsen, E. A. A randomized clinical trial of 5% topical minoxidil versus 2% topical minoxidil and placebo in the treatment of androgenetic alopecia in men. J Am Acad Dermatol. 47 (3), 377-385 (2002).
- Rossi, A. 1 mg daily administration on male androgenetic alopecia in different age groups: 10-year follow-up. Dermatol Ther. 24 (4), 455-461 (2011).
- Gibbons, R. D., Fiedler-Weiss, V. C. Computer-aided quantification of scalp hair. Dermatol Clin. 4 (4), 627-640 (1986).
- Fleming, M. G. Techniques for a structural analysis of dermatoscopic imagery. Comput Med Imaging Graph. 22 (5), 375-389 (1998).
- Chamberlain, A. J., Dawber, R. P. Methods of evaluating hair growth. Australas J Dermatol. 44 (1), 10-18 (2003).
- The Kodak/Tiffen Q-13 Gray Scale*. , Imatest. http://www.imatest.com/docs/q13/ Forthcoming.
- Freyschmidt-Paul, P. Treatment of alopecia areata in C3H/HeJ mice with the topical immunosuppressant FK506 (Tacrolimus). Eur J Dermatol. 11 (5), 405-409 (2001).
- Katikaneni, R., Ponnapakkam, T., Matsushita, O., Sakon, J., Gensure, R. Treatment and prevention of chemotherapy-induced alopecia with PTH-CBD, a collagen-targeted parathyroid hormone analog, in a non-depilated mouse model. Anticancer Drugs. 25 (1), 30-38 (2014).
- Peters, E. M., Foitzik, K., Paus, R., Ray, S., Holick, M. F. A new strategy for modulating chemotherapy-induced alopecia, using PTH/PTHrP receptor agonist and antagonist. J Invest Dermatol. 117 (2), 173-178 (2001).
- Katikaneni, R., Ponnapakkam, T., Seymour, A., Sakon, J., Gensure, R. C. Parathyroid hormone linked to a collagen binding domain promotes hair growth in a mouse model of chemotherapy induced alopecia in a dose-dependent manner. Anti-cancer drugs. 25 (7), 819-825 (2014).
