Introduction
प्राथमिक मोतियाबिंद जीवन फेरबदल दृष्टि हानि और अंधापन दो को जन्म दे सकता है, जो दुनिया एक भर में एक अनुमान के अनुसार 60,500,000 लोगों को प्रभावित करने के लिए एक विनाशकारी नेत्र रोग है। रोग तंत्र में अनुसंधान, और मोतियाबिंद के लिए उपन्यास चिकित्सा विज्ञान के विकास, विकृति की पहचान के कुछ पुनरावृत्ति जो रोग के अच्छे मॉडल पर निर्भर हैं।
हम Samsel एट अल की पद्धति पर आधारित यहाँ एक चूहे मोतियाबिंद मॉडल प्रस्तुत करते हैं। 3 इस तकनीक के समग्र लक्ष्य, प्रत्यक्ष पूर्वकाल कक्ष में चुंबकीय microspheres के इंजेक्शन लगाने, और एक चुंबकीय अंगूठी का उपयोग करके आंख में intraocular दबाव (IOP) बढ़ाने के लिए है उन्हें iridocorneal कोण में। इस न्यूरोनल नुकसान और सेल नुकसान के लिए अग्रणी, IOP बढ़ जाती है, जो जलीय बहिर्वाह, बाधा उत्पन्न करती है। प्रोटोकॉल मोतियाबिंद का एक सरल, inducible मॉडल प्रदान करने के लिए प्रयास करने के लिए विकसित किया गया था।
इस प्रोटोकॉल के कुछ लाभ हो सकता हैमौजूदा तकनीक से अधिक है। ऐसे डी बी ए / 2J के रूप में आनुवंशिक माउस मॉडल आरंभ करने के लिए प्रक्रियाओं की आवश्यकता नहीं है, जो उपलब्ध हैं; हालांकि इन रोग प्रगति 4 के एक अप्रत्याशित शुरुआत हो सकती है। इसके विपरीत, शल्य चिकित्सा कृन्तकों में IOP को ऊपर उठाने पर भरोसा करते हैं, जिनमें से अधिकांश inducible मॉडल, दीक्षा उपयोगकर्ता द्वारा नियंत्रित किया जा सकता है कि फायदा है। इन तरीकों में से कुछ सहित 5 तकनीकी रूप से चुनौतीपूर्ण जा रहा है, हालांकि उनकी खुद की कमियां हो सकती है, और बुलंद IOP 6 बनाए रखने के लिए कई प्रक्रियाओं की आवश्यकता कर सकते हैं।
इसके विपरीत, इस पांडुलिपि में विस्तृत inducible विधि reinjection के लिए न्यूनतम आवश्यकता के साथ दबाव में स्थिर, मजबूत बढ़ जाती है, का उत्पादन एक, सरल, प्रभावी और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य तकनीक है। इसके अतिरिक्त, यह महंगे उपकरण को शामिल नहीं करता है, और केवल प्रदर्शन करने के लिए बेसिक सर्जिकल कौशल की आवश्यकता है। इस प्रोटोकॉल एक कम तकनीकी रूप से मांग inducible स्थापित करने के लिए देख रहे हैं, जो पाठकों के लिए उपयुक्त हो सकता हैउनकी प्रयोगशाला में मोतियाबिंद मॉडल।
Protocol
आचार बयान: सभी पशु प्रयोगों संस्थागत पशु की देखभाल और उपयोग समिति (IACUC) के अनुसार आयोजित किया गया है, और यूनाइटेड किंगडम गृह मंत्रालय के दिशा निर्देशों के साथ समझौते (में अनुमोदित किया गया http://goo.gl/FLkirW , पिछले 10 जून तक पहुँचा 2014) और नेत्र और विजन रिसर्च (में जानवरों के इस्तेमाल के लिए ARVO वक्तव्य http://goo.gl/4LFOjD , पिछले 10 जून, 2014) तक पहुँचा।
1. नेत्र उच्च रक्तचाप प्रेरण
- Samsel एट अल की पद्धति पर आधारित, ब्राउन नॉर्वे चूहों के पूर्वकाल चेंबर में समचुंबक microspheres की एकतरफा इंजेक्शन के माध्यम से intraocular दबाव (IOP) को ऊपर उठाने के द्वारा प्रयोगात्मक मोतियाबिंद प्रेरित। इन मान्य किया जा करने की आवश्यकता होगी, हालांकि तीन अन्य pigmented चूहों, उपयुक्त हो सकता है उपयोगकर्ता से पहले।
- हाउस 250-300 ग्राम महिलाएक निरंतर कम प्रकाश पर्यावरण (40-60 लक्स) में पूर्व ब्रीडर ब्राउन नॉर्वे चूहों भोजन और पानी यथेच्छ के उपयोग के साथ, IOP 7 में प्रतिदिन उतार चढ़ाव को कम से कम करने के लिए।
- चूहे आँख 9 में उपयोग के लिए calibrated एक पलटाव टनमीटर का उपयोग कर, पूर्व संज्ञाहरण और मनका इंजेक्शन के लिए जाग जानवरों 8 में आधारभूत IOP नाप लो। IOP पांच रीडिंग के मतलब के रूप में लिया जाता है।
- Intraperitoneally वितरित 37.5 मिलीग्राम / किग्रा Ketamine, और 0.25 मिलीग्राम / किग्रा medetomidine हाइड्रोक्लोराइड के साथ चूहों चतनाशून्य। पशु के पीछे के पैर सजगता परीक्षण के द्वारा संज्ञाहरण की गहराई की पुष्टि करें, आयोडीन आवेदन (1.5 कदम देखें), और मनका इंजेक्शन povidone करने से पहले (कदम 1.8 देखें)। Analgesia के लिए 0.5% proparacaine हाइड्रोक्लोराइड प्रशासन।
नोट: किसी भी स्तर पर छात्र को चौड़ा करना मत करो। यह मोती iridocorneal कोण में बेहतर व्यवस्थित करने के लिए मदद, और लेंस के लिए बाध्य नहीं कर पाएगा। संयुक्त राष्ट्र संचालित contralateral आंख पर कॉर्निया सुखाने को रोकने के लिए नेत्र मरहम लागू करें। - डब्ल्यूपानी में इंजेक्शन के लिए पहले 10 5 मिनट में 5% povidone आयोडीन के साथ ऑपरेटिव आंख राख।
- 5 मिनट के बाद, बाँझ धुंध का उपयोग कर बंद povidone आयोडीन बाती, और 0.9% बाँझ खारा समाधान के साथ आंख धोने। बाँझ खारा की नियमित रूप से आवेदन के साथ संज्ञाहरण के दौरान नम नजर रखें।
- आंख के चारों ओर एक toroidal चुंबक रखें।
- एक 33 जी beveled सुई का उपयोग 30 मिलीग्राम / पूर्वकाल कक्ष में हांक संतुलित नमक समाधान (HbSS) में 8 माइक्रोन चुंबकीय microspheres के निष्फल गामा विकिरण की मिलीलीटर, युक्त समाधान के 25 μl इंजेक्षन।
- माला तैयार करने के लिए, तो अंतिम 30 मिलीग्राम / एमएल समाधान करने से पहले, 1 मिलीलीटर HBSS के साथ 5 मिनट के लिए 10,000 XG पर 3 बार centrifuging, फिर से निलंबित कर धो लें। भर बाँझ शर्तों को बनाए रखें।
- इंजेक्शन के लिए, आईरिस आघात के जोखिम को कम करने के लिए, आईरिस के लिए सुई डालने से बचने के लिए सावधान रहना होगा। इस के समांतर रूप में, कॉर्निया की सतह के लिए स्पर्शरेखा सुई orientating से रोका जा सकता हैसंभव के रूप में आईरिस। यह भी इंजेक्शन साइट से मनका नुकसान को कम करने में मदद मिलेगी।
नोट: IOP को ऊपर उठाने के लिए महत्वपूर्ण है जो iridocorneal कोण, चारों ओर एक भी वितरण सुनिश्चित करने के लिए एक तीव्र दर से मोती इंजेक्षन। इसके अतिरिक्त, दुकान मोती, सुइयों और चुंबकीय के छल्ले अलग से मोती सिरिंज में लोड और इंजेक्षन करने के लिए उन्हें मुश्किल बना समूहों के रूप में नहीं है, इसलिए है कि और सुई चुम्बकीय नहीं बन जाता है।
- मोती घरनदार meshwork से जलीय जल निकासी में बाधा iridocorneal कोण में बसा है यह सुनिश्चित करने के लिए 1 मिनट के बाद इंजेक्शन के लिए जगह में सुई छोड़ दें। थोड़ा कोण मोती के बाद सुई शुरू में IOP में क्षणिक बढ़ जाती है कम करने के लिए, जलीय में से कुछ रिसाव अनुमति देने के लिए तय हो चुका है। सर्जरी के अंत में पहली फॉस्फेट बफर खारा (पीबीएस) के साथ सुई के माध्यम से निकलवाने, फिर, आसुत जल के द्वारा पीछा 70% इथेनॉल, अलग प्रक्रियाओं में सुई के निरंतर उपयोग सुनिश्चित करने के लिए। वैकल्पिक रूप से, एक का उपयोग कर सकता हैसही लाइन और सिरिंज संयोजन उपलब्ध है अगर डिस्पोजेबल सुई। वैकल्पिक: सुई उनके उपयोग को लम्बा करने के लिए एक beveller का उपयोग कर बढ़ाई जा सकती है।
- इस चरण में यदि आवश्यक हो तो कम, चुंबक हटाने, और अधूरा कवरेज के क्षेत्रों में मोती आकर्षित करने के लिए इसका इस्तेमाल करते हैं।
- मोती iridocorneal कोण में अच्छी तरह से व्यवस्थित सुनिश्चित करने के लिए एक और आगे 10 मिनट के बाद इंजेक्शन के लिए आंख के आसपास जगह में चुंबक छोड़ दें।
- 0.25 मिलीग्राम / किग्रा atipemezole हाइड्रोक्लोराइड का उपयोग कर उल्टा संज्ञाहरण।
- संक्रमण को रोकने के लिए topically उदाहरण gentamycin या Terramycin के लिए chloramphenicol, या अन्य एंटीबायोटिक मलहम, प्रशासन और analgesia के लिए 0.5% proparacaine हाइड्रोक्लोराइड। वे आंदोलन हासिल है, जब तक एक गर्मी की चटाई पर ठीक करने के लिए जानवरों को छोड़ दो वसूली पूर्ण होने तक तो इस तरह के एक खाद्य पूरक या सिक्त नियमित आहार के रूप में अतिरिक्त पोषण, के साथ एक गर्म बॉक्स और आपूर्ति के लिए स्थानांतरण। प्रणालीगत या स्थानीय एनलजेसिया सर्जरी के बाद दर्द 24 घंटा के लक्षण प्रदर्शित जानवरों को दी जानी चाहिए। Thes के हैंई लक्षण इलाज के बावजूद जारी रहती है, पशुओं के लिए नम्रता से मारी गईं जाना चाहिए।
- एक unoperated नियंत्रण के रूप में प्रतिपक्षी आंख का प्रयोग करें।
- मनका प्रशासन के बाद हर 2-3 दिनों IOP नाप लो, और हर 2-3 दिनों उसके बाद चूहे आँख 9 में उपयोग के लिए calibrated एक पलटाव टनमीटर इस्तेमाल करते हैं।
- 1) IOP 5 एमएमएचजी द्वारा contralateral नियंत्रण दबाव से ऊपर उठाया है, और अगर 2) 60 एमएमएचजी से अधिक नहीं है: अध्ययन में आंखों सहित के लिए मापदंड हो सकता है।
- (आमतौर पर एक सप्ताह के बाद इंजेक्शन द्वारा) आधारभूत करने के लिए दबाव रिटर्न अध्ययन में शामिल नहीं किया जाना चाहिए जहां आंखें, लेकिन यह अगर वांछित उच्च IOP विकसित करने में विफल है कि आंखों में फिर से इंजेक्षन मोतियों के लिए संभव है।
- प्रयोग के अंत में सीओ 2 asphyxiation द्वारा जानवरों euthanize।
- आँखें और ऑप्टिक नसों काटना, और रात भर आगे ऊतकीय विश्लेषण के लिए 4% paraformaldehyde (पीएफए) में तय कर लो।
2. TUNEL के एस का प्रयोग रेटिना न्यूरॉन क्षति का आकलनTaining
- निर्माता के निर्देशों के अनुसार, टर्मिनल deoxynucleotidyl ट्रांस्फ़्रेज़ की मध्यस्थता dUTP निक लेबलिंग (TUNEL के) परख retinasuse पूरे माउंट में apoptotic कोशिकाओं यों।
- फॉस्फेट में 0.3% ट्राइटन X-100 में 3 एक्स 5 मिनट के लिए बफर खारा (टी पीबीएस) धोने, नेत्र कप से रेटिना काटना।
- 2 घंटे के लिए 3% टी पीबीएस में ऊतक permeabilize।
- 37 डिग्री सेल्सियस पर 1 घंटे के लिए TUNEL के प्रतिक्रिया समाधान में ऊष्मायन से पहले, 10 मिनट के लिए संतुलन बफर में retinas के पूर्व संतुलित करना।
- 0.3% टी पीबीएस 5 माइक्रोन DAPI युक्त में कुल्ला, 0.3% टी पीबीएस में 3 एक्स 5 मिनट के लिए ऊतक को धो लें, और बढ़ते मीडिया में फ्लैट माउंट।
- TUNEL के सकारात्मक नाभिक 20X बढ़ाई नाड़ीग्रन्थि सेल परत के माध्यम से 10 माइक्रोन Z ढेर लेने के लिए एक confocal खुर्दबीन का उपयोग यों। पूरे moun प्रति 12 छवियों की कुल दे रही है, रेटिना के दूर परिधि में मध्य परिधि में, ऑप्टिक तंत्रिका के करीब स्थलों पर, चार पंखुड़ियों से प्रत्येक पर तीन छवियों ले लो, औरटी, लगभग 7000 कोशिकाओं के नमूने। रूपात्मक मापदंड neuronal कोशिकाओं से गैर-न्यूरोनल (एन्दोथेलिअल और glial) कोशिकाओं भेदभाव।
- उपचार समूहों के लिए केवल DAPI चैनल, और मुखौटा जांचकर्ताओं का उपयोग कर इमेजिंग के लिए चुनिंदा क्षेत्रों।
3. Toluidine ब्लू धुंधला का उपयोग ऑप्टिक तंत्रिका क्षति का आकलन
- रातोंरात 4 डिग्री सेल्सियस पर Karnovsky के समाधान में ऑप्टिक नसों को ठीक करें।
- 1% (डब्ल्यू / वी) आज़मियम tetroxide में 2 घंटे के लिए नमूनों को समझो और फिर 100% इथेनॉल में निर्जलीकरण।
- 30 मिनट के लिए propylene ऑक्साइड में ऑप्टिक नसों को सेते हैं, और propylene ऑक्साइड के 50:50 मिश्रण में जगह: araldite रातोंरात।
- रातोंरात 60 डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन द्वारा पीछा 100% araldite करने के लिए इस समाधान, बदलें।
- कट semithin वर्गों (0.75 मिमी मोटी) और प्रकाश माइक्रोस्कोपी द्वारा परीक्षा से पहले 50% इथेनॉल में 1% toluidine नीले / बोरेक्स (टीबी) के साथ दाग।
4. सांख्यिकीय विश्लेषण
- सांख्यिकीय एना बाहर ले जाने के लिएएक उपयुक्त आँकड़े सॉफ्टवेयर पैकेज का उपयोग कर lyses। न्यूमैन-Keul की पोस्ट-हॉक परीक्षण के साथ एक दो तरह एनोवा IOP समय के साथ परिवर्तन के लिए सांख्यिकीय महत्व की गणना करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है।
- कम से कम 0.05 की एक पी मूल्य महत्वपूर्ण माना जा सकता है।
Representative Results
Iridocorneal कोण में चुंबकीय मोतियों इंजेक्शन लगातार पहली बार बिंदु, 3 दिनों के बाद इंजेक्शन पर आसानी से नमूदार था जो दबाव में एक लम्बी और मजबूत वृद्धि (चित्रा 1), प्रेरित किया। इसके अलावा, दबाव में वृद्धि के प्रयोग की अवधि भर में बनाए रखा गया था, और हमारे समय के पाठ्यक्रम 18 दिनों में बाद इंजेक्शन समाप्त हो गया है, हालांकि दूसरों के दबाव लंबी अवधि 3 बनी रहती है कि सूचना दी है। मतलब IOP नियंत्रण के लिए प्रयोग की पूरी लंबाई पर औसतन, गैर मनका इंजेक्शन आँखों मनका इंजेक्शन आंखों के लिए 40.5 ± 2.8 एमएमएचजी (पी <0.001) के साथ तुलना में 19.7 ± 0.3 एमएमएचजी था। इसके अतिरिक्त, शिखर IOP 49.9 ± 2.3 एमएमएचजी को 22.8 ± 0.3 एमएमएचजी से वृद्धि हुई है।
IOP में ऊंचाई रेटिना नाड़ीग्रन्थि कोशिकाओं की मौत हो जाती है कि क्या यह निर्धारित करने के लिए, हम (चित्रा 2) अनुप्रस्थ ऑप्टिक तंत्रिका वर्गों पर TUNEL के रेटिना पर धुंधला हो जाना, और प्रोटोकॉल का प्रदर्शन किया। रेटिना में हम बुलंद IOP साथ मनका इंजेक्शन आँखों में TUNEL के धुंधला (2A चित्रा) में वृद्धि मनाया। (; पी <0.05 चित्रा 2B) apoptotic नाभिक की संख्या उच्च रक्तचाप से ग्रस्त retinas में 24.5 ± 0.5 कोशिकाओं को, contralateral नियंत्रण में 1.6 ± 0.5 कोशिकाओं से, लगभग 15 गुना बढ़ गई। इसके अलावा, आँखों में है जिसमें चुंबकीय मोतियों इंजेक्शन थे लेकिन दबाव (कारण iridocorneal कोण का अधूरा रुकावट की संभावना) में वृद्धि नहीं था, TUNEL के पॉजिटिव कोशिकाओं की संख्या uninjected नियंत्रण (पी> 0.05) के उन लोगों से काफी अलग नहीं थे। इस कोशिका मृत्यु चुंबकीय microspheres की प्रत्यक्ष विषाक्तता की वजह से नहीं दबाव बढ़ जाती है, से संबंधित था कि पता चलता है। अंत में, हम मोतियाबिंद मॉडल में ऑप्टिक तंत्रिका विकृति की जांच की, और इन सेलुलर प्रक्रियाओं (चित्रा -2) का अध: पतन का संकेत है, axons की कई में toluidine नीले रंग के संचय को देखा।
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पूर्वकाल कक्ष में चुंबकीय microspheres की चित्रा 1. चुंबकीय microspheres का उपयोग कर intraocular दबाव की ऊंचाई। इंजेक्शन contralateral नियंत्रण, गैर इंजेक्शन आँखों की तुलना में intraocular दबाव (IOP) में एक मजबूत, महत्वपूर्ण वृद्धि प्रेरित किया। वाई अक्ष इकाइयों = पारे के मिलीमीटर (एमएमएचजी)। Data = ± SEM के मतलब है। * = पी <0.001;। एन = 12. यह आंकड़ा Foxton एट अल, हूँ से संशोधित किया गया है। जे Pathol 182 (4):। 1379-1390।
नाड़ीग्रन्थि सेल परत (GCL) में neuronal मौत प्रेरित iridocorneal कोण में चुंबकीय microspheres की इंजेक्शन द्वारा IOP के 2. ऊंचाई चित्रा। (ए) नियंत्रण (बाएं) और मोतियाबिंद TUNEL के (ग्रीन द्वारा apoptotic नाभिक के लिए दाग (दाएं) आँखों से retinas के प्रतिनिधि छवियों;IOP गुलाब के रूप में apoptotic नाभिक की संख्या में वृद्धि हुई है का संकेत सफेद तीर) और DAPI (नीला),। (बी) GCL में TUNEL के सकारात्मक कोशिकाओं की मात्रा का ठहराव, बुलंद IOP (मध्य) के साथ आंखों, की तुलना में काफी अधिक apoptotic कोशिकाओं पड़ा दिखा रहा है कि नियंत्रण (बाएं)। इसके विपरीत, मनका इंजेक्शन आंखों में दबाव, TUNEL के धुंधला करने में कोई उल्लेखनीय वृद्धि मनाया गया (दाएं) वृद्धि नहीं था, जहां। Data = ± SEM के मतलब है। * = पी <0.05; एन = 7-8 (सी) प्रतिनिधि ऑप्टिक तंत्रिका धुंधला की छवियों, मोतियाबिंद (दाएं) से क्षतिग्रस्त axons में toluidine नीले संचय में वृद्धि (काला तीर) का प्रदर्शन है, लेकिन नियंत्रण नहीं आँखें (बाएं)।। स्केल सलाखों 50 माइक्रोन =। यह आंकड़ा Foxton एट अल से संशोधित किया गया है। हूँ। जे Pathol 182 (4):। 1379-1390।
Discussion
यहाँ हम आंख की पूर्वकाल कक्ष में चुंबकीय microspheres के इंजेक्शन लगाने के द्वारा, चूहे में बुलंद IOP उत्प्रेरण के लिए एक विधि प्रदर्शित करता है। इस विधि को बाहर ले जाने के लिए आसान है, और छोटी सी शल्य चिकित्सा विशेषज्ञता की आवश्यकता है, या अभ्यास और शोधन के घंटे। इसके अलावा, प्रक्रिया प्रभावी है; शायद ही कभी दबाव में एक मजबूत, मजबूत वृद्धि (लगभग 10% reinjection दर) को प्रेरित करने के मोतियों की एक इंजेक्शन से भी अधिक की आवश्यकता होती है। इस IOP उठाया बनाए रखने के लिए कई प्रक्रियाओं की आवश्यकता कर सकते हैं जो 11 मॉडल, या लेजर फोटोकोगुलेशन प्रोटोकॉल 6, काठिन्य ऐसी तकनीकी रूप से चुनौतीपूर्ण episceral नस के रूप में मौजूदा inducible तरीकों, एक से अधिक लाभ प्रदान कर सकता है।
हालांकि सफल होने के लिए विधि के लिए आदेश में, उठाए जाने की जरूरत है कि कुछ छोटे महत्वपूर्ण कदम उठाए हैं। सबसे पहले यह iridocorneal कोण में मोती आकर्षित करने के लिए एक toroidal के आकार का चुंबक का उपयोग करने के लिए उपयोगी है। यह कदम मूल प्रोटोकॉल, wher के एक संशोधन हैई मोती पूर्वकाल कक्ष में इंजेक्शन, और फिर आंख तीन के आसपास मुक्तहस्त चले गए थे। एक toroidal चुंबक का उपयोग कर microspheres के न्यूनतम मैनुअल पुनर्वितरण की आवश्यकता होती है, कोण चारों ओर समान रूप से समझौता करना चाहिए कि इसका मतलब है। बहुत धीमी गति से और मोती मुख्य रूप से अधूरा कवरेज, और संभवतः कोई दबाव वृद्धि करने के लिए अग्रणी कोण के एक तरफ जमा करेंगे - दूसरे, इंजेक्शन की दर तेजी से होना चाहिए। हालांकि आम तौर पर बोल रहा हूँ, विधि उपयोगकर्ता आसानी से इस तरह शायद IOP पदोन्नति की डिग्री को बदलने के लिए प्रयास करने के लिए, माइक्रोस्फीयर कणों के आकार या मात्रा बदलती के रूप में प्रोटोकॉल के लिए संशोधन, कर सकता है कि काफी स्पष्ट है।
हालांकि, विधि का एक संभावित वापसी एक हम मनाया मामलों के बारे में 5-10% में 60 एमएमएचजी से ऊपर पहुंच गया है, जो उच्च रक्तचाप, की हद पर उनका नियंत्रण नहीं है कि है। IOP में अत्यधिक बढ़ जाता है रेटिना के ऊतकों को बहुत ही विनाशकारी हो सकता है, और तंत्र और जैव का अध्ययन कर सकते हैंकोशिका मृत्यु की सना हुआ चुनौतीपूर्ण। हालांकि, विधि औषधीय 12 चालाकी से किया जा सकता है, जो रेटिना और ऑप्टिक तंत्रिका, दोनों में एक सुसंगत न्यूरोनल विकृति पैदा करता है। इस मोतियाबिंद के इलाज के लिए उपन्यास चिकित्सा विज्ञान के विकास के लिए मॉडल आकर्षक बना सकता है। मोती iridocorneal कोण में निर्देशित कर रहे हैं, क्योंकि इसके साथ ही, इस रेटिना या ऑप्टिक डिस्क का जीना इमेजिंग के लिए मुफ्त दृश्य अक्ष छोड़ देता है। हम इस मॉडल को अनुकूलित और माउस सहित अन्य प्रजातियों में भविष्य के अनुप्रयोगों के लिए इस्तेमाल किया जाएगा आशा करते हैं कि।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 250 - 300g female Brown Norway ex-breeder rats | Harlan UK | 203 | |
| Tonolab Rebound Tonometer | Tiolat | TV02 | |
| Ketaset (ketamine) | Fort Dodge Animal health | BN1000118 | 37.5 mg/kg |
| Domitor (medetomidine hydrochloride) | Orion Pharma | 140-999 | 0.25 mg/kg |
| Povidone iodine | Ecolab | BN4369LE10 | 5% in H2O |
| Minim's Saline Solution | Bausch and Lomb | PL00033/5017 | |
| Toroidal magnet | Supermagnete | R-10-07-03-N | |
| Magnetic Microspheres | Bangs Laboratories | UMC4N/9692 | |
| HBSS | Invitrogen | 14025 | |
| 33 G beveled needle | Hamilton | 7747-01 | Custom needle |
| Luer tip syringe | Hamilton | 80601 | |
| Antisedan (atipemezole hydrochloride ) | Orion Pharma | 141-003 | 0.25 mg/kg |
| Chloramphenicol ointment | Medicom | 18956-0005 | |
| TUNEL staining kit | Promega | G3250 | |
| Triton X-100 | Sigma-Aldrich | T8787 | |
| DAPI | Sigma-Aldrich | D9542 | |
| Vectashield mounting media | Vector Labs | H-1000 |
References
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