Heligmosomoides polygyrus बारीकी से बेहद प्रचलित मानव पेट का कीड़ा संक्रमण की उन जैसे लगते हैं कि शक्तिशाली immunomodulatory क्षमताओं के साथ एक murine निमेटोड है। यहाँ हम एच के लिए लंबी अवधि के रखरखाव के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन polygyrus जीवन चक्र।
Heligmosomoides polygyrus (पूर्व Nematospiroides dubius के रूप में जाना जाता है, और भी एच BAKERI के रूप में कुछ लोगों द्वारा कहा जाता है) को बारीकी से चूहों में पुराने संक्रमण की स्थापना के लिए कई immunomodulatory तंत्र को रोजगार और कहा कि एक जठरांत्र पेट का कीड़ा प्रचलित मानव पेट का कीड़ा संक्रमण से मिलता-जुलता है। एच polygyrus पेट का कीड़ा व्युत्पन्न प्रतिरक्षा विनियमन के क्षेत्र में बड़े पैमाने पर अध्ययन किया गया है और potently (सक्रिय संक्रमण और पृथक स्रावित उत्पादों के साथ दोनों) एलर्जी और औतोइम्मुिनित की प्रयोगात्मक मॉडल को दबाने के लिए पाया गया है। इस पत्र में वर्णित प्रोटोकॉल एच के प्रबंधन की रूपरेखा उनके मल त्यागने-स्रावी उत्पादों (HES) के अनुरूप L3 के लार्वा का उत्पादन, वयस्क परजीवी की वसूली, और संग्रह के लिए polygyrus जीवन चक्र।
Heligmosomoides polygyrus बारीकी से बेहद प्रचलित मानव निमेटोड परजीवी एक से संबंधित है जो एक प्राकृतिक murine जठरांत्र पेट का कीड़ा है। ऐसे Nippostrongylus brasiliensis, एच के रूप में अन्य निमेटोड मॉडल के विपरीत polygyrus लगातार यह मेजबान प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया दो को दबाने के लिए कार्यरत कई शक्तिशाली immunomodulatory तंत्र का एक सीधा परिणाम के रूप में चूहों में पुराने संक्रमण स्थापित करता है।
एच polygyrus एक प्रत्यक्ष जीवन चक्र है: संक्रामक L3 लार्वा feco-मौखिक संचरण द्वारा किया जाता है (या प्रयोगशाला स्थापित करने में मौखिक gavage द्वारा प्रशासित) कर रहे हैं, वे के रूप में आंत्र लुमेन लौटने से पहले ग्रहणी और encyst की subserosal परत को विस्थापित जिस लगभग आठ दिनों के आरंभिक संक्रमण के बाद वयस्क कीड़े। संभोग और अंडे का उत्पादन 10 दिन से होता है और यह दा से मल त्यागने-स्रावी उत्पादों की संस्कृति और संग्रह के लिए वयस्क कीड़े फसल के लिए संभव हैY 14 के बाद 3। एच polygyrus भी संक्रमित अतिसंवेदनशील चूहों 4-6, और एच के स्तर में वृद्धि में वृद्धि हुई lactobacilli साथ, खानेवाला microflora के साथ मौजूद सूचना का आदान प्रदान lactobacilli से 6 चूहों के प्रदर्शन के बाद polygyrus संक्रमण।
एच के साथ सक्रिय संक्रमण polygyrus औतोइम्मुिनित 7-10 के कई पशु मॉडल में इम्युनोपैथोलोजी के खिलाफ की रक्षा करने के लिए दिखाया गया है, 11,12 और एलर्जी 13-16 बृहदांत्रशोथ। फलस्वरूप इस परजीवी से मलोत्सर्ग-स्रावी अणुओं की क्षमता में बहुत रुचि नहीं किया गया है ("HES") विवो 17,18 में विकृति नीचे-मिलाना। दरअसल, सुरक्षात्मक प्रभाव अब 18,20 पहचान की जा रही है, जो रास्ते के माध्यम से HES उत्पादों 19 के साथ चूहों के इलाज के बाद देखा जाता है। यहाँ हम अपने स्रावित उत्पादों के विश्वसनीय Heligmosomoides polygyrus के उत्पादन और वसूली के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णनकि आगे कार्यात्मक जैव रासायनिक और प्रतिरक्षाविज्ञानी जांच की एक श्रृंखला के लिए उपयोग किया जा सकता है।
एच के जीवन चक्र एक मज़बूती से लगातार फैशन में polygyrus आय। प्राकृतिक घूस या दिन शून्य पर L3 के लार्वा की मौखिक gavage के बाद, अल्सर दिन 10 से आंत लुमेन में वयस्क कीड़े के रूप में उभर तो लार्वा moults के लिए प्रगति और, दिन 5 से ग्रहणी serosa के तहत फार्म शुरू, अंडे से मल में देखा जा सकता है 14 दिन और कणिकागुल्म दिन 21. ऊपर वर्णित (और चित्रा 6 में संक्षेप) प्रोटोकॉल से ग्रहणी serosal सतह पर दिखाई दे रहे हैं एच के उच्च throughput उत्पादन के लिए अनुमति देता है भविष्य प्रयोगात्मक और जीवन चक्र के संक्रमण के लिए व्यवहार्य L3 के लार्वा के विश्वसनीय वसूली के अलावा polygyrus निकालनेवाला-स्रावी उत्पादों (HES),।
एच polygyrus संक्रमण ओवीए या der पी 1 (घर में धूल घुन allergen के) 14 पर निर्भर अस्थमा के मॉडल में रक्षात्मक होने के लिए दिखाया गया है। इसके अलावा, airway सूजन के दमन सीडी 4 + CD25 + के साथ स्थानांतरित किया जा सकता है </suपी> विनियामक टी कोशिकाओं 14 या CD19 + CD23 हाय विनियामक बी कोशिकाओं से 24 एच, गैर अवगत polygyrus चूहों -infected। स्वरोगक्षमता, एच के मॉडल में polygyrus संक्रमण एकाधिक काठिन्य 9 की प्रयोगात्मक स्व-प्रतिरक्षित इंसेफैलोमाईलिटिस (EAE) मॉडल में दमनकारी होना दिखाया गया है, और दमन संक्रमित चूहों 24 से सीडी 4+ टी कोशिकाओं या CD19 + बी कोशिकाओं के साथ या तो स्थानांतरित किया जा सकता है।
, उत्तेजना से 25 वृक्ष के समान सेल जवाबदेही का एक) निषेध सीडी 4 की ख) शामिल: Heligmosomoides polygyrus निकालनेवाला-स्रावी उत्पादों (HES) सहित मेजबान प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया मिलाना और (चित्रा 7 में उल्लिखित) तंत्र की एक संख्या से Th2 की मध्यस्थता सूजन को दबाने + Foxp3 + विनियामक टी कोशिकाओं 18। और ग) आईएल-33 उत्पादन 20 की नाकाबंदी। एक दिलाई जब hes रक्षात्मक होने के लिए दिखाया गया हैटी संवेदीकरण या चुनौती अस्थमा 19 की ओवीए-फिटकिरी मॉडल में और भी जल्दी आईएल-33 रिहाई के दमन के माध्यम से, Alternaria निकालने allergen के 20 के साथ intranasally दिलाई है। HES की LPS के संदूषण से बचाव अक्सर भविष्य प्रतिरक्षाविज्ञानी प्रयोगों की सफलता के लिए महत्वपूर्ण है। यहाँ उल्लिखित प्रोटोकॉल में, इस को प्राप्त करने में महत्वपूर्ण कदम (2.10 देखें) और संस्कृति के पहले 24 घंटे से अलग ते समाधान सेट करने के लिए अंतिम HES तैयारी में प्रवेश नहीं करता Baermann उपकरण की मलमल बैग के भीतर निहित है कि मलबे सुनिश्चित करने के लिए कर रहे हैं (5.1 देखें)।
हाल के वर्षों में, वह अच्छी तरह से 26,27 पहचान 370 से अधिक विशिष्ट प्रोटीन के साथ प्रोटिओमिक स्तर पर बताया गया है। इसके अलावा, 4 चरण लार्वा से ते प्रोटिओमिक विश्लेषण 28 के अधीन कर दिया गया है। चल रहे काम तीन जोरदार immunogenic होने के लिए जाना जाता है HES के प्रमुख glycan घटकों, निस्र्पक भी शामिल है, और सूक्ष्म आर.एन. स्रावितकि 50-100 एनएम पुटिकाओं या exosomes (हिरन एट अल।, प्रकाशन के लिए प्रस्तुत) में समझाया जाता है। इस बेहद immunomodulatory परजीवी से, और hes के आणविक घटकों की पहचान व्यापक प्रोटिओमिक डेटा के साथ ते के संग्रह के लिए प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य प्रोटोकॉल की स्थापना के साथ, मंच अब पहचान और एच से व्यक्तिगत अणुओं के चिकित्सीय परीक्षण के लिए सेट किया गया है मेजबान प्रतिरक्षा प्रणाली पर महत्वपूर्ण प्रभाव मध्यस्थता कर सकते हैं कि polygyrus।
The authors have nothing to disclose.
The authors are funded by the Wellcome Trust through the Edinburgh Clinical Academic Track (C.J.C.J.) and Programme Grant (Y.H., and R.M.M.) and Fellowship (J.R.G) funding, the BBSRC (G.C.), the American Asthma Foundation (E.R., H.J.McS. and R.M.M.), Asthma UK (H.J.McS.) and the Rainin Foundation (D.J.S. and R.M.M.).
Material Name | Company | Catalogue Number | Comments |
Amicon concentrator | Millipore | 5112 | Model 8050 50 ml http://www.emdmillipore.com/INTL/en/product/Stirred-Cell-Model-8050,-50%C2%A0mL,MM _NF-5122 |
Hanks’ buffered salt solution | Sigma | H9394 | 500 ml http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/h9394?lang=en®ion=GB |
Penicillin streptomycin | Invitrogen | 15070-063 | 100 ml http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/15070063 |
L-glutamine | Invitrogen | 25030-081 | 200 MM 100ml https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/25030081?ICID=search-25030081 |
Activated charcoal | Merck | 1.09624.0500 | 18-35 mesh http://www.merckmillipore.com/GB/en/product/Charcoal-activated,MDA_CHEM-109624 |
Glucose solution | Sigma | G8769 | 100 ml 45% solution http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/g8769?lang=en®ion=GB |
Falcon tubes | Sarstedt | 62.547.254 | 50 ml http://www.scribd.com/doc/124320105/Sarstedt-Falcon |
T25 Flasks | Sigma | CLS430639 | 25cm vented flask http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/cls430639?lang=en®ion=GB |
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Gentamicin | Gibco | 15710-049 | 100 ml http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/15710072 |
Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 | Gibco | 11875093 | 500 ml; without L-glutamine http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/11875093 |