परिसंचारी microRNAs हाल ही में विभिन्न प्रकार के कैंसर और अन्य बीमारियों के लिए होनहार और उपन्यास बायोमार्कर के रूप में उभरा है। इस लेख का लक्ष्य तीन अलग अलग जांच आधारित वास्तविक समय पीसीआर प्लेटफार्मों और यों और microRNAs परिसंचारी की बहुतायत निर्धारित करने के लिए उपलब्ध हैं कि तरीकों पर चर्चा करने के लिए है।
यह एक सटीक और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य विश्लेषण प्रदान करता है कि सबसे ज्यादा संवेदनशील तरीकों का पता लगाने में से एक है, क्योंकि जांच के आधार पर मात्रात्मक पीसीआर (qPCR), प्रतिलेख बहुतायत को मापने के लिए एक इष्ट विधि है। जांच-आधारित रसायन शास्त्र अन्य (डाई-आधारित) chemistries की तुलना में कम से कम पृष्ठभूमि प्रतिदीप्ति प्रदान करता है। वर्तमान में, प्रतिलेख बहुतायत quantitate करने के लिए उपयोग की जांच-आधारित रसायन शास्त्र उपलब्ध कई प्लेटफार्मों रहे हैं। एक 96 अच्छी तरह से थाली में qPCR हालांकि 96 नमूने या miRNAs की केवल एक अधिकतम एक भी रन में परीक्षण किया जा सकता है सबसे नियमित तौर पर इस्तेमाल किया विधि है। नमूनों की एक बड़ी संख्या / miRNAs विश्लेषण किया जा करने के लिए कर रहे हैं तो यह समय लेने वाली और थकाऊ है। ऐसे में microfluidics (जैसे TaqMan ऐरे कार्ड) और nanofluidics सरणियों (जैसे OpenArray) की पेशकश आसानी के रूप में उच्च throughput जांच-आधारित प्लेटफॉर्म reproducibly और कुशलता से एक कम समय में नमूनों की एक बड़ी संख्या में कई microRNAs की बहुतायत का पता लगाने के लिए। यहाँ, हम प्रयोगात्मक सेटअप एक का प्रदर्शनएन डी throughput के बढ़ते स्तर की पेशकश जांच आधारित रसायन शास्त्र और तीन अलग अलग प्लेटफार्मों (96 अच्छी तरह से थाली, microfluidics और nanofluidics सरणियों) का उपयोग सीरम या प्लाज्मा EDTA के नमूने से miRNA के quantitation के लिए प्रोटोकॉल।
MicroRNAs (miRNAs) जीन अभिव्यक्ति 1-3 के नियामकों के रूप में कार्य, ~ 22 न्यूक्लियोटाइड गैर-कोडिंग (नेकां) RNAs हैं। पशुओं में ज्यादातर miRNAs जीन अभिव्यक्ति 2-4 की नकारात्मक विनियमन की ओर जाता है, जो 3 'UTR से, लक्षित कर, एक mRNA के साथ दृश्य-विशिष्ट आधार बाँधना के माध्यम से कार्य करते हैं। यह आमतौर पर mRNA के अनुवाद के निषेध के माध्यम से या राइबोसोमल ड्रॉप बंद से उत्पन्न होती है। संचलन में miRNAs जैसे मधुमेह 5-7, डिम्बग्रंथि 8, प्रोस्टेट 9 और स्तन कैंसर 10,11, हेपेटाइटिस बी 12 और अन्य autoimmune रोग के रूप में 13 रोगों की एक किस्म के लिए अनुसंधान और नैदानिक क्षेत्रों में उपन्यास बायोमार्कर होना दिखाया गया है। रिसर्च और अधिक सुलभ और 9,11-15 कम आक्रामक है जो मानव प्लाज्मा और सीरम नमूनों से प्रचलन में है, साथ ही विभिन्न कोशिकाओं या ऊतकों में प्रचुर मात्रा में miRNAs की पहचान करने के लिए आयोजित किया गया है।
MiRNA मात्रा का ठहराव के विभिन्न तरीकों ई गया हैइस तरह के मानक 96 अच्छी तरह से थाली मंच 4,12,16-18, microfluidics कार्ड मंच 12,18-23 और nanofluidics सरणी मंच 17,24 के रूप में कई प्लेटफार्मों का उपयोग करते हुए stablished। मात्रात्मक वास्तविक समय पीसीआर (qPCR) एकाधिक (dye- या जांच-आधारित) chemistries का उपयोग कर टेप के रिश्तेदार या निरपेक्ष संख्या को मापने की क्षमता प्रदान करता है। जांच के आधार पर वास्तविक समय पीसीआर रसायन शास्त्र एक एकल प्रतिलिपि प्रतिलिपि पता लगाने के लिए कम पृष्ठभूमि प्रतिदीप्ति और उच्च संवेदनशीलता के लाभ प्रदान करता है। यह अपेक्षाकृत बढ़ाता और miRNA अभिव्यक्ति 25 का निर्धारण करने के लिए यह एक इष्ट विधि है, जिससे, प्रभावी उपयोग करने के लिए सरल और अत्यधिक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य खर्च कर रहा है। प्रतिलेखन (आरटी) और qPCR 4,26,27 रिवर्स: जांच आधारित qPCR के विधि आम तौर पर दो कदम शामिल है। स्टेम पाश आरटी प्राइमर एक परिपक्व या प्राथमिक miRNA के अणु को संकरित और पूरक (ग) डीएनए में बदल जाती है जहां आरटी है। सीडीएनए उत्पाद की मात्रा तो miRNA के विशिष्ट पीसीआर प्राइमरों का उपयोग किया जाता है26-28। जांच के आधार पर qPCR के सिद्धांत fluorescently टैग जांच की hydrolysis शामिल है जो वास्तविक समय में पूरक किनारा विस्तार, का पता लगाने पर आधारित है। ये जांच एक फ्लोरोसेंट रिपोर्टर और झल्लाहट (प्रतिदीप्ति प्रतिध्वनि ऊर्जा हस्तांतरण) की अनुमति के लिए सिर्फ अलग कर रहे हैं कि एक पेय शामिल करने के लिए तैयार कर रहे हैं। प्रतिदीप्ति रिपोर्टर (emitter) से उत्सर्जन की जांच पेय अणु के करीब निकटता से छिपा हुआ है। Taq पोलीमरेज़ (पीओएल) अपस्ट्रीम प्राइमर से फैली और एक कांटा (जांच के 5 'अंत) तक पहुँच जाता है, Taq पीओएल exonuclease गतिविधि पेय से फ्लोरोसेंट emitter के एक भौतिक हदबंदी / जुदाई के लिए अग्रणी, जांच hydrolyses। प्रतिदीप्ति emitter के एक अणु का यह रिलीज डिटेक्टर द्वारा दर्ज की गई और कहा कि अच्छी तरह से / प्रतिक्रिया से प्रतिदीप्ति संकेत में एक वृद्धिशील वृद्धि के रूप में प्रस्तुत किया है। प्रतिदीप्ति में वृद्धि के लिए एक सटीक qu के लिए अनुमति देता है, उत्पन्न पीसीआर उत्पाद की राशि के लिए आनुपातिक हैप्रवर्धित लक्ष्य 26,28 के antification।
MiRNA मात्रा का ठहराव में बढ़ती मांग के साथ, उच्च throughput प्रौद्योगिकियों के लिए मध्यम नमूनों की एक बड़ी संख्या के समय की एक छोटी राशि में संसाधित करने की अनुमति देने के लिए विकसित किया गया है। TaqMan कम घनत्व सरणी (TLDA) एक प्लेट पर विश्लेषण miRNAs की संख्या में वृद्धि की पेशकश की जांच के आधार पर qPCR के रसायन विज्ञान पर आधारित एक मध्यम throughput के अभिनव microfluidic डिजाइन है। TLDA सीडीएनए synthesize करने के लिए उपयोग किया जाता है कि आर टी-प्राइमरों के एक पूर्वनिर्धारित पूल का उपयोग शामिल है। ये cDNAs तो qPCR के 22,26,29 के प्रयोग से कई miRNAs की अभिव्यक्ति का निर्धारण करने के लिए एक स्वनिर्धारित 384 अच्छी तरह से सूक्ष्म fluidic कार्ड में काता जाता है। कार्ड के प्रत्येक अच्छी तरह इसलिए एकल TLDA कार्ड 26 में संसाधित किया जा सकता 384 प्रतिक्रियाओं अप करने के लिए, विशिष्ट miRNA (ओं) को बढ़ाना प्राइमरों और जांच सूख शामिल हैं।
nanofluidics सरणी जीन टेप का पता लगाने के लिए किया जाता है कि एक उच्च throughput मंच है <sup> 24 एक ही जांच-आधारित रसायन विज्ञान के प्रयोग से। इसके माध्यम से छेद एक स्टेनलेस स्टील स्लाइड 24 पर 3072 की एक सरणी में 33 nanoliter प्रतिक्रिया मिश्रण की आसान लोड हो रहा है की सुविधा के लिए हाइड्रोफोबिक-हाइड्रोफिलिक बातचीत की पेशकश की एक मालिकाना मैट्रिक्स का इस्तेमाल करता। यह लेख सीरम / प्लाज्मा में miRNAs बढ़ाता के लिए इन तरीकों का प्रदर्शन किया और प्रदर्शन करने और इस तरह के डेटा की व्याख्या जब विचार किया जाना चाहिए कि महत्वपूर्ण कारक हैं कैसे प्रदर्शन पर केंद्रित है। खाते में ले लिया है, अपने व्यक्तिगत लाभ और सीमाएं इस लेख में चर्चा की जाएगी।
सटीक और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य परिणाम प्राप्त करने के लिए जांच-आधारित qPCR के प्रोटोकॉल के भीतर महत्वपूर्ण कदम आरटी-उत्पाद का एक ही मात्रा और एकाग्रता प्रत्येक qPCR प्रतिक्रिया में भरी हुई है) यकीन है कि एक बनाने के लिए कर रहे हैं, 2) के घटकों का सही अनुपात और संस्करणों के लिए आवश्यक qPCR प्रतिक्रिया तैयार किया है और अच्छी तरह से, 3) सही और लगातार संस्करणों प्रत्येक qPCR प्रतिक्रिया के लिए जोड़ रहे मिलाया है, और अभी भी ध्यान में रखना है, जबकि 4) प्रत्येक नमूने और प्रतिक्रिया मिश्रण की तैयारी और लोड हो रहा है, संभव के रूप में समय कम से कम राशि में पूरा हो गया है कर रहे हैं ऊपर दिए गए महत्वपूर्ण कदम पहले उल्लेख किया है।
microfluidics सरणी कार्ड उपयुक्त सेंट्रीफ्यूज और विशिष्ट बाल्टी की जरूरत है। प्रत्येक बाल्टी तीन कार्ड (लोड / खाली) को पकड़ कर सकते हैं। हमेशा एक बाल्टी के सभी 3 स्लॉट के कब्जे में हैं और बाल्टी सेंट्रीफ्यूज के विपरीत स्लॉट में इसी तरह की बाल्टी (इस बाल्टी भी खाली या पूर्ण या तो तीन कार्ड, को शामिल करना चाहिए) रखकर संतुलित है कि सुनिश्चित करते हैं। Bucke में कार्ड देते हुएटी धारक, 8 जलाशयों ऊपर की तरफ परियोजना और प्रतिक्रिया कुओं सेंट्रीफ्यूज की बाहरी दीवार का सामना करना सुनिश्चित करें। कमरे के तापमान पर 1 मिनट के लिए 331 XG पर कार्ड स्पिन। पहले स्पिन के बाद, अपकेंद्रित्र खोलने के लिए और नेत्रहीन प्रतिक्रिया मिश्रण 384 कुओं के माध्यम से तिरस्कृत किया गया है सुनिश्चित करते हैं। एक और अधिक समय के लिए एक ही सेटिंग्स पर स्पिन को दोहराएँ। बाल्टी से कार्ड निकालें और आठ जलाशयों में से प्रत्येक में प्रतिक्रिया मिश्रण का स्तर एक समान है कि सुनिश्चित करते हैं। जलाशयों में छोड़ दिया तरल खंडों में किसी भी विसंगतियों आगे उपयोग के लिए कार्ड अनुचित बनाते हैं।
आर टी-उत्पाद का एक ही एकाग्रता है, शाही सेना के एक ही इनपुट एकाग्रता प्रत्येक आरटी प्रतिक्रिया में जोड़ा जाता है। कुल शाही सेना एकाग्रता एक माइक्रो volumespectrophotometer का उपयोग कर मापा जाता है। मनाया 260/280 अनुपात प्लाज्मा / सीरम से अलग शाही सेना के लिए 1.3 के रूप में के रूप में कम हो सकता है; नीचे की ओर qPCR संबंधी प्रक्रिया या डेटा 30 उत्पन्न पर इस एक प्रभाव है प्रकट नहीं होता है। इसी तरह, के 260/280 अनुपातइस के साथ साथ परीक्षण किया शाही सेना के नमूने मनाया qPCR में कोई असामान्य प्रभाव के साथ 1.3-1.7 के बीच थे।
ऐसे biofluids से उन के रूप में कम आरएनए सामग्री के नमूने, का उपयोग कर, यह प्रसंस्करण के लिए पूर्व शाही सेना अंदाजा लगाना मुश्किल हो सकता है। हम शाही सेना अलगाव में सिंथेटिक कील-इन का उपयोग करने के साथ ही रिवर्स प्रतिलेखन चरणों की सलाह देते हैं। हमारे अनुभव, Arabidopsis thaliana miRNA के उम्मीदवारों (ATH-मीर 159a और एथलीट-मीर 172a) में हमारे अनुभव में उच्च हो सकता है, जो (जैसे सेल-मीर 39 या सेल-मीर 54) के रूप में Caenorhabditis एलिगेंस miRNAs अधिक पसंद कर रहे हैं ए से उन लोगों की तुलना अनुरूपता thaliana। इस तरह के चरण-विशिष्ट कील-इन के उपयोग के अलग अलग समय पर assayed कई नमूने भर में miRNA के डेटा को सामान्य बनाने के लिए खाते में कर सकते हैं। सीडीएनए संश्लेषण प्रतिक्रिया के लिए शाही सेना की एक निश्चित इनपुट मात्रा का प्रयोग भी 32,33 सिफारिश की है।
miRNA मात्रा का ठहराव के लिए तीन जांच आधारित प्रोटोकॉल यहाँ वर्णित अलग मात्रा की आवश्यकता होती हैकुल शाही सेना इनपुट, अलग workflows और लागत की। वर्कफ़्लोज़ के प्रत्येक miRNA लक्ष्य की संख्या और विश्लेषण किया जा करने के लिए नमूनों की संख्या के आधार पर अलग-अलग throughputs के लिए पूरा करने के लिए तैयार कर रहे हैं। बढ़ रही है throughput (384 rxn 3072 rxn 96 rxn) के साथ, प्रतिक्रिया प्रति लागत के समय की एक इकाई पर प्राप्त डेटा की मात्रा में वृद्धि के साथ कम हो जाती है। इन प्लेटफार्मों के सभी TaqMan रसायन शास्त्र उपयोग के बाद से, प्राप्त आंकड़ों की गुणवत्ता के समान होने की उम्मीद की जा सकती। TaqMan qPCR के सीरम / प्लाज्मा नमूने 9,11,27 में miRNAs की बहुतायत की पहचान के लिए एक अच्छी तरह से स्थापित विधि है। यहाँ पर चर्चा की तीन प्लेटफार्मों वही रसायन शास्त्र का हिस्सा है, प्रतिक्रिया मात्रा में कमी प्रतिलेख का पता लगाने के गतिशील रेंज में कमी (फार आरजे एट अल।, अप्रकाशित डेटा) की ओर जाता है। 96 अच्छी तरह से qPCR के प्लेटफार्म एक कम throughput, लेकिन उच्च संवेदनशीलता मंच है और हमारे विचार में, सभी की जांच के आधार पर (या आधारित डाई) पीसीआर प्लेटफार्मों के लिए "सोने के मानक '। हालांकि, इस साल मईनमूने के कई सौ या हजारों assayed और कई microRNAs के लिए किया जा रहा है अगर सबसे किफायती या कुशल मंच नहीं हो। Microfluidics (TLDA) और nanofluidics (OA) की प्लेटफार्मों एक कम समय में बड़े डेटा के अधिग्रहण की अनुमति देने के लिए बनाया गया उच्च throughput / सामग्री प्लेटफार्मों रहे हैं। बैच मतभेद TLDA कार्ड में मनाया गया है, इस एक ही बैच से TLDA कार्ड का अनुरोध द्वारा कम किया जा सकता है। कम बहुतायत miRNAs TLDA कार्ड के विभिन्न बैचों पर ही नमूना परीक्षण का उपयोग कर – जब हम TLDA मंच (चित्रा 3) के मध्य का 17% में महत्वपूर्ण भिन्नता से पता चला है कि निरीक्षण करते हैं। इसलिए हम TLDA कार्ड का उपयोग कर विश्लेषण के लिए एक ही बैच नंबर का उपयोग की सलाह देते हैं। इस बदलाव भी किसी भी संभावित लोड हो रहा है और pipetting त्रुटियों सहित तकनीकी परिवर्तनशीलता के कारण हो सकता है। हालांकि, हम TLDA ताश के पत्तों की एक ही बैच का अनुरोध / आदेश देने की सलाह देते हैं। कोई महत्वपूर्ण बैच भिन्नता OA के मंच पर मनाया गया। इस के बावजूद, TaqMan experimen आधारितताल qPCR प्लाज्मा / सीरम नमूनों में miRNAs की बहुतायत को मापने के लिए प्रस्ताव आसानी दृष्टिकोण। यहाँ पर चर्चा कम, मध्यम और उच्च throughput दृष्टिकोण एक अत्यंत कुशल, प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य है और साफ (कम पृष्ठभूमि शोर) रसायन विज्ञान का उपयोग कर नमूने और miRNAs की एक सीमा का विश्लेषण करने के लिए लचीलापन प्रदान करते हैं।
The authors have nothing to disclose.
सभी लेखकों NHMRC सीटीसी, सिडनी, किशोर मधुमेह अनुसंधान फाउंडेशन (JDRF), ऑस्ट्रेलिया के विश्वविद्यालय और रेबेका कूपर फाउंडेशन, ऑस्ट्रेलिया से बुनियादी सुविधाओं के समर्थन को स्वीकार करते हैं। इस शोध WW, RJF आह करने के लिए ऑस्ट्रेलियाई अनुसंधान परिषद (FT110100254) और JDRF, ऑस्ट्रेलिया (CRN201314) से अनुदान के माध्यम से वित्त पोषित किया गया और एम वी जे सब गीला प्रयोगशाला प्रयोग किया जाता है, ASJ डेटा विश्लेषण किया जाता है। WW के पहले मसौदे में लिखा था। आह अध्ययन की योजना बनाई है और डेटा का विश्लेषण किया। सभी लेखकों को पढ़ा है और प्रकाशन के लिए प्रस्तुत पांडुलिपि, आंकड़े और कार्यपत्रकों के अंतिम संस्करण पर सहमत हुए।
96 well-platform | |||
For Reverse transcription | |||
TaqMan MicroRNA Assays INV SM | Applied Biosystems |
4427975 | https://www.lifetechnologies.com/au/en/home/life-science/pcr/real-time-pcr/real-time-pcr-assays/mirna-ncrna-taqman-assays/single-tube-mirna-taqman-assays.html?ICID=search-4427975 The assays comes as a pack of RT primers and PCR primer. |
TaqMan MicroRNA Reverse Transcription Kit | Applied Biosystems |
4366597 or 4366596 | https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/4366597?ICID=search-4366597 or http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/4366596?ICID=search-4366596 The TaqMan MicroRNA Reverse Transcription Kit is the same kit used for reverse transcription in all the threeTaqMan platform- 96-well platform, TLDA and OpenArray. |
For qPCR run on a 96-well platform | |||
2X TaqMan Fast Universal PCR Master Mix, no AmpErase UNG | Applied Biosystems |
4367846 | https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/4367846?ICID=search-4367846 The 2X TaqMan Fast Universal PCR Master Mix is used for qPCR on the two TaqMan platforms-96-well platform and TLDA. |
MicroAmp Optical Adhesive Film | Applied Biosystems | 4311971 | https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/4311971?ICID=search-product |
MicroAmp Fast Optical 96-Well Reaction Plate, 0.1 mL | Applied Biosystems | 4346907 | https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/4346907?ICID=search-product |
Microfluidics platform (TLDA) | |||
For Reverse transcription | |||
Refer to 96-well platform TaqMan MicroRNA Reverse Transcription Kit kit (4366597 or 4366596) (as shown above). | |||
Megaplex RT Primers, Human Pool A v2.1 | Applied Biosystems |
4399966 | https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/4399966?ICID=search-4399966 The Megaplex RT Primers, Human Pool A v2.1 is used for RT on the two TaqMan platforms- TLDA and OpenArray. |
Megaplex RT Primers, Human Pool B v3.0 | Applied Biosystems |
4444281 | https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/4444281?ICID=search-4444281 The Megaplex RT Primers, Human Pool B v3.0 is used for RT on the two TaqMan platforms- TLDA and OpenArray. |
OR | OR | ||
Megaplex Primer Pools, Human Pools Set v3.0 | Applied Biosystems |
4444750 | http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/4444750?ICID=search-4444750 The Megaplex Primer Pools, Human Pools Set v3.0 is used for RT on the two TaqMan platforms- TLDA and OpenArray. |
For Pre-amplification | |||
TaqMan PreAmp Master Mix | Applied Biosystems |
4391128 or 4488593 | https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/4391128?ICID=search-4391128 or http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/4488593 The TaqMan PreAmp Master Mix is used for pre-amplification of qPCR on the two TaqMan platforms- TLDA and OpenArray. |
Megaplex PreAmp Primers, Human Pool B v3.0 | Applied Biosystems |
4444303 | https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/4444303?ICID=search-4444303 The Megaplex PreAmp Primers, Human Pool B v3.0 is used for pre-amplification of qPCR on the two TaqMan platforms- TLDA and OpenArray. |
Megaplex PreAmp Primers, Human Pool A v2.1 | Applied Biosystems |
4399233 | https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/4399233?ICID=search-4399233 The Megaplex PreAmp Primers, Human Pool A v2.1 is used for pre-amplification of qPCR on the two TaqMan platforms- TLDA and OpenArray. |
1X TE Buffer (100 mL) | Invitrogen | 12090-015 | https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/12090015?ICID=search-product The 1X TE Buffer is used for pre-amplification of qPCR on the two TaqMan platforms- TLDA and OpenArray. |
To load and run the 384 well microfluidics (TLDA) card | |||
TaqMan Array Human MicroRNA A+B Cards Set v3.0 | Applied Biosystems | 4444913 | https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/4444913 |
Nanofluidics platform (OpenArray) | |||
For Reverse transcription | |||
Refer to 96-well platform TaqMan MicroRNA Reverse Transcription Kit kit (4366597 or 4366596) (as shown above). | |||
For Pre-amplification | |||
Refer to TLDA pre-amplification reagents (as shown above) | |||
To load and run the slides | |||
TaqMan OpenArray Human MicroRNA Panel, QuantStudio 12K Flex (1 panel) | Applied Biosystems |
4470187 | https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/4470187?ICID=search-4470187 |
QuantStudio 12K Flex OpenArray Accessories Kit | Applied Biosystems |
4469576 | https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/4469576?ICID=search-4469576 |
OpenArray 384-well Sample Plates | Applied Biosystems |
4406947 | https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/4406947?ICID=search-4406947 |
TaqMan OpenArray Real-Time PCR Master Mix | Applied Biosystems |
4462159 | https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/4462159?ICID=search-4462159 |
OpenArray AccuFill System Tips | Applied Biosystems |
4457246 | https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/4457246?ICID=search-4457246 |
Others | |||
Nuclease-Free Water | Qiagen | 129117 | http://www.qiagen.com/products/catalog/lab-essentials-and-accessories/nuclease-free-water |