Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Medicine

הפגנה של דגם פצע עור העכברוש איסכמי

doi: 10.3791/52637 Published: April 1, 2015
* These authors contributed equally

Summary

החולדה, בשל הגודל, הזמינות, וההתנהגות לא הצייתנית שלה, נוצלה כמודל מחקר במשך שנים רבות. המטרה של פרוטוקול זה היא לנצל את החולדה כמודל ריפוי עור פצע איסכמי לספק תובנה חשובה הפתופיזיולוגיה של פצעים כרוניים.

Abstract

הנטייה לפצעים כרוניים בבני אדם עולה עם הזדקנות, תנאי מחלה כמו סוכרת ותפקוד לב וכלי דם פגום, ולחץ תמידי עקב חוסר תנועה. מודלים של בעלי החיים פותחו ניסיון שכדי לחקות את התנאים האלה לצורך קידום ההבנה של המורכבות של פצעים כרוניים שלנו. המודל המתואר כאן הוא מודל דש עור איסכמי חולדה המאפשר הפחתה ממושכת של זרימת דם וכתוצאה מכך פצעים שהפכו איסכמי ודומה פנוטיפ כרוני פצע (כלי דם מופחתים, דלקת מוגברת וסגירת פצעים מתעכבת). הוא מורכב מדש גב bipedicled עם 2 פצעים איסכמיים ממוקמים במרכז ו -2 פצעים אינם איסכמי לרוחב הדש כפקדים. בנוסף רומן למודל דש עור איסכמי זה הוא המיקום של גיליון סיליקון מתחת לדש שמתפקד כמחסום וסד למניעת revascularization ולהפחית התכווצות כלרפא את הפצעים. למרותדיון של שימוש בחולדות לריפוי פצע לימודים בשל ההבדלים אנטומיים ופיסיולוגיים שונים לגמרי שלהם בהשוואה לבני אדם (כלומר, הנוכחות של שריר carnosus מִרפָּד, תוחלת חיים קצרה, מספר הגדל של זקיקי שיער, וביכולתם לרפא את הפצעים נגועים) השינויים מועסקים במודל זה הופכים אותו לאלטרנטיבה יקרה לדגמי דש עור איסכמי שפותחו בעבר.

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

פיתוח תרופות יעיל ותרופות ריפוי פצע אחרות דורשים מתאימים בדגמי vivo, למרות בעיות ידועות בתרגום ממצאים במודלים של בעלי חיים לטיפולים אנושיים 1. להלן תיאור של פרוטוקול מפורט לשימוש במודל עכברים של ריפוי עור איסכמי פצע לחקור מנגנונים שעוד יותר את ההבנה של ריפוי פצע פתולוגי. מיני החולדה, לעתים קרובות מועסק בשל הזמינות רחבה, גודלה והטבע הצייתן משמש לפצע לימודי ריפוי כפי שהוא גדול מספיק כדי לספק שטח עור מתאים לפציעת incisional וexcisional, הדמיה ורקמות אוסף 2. עם זאת יש לקחת בחשבון זהיר שהעור של עכברים ובני אדם הוא שונים מבחינה אנטומית, עם חולדות שהופנו לבעלי חיים רופפים עור כ. מאפיין מובהק זה מאפשר להתכווצות פצע, ולא epithelialization לתרום באופן משמעותי לסגירת העור של העכברים wounds 2. בנוסף, הנוכחות של שריר carnosus מִרפָּד תת-עורי בחולדות, תורמת לריפוי על ידי שתי היווצרות ההתכווצות וקולגן 3,4. הבחנות אנטומיים חשובות מאוד אלה נחשבו בפיתוח מודל פצע עור איסכמי חולדה ושינויים ספציפיים יושמו כדי להקטין התכווצות פצע ולהפחית את ההשפעה של השריר carnosus מִרפָּד 5.

בכיבי רגל סוכרתיים, כיבים ברגלי ורידים, וכיבי לחץ, ריפוי מתעכב ופצעים אלה נחשבים כרוניים. הפצעים מתאפיינים בדלקת מופרזת, המונעת את הפצע מהתקדמות לשלבים הבאים של תיקון פצע 6. אחד הגורמים העיקריים בהתפתחות של פצע כרוני הוא איסכמיה המקומית רקמה (זרימת דם מופחתת) 5 תורמת לחוסר היכולת לנקות את הדלקת. בזמן שבמהלכו מודל זה היה מפותח ותקף (ב2003-4), לא היו מודלים של בעלי חיים סטנדרטיים שיכול לספק מספיק רקמה לבדיקת אינדוקציה של אנגיוגנזה במיטת הפצע, שלב מפתח בריפוי פצע נורמלי והמוטיבציה לפיתוח מודל זה 5. שאמרו, המודל שהוצג כאן הוא שינוי של מודל פצע איסכמי המתואר במקור על ידי שוורץ et al. 7 ולאחר מכן השתמש בצורה שונה על ידי et al חן. 8

במודל פצע איסכמי שונה, שינויים נעשו כדי לעקוף את המאפיינים אנטומיים שהוזכרו לעיל של העכברוש שיובילו לריפוי על ידי התכווצות ולא epithelialization: (1) שני פצעי excisional עובי מלאים נוצרים בתוך דש עור הגב וbipedicled שריר carnosus מִרפָּד מוסר מהפצע למיטה על ידי לנתח בדיוק מעל fascia השריר. (2) יש הדש עצמו ממדים צרים יותר, על מנת להבטיח שאספקת דם היא אקראית ופצעים הממוקמים בנקודת האמצע של tהוא הדש הוא איסכמי. (3) גיליון סיליקון מוחדר מתחת לדש, מניעת readherence וreperfusion של הדש מהרקמה בסיסית. התכווצות פצע מוגבלת (לא בוטל) על ידי עיגון או תפירת הדש לגיליון סיליקון 5.

לאחרונה המודל נעשה שימוש במחקרים שנעו בין השפעות לחץ חמצן על פצע איסכמי ריפוי 9,10 לריפוי פצע איסכמי בצעיר לעומת חולדות בגילי 11 והוכיח להיות מודל אמין של איסכמיה רקמות הממושכת. הממדים של הדש bipedicled גם הותאמו לזני עכברוש שונים, כוללים ספראג Dawley (ארוך 11 סנטימטרים על ידי 2 סנטימטרים רוחב) וחולדות F344 (ארוך 10.5 סנטימטר על 3.0-3.5 סנטימטרים רוחב) ומינים אחרים, ובכלל זה חזירים 12 ועכברים 13,14. סרט הווידאו הזה מנצל את מתח החולדה טהור F344 בהפגנה של מודל פצע עור איסכמי.

אישור לכל נהלים בבעלי החיים המוצגים להלן היה להשיגed מאוניברסיטת הדרום פלורידה הוועדה של טיפול בבעלי חיים (IACUC) ולציית לכל הדרישות של צער בעלי החיים החוק והמדריך לטיפול ושימוש בחי מעבדה.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

הערה: אישור לכל נהלים בבעלי החיים המוצגים להלן התקבל מאוניברסיטת הדרום פלורידה הוועדה של טיפול בבעלי חיים (IACUC) ולציית לכל הדרישות של צער בעלי החיים החוק והמדריך לטיפול ושימוש בחי מעבדה.

1. הכנת גיליונות סיליקון ומכשירי ניתוח

  1. רצועות חתוכות (10.5 סנטימטרים x 3.0 סנטימטרים) של אי-חיזקו 0.01 עובי, יריעות סיליקון כיתה רפואית ולעקר באמצעות החיטוי.
  2. לנקות ולחטא מכשירי ניתוח (מספריים, מלקחיים ווילאות או מגבות כדי ליצור שדה סטרילי במהלך ניתוח) מתאימים.

2. בעלי חיים ניסויי

  1. השתמש בזכר בוגר או חולדות נקבות במשקל בטווח 250-350 g מתקבל ממגדל מסחרי. אם חולדות בגילים מנוצלות, הם צריכים להיות ≥350 g כדי להבטיח את הישרדות טובה יותר לאחר ניתוח. לפני תחילתו של כל ניסויים להסתגל כל בעלי החיים לפחות7 ימים בתנאים סטנדרטיים של מחזור אור-חושך 12 שעות עם כרצונך מזון ומים.

3. הרדמה, שיכוך כאבים לפני ניתוח והכנת Operative

  1. לגרום הרדמה כללית על ידי שימוש בisoflurane 3% -4% באמצעות תא אינדוקציה ולשמור (באמצעות שימוש בחרטום) בשעה 1% -2% עם O 2 במהלך הכנת עור וניתוחים. לפקח על עומק ההרדמה על ידי התבוננות בשיעור ועומק הנשימה, קמצוץ interdigital או רפלקס מצמוץ palpebral.
    הערה: בשלב זה, משחה וטרינר יכולה להיות ממוקמת על העיניים כדי למנוע יובש ואילו בעלי החיים נמצאים תחת הרדמה.
  2. בשלט רחוק מיקום כירורגים באזור סטרילי, למקם את העכברוש במצב שכיבה ולגלח את dorsum עם קוצץ מבסיס הצוואר ומטה כ -11 סנטימטרים. סטנסיל עם סמן קבוע, את קווי המתאר ל3.0 סנטימטרים x 10.5 סנטימטרים הדש (ראו איור 1 א).
  3. הזז את העכבר לsurgica נקי, המיועדאזור l המצויד בכרית חימום אושרה ווילאות כירורגי סטרילי או מגבות. להזריק 5 מ"ג / קילוגרם Ketoprofen תת עורי לפני החתכים הניתוחיים הראשונים לטיפול בכאב. נוזלים נוספים (מלוח) יכולים להינתן (עד 5 סמ"ק) תת עורי במידת הצורך.
  4. הכן את העור עוד יותר על ידי השטיפה ראשונה עם 70% אלכוהול איזופרופיל והשני עם chlorhexidine 0.2%, ולאחר מכן להחיל סדינים מעוקרים כדי ליצור שדה סטרילי. גם 10% povidone- יוד (פולידין) ניתן להשתמש.
    הערה: אנטיביוטיקה (אמפיצילין ב 15 מ"ג / קילוגרם) יכולה להיות מנוהלת תת עורי, אבל אם טכניקות ספטית טובות משמשות היא אינה נדרשת.

4. יצירת פצעי excisional וBipedicled דש

  1. שימוש בכלי סטרילי, חד פעמי 6 מ"מ ביופסיה, ליצור שני פצעים "איסכמי" עגולים במרכז אזור הדש המיועד (איור 1). העומק של הפצע צריך להיות עד ל( לא דרך) fascia הבסיסי של קארנו מִרפָּדשריר sus (הבלעה 1B איור).
  2. שימוש במלקחיים להרים את העור באמצע המתווה הפצע שנוצרה על ידי הביופסיה ולאחר מכן להשתמש במספרי איריס (עם טיפים מעוגלים) שיחתכו את החתיכה העגולה של רקמה (כולל שריר carnosus מִרפָּד). התוצאה תהיה בעובי מלא פצע עם fascia כבסיס של הפצע.
    הערה: הרקמה נכרתה (תקעי פצע) ניתן להצמיד קפואה בחנקן נוזלי או קבוע ב 10% O נאגר פורמלין / N לעיבוד מאוחר יותר כשליטה, עור רגיל.
  3. צור דש bipedicled על ידי ביצוע חתכים עם אזמל סטרילי בכל צד של הפצעים איסכמיים לאורך הקווים מצוירים מראש (איור 1 ג), כי הם 10.5 סנטימטר אורך ו -3.0 סנטימטר זה מזה. עומק החתכים צריך להיות עד לשרירי paraspinous. בעזרת המספריים איריס, להפריד fascia carnosus מִרפָּד משרירי paraspinous, להיות זהיר, כדי לשמור על fascia שלם בשם "הבסיס" של האגרופים מ"מ 6 (Figure 1D).
  4. קח 1 גיליון סיליקון מראש לחתוך סטרילית ולמקם אותו בין fascia carnosus מִרפָּד ושרירי paraspinous (איור 1E) להבטיח שהגיליון לא יתקפל או לקפל. שימוש בתפרים שחורים, שאינם נספגים (גודל 4.0) לסגור את שני החתכים על ידי עיגון גיליון סיליקון לעור עם לפחות 8 תפרים נקטעו בכל צד, לאורכו של הדש (איור 1F ו1G).
  5. שימוש בכלי סטרילי, חד פעמי ביופסיה, ליצור שני פצעים פנימיים שליטה "אינם איסכמי" (עד fascia הקדמי של שריר carnosus מִרפָּד) 1 סנטימטר לרוחב הפצעים איסכמיים בכל צד של הדש (איור 1G).
  6. הנח שליט מתחת לפצעים ולקחת את תמונות דיגיטליות למטרות מדידת פצע (ראה איור 3 א). בשלב זה, את זרימת דם (זלוף) יכולה להיות במעקב על ידי שימוש בליזר דופלר או מניפולציות אחרות (מיקום תרופתי מקומי) שבוצעו.
  7. החל דבק נוזלי אושר שתי גולגולת וזנב לפצעים וסרט שקוף הלבשה כדי לשמור על סביבת הפצע לח ונקי (סטרילי). הלבשה נוספת עשויה להיות ממוקמת בסוף הזנב של הדש כדי למנוע את החיה מהסרת תפרי הזנב ביותר.

נהלים 5. לאחר ניתוח

  1. הנח בעלי חיים בכלובים (שוכנו בנפרד) מצוידים במתקני האכלה רדודים כדי למנוע מהאתר כירורגית מתחכך המזין. לא צריכים להשאיר בעלי חיים ללא השגחה או חזרו לחברה של בעלי חיים אחרים, עד שהם יחזרו להכרה מספיק כדי לשמור על כיבה sternal ולהציג תנועה תכליתית. מחצלות חימום צריכה להיות ממוקמות מתחת מחצית מהכלוב עד 2 ימים במהלך התאוששות.
  2. לטיפול בכאב לאחר הניתוח, לנהל Ketoprofen (5 מ"ג / קילוגרם) תת עורי לבעלי חיים בוקר ו1x ליום הבא שללאחר ניתוח עד 48 שעות. גם לבעלי חיים צריכים להיות במעקב יומי לסימנים מתמשכים של כאב, ירידה במשקל או זיהומים באתר ניתוח.

6. מדידות פצע לאחר שינויים וגימור

  1. מדדו פצעים איסכמיים ולא-איסכמי לעתים קרובות בהרדמה כללית באמצעות isoflurane ב -3% -4% באמצעות תא אינדוקציה ומתוחזק (דרך חרטום) בשעה 1% -2% עם O 2 כמו בשלב 3.1.
  2. הסר את האיפור בעדינות כדי לא למשוך את הדבק מהעור. בשלב זה תמונות דיגיטליות נוספות נלקחות למדידות פצע, טיפול מקומי מוחל מחדש, הדמיה דופלר הלייזר (LDI) או מניפולציות אחרות המבוצעות בהתאם לצרכיה של החוקר.
  3. החל דבק והלבשה נקייה ולאפשר לבעלי החיים להתאושש כמו בשלב 5.1.

7. פצע איסוף והמתת חסד

  1. איסכמי קציר ופצעים שאינם איסכמי (בימי החוקר ימצאו לנכון) ואילו בעלי החיים הוא בהרדמה כללית באמצעות isoflurane ב -3% -4% באמצעות indתא uction ומתוחזק (דרך חרטום) בשעה 1% -2% עם O 2 כמו בשלב 3.1.
  2. באמצעות אזמל, לבצע כריתה בצורת ריבוע סביב הפצע לכלול כמה רקמות בריאות סביב הפצע. הנח את הכריתה ל1.5 מיליליטר הצמד צינור כובע ולהצמיד הקפאה בחנקן נוזלי (חנות ב -80 ° C) לצורך הניתוח מולקולרי עתיד או לדגור ב 10% O נאגר פורמלין / N ב RT לעיבוד היסטולוגית.
    הערה: ניתן גם לחתוך חתכים בפצע במחצית לספק יותר דגימות לבדיקה.
  3. לאחר הסרת רקמת פצע, להרדימו בשיטה שאושרה של CO 2 שאיפה.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

פרוטוקול מודל ריפוי עכברוש איסכמי פצע צריך לקחת כ 20 דקות לכל בעל חיים אם ביצע ביעילות. לפני היישום של הלבשת המודל אמור להופיע כפי שהוא מיוצג באיור 1G. זה יהיה חשוב כדי לוודא שהדש ופצעי bipedicled בי הם איסכמי. מתח חמצן תת עורי (PscO 2) ברמה של הפצעים כבר נמדד במהלך האימות של מודל זה 5 על ידי הצבת אלקטרודה polarographic ברקמה התת עורית בין שני פצעי איסכמי. 2 ערכי PscO היו בטווח ביקורתי איסכמי (20-40 מ"מ כספית). מאז הפיתוח של מודל זה השימוש בLDI יש יותר ויותר נעשה שימוש כדי למדוד זלוף דם וטכניקה זו תיתן מידע הולם על מצב איסכמי של דש bipedicled.

בקצרה, טכניקת LDI מבוססת על הפליטה של ​​קרן של אור הלייזר מתבצע על ידי בדיקה סיבים אופטיים. Measuriעומק ng תלוי במאפייני הרקמה ואורך הגל של אור הלייזר. בעור רגיל, מכשיר עם בדיקה עם הפרדה סטנדרטית סיבים (0.25 מ"מ) וליזר באורך גל של 780 ננומטר, מדידת עומק יהיה בסדר הגודל של 0.5-1 מ"מ. תמונת דופלר נציג (משמאל) לדש גב bipedicled מראה את שני שבאזור מטופל (משמאל של קו התפר) ואזור-perfused שאינו (מימין של קו התפר) מוצגת באיור 2.

בנוסף למדידת מתח חמצן תת-עורי, אפשר גם להשתמש בחיישנים או סמנים ביוכימיים נפוצים לקבוע, כי הפצעים בדש הם איסכמי. PECAM-1 או CD31 בדרך כלל נמצא על תאי האנדותל של כלי דם הוא סמן להיווצרות כלי חדש בפצעים. סמנים שונים למיני חמצן תגובתי, מצאו להיות גבוהים בפצעים איסכמיים, זמינים מסחרי לעתים קרובות ניאון מתויג כנוגדנים או אינדיקטורים סופראוקסיד כגון dihydroethidium (DHE).

Wounמדידות שטח d כדי לעקוב אחר סגירת פצע יכולות להיות מיוצגות במגוון דרכים. בדרך כלל, אזור פצע הוא לכמת מתמונות דיגיטליות של הפצעים במהלך הריפוי 11 הזמן באמצעות נוסחא כגון (r אזור הביופסיה 6 מ"מ = (π) 2 = 3.14 x 9 = 28.26 מ"מ 2 ביום 0) עם הנתונים מוצג כאחוז מאזור הפצע הראשוני או שטח פן פצע ביום מסוים ניתן לכמת כמו בet al גולד. 5 לצורך הפגנה זו, התקדמות סגירת פצע מיוצגת כאחוז מאזור הפצע הראשוני על קורס של 28 ימים זמן . באמצעות ImageJ התוכנה החופשי, תמונה דיגיטלית נפתחת וקנה המידה מוגדר באמצעות 10 מ"מ על השליט בתמונה (איור 3 א). למתוח קו 10 מ"מ האורך משווה ל מספר הפיקסלים (הבלעה באיור 3 א) הניתן להמרה ליחידה של בחירה, במקרה זה (מ"מ). בשלב הבא, את היקפו של הפצע הוא לייחס בתמונה (3B איור) ופעם אחת את פקודת המידה היא נתון, האזור מוצג במ"מ (הבלעה באיור 3). הנתונים אז יכולים להיות מוצגים כאחוז מאזור פצע הראשוני על ציר y וימים על ציר X (איור 3 ג).

איור 1
תמונות באיור 1. המתארות את שלבים במהלך ניתוח ליצירת פצעים איסכמיים, דש bipedicled, ופצעים שאינם איסכמי. הסרת שיער בטרום-ניתוחית והכנת עור של עכברים מורדמים מקבלים מנה טרום ניתוחית של משכך כאבים תת עורי (Ketoprofen) לניהול כאב (). (B והבלעה) פצעי איסכמי נוצרים בתוך סמני חתך 2 על ידי שימוש באגרוף סטרילי כלי ביופסיה. חתכים (C) עשויים לאורך הקווים המסומנים למטה לשריר paraspinous ו( ד ') את דש bipedicled עולהכדי להראות את ההפרדה של הדש (עם fascia מִרפָּד carnosus שלם) משיכבת השריר להלן. (E) גיליון של סיליקון סטרילי (חץ שחור) ממוקם בין fascia של carnosus מִרפָּד ושרירי paraspinous. (F) תפרים שחורים, שאינם נספגים (גודל 4.0) לסגור את שני החתכים על ידי עיגון גיליון סיליקון לעור עם מספר תפרים קטע לאורכו של הדש (G). שני פצעים שאינם איסכמי (חיצים שחורים) נוצרים באמצעות רוחב כלי סטרילי ביופסיה לדש bipedicled בשני הצדדים. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

איור 2
תמונת איור 2. לייזר נציג דופלר של זלוף הדם לאחר ניתוח. המחבת תקיןאל מראה תמונה שחורה-לבן של 2 פצעים איסכמי (חיצים שחורים) באמצע דש bipedicled ו1 פצע שאינו איסכמי (חץ שחור יחיד) לרוחב לדש. קו התפר כבר מסומן בלבן. הפנל מהשמאל מראה את תמונת דופלר של אותו האזור המתואר בפנל הימני. אזורים עם צבעים בהירים יותר הם perfused יותר מאשר באזורים עם כחול כהה. הבדל בזלוף בין האזור אינו איסכמי (משמאל) ואזור איסכמי (מימין) זה ברור וניתן בעקבות לאורך כל אורכו של קו התפר. שים לב שהפצעים בשני הצדדים מופיעים בהירים, כמו תאי דם עדיין קיימים במידה מסוימת. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

איור 3
איור 3. מדידת פצע וייצוג נתונים. () תמונות דיגיטליות המתארות מדידת אזור פצע באמצעות תוכנה (ImageJ), המרה של פיקסלים ל( חיצים שחורים) (מ"מ) ואת השיטה כדי ללכוד היקף מדויק (חץ שחור יחיד) של הפצע (B). נתונים סטטיסטיים (ממוצע ± SEM של אזורי פצע ביום נתון) אז יכול להיות מוצגים כאחוז משטח הראשוני פצע (יום 0) על ציר y וימים על ציר X (C). מתנות גרף קו נתונים נותחו באמצעות ANOVA 2-way עם מבחן ההשוואות מרובה של Sidak, *** מייצג (P = 0.0004) הגבוה באופן משמעותי מאלו שאינם איסכמי באותה נקודה (יום 10) זמן, N = 8 פצעים לכל קבוצה. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

ריפוי פצעים בחולדות היה לעתים קרובות הנושא לוויכוח בשל יכולתם לרפא את הפצעים נגועים ושיעור גבוה של שונות interanimal 5. אחת מהמטרות המקוריות של המודל במהלך פיתוחו היה כדי להקטין וריאציה זו. שינויים ברוחב של הדש, צמצום מספר הפצעים במיקום ספציפי (התמקד בדש עם מיקום קרניו-הזנב עקבי) והכנסה של גיליון סיליקון השיג מטרה זו. ריפוי פצע על ידי התכווצות גם צומצם וריפוי על ידי epithelialization, כמו אצל בני אדם, היא התוצאה הנמדדת. התאמה של המודל לזן של עכברים שונה, כלומר, F344, הוכיחה גם מוצלחת ומשחזרת את התואר של איסכמיה נצפתה באמצעות חולדות ספראג Dawley. בסך הכל הטכניקות הניתוחיות (ביופסיה, תפירה וכריתת פצע) הנדרשות למודל זה נרכשות בקלות על ידי רוב התלמידים וטכנאים בעלי ניסיון כירורגית מוגבל.

_content "> כדי להשיג עקביות עם המודל הזה בעת ביצוע ניתוחים מרובים, נמצא כי חשוב ליצור פצעים איסכמיים לפני ההעלאה של הדש למיקום גיליון סיליקון 5. בנוסף, לא חבטות דרך fascia carnosus מִרפָּד הוא קריטי ל לספק פצע קיימא למיטה להישאר על סיליקון. סיליקון פועל לא רק כדי למנוע צמיחה מחודשת של כלי דם, אלא גם כ" סד "שמעודד את הפצע מחדש epithelialization. היישום של הדבק ורטבים כדי למנוע זיהום ולשמור על סביבה לחה ל ריפוי פצע הוא גם חשוב. בחירת מוצר ניתן מה עדיפה או בשימוש במתקן בעלי החיים של החוקר. ואולם, אין זה נדיר עבור חלק מבעלי החיים כדי להיות מסוגל להסיר חבישתם, לא משנה איזה סוג של דבק / שילוב הלבשה הוא בשימוש.

דש bipedicled צריך להישאר קיימא לאורך מהלך זמן של ריפוי שהוא מקורב ly 28 ימים, תלוי בזן עכברים ועמיתים נלווים אחרים הנמצאים. לעיתים נדירות, מורסות יכולות להיווצר בדש (במיוחד תפרים ליד) וseromas עלול להיווצר תחת הכנף. נוזל יכול להיות מנוקז ואנטיביוטיקה מנוהלת במידת צורך. עם זאת, אם את הדש מאבד את הכדאיות והופך נימקי מומלצת שהחיה שלא תשמש עוד. כריתת פצע לאנליזה ביוכימית עושה להציג את ההשתנות עקב (1) כמה רקמות נורמליות שיש לשמור על תמיכה (2) הבחירה של הומוגניזציה והכנת רקמה לבידודה של RNA, DNA או חלבון ו- (3) 5,10 השתנות interanimal טבועה, 11. אפשר לשקול נקודה האחרונה זו הגבלה למודל ונמצא כי הקטנת הגודל של הדש (<2.0 סנטימטרים) או טראומה יכולה לגרום לנימק דש, מצביע על כך ששינויים קלים בגורמים כגון רמות טמפרטורה או מתח, עשויים גם להוביל לוריאציה ביוכימית לזיהוי בין דגימות פצע מעכברוש אחד לעוד 5.

ve_content "> לסיכום, מודל זה, עם דש אורך, bipedicled החל 2.0-3.0 סנטימטר וברוחב יריעת סיליקון במיקום אסטרטגי, הוא מודל אמין של איסכמיה רקמות הממושכת. ברגע שהמשתמש הוא מיומן בשימוש בטכניקות ליצירה פצע איסכמי עקבי, הם צריכים להיות מסוגלים להתאים אותה לגילים נוספים ומינים של מכרסמים (עכברים כלולים). ניתן לטפל בפצעי excisional topically, או טיפולים מערכתיים מנוצלים כדי לחקור את המנגנון (ים) מעורב בהיווצרות פצע כרונית נוסף, החריף תגובות דלקתיות, אנגיוגנזה חריגה וסגירת פצעים מתעכבת.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Sil-Tec medical grade sheeting Technical Products Inc. 500-3 nonreinforced, 0.01 inches in thickness
Mini Iris scissors, 8 cm, curved, SS World Precision Instruments #503671
Ethilon Nylon Sutures Ethicon 1964G black, size 4.0, PC-3 16 mm needles (3/8 circle)
Laser Doppler Imager Moor Instruments moorLDI2-IR Standard blood flow imager: http://us.moor.co.uk/product/moorldi2-laser-doppler-imager/8
ImageJ NIH free download http://rsb.info.nih.gov/ij/
Mastisol Henry Schein Cat # 7289210 Fisher Scientific NC9774929
Tegaderm Medical Specialties  3M1624W Fisher Scientific NC9922128

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Ansell, D. M., Holden, K. A., Hardman, M. J. Animal models of wound repair: Are they cutting it. Experimental dermatology. 21, (8), 581-585 (2012).
  2. Dorsett-Martin, W. A. Rat models of skin wound healing: a review. Wound repair and regeneration : official publication of the Wound Healing Society [and] the European Tissue Repair Society. 12, (6), 591-599 (2003).
  3. Davidson, J. M. Animal models for wound repair. Arch Dermatol Res. 290, (S1-11), (1998).
  4. Finn, G., Magnus, S. A., Tonny, K. Models for use in wound healing research: A survey focusing on in vitro and in vivo adult soft tissue). Wound Repair and Regeneration. 8, (2000).
  5. Gould, L. J., Leong, M., Sonstein, J., Wilson, S. Optimization and validation of an ischemic wound model. Wound repair and regeneration : official publication of the Wound Healing Society [and] the European Tissue Repair Society. 13, (6), 576-582 (2004).
  6. Loots, M. A., et al. Differences in cellular infiltrate and extracellular matrix of chronic diabetic and venous ulcers versus acute wounds. The Journal of investigative dermatology. 111, (5), 850-857 (1998).
  7. Schwartz, D. A., Lindblad, W. J., Rees, R. R. Altered collagen metabolism and delayed healing in a novel model of ischemic wounds. Wound Repair Regen. 3, (2), 204-212 (1995).
  8. Chen, C., et al. Molecular and mechanistic validation of delayed healing rat wounds as a model for human chronic wounds. Wound Repair and Regeneration. 7, (1999).
  9. Zhang, Q., Chang, Q., Cox, R. A., Gong, X., Gould, L. J. Hyperbaric oxygen attenuates apoptosis and decreases inflammation in an ischemic wound model. The Journal of investigative dermatology. 128, (8), 2102-2112 (2008).
  10. Zhang, Q., Gould, L. J. Hyperbaric oxygen reduces matrix metalloproteinases in ischemic wounds through a redox-dependent mechanism. The Journal of investigative dermatology. 134, (1), 237-246 (2013).
  11. Moor, A. N., et al. Consequences of age on ischemic wound healing in rats: altered antioxidant activity and delayed wound closure. Age (Dordrecht, Netherlands). 36, (2), 733-748 (2014).
  12. Roy, S., et al. Characterization of a preclinical model of chronic ischemic wound). Physiological genomics. 37, (3), 211-224 (2009).
  13. Biswas, S., et al. Hypoxia inducible microRNA 210 attenuates keratinocyte proliferation and impairs closure in a murine model of ischemic wounds. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107, (15), 6976-6981 (2010).
  14. Winocour, S., Vorstenbosch, J., Trzeciak, A., Lessard, L., Philip, A. CD109, a novel TGF-beta antagonist, decreases fibrotic responses in a hypoxic wound model. Exp Dermatol. 23, (7), 475-479 (2014).
הפגנה של דגם פצע עור העכברוש איסכמי
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Trujillo, A. N., Kesl, S. L., Sherwood, J., Wu, M., Gould, L. J. Demonstration of the Rat Ischemic Skin Wound Model. J. Vis. Exp. (98), e52637, doi:10.3791/52637 (2015).More

Trujillo, A. N., Kesl, S. L., Sherwood, J., Wu, M., Gould, L. J. Demonstration of the Rat Ischemic Skin Wound Model. J. Vis. Exp. (98), e52637, doi:10.3791/52637 (2015).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter