Summary
الفئران، نظرا لحجمها، وتوافر، وسلوكها سهلة الانقياد بدلا من ذلك، وقد استخدمت كنموذج البحث لسنوات عديدة. والهدف من هذا البروتوكول هو الاستفادة من الفئران باعتبارها الجلد الجرح نموذج الشفاء الدماغية لتوفير معلومات قيمة حول الفيزيولوجيا المرضية من الجروح المزمنة.
Abstract
الميل للجروح المزمنة في البشر يزيد مع الشيخوخة، والحالات المرضية مثل مرض السكري ووظيفة القلب الوعائية ضعف، والضغط غير مرتاح بسبب الجمود. وقد تم تطوير نماذج حيوانية أن محاولة لتقليد هذه الظروف لغرض تعزيز فهمنا للتعقيد الجروح المزمنة. نموذج الموصوفة هنا هو فأر الجلد الدماغية نموذج رفرف الذي يسمح بتخفيض فترة طويلة من تدفق الدم مما أدى إلى الجروح التي تصبح الدماغية وتشبه النمط الظاهري المزمن الجرح (خفض الأوعية الدموية، وزيادة الالتهابات وتأخر إغلاق الجرح). وهو يتألف من رفرف الظهرية bipedicled مع 2 الجروح الدماغية وضعها مركزيا و2 الجروح غير الدماغية الوحشي للرفرف والضوابط. وثمة إضافة جديدة لهذا الدماغية نموذج رفرف الجلد هو وضع ورقة سيليكون تحت رفرف التي تعمل كحاجز وجبيرة لمنع إعادة التوعي والحد من انكماش مثل التئام الجروح. وعلى الرغم منمناقشة باستخدام الفئران لالتئام الجروح الدراسات بسبب الاختلافات التشريحية والفسيولوجية واضحة تماما وذلك مقارنة مع البشر (أي وجود العضلات السبلة العضلية، القصير العمر، وزيادة عدد بصيلات الشعر، وقدرتها على شفاء الجروح المصابة) التعديلات العاملين في هذا النموذج جعله بديلا قيما لنماذج رفرف الجلد الدماغية التي سبق وضعها.
Introduction
تطوير العقاقير الفعالة وغيرها من التئام الجروح العلاجات تتطلب المناسبة في نماذج الجسم الحي، على الرغم من المشاكل المعروفة في ترجمة النتائج في نماذج حيوانية لعلاج الإنسان 1. ما يلي هو وصف لبروتوكول مفصلة لاستخدام نموذج الفئران من الجلد الدماغية التئام الجروح للتحقيق في الآليات التي تعزز فهم المرضية التئام الجروح. أنواع الفئران، وغالبا ما يعملون، نظرا لتوافر واسعة، وحجم ويستخدم طبيعة منصاع للدراسات التئام الجروح كما أنها كبيرة بما يكفي لتوفير مساحة الجلد مناسبة للجرح الجراحي واستئصالية، والتصوير وجمع الأنسجة 2. ومع ذلك فإنه ينبغي أن تؤخذ في الاعتبار حذرا أن الجلد من الفئران والإنسان تختلف تشريحيا، مع الفئران التي أشار إليها الحيوانات فضفاضة البشرة كما. هذه سمة مميزة تسمح الجرح الانكماش، بدلا من الاندمال بتشكل النسيج الظهاري للمساهمة بشكل كبير في إغلاق الجلد الفئران ثounds 2. بالإضافة إلى ذلك، فإن وجود تحت الجلد السبلة العضلات عضلية في الفئران، ويسهم في الشفاء من قبل كل من انكماش الكولاجين وتشكيل 3،4. واعتبرت هذه الفروق التشريحية مهمة جدا في تطوير الفئران الدماغية نموذج الجرح الجلد ونفذت تعديلات محددة لخفض الجرح انكماش وتقليص نفوذ السبلة العضلية في العضلات 5.
في تقرحات القدم السكرية، وقرحة الساق الوريدية، وقرحة الضغط، تأخر الشفاء وتعتبر هذه الجروح المزمنة. وتتميز الجراح التي التهاب المفرط، والذي يمنع الجرح من التقدم إلى مراحل المقبلة من إصلاح الجرح 6. واحدة من العوامل الرئيسية في تطوير الجرح المزمن هو نقص التروية محلية الأنسجة (انخفاض تدفق الدم) 5 المساهمة في عدم القدرة على مسح الالتهاب. في الوقت الذي كان يجري تطوير هذا النموذج والتحقق من صحتها (في 2003-4)، لم تكن هناك نماذج حيوانية الموحدة التي يمكن أن توفر ما يكفي من الأنسجة لاختبار تحريض الأوعية الدموية في السرير الجرح، مرحلة أساسية خلال العادي التئام الجروح والدافع لتطوير هذا النموذج 5. ومع ذلك، فإن النموذج المقدم هنا هو تعديل للنموذج الجرح الدماغية ووصف في الأصل من قبل شوارتز وآخرون. (7) وبعد ذلك تستخدم في شكل معدل تشن وآخرون. 8
في النموذج الجرح الدماغية المعدلة، تم إجراء تغييرات للتحايل على الخصائص التشريحية المذكورة أعلاه من الفئران التي تؤدي إلى الشفاء من الانكماش بدلا من الاندمال بتشكل النسيج الظهاري: (1) يتم إنشاؤها اثنان بجروح استئصالية كاملة سمك ضمن bipedicled رفرف الجلد الظهرية و تتم إزالة العضلات عضلية السبلة من الجرح سرير من تشريح فقط فوق اللفافة العضلية. (2) رفرف نفسها له أبعاد أكثر ضيقة، وضمان أن إمدادات الدم هو عشوائي والجروح التي تقع في منتصف رانه لنقص تروية رفرف. تم إدراج (3) ورقة سيليكون تحت رفرف، ومنع readherence وضخه من رفرف من الأنسجة الكامنة وراءها. انكماش الجرح محدودة (لم يكن القضاء عليها) من خلال ترسيخ أو خياطة رفرف إلى ورقة سيليكون 5.
وقد تم مؤخرا استخدام النموذج في الدراسات التي تتراوح بين الآثار بالأكسجين تحت الضغط على الجرح الدماغية الشفاء 9،10 إلى نقص تروية التئام الجروح في الشباب الذين تتراوح أعمارهم بين 11 مقابل الفئران وثبت أن تكون نموذجا يمكن الاعتماد عليها من نقص تروية الأنسجة لفترة طويلة. كما تم تكييفها أبعاد رفرف bipedicled لسلالات الفئران مختلفة، بما في ذلك سبراغ داولي (11 سم طولا و 2 سم واسعة) والجرذان F344 (10.5 سم طولا و 3.0-3.5 سم واسعة) وغيرها من الأنواع، بما في ذلك الخنازير 12 والفئران 13،14. هذا الفيديو ويستخدم F344 سلالة الفئران الفطرية في المظاهرة من نقص تروية نموذج الجرح الجلد.
كان الموافقة على جميع الإجراءات الحيوانية الواردة أدناه حصول علىإد من جامعة جنة رعاية الحيوان جنوب ولاية فلوريدا (IACUC) والالتزام بجميع متطلبات قانون رعاية الحيوان ودليل لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
تم الحصول على الموافقة لجميع الإجراءات الحيوانية الواردة أدناه من جامعة جنة رعاية الحيوان جنوب ولاية فلوريدا (IACUC) والالتزام بجميع متطلبات قانون رعاية الحيوان ودليل لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية: ملاحظة.
1. إعداد ورقة سيليكون والأدوات الجراحية
- شرائط قبل القطع (10.5 سم × 3.0 سم) من غير عززت 0.01 سمك، سيليكون الصف الطبية والأغطية وتعقيم باستخدام الأوتوكلاف.
- تنظيف وتعقيم الأدوات الجراحية المناسبة (مقص، ملقط وستائر أو المناشف لإنشاء حقل معقمة أثناء الجراحة).
2. حيوانات التجارب
- استخدام الذكور البالغين أو إناث الفئران وزنها في نطاق 250-350 ز تم الحصول عليها من مربي التجاري. إذا تستخدم الفئران الذين تتراوح أعمارهم بين، ينبغي أن تكون ≥350 ز من أجل ضمان البقاء على قيد الحياة أفضل بعد الجراحة. قبل بداية أي تجارب تأقلم جميع الحيوانات على الأقل7 أيام في ظل ظروف قياسية من الضوء الظلام دورة 12 ساعة مع الغذاء والماء بالمال وبالشهرة أيضا الإعلانية.
3. التخدير، تسكين ما قبل الجراحة وإعداد المنطوق
- لحث التخدير العام باستخدام الأيزوفلورين في 3٪ -4٪ عن طريق غرفة الاستقراء والحفاظ على (عبر استخدام مخروط الأنف) بنسبة 1٪ -2٪ مع O 2 أثناء إعداد الجلد والجراحة. رصد عمق التخدير عن طريق الملاحظة من معدل وعمق التنفس، قرصة بين الأصابع أو الجفني المنعكس طرفة.
ملاحظة: في هذا الوقت، يمكن وضع مرهم التعليم والتدريب المهني على العيون لمنع جفاف في حين أن الحيوان هو تحت التخدير. - في منطقة نائية موقع من منطقة العمليات الجراحية المعقمة، ووضع الفئران في وضعية الانبطاح وحلق ظهر مع كليبرز من قاعدة الرقبة إلى أسفل حوالي 11 سم. مرسام مع علامة دائمة، الخطوط العريضة ل3.0 سم x 10.5 سم رفرف (انظر الشكل 1A).
- نقل الفئران إلى surgica نظيفة، والمعينمنطقة لتر مجهزة سادة التدفئة المعتمدة والستائر الجراحية المعقمة أو المناشف. حقن 5 ملغ / كغ كيتوبروفين تحت الجلد قبل أول شقوق جراحية لإدارة الألم. سوائل إضافية (المالحة) يمكن أن يعطى (تصل إلى 5 سم مكعب) تحت الجلد حسب الحاجة.
- تحضير البشرة مزيدا من ينظف أولا مع 70٪ ايزوبروبيل والثانية مع 0.2٪ الكلورهيكسيدين، ثم تطبيق الستائر العقيمة لإنشاء حقل العقيمة. ويمكن أيضا أن 10٪ بوفيدون اليود (بتدين) يمكن استخدامها.
ملاحظة: مضاد حيوي (الأمبيسلين في 15 ملغ / كلغ) يمكن أن تدار تحت الجلد، ولكن إذا تم استخدام تقنيات العقيم جيدة ليس هو مطلوب منها.
4. إنشاء الجروح استئصالية وBipedicled رفرف
- باستخدام معقمة، يمكن التخلص منها 6 مم أداة خزعة لكمة، وإنشاء اثنين دائرية الجروح "الدماغية" في وسط منطقة رفرف المعينة (الشكل 1B). يجب أن يكون عمق الجرح أسفل إلى (ليس من خلال) اللفافة الكامنة وراء carno السبلةالعضلات سوس (الشكل 1B الشكل).
- باستخدام ملقط رفع الجلد في منتصف مخطط الجرح التي أنشأتها خزعة لكمة ومن ثم استخدام مقص القزحية (مع نصائح المنحنية) لاستئصال قطعة دائرية من نسيج (بما في ذلك العضلات عضلية السبلة). سوف تكون النتيجة سمك الكامل الجرح مع لفافة كقاعدة للجرح.
ملاحظة: الأنسجة استئصاله (المقابس الجرح) يمكن المفاجئة مجمدة في النيتروجين السائل أو ثابتة في 10٪ O-مخزنة الفورمالين / N للتجهيز لاحق عن السيطرة، والجلد العادي. - إنشاء رفرف bipedicled بجعل شقوق مع مشرط معقم على كل جانب من الجروح الدماغية على طول الخطوط المرسومة مسبقا (الشكل 1C) التي هي 10.5 سم في الطول و 3.0 سم عن بعضها البعض. يجب أن يكون عمق الشقوق وصولا الى العضلات paraspinous. باستخدام مقص القزحية، فصل لفافة السبلة العضلية من العضلات paraspinous، والحرص للحفاظ على لفافة سليمة مثل "القاعدة" من مم اللكمات 6 (Figure 1D).
- خذ 1 معقمة ورقة سيليكون قبل قطع ووضعها في بين لفافة السبلة العضلية والعضلات paraspinous (الشكل 1E) التأكد من أن ورقة لا ربط حزام الأمان أو طيها. باستخدام السوداء، خيوط غير قابل للامتصاص (حجم 4.0) إغلاق كل من شقوق خلال ترسيخ ورقة سيليكون على الجلد مع لا يقل عن 8 توقف غرز على كل جانب، على طول رفرف (الشكل 1F و1G).
- باستخدام العقيمة، خزعة يمكن التخلص منها أداة لكمة، وإنشاء اثنين من السيطرة الجروح الداخلية "غير الدماغية" (وصولا الى الواجهة الأمامية للعضلة عضلية السبلة) 1 سم الوحشي على الجروح الدماغية على جانبي رفرف (الشكل 1G).
- وضع مسطرة أدناه الجروح والتقاط الصور الرقمية لأغراض قياس الجرح (انظر الشكل 3A). في هذا الوقت، وتدفق الدم (التروية) يمكن رصدها عن طريق استخدام الليزر دوبلر أو معالجات أخرى (التنسيب المخدرات الموضعية) التي يؤدونها.
- تطبيق لاصقة السائل وافق كل من الجمجمة والذيلية للالجروح وفيلم شفافة خلع الملابس للحفاظ على بيئة الجرح رطبة ونظيفة (عقيمة). ويمكن وضع لخلع الملابس إضافي في نهاية الذيلية للرفرف لمنع الحيوانات من إزالة الغرز الأكثر الذيلية.
5. إجراءات ما بعد المنطوق
- وضع الحيوانات في أقفاص (يضم منفردة) مجهزة مغذيات الضحلة وذلك لمنع موقع الجراحية من فرك ضد وحدة التغذية. لا ينبغي أن تترك الحيوانات غير المراقب أو إعادتها إلى الشركة من الحيوانات الأخرى حتى يستعيد وعيه كافية للحفاظ على الاستلقاء القصية وعرض حركة هادفة. يجب وضع الحصير التدفئة أقل من نصف القفص لمدة تصل إلى 2 أيام خلال الانتعاش.
- لإدارة الألم بعد العملية وإدارة كيتوبروفين (5 ملغ / كلغ) تحت الجلد للحيوانات الصباح و1X في اليوم التالي لمدة تصل إلى 48 ساعة بعد الجراحة. وينبغي أيضا مراقبة الحيوانات يوميا لعلامات طويلة من الألم، وفقدان الوزن أو التهابات الموقع الجراحية.
6. القياسات الجرح اللاحقة والتغييرات خلع الملابس
- قياس الجروح الدماغية وغير الدماغية في كثير من الأحيان تحت التخدير العام باستخدام الأيزوفلورين في 3٪ -4٪ عن طريق غرفة الاستقراء وحافظت (عبر مخروط الأنف) بنسبة 1٪ -2٪ مع O 2 كما في الخطوة 3.1.
- إزالة خلع الملابس بلطف حتى لا سحب لاصقة من الجلد. في هذا الوقت يتم أخذ الصور الرقمية إضافية لقياسات الجرح، والعلاجات الموضعية إعادة تطبيق، التصوير دوبلر الليزر (LDI) أو معالجات أخرى أجريت لتلائم الاحتياجات المحقق.
- تطبيق لاصق وخلع الملابس نظيفة والسماح للحيوان لاسترداد كما في الخطوة 5.1.
7. الجرح جمع والقتل الرحيم
- الدماغية الحصاد والجروح غير الدماغية (في الأيام يرى المحقق المناسب) في حين أن الحيوان هو تحت التخدير العام باستخدام الأيزوفلورين بنسبة 3٪ -4٪ عن طريق دائرة الهجرة والجنسيةغرفة uction وحافظت (عبر مخروط الأنف) بنسبة 1٪ -2٪ مع O 2 كما في الخطوة 3.1.
- باستخدام مشرط، وجعل الختان على شكل مربع حول الجرح لتشمل بعض الأنسجة السليمة حول الجرح. وضع الختان إلى 1.5 مل المفاجئة أنبوب سقف والمفاجئة التجميد في النيتروجين السائل (مخزن في -80 ° C) للتحليل الجزيئي في المستقبل أو احتضان في 10٪ من الفورمالين مخزنة O / N في RT لمعالجة النسيجي.
ملاحظة: يمكن أيضا قطع الختان الجرح في نصف لتوفير مزيد من العينات لتحليلها. - بعد إزالة الأنسجة الجروح، والموت ببطء الحيوان باستخدام أسلوب معتمد من CO 2 الاستنشاق.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
بروتوكول الفئران الدماغية الجرح نموذج الشفاء يجب أن تأخذ حوالي 20 دقيقة لكل حيوان إذا أجريت بكفاءة. قبل تطبيق خلع الملابس نموذج يجب أن تظهر ممثلة في الشكل 1G. وسيكون من المهم للتحقق من أن رفرف والجروح bipedicled هم فيه الدماغية. وقد تم قياس تحت الجلد توتر الأكسجين (PscO 2) على مستوى الجروح أثناء التحقق من الصحة لهذا النموذج 5 عن طريق وضع القطب البولاروجرافي في الأنسجة تحت الجلد بين اثنين من الجروح الدماغية. كانت PscO 2 القيم في النطاق الدماغية خطيرة (20-40 مم زئبق). منذ تطوير هذا النموذج استخدام LDI بشكل متزايد استخدمت لقياس التروية الدموية وسوف هذه التقنية تعطي معلومات كافية عن حالة الدماغية من رفرف bipedicled.
لفترة وجيزة، ويستند تقنية LDI على انبعاث شعاع من ضوء الليزر التي يحملها مسبار الألياف البصرية. وmeasuriعمق نانوغرام يعتمد على خصائص الأنسجة والطول الموجي للضوء الليزر. في الجلد الطبيعي، أداة مع التحقيق الذي تجريه مع الفصل القياسية الألياف (0.25 مم) وطول الموجة 780 نانومتر ليزر، وقياس عمق سيكون بناء على أمر من 0.5-1 ملم. وأظهرت صورة دوبلر التمثيلية (يسار) لالظهرية bipedicled رفرف تظهر كل من منطقة perfused ل(من اليسار من خط خياطة) ومنطقة غير perfused ل(يمين الخط خياطة) في الشكل رقم 2.
بالإضافة إلى قياس تحت الجلد توتر الأكسجين، ويمكن للمرء أيضا استخدام تحقيقات أو علامات الحيوية المشتركة لإثبات أن الجروح في رفرف هي الدماغية. PECAM-1 أو CD31 توجد عادة على خلايا بطانة الأوعية الدموية هو علامة للحصول على تشكيل السفن الجديدة في الجروح. علامات مختلفة لأنواع الاكسجين التفاعلية، وجدت لتكون مرتفعة في الجروح الدماغية، وتتوفر في كثير من الأحيان تجاريا الأجسام المضادة أو مؤشرات الفائق الفلورسنت الموسومة كما مثل dihydroethidium (DHE).
Wounأن تمثل قياسات منطقة التطوير لتتبع إغلاق الجرح في مجموعة متنوعة من الطرق. عادة، وكميا منطقة الجرح من الصور الرقمية من الجروح على مدار الساعة للشفاء 11 باستخدام صيغة مثل (6 ملم منطقة خزعة لكمة = (π) ص 2 = 3.14 × 9 = 28.26 مم 2 في يوم 0) مع البيانات عرض كنسبة مئوية من منطقة الجرح الأولية أو مساحة الجرح في يوم معين يمكن قياسها كميا كما هو الحال في جولد وآخرون. 5 لأغراض هذه التظاهرة، يتم تمثيل الجرح التقدم إغلاق كنسبة مئوية من منطقة الجرح الأولية على مدار الساعة من 28 يوما . باستخدام برنامج يماغيج الحرة، يتم فتح صورة رقمية ويتم تعيين نطاق باستخدام 10 ملم على المسطرة في الصورة (الشكل 3A). خط مرسوم 10 ملم في الطول يعادل العد بكسل (أقحم في الشكل 3A) التي يمكن تحويلها إلى وحدة الاختيار، في هذه الحالة (ملم). وبعد ذلك، يتم تتبع محيط الجرح على الصورة (الشكل 3B) ومرة واحدة يتم إعطاء الأمر التدبير، وتقدم المنطقة في ملم (أقحم في الشكل 3B). ويمكن بعد ذلك عرض البيانات كنسبة مئوية من منطقة الجرح الأولية على المحور الصادي وأيام على محور س (الشكل 3C).
الشكل 1. صور تصور الخطوات أثناء الجراحة لخلق الجروح الدماغية، ورفرف bipedicled، والجروح غير الدماغية. (A) لإزالة الشعر ما قبل الجراحة وإعداد الجلد من الفئران تخدير تلقي جرعة ما قبل الجراحي للمسكن (كيتوبروفين) تحت الجلد لإدارة الألم. (B وأقحم) يتم إنشاء الجروح الدماغية داخل علامات شق 2 من خلال الاستفادة من لكمة معقمة أداة الخزعة. مصنوعة (C) الشقوق على طول خطوط ملحوظ وصولا الى العضلات paraspinous و (D) يتم رفع رفرف bipedicledلإظهار فصل رفرف (مع السبلة العضلية فآسيا سليمة) من طبقة العضلات أدناه. (E) ورقة من السيليكون معقم (السهم الأسود) يتم وضعها بين لفافة من العضلية السبلة والعضلات paraspinous. (F) سوداء، خيوط غير قابل للامتصاص (حجم 4.0) أغلق كل من شقوق خلال ترسيخ ورقة سيليكون على الجلد مع عدة غرز توقف على طول رفرف (G). يتم إنشاء اثنين من الجروح غير الدماغية (الأسهم السوداء) باستخدام معقم خزعة لكمة أداة الأفقي إلى رفرف bipedicled على كلا الجانبين. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 2. الليزر الممثل صورة دوبلر من نضح الدم بعد الجراحة. وعموم الصحيحشرم يظهر صورة بالأبيض والأسود من 2 الجروح الدماغية (الأسهم السوداء) في منتصف رفرف bipedicled و1 الجرح غير الدماغية (السهم الأسود واحد) الجانبية لرفرف. وقد تم تسليط الضوء خياطة خط باللون الأبيض. وتظهر لوحة ترك صورة دوبلر من نفس المنطقة صورت في اللوحة اليمنى. المناطق مع ألوان أكثر إشراقا وأكثر perfused لمن المناطق ذات اللون الأزرق الداكن. هذا الاختلاف في نضح بين منطقة غير الدماغية (يسار) والمنطقة الدماغية (يمين) واضح ويمكن اتباعها على طول خط خياطة. لاحظ أن الجروح في كلا الجانبين تظهر مشرق، وخلايا الدم لا تزال موجودة إلى حد ما. يرجى النقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 3. قياس الجرح وتمثيل البيانات. (A) والصور الرقمية تصور الجرح قياس المجال باستخدام برنامج (يماغيج)، وتحويل بكسل إلى (مم) (الأسهم السوداء) وطريقة لالتقاط محيط دقيقة (السهم الأسود واحد) من الجرح (B). البيانات الإحصائية (يعني ± SEM من المناطق الجرح في يوم معين) ويمكن بعد ذلك أن يعرض كنسبة مئوية من منطقة الجرح الأولية (يوم 0) على المحور الصادي وأيام على محور س (C). تحليل البيانات ويعرض خط الرسم البياني باستخدام 2-طريقة ANOVA مع مقارنات متعددة اختبار Sidak، و*** يمثل أعلى بكثير (P = 0.0004) من غير الدماغية في نفس الوقت نقطة (يوم 10)، N = 8 الجروح لكل مجموعة. الرجاء الضغط هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
وكان التئام الجروح في الفئران غالبا ما تكون موضع نقاش نظرا لقدرتها على شفاء الجروح المصابة وارتفاع معدل تقلب interanimal 5. كان واحدا من الأهداف الأصلية للنموذج أثناء تطورها لتقليل هذا الاختلاف. تعديلات على عرض رفرف، والحد من عدد من الجروح مع وضع معين (تركزت على رفرف مع ثابت موقع القحف الذيلية) وإدخال ورقة سيليكون أنجزت هذا الهدف. كما تم تخفيض التئام الجروح والشفاء من الانكماش التي كتبها الاندمال بتشكل النسيج الظهاري، كما في البشر، هو نتيجة محسوبة. التكيف للنموذج إلى سلالة مختلفة من الفئران، أي F344، وقد ثبت أيضا ناجحة ويستنسخ درجة نقص التروية الملحوظ باستخدام الفئران سبراغ داولي. عموما التقنيات الجراحية (خزعة، وخياطة الجرح الختان) المطلوبة لهذا النموذج يتم الحصول عليها بسهولة من قبل معظم الطلاب والفنيين من ذوي الخبرة الجراحية محدودة.
_content "> لتحقيق الاتساق مع هذا النموذج أثناء أداء العمليات الجراحية المتعددة، فقد وجد أنه من المهم لإنشاء الجروح الدماغية قبل ارتفاع رفرف لورقة سيليكون التنسيب 5. بالإضافة إلى ذلك، وليس من خلال اللكم اللفافة السبلة العضلية أمر بالغ الأهمية ل توفير الجرح قابلة للحياة السرير لتبقى على السيليكون. ويعمل السيليكون ليس فقط لمنع إعادة نمو الأوعية الدموية ولكن أيضا بوصفها "جبيرة" التي تشجع الجرح إعادة الاندمال بتشكل النسيج الظهاري. تطبيق لاصقة وضمادات لمنع العدوى والحفاظ على بيئة رطبة ل التئام الجروح مهم أيضا. اختيار المنتج يمكن ما هو المفضل أو استخدامها في منشأة الحيوان الباحث. ومع ذلك، فإنه ليس من غير المألوف بالنسبة لبعض الحيوانات لتكون قادرة على إزالة الضمادات، وبغض النظر عن نوع من مادة لاصقة / مزيج خلع الملابس هو المستخدمة.وينبغي أن تظل رفرف bipedicled قابلة للحياة طوال دورة الوقت للشفاء وهو تقريبية لاي 28 يوما، اعتمادا على سلالة الفئران وغيرها من شارك في حالة مرضية الحالية. نادرا ما، يمكن أن تشكل خراجات في رفرف (وخاصة بالقرب من الغرز) وseromas قد تشكل تحت رفرف. السائل يمكن أن ينضب والمضادات الحيوية تدار إذا لزم الأمر. ومع ذلك، إذا رفرف يفقد الجدوى ويصبح نخرية فمن المستحسن أن هذا الحيوان لم يعد من الممكن استخدامها. الختان الجرح لتحليل الكيمياء الحيوية يفعل إدخال تقلب بسبب (1) يجب أن يتم الاحتفاظ بعض الأنسجة الطبيعية للحصول على الدعم (2) اختيار تجانس الأنسجة والتحضير لعزل RNA، DNA أو البروتين و(3) المتأصل interanimal تقلب 5،10، 11. يمكن للمرء أن ينظر في هذه النقطة الأخيرة وجود قيود على النموذج وتبين أن الحد من حجم رفرف (<2.0 سم) أو رفرف الصدمة يمكن أن يسبب نخر، مشيرا إلى أن الاختلافات الطفيفة في عوامل مثل درجة الحرارة أو الضغط المستويات، قد تؤدي أيضا لاختلاف اكتشاف كيميائيا بين العينات الجرح من الفئران واحد إلى 5 آخر.
ve_content "> وباختصار، هذا النموذج، مع طولية، رفرف bipedicled تتراوح 2،0-3،0 سم في العرض ورقة سيليكون استراتيجي، هو نموذج موثوق من نقص تروية الأنسجة لفترة طويلة. بمجرد أن يقوم المستخدم هو بارعون في استخدام التقنيات لخلق جرح الدماغية متسقة، ينبغي أن تكون قادرة على تكييفه مع الأعمار إضافية وأنواع من القوارض (الفئران وشمل). الجروح استئصالية يمكن علاجها موضعيا، أو العلاجات النظامية تستخدم لمواصلة استكشاف آلية (ق) تشارك في تشكيل الجرح المزمن، تفاقمت الاستجابات الالتهابية، الأوعية الدموية الشاذة وتأخر إغلاق الجرح.Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Sil-Tec medical grade sheeting | Technical Products Inc. | 500-3 | nonreinforced, 0.01 inches in thickness |
| Mini Iris scissors, 8 cm, curved, SS | World Precision Instruments | #503671 | |
| Ethilon Nylon Sutures | Ethicon | 1964G | black, size 4.0, PC-3 16 mm needles (3/8 circle) |
| Laser Doppler Imager | Moor Instruments | moorLDI2-IR | Standard blood flow imager: http://us.moor.co.uk/product/moorldi2-laser-doppler-imager/8 |
| ImageJ | NIH | free download | http://rsb.info.nih.gov/ij/ |
| Mastisol | Henry Schein | Cat # 7289210 | Fisher Scientific NC9774929 |
| Tegaderm | Medical Specialties | 3M1624W | Fisher Scientific NC9922128 |
References
- Ansell, D. M., Holden, K. A., Hardman, M. J. Animal models of wound repair: Are they cutting it. Experimental dermatology. 21 (8), 581-585 (2012).
- Dorsett-Martin, W. A. Rat models of skin wound healing: a review. Wound repair and regeneration : official publication of the Wound Healing Society [and] the European Tissue Repair Society. 12 (6), 591-599 (2003).
- Davidson, J. M. Animal models for wound repair. Arch Dermatol Res. 290 (S1-11), (1998).
- Finn, G., Magnus, S. A., Tonny, K. Models for use in wound healing research: A survey focusing on in vitro and in vivo adult soft tissue). Wound Repair and Regeneration. 8, (2000).
- Gould, L. J., Leong, M., Sonstein, J., Wilson, S. Optimization and validation of an ischemic wound model. Wound repair and regeneration : official publication of the Wound Healing Society [and] the European Tissue Repair Society. 13 (6), 576-582 (2004).
- Loots, M. A., et al. Differences in cellular infiltrate and extracellular matrix of chronic diabetic and venous ulcers versus acute wounds. The Journal of investigative dermatology. 111 (5), 850-857 (1998).
- Schwartz, D. A., Lindblad, W. J., Rees, R. R. Altered collagen metabolism and delayed healing in a novel model of ischemic wounds. Wound Repair Regen. 3 (2), 204-212 (1995).
- Chen, C., et al. Molecular and mechanistic validation of delayed healing rat wounds as a model for human chronic wounds. Wound Repair and Regeneration. 7, (1999).
- Zhang, Q., Chang, Q., Cox, R. A., Gong, X., Gould, L. J. Hyperbaric oxygen attenuates apoptosis and decreases inflammation in an ischemic wound model. The Journal of investigative dermatology. 128 (8), 2102-2112 (2008).
- Zhang, Q., Gould, L. J. Hyperbaric oxygen reduces matrix metalloproteinases in ischemic wounds through a redox-dependent mechanism. The Journal of investigative dermatology. 134 (1), 237-246 (2013).
- Moor, A. N., et al. Consequences of age on ischemic wound healing in rats: altered antioxidant activity and delayed wound closure. Age (Dordrecht, Netherlands). 36 (2), 733-748 (2014).
- Roy, S., et al. Characterization of a preclinical model of chronic ischemic wound). Physiological genomics. 37 (3), 211-224 (2009).
- Biswas, S., et al. Hypoxia inducible microRNA 210 attenuates keratinocyte proliferation and impairs closure in a murine model of ischemic wounds. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (15), 6976-6981 (2010).
- Winocour, S., Vorstenbosch, J., Trzeciak, A., Lessard, L., Philip, A. CD109, a novel TGF-beta antagonist, decreases fibrotic responses in a hypoxic wound model. Exp Dermatol. 23 (7), 475-479 (2014).
