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Medicine

चूहा इस्केमिक त्वचा घाव मॉडल का प्रदर्शन

doi: 10.3791/52637 Published: April 1, 2015
* These authors contributed equally

Summary

चूहे की वजह से इसका आकार, उपलब्धता, और नहीं बल्कि विनम्र व्यवहार करने के लिए कई वर्षों के लिए एक शोध मॉडल के रूप में उपयोग किया गया है। इस प्रोटोकॉल के लक्ष्य के पुराने घावों के pathophysiology में बहुमूल्य जानकारी प्रदान करने के लिए एक इस्कीमिक त्वचा घाव भरने मॉडल के रूप में चूहे का उपयोग करने के लिए है।

Abstract

मानव में पुराने घावों के लिए प्रवृत्ति ऐसे कारण गतिहीनता को मधुमेह और बिगड़ा हृदय समारोह, और लगातार दबाव के रूप में बुढ़ापे, बीमारी की स्थिति के साथ बढ़ जाती है। पशु मॉडलों पुराने घावों की जटिलता के बारे में हमारी समझ को आगे बढ़ाने के उद्देश्य के लिए इन शर्तों को नकल करने के लिए लगता है कि प्रयास विकसित किया गया है। इस के साथ साथ वर्णित मॉडल इस्कीमिक बनने के लिए और एक पुराने घाव फेनोटाइप (कम vascularization वृद्धि हुई है, सूजन और देरी घाव बंद) जैसे लगते हैं कि घाव में जिसके परिणामस्वरूप रक्त के प्रवाह की एक लम्बी कमी है कि परमिट एक चूहे इस्कीमिक त्वचा फ्लैप मॉडल है। यह नियंत्रण के रूप में फ्लैप के लिए पार्श्व केन्द्र रखा दो इस्कीमिक घाव और दो गैर इस्कीमिक घाव के साथ एक bipedicled पृष्ठीय फ्लैप के होते हैं। इस इस्कीमिक त्वचा फ्लैप मॉडल के लिए एक उपन्यास के अलावा एक बाधा और revascularization रोकने और घावों को भरने के रूप में संकुचन कम करने के लिए एक पट्टी के रूप में कार्य करता है कि फ्लैप के नीचे एक सिलिकॉन चादर का स्थान है। के बावजूदकारण मनुष्यों की तुलना में उनकी काफी अलग शारीरिक और शारीरिक मतभेद के अध्ययनों से घाव भरने के लिए चूहों का उपयोग करने की बहस (यानी, एक panniculus carnosus मांसपेशी, लघु जीवन अवधि की उपस्थिति, बालों के रोम की संख्या में वृद्धि, और संक्रमित घावों को चंगा करने की क्षमता) इस मॉडल में कार्यरत संशोधनों यह पहले से विकसित इस्कीमिक त्वचा फ्लैप मॉडल के लिए एक मूल्यवान विकल्प बनाते हैं।

Introduction

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प्रभावी दवा के विकास और अन्य घाव भरने चिकित्सा विज्ञान मानव उपचारों एक करने के लिए पशु मॉडल में निष्कर्षों का अनुवाद करने में ज्ञात समस्याओं के बावजूद, विवो मॉडल में उपयुक्त आवश्यकता होती है। क्या इस प्रकार के तंत्र रोग घाव भरने की है कि आगे समझने की जांच के लिए इस्कीमिक त्वचा घाव भरने की एक चूहे मॉडल के उपयोग के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल का वर्णन है। चूहे प्रजातियों, अक्सर इसकी व्यापक उपलब्धता, आकार की वजह से कार्यरत हैं और यह incisional और excisional लोग घायल हो गए, इमेजिंग और ऊतक संग्रह 2 के लिए एक उपयुक्त त्वचा क्षेत्र प्रदान करने के लिए काफी बड़ी है के रूप में विनम्र स्वभाव घाव भरने के अध्ययन के लिए प्रयोग किया जाता है। हालांकि यह चूहों के रूप में ढीली चमड़ी जानवरों के लिए भेजा जा रहा है, के साथ एक चूहा और एक मानव की त्वचा anatomically अलग हैं कि सावधान ध्यान में रखा जाना चाहिए। यह अलग विशेषता चूहे की त्वचा के समापन डब्ल्यू में महत्वपूर्ण योगदान करने के लिए नहीं बल्कि epithelialization से, घाव संकुचन के लिए अनुमति देता हैounds दो। इसके अतिरिक्त, चूहों में एक चमड़े के नीचे panniculus carnosus मांसपेशियों की उपस्थिति, दोनों संकुचन और कोलेजन गठन 3,4 द्वारा उपचार के लिए योगदान देता है। ये बहुत ही महत्वपूर्ण संरचनात्मक भेद चूहे इस्कीमिक त्वचा घाव मॉडल के विकास में विचार किया गया और विशिष्ट संशोधन घाव संकुचन कम होती है और panniculus carnosus पेशी 5 के प्रभाव को कम करने के लिए लागू किया गया।

मधुमेह पैर अल्सर, शिरापरक पैर अल्सर, और दबाव अल्सर में, चिकित्सा देरी हो रही है और इन घावों पुरानी माना जाता है। घाव घाव की मरम्मत 6 के अगले चरणों के लिए प्रगति से घाव को रोकता है जो अत्यधिक सूजन, की विशेषता है। एक पुराने घाव के विकास में मुख्य कारकों में से एक सूजन को स्पष्ट करने में असमर्थता के लिए योगदान दे स्थानीय ऊतक ischemia (कम रक्त प्रवाह) 5। इस मॉडल 2003-4 में (विकसित और मान्य किया जा रहा था, जिसके दौरान समय), घाव बिस्तर, सामान्य घाव भरने के दौरान एक महत्वपूर्ण चरण है और इस मॉडल 5 के विकास के लिए प्रेरणा में angiogenesis के शामिल होने का परीक्षण करने के लिए पर्याप्त ऊतक प्रदान कर सकता है कि कोई मानकीकृत पशु मॉडल थे। यही कारण है कि यहाँ प्रस्तुत मॉडल चेन एट अल द्वारा संशोधित रूप में इस्तेमाल किया मूल है Schwartz एट अल। 7 और बाद के द्वारा वर्णित इस्कीमिक घाव मॉडल के एक संशोधन है, ने कहा। 8

संशोधित इस्कीमिक घाव मॉडल में, परिवर्तन बल्कि epithelialization से संकुचन द्वारा उपचार के लिए नेतृत्व कि चूहे के उपर्युक्त शारीरिक विशेषताओं को नाकाम करने के लिए बनाया गया है: (1) दो पूर्ण मोटाई excisional घाव एक bipedicled पृष्ठीय त्वचा फ्लैप और भीतर पैदा कर रहे हैं panniculus carnosus पेशी सिर्फ मांसपेशियों प्रावरणी से ऊपर विदारक से बिस्तर घाव से निकाल दिया जाता है। (2) फ्लैप ही टी के मध्य में स्थित अधिक संकीर्ण रक्त की आपूर्ति अनियमित है कि यह सुनिश्चित करने आयाम, और घाव हैवह फ्लैप इस्कीमिक हैं। (3) एक सिलिकॉन चादर अंतर्निहित ऊतक से फ्लैप के readherence और reperfusion रोकने, फ्लैप के नीचे डाला जाता है। घाव संकुचन प्रस्तोता या सिलिकॉन चादर से 5 फ्लैप suturing द्वारा (सफाया नहीं) सीमित है।

मॉडल ने हाल ही में वृद्ध चूहों 11 बनाम युवा में इस्कीमिक घाव भरने के लिए 9,10 चिकित्सा इस्कीमिक घाव पर हाइपरबेरिक ऑक्सीजन प्रभाव से लेकर पढ़ाई में इस्तेमाल किया गया है और लंबे समय तक ऊतक ischemia के एक विश्वसनीय मॉडल साबित हो गया है। bipedicled फ्लैप के आयाम भी स्वाइन 12 और चूहों सहित और अन्य प्रजातियों, (3.0-3.5 सेमी चौड़ा द्वारा 10.5 सेमी लंबे) और F344 चूहों (2 सेमी चौड़ा द्वारा 11 सेमी लंबे) Sprague Dawley सहित विभिन्न चूहा उपभेदों के लिए अनुकूलित किया गया है 13,14। यह वीडियो इस्कीमिक त्वचा घाव मॉडल के प्रदर्शन में F344 जन्मजात चूहा तनाव का इस्तेमाल करता।

नीचे प्रस्तुत सभी पशु प्रक्रियाओं के लिए अनुमोदन प्राप्त थादक्षिण फ्लोरिडा के पशु की देखभाल समिति (IACUC) के विश्वविद्यालय से एड और पशु कल्याण अधिनियम और देखभाल के लिए गाइड और प्रयोगशाला पशुओं के उपयोग की सभी आवश्यकताओं का पालन करना।

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Protocol

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नोट: नीचे प्रस्तुत सभी पशु प्रक्रियाओं के लिए स्वीकृति दक्षिण फ्लोरिडा के पशु की देखभाल समिति (IACUC) के विश्वविद्यालय से प्राप्त की है और पशु कल्याण अधिनियम और देखभाल और प्रयोगशाला पशुओं के उपयोग के लिए गाइड की सभी आवश्यकताओं का पालन किया गया था।

सिलिकॉन शीट्स और सर्जिकल उपकरणों की 1. तैयारी

  1. Precut स्ट्रिप्स के (10.5 सेमी x 3.0 सेमी) 0.01 मोटाई, चिकित्सा ग्रेड सिलिकॉन कनवास गैर प्रबलित और एक आटोक्लेव का उपयोग कर बाँझ।
  2. साफ और (सर्जरी के दौरान एक बाँझ क्षेत्र बनाने के लिए कैंची, संदंश और पर्दे या तौलिए) उपयुक्त सर्जिकल उपकरणों बाँझ।

2. प्रायोगिक पशुओं

  1. वयस्क पुरुष या एक वाणिज्यिक ब्रीडर से प्राप्त 250-350 जी से रेंज में वजन मादा चूहों का प्रयोग करें। वृद्ध चूहों का उपयोग कर रहे हैं, वे बेहतर अस्तित्व के बाद सर्जरी सुनिश्चित करने के क्रम में ≥350 जी होना चाहिए। किसी भी प्रयोगों के शुरू करने से पहले कम से कम के लिए सभी जानवरों acclimateभोजन और पानी यथेच्छ के साथ एक 12 घंटा प्रकाश अंधेरे चक्र की मानक स्थितियों के तहत सात दिनों के लिए।

3. संज्ञाहरण, प्री-ऑपरेटिव analgesia और ऑपरेटिव तैयारी

  1. एक प्रेरण कक्ष के माध्यम से 3% से कम -4 isoflurane% का उपयोग करके सामान्य संज्ञाहरण प्रेरित और त्वचा की तैयारी और सर्जरी के दौरान ओ 2 के साथ 1% से कम (एक नाक शंकु के उपयोग के माध्यम से) -2% बनाए रखें। दर और श्वसन, interdigital चुटकी या नेत्रच्छद झपकी पलटा की गहराई का अवलोकन द्वारा संज्ञाहरण की गहराई मॉनिटर।
    नोट: इस समय, एक पशु चिकित्सक मरहम पशु संज्ञाहरण के तहत है, जबकि सूखापन को रोकने के लिए आंखों पर रखा जा सकता है।
  2. बाँझ शल्य चिकित्सा के क्षेत्र से एक स्थान दूरस्थ में, प्रवण स्थिति में चूहे जगह और नीचे गर्दन लगभग 11 सेमी के आधार से कतरनी के साथ पीठ दाढ़ी। स्थायी मार्कर के साथ स्टैंसिल, 3.0 सेमी x 10.5 सेमी फ्लैप के लिए रूपरेखा (चित्रा 1 ए देखें)।
  3. एक साफ, नामित surgica को चूहे ले जाएंएक अनुमोदित हीटिंग पैड और बाँझ शल्य पर्दे या तौलिए से लैस एल क्षेत्र। दर्द प्रबंधन के लिए पहली शल्य चीरों के लिए 5 मिलीग्राम / किग्रा Ketoprofen subcutaneously पूर्व इंजेक्षन। जरूरत के रूप में अतिरिक्त तरल पदार्थ (खारा) subcutaneously (5 सीसी के लिए) दिया जा सकता है।
  4. एक बाँझ क्षेत्र बनाने के लिए बाँझ पर्दे लागू तो, 70% isopropyl शराब और 0.2% chlorhexidine के साथ दूसरे के साथ पहली swabbing द्वारा आगे की त्वचा तैयार करें। 10% povidone आयोडीन (Betadine) का भी इस्तेमाल किया जा सकता है।
    नोट: एक एंटीबायोटिक (15 मिलीग्राम / किग्रा में एम्पीसिलीन) subcutaneously प्रशासित किया जा सकता है, लेकिन अच्छा सड़न रोकनेवाला तकनीक का इस्तेमाल कर रहे हैं तो यह जरूरी नहीं है।

4. Excisional घाव और Bipedicled प्रालंब बनाने

  1. एक बाँझ, डिस्पोजेबल 6 मिमी बायोप्सी पंच उपकरण का उपयोग, नामित फ्लैप क्षेत्र (चित्रा 1 बी) के केंद्र में दो गोल "इस्कीमिक" घाव पैदा करते हैं। घाव की गहराई नीचे (नहीं) के माध्यम से करने के लिए panniculus carno की अंतर्निहित प्रावरणी होना चाहिएSUS मांसपेशी (चित्रा 1 बी इनसेट)।
  2. का प्रयोग संदंश पंच बायोप्सी द्वारा बनाई गई घाव रूपरेखा के बीच में त्वचा उठा और फिर (panniculus carnosus पेशी सहित) ऊतक के परिपत्र टुकड़ा आबकारी करने के लिए (घुमावदार सुझावों के साथ) आईरिस कैंची का उपयोग करें। परिणाम घाव के आधार के रूप में प्रावरणी के साथ घाव एक पूर्ण मोटाई किया जाएगा।
    नोट: excised ऊतक (घाव प्लग) तरल नाइट्रोजन में जमे हुए या नियंत्रण के रूप में बाद में प्रसंस्करण, सामान्य त्वचा के लिए 10% बफर-formalin हे / एन में तय तस्वीर जा सकता है।
  3. अलग लंबाई में 10.5 सेमी और 3.0 सेमी हैं कि पूर्व तैयार की लाइनें (चित्रा 1C) के साथ इस्कीमिक घाव के प्रत्येक पक्ष पर एक बाँझ स्केलपेल के साथ चीरों बनाकर एक bipedicled फ्लैप बनाएँ। चीरों की गहराई नीचे paraspinous मांसपेशियों के लिए होना चाहिए। आईरिस कैंची का प्रयोग, (6 मिमी घूंसे के "आधार" के रूप में बरकरार प्रावरणी रखने के लिए सावधान किया जा रहा है, paraspinous मांसपेशियों से एफ panniculus carnosus प्रावरणी अलगigure -1)।
  4. एक बाँझ पूर्व में कटौती सिलिकॉन चादर लो और panniculus carnosus प्रावरणी और चादर बकसुआ या गुना नहीं करता है यह सुनिश्चित करना कि paraspinous मांसपेशियों (चित्रा 1E) के बीच में यह जगह है। काले, गैर absorbable sutures के (आकार 4.0) का उपयोग फ्लैप (चित्रा 1F और 1G) की लंबाई के साथ, प्रत्येक पक्ष पर कम से कम 8 बाधित टांके के साथ त्वचा के लिए सिलिकॉन चादर प्रस्तोता द्वारा दोनों चीरों बंद करें।
  5. एक बाँझ, डिस्पोजेबल बायोप्सी पंच उपकरण का उपयोग, 1 सेमी फ्लैप (चित्रा 1G) के दोनों तरफ इस्कीमिक घाव करने के लिए पार्श्व (panniculus carnosus पेशी के पूर्वकाल प्रावरणी के लिए नीचे) दो आंतरिक नियंत्रण "गैर इस्कीमिक" घाव पैदा करते हैं।
  6. घाव के नीचे एक शासक प्लेस और घाव माप प्रयोजनों (चित्रा 3A देखें) के लिए डिजिटल तस्वीरें ले। इस समय, रक्त प्रवाह (छिड़काव) लेजर डॉपलर या प्रदर्शन किया अन्य जोड़तोड़ (सामयिक दवा प्लेसमेंट) के उपयोग द्वारा नजर रखी जा सकती है।
  7. कपाल और दुम घावों को और नम और (बाँझ) स्वच्छ घाव वातावरण बनाए रखने के लिए ड्रेसिंग एक पारदर्शी फिल्म दोनों एक अनुमोदित तरल चिपकने वाला लागू करें। एक अतिरिक्त ड्रेसिंग सबसे दुम टांके हटाने से जानवर को रोकने के लिए फ्लैप की दुम अंत में रखा जा सकता है।

5. पोस्ट ऑपरेटिव प्रक्रियाएं

  1. फीडर के खिलाफ रगड़ से शल्य साइट को रोकने के लिए इतनी के रूप में उथले फीडरों के साथ सुसज्जित पिंजरों (अकेले रखे) में पशुओं रखें। पशु नायाब छोड़ दिया है या वे sternal अवलंबन को बनाए रखने और उद्देश्यपूर्ण आंदोलन का प्रदर्शन करने के लिए पर्याप्त होश जब तक अन्य जानवरों की कंपनी को वापस नहीं किया जाना चाहिए। ताप मैट वसूली के दौरान अप करने के लिए दो दिनों के लिए पिंजरे के आधे के तहत रखा जाना चाहिए।
  2. बाद operatively दर्द का प्रबंधन करने के लिए, अप करने के लिए 48 घंटे के बाद सर्जरी के लिए निम्नलिखित सुबह और प्रति दिन 1x जानवरों के लिए subcutaneously Ketoprofen (5 मिलीग्राम / किग्रा) प्रशासन। पशु भी लिए दैनिक निगरानी की जानी चाहिएदर्द, वजन घटाने या शल्य साइट संक्रमण के लंबे समय तक संकेत।

6. इसके बाद घाव माप और ड्रेसिंग परिवर्तन

  1. एक प्रेरण कक्ष के माध्यम से 3% पर isoflurane का उपयोग कर सामान्य संज्ञाहरण के तहत अक्सर -4% इस्कीमिक और गैर इस्कीमिक घाव उपाय और 3.1 कदम के रूप में ओ 2 के साथ 1% -2% से कम (एक नाक शंकु के माध्यम से) बनाए रखा।
  2. त्वचा से चिपकने वाला नहीं खींच के रूप में धीरे ड्रेसिंग निकालें। अतिरिक्त डिजिटल फोटो घाव मापन के लिए लिया जाता है इस समय, सामयिक उपचार को फिर से लागू किया, लेजर डॉपलर इमेजिंग (LDI) या अन्वेषक की आवश्यकताओं के अनुरूप करने के लिए प्रदर्शन अन्य जोड़तोड़।
  3. चिपकने वाला और एक साफ ड्रेसिंग लागू करें और पशु 5.1 कदम के रूप में ठीक करने के लिए अनुमति देते हैं।

7. घाव संग्रह और इच्छामृत्यु

  1. पशु एक इंडस्ट्रीज़ के माध्यम से 3% से कम -4 isoflurane% का उपयोग कर सामान्य संज्ञाहरण के तहत है, जबकि फसल इस्कीमिक और गैर इस्कीमिक घावों (दिनों पर अन्वेषक उचित समझे)uction कक्ष और 3.1 कदम के रूप में ओ 2 के साथ 1% -2% से कम (एक नाक शंकु के माध्यम से) बनाए रखा।
  2. एक स्केलपेल का उपयोग करना, घाव के आसपास कुछ स्वस्थ ऊतकों को शामिल करने के लिए घाव के चारों ओर एक चौकोर आकार छांटना बनाते हैं। एक 1.5 मिलीलीटर में छांटना जगह टोपी ट्यूब तस्वीर और भविष्य आणविक विश्लेषण के लिए (-80 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर) तरल नाइट्रोजन में फ्रीज तस्वीर या ऊतकीय प्रसंस्करण के लिए आरटी पर 10% बफर formalin हे / एन सेते हैं।
    नोट: घाव excisions भी विश्लेषण के लिए अधिक नमूने उपलब्ध कराने के लिए आधे में कटौती की जा सकती है।
  3. घाव ऊतक को हटाने के बाद, सीओ 2 साँस लेना की मंजूरी दे दी है विधि का उपयोग कर पशु euthanize।

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Representative Results

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कुशलता का प्रदर्शन अगर चूहे इस्कीमिक घाव भरने मॉडल प्रोटोकॉल जानवर के अनुसार लगभग 20 मिनट के लिए ले जाना चाहिए। पहले एक आंकड़ा 1G में प्रतिनिधित्व के रूप में प्रकट करना चाहिए मॉडल ड्रेसिंग के आवेदन करने के लिए। यह bipedicled फ्लैप और घावों उसमें इस्कीमिक हैं कि सत्यापित करने के लिए महत्वपूर्ण होगा। घाव के स्तर पर चमड़े के नीचे ऑक्सीजन तनाव (PscO 2) दो इस्कीमिक घाव के बीच चमड़े के नीचे ऊतक में एक polarographic इलेक्ट्रोड रखकर इस मॉडल 5 के सत्यापन के दौरान मापा गया है। PscO 2 मूल्यों समीक्षकों इस्कीमिक रेंज (20-40 एमएमएचजी) में थे। इस मॉडल के विकास के बाद से LDI का उपयोग तेजी से रक्त छिड़काव को मापने के लिए इस्तेमाल किया गया है और इस तकनीक bipedicled फ्लैप के इस्कीमिक राज्य के बारे में पर्याप्त जानकारी दे देंगे।

संक्षेप में, LDI तकनीक एक फाइबर ऑप्टिक जांच द्वारा किए गए लेजर प्रकाश की एक किरण के उत्सर्जन पर आधारित है। measuriएनजी गहराई लेजर प्रकाश के ऊतक गुण और तरंग दैर्ध्य पर निर्भर करता है। सामान्य त्वचा में, मानक फाइबर जुदाई (0.25 मिमी) और एक 780 एनएम तरंगदैर्ध्य लेजर के साथ एक जांच के साथ एक साधन है, गहराई मापने 0.5-1 मिमी के आदेश पर किया जाएगा। (सीवन लाइन के बाएं) एक perfused क्षेत्र और गैर perfused क्षेत्र (सीवन लाइन का अधिकार) दोनों दिखा एक पृष्ठीय bipedicled फ्लैप के लिए एक प्रतिनिधि डॉपलर छवि (बाएं) चित्रा 2 में दिखाया गया है।

चमड़े के नीचे ऑक्सीजन तनाव को मापने के अलावा, एक भी फ्लैप में घाव इस्कीमिक हैं कि स्थापित करने के लिए जांच या आम जैव रासायनिक मार्कर का उपयोग कर सकते हैं। सामान्य रूप से संवहनी endothelial कोशिकाओं पर पाया PECAM-1 या CD31 के घावों में नए पोत के गठन के लिए एक मार्कर है। इस्कीमिक घाव में ऊंचा हो पाया प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों के लिए विभिन्न मार्करों, ऐसे dihydroethidium (DHE) के रूप में व्यावसायिक रूप से अक्सर के रूप में फ्लोरोसेंट टैग एंटीबॉडी या सुपर संकेतक उपलब्ध हैं।

Wounघाव बंद ट्रैक करने के लिए डी क्षेत्र मापन के तरीके की एक किस्म में प्रतिनिधित्व किया जा सकता है। आमतौर पर, घाव क्षेत्र में इस तरह के रूप में एक सूत्र का उपयोग चिकित्सा 11 के समय के पाठ्यक्रम पर घाव के डिजिटल छवियों से मात्रा निर्धारित है डेटा के साथ (6 मिमी पंच बायोप्सी क्षेत्र = (π) आर 0 दिन में 2 = 3.14 एक्स 9 = 28.26 मिमी 2) प्रारंभिक घाव क्षेत्र का प्रतिशत या एक विशेष दिन पर घाव सतह क्षेत्र के रूप में प्रस्तुत गोल्ड एट अल में के रूप में मात्रा निर्धारित किया जा सकता है। इस प्रदर्शन के प्रयोजनों के लिए 5, घाव बंद प्रगति 28 दिनों के समय के पाठ्यक्रम पर प्रारंभिक घाव क्षेत्र के प्रतिशत के रूप में प्रतिनिधित्व किया है । मुफ्त सॉफ्टवेयर ImageJ का उपयोग, एक डिजिटल चित्र खोला जाता है और बड़े पैमाने छवि (चित्रा 3A) में शासक पर 10 मिमी का उपयोग करते हुए निर्धारित है। लंबाई में 10 मिमी तैयार की एक पंक्ति इस मामले (मिमी) में, विकल्प की एक इकाई में तब्दील किया जा सकता है (चित्रा 3 ए में इनसेट) एक पिक्सेल गिनती के लिए equates। अगला, घाव की परिधि छवि पर पता लगाया जाता है (3B चित्रा) और उपाय आदेश दिया जाता है, एक बार क्षेत्र 3B चित्रा में इनसेट मिमी (में प्रस्तुत किया जाता है)। डाटा तो एक्स-अक्ष (चित्रा -3 सी) पर y अक्ष और दिन पर प्रारंभिक घाव क्षेत्र के प्रतिशत के रूप में प्रस्तुत किया जा सकता है।

चित्र 1
सर्जरी के दौरान चरणों चित्रण चित्रा 1. फोटो इस्कीमिक घाव, bipedicled फ्लैप, और गैर इस्कीमिक घाव बनाने के लिए। (ए) के पूर्व शल्य बालों को हटाने और दर्द प्रबंधन के लिए एनाल्जेसिक (Ketoprofen) subcutaneously के एक पूर्व शल्य खुराक प्राप्त एक anesthetized चूहे की त्वचा तैयारी। (बी और इनसेट) इस्केमिक घाव दो चीरा मार्करों के अंदर पैदा कर रहे हैं एक बाँझ पंच के उपयोग के द्वारा बायोप्सी उपकरण। (सी) चीरों bipedicled फ्लैप उठाया है paraspinous मांसपेशियों और (डी) के लिए नीचे चिह्नित पंक्तियों के साथ बना रहे हैंनीचे पेशी परत से (panniculus carnosus प्रावरणी बरकरार साथ) फ्लैप की जुदाई दिखाने के लिए। (ई) panniculus carnosus की प्रावरणी और paraspinous पेशी के बीच रखा गया है बाँझ सिलिकॉन (काला तीर) के एक पत्रक। (एफ) काले, गैर absorbable sutures के (आकार 4.0) एकाधिक फ्लैप (जी) की लंबाई के साथ टांके बाधित साथ त्वचा के लिए सिलिकॉन चादर प्रस्तोता द्वारा दोनों चीरों बंद करें। दो गैर इस्कीमिक घावों (काला तीर) दोनों पक्षों पर bipedicled फ्लैप के लिए एक बाँझ पंच बायोप्सी उपकरण पार्श्व का उपयोग कर बनाई गई हैं। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्र 2
रक्त छिड़काव के बाद सर्जरी की चित्रा 2. प्रतिनिधि लेजर डॉपलर छवि। सही पैनएल फ्लैप के लिए पार्श्व bipedicled फ्लैप के बीच में दो इस्कीमिक घावों (काला तीर) और एक गैर इस्कीमिक घाव (एकल काला तीर) के एक काले और सफेद छवि को दर्शाता है। सीवन लाइन सफेद में प्रकाश डाला गया है। बाएं पैनल सही पैनल में दिखाया गया एक ही क्षेत्र के डॉपलर छवि को दर्शाता है। चमकीले रंग के साथ क्षेत्रों में अधिक गहरे नीले रंग के साथ क्षेत्रों की तुलना में perfused कर रहे हैं। गैर इस्कीमिक क्षेत्र (बाएं) और इस्कीमिक क्षेत्र (दाएं) के बीच छिड़काव में यह अंतर स्पष्ट है और सिवनी लाइन की पूरी लंबाई के साथ पीछा किया जा सकता है। रक्त कोशिकाओं को अभी भी कुछ हद तक मौजूद हैं, के रूप में दोनों पक्षों पर घाव, उज्ज्वल दिखाई देते हैं कि ध्यान दें। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्र तीन
चित्रा 3. घाव माप और डेटा प्रतिनिधित्व। (ए) (ImageJ) सॉफ्टवेयर का उपयोग कर घाव क्षेत्र माप चित्रण डिजिटल तस्वीरें, (मिमी) (काला तीर) और विधि करने के लिए पिक्सल के रूपांतरण घाव (बी) के एक सटीक परिधि (एकल काला तीर) पर कब्जा करने के लिए। सांख्यिकीय डेटा तो एक्स-अक्ष (सी) पर y अक्ष और दिन पर प्रारंभिक घाव क्षेत्र (0 दिन) के प्रतिशत के रूप में प्रस्तुत किया जा सकता है (एक भी दिन पर घाव क्षेत्रों की ± SEM के मतलब है)। लाइन ग्राफ प्रस्तुत डेटा *** समूह प्रति एन = 8 घाव, एक ही समय बिंदु (10 दिन) पर गैर इस्कीमिक से (= पी .0004) काफी अधिक का प्रतिनिधित्व करता है, सिदक के एकाधिक तुलना परीक्षण के साथ एक दो तरह से एनोवा का उपयोग विश्लेषण। इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

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Discussion

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चूहों में घाव भरने कारण अक्सर संक्रमित घावों और interanimal परिवर्तनशीलता 5 की उच्च दर को चंगा करने की क्षमता के लिए बहस का विषय रहा है। अपने विकास के दौरान मॉडल के मूल लक्ष्यों में से एक इस बदलाव को कम करने के लिए किया गया था। विशिष्ट स्थापन के साथ घावों की संख्या को कम करने के फ्लैप की चौड़ाई के लिए संशोधन, एक सिलिकॉन चादर की और परिचय (संगत cranio-दुम स्थान के साथ फ्लैप पर केंद्रित) इस लक्ष्य को पूरा किया है। संकुचन से घाव भरने में भी मनुष्य के रूप में मापा परिणाम है, epithelialization से कम हो और उपचार किया गया है। चूहे का एक अलग तनाव के लिए मॉडल के अनुकूलन, यानी, F344, भी Sprague Dawley चूहों का उपयोग कर मनाया सफल सिद्ध और ischemia के डिग्री reproduces गया है। कुल मिलाकर इस मॉडल के लिए आवश्यक सर्जिकल तकनीक (बायोप्सी, suturing और घाव छांटना) आसानी से सबसे अधिक छात्रों और सीमित शल्य चिकित्सा के अनुभव के साथ तकनीशियनों द्वारा अर्जित कर रहे हैं।

_content "> एकाधिक सर्जरी प्रदर्शन करते हुए, इसे सिलिकॉन चादर नियुक्ति 5 के लिए फ्लैप के उन्नयन के लिए पहले इस्कीमिक घाव बनाने के लिए महत्वपूर्ण है कि पाया गया था इस मॉडल के साथ स्थिरता प्राप्त करने के लिए। इसके अतिरिक्त, के लिए महत्वपूर्ण है panniculus carnosus प्रावरणी के माध्यम से छिद्रण नहीं सिलिकॉन से अधिक रहने के लिए बिस्तर एक व्यवहार्य घाव प्रदान करते हैं। सिलिकॉन लेकिन यह भी घाव फिर से epithelialization को प्रोत्साहित करती है कि एक "पट्टी" के रूप में संवहनी पुनर्वृद्धि को रोकने के लिए न केवल कार्य करता है। संक्रमण को रोकने के लिए और एक नम वातावरण बनाए रखने के लिए चिपकने वाला और ड्रेसिंग के आवेदन जानवरों के कुछ कोई फर्क नहीं पड़ता, चिपकने की किस प्रकार उनके ड्रेसिंग दूर करने के लिए सक्षम होने के लिए घाव भरने में भी महत्वपूर्ण है। उत्पाद की पसंद क्या पसंद किया या शोधकर्ता जानवरों की सुविधा में इस्तेमाल किया जा सकता है। हालांकि, यह असामान्य नहीं है / ड्रेसिंग संयोजन है इस्तेमाल किया।

bipedicled फ्लैप अनुमानित है जो चिकित्सा के एक समय के पाठ्यक्रम में व्यवहार्य रहना चाहिए ly के 28 दिन, चूहा तनाव और वर्तमान अन्य सह-रुग्णता पर निर्भर करता है। शायद ही कभी, फोड़े फ्लैप के तहत फार्म का हो सकता फ्लैप (विशेष रूप से निकट टांके) और seromas में फार्म कर सकते हैं। द्रव सूखा जा सकता है और यदि आवश्यक हो तो एंटीबायोटिक दवाओं दिलाई। फ्लैप व्यवहार्यता खो देता है और परिगलित हो जाता है हालांकि, अगर यह है कि पशु अब नहीं किया जा सिफारिश की है। जैव रासायनिक विश्लेषण के लिए घाव छांटना (1) कुछ सामान्य ऊतक समर्थन के लिए बनाए रखा जाना चाहिए की वजह से परिवर्तनशीलता परिचय करता है (2) आरएनए, डीएनए या प्रोटीन और (3) निहित interanimal परिवर्तनशीलता 5,10 के अलगाव के लिए ऊतक homogenization और तैयारी की पसंद 11। एक यह आखिरी बिंदु मॉडल के लिए एक सीमा पर विचार कर सकता है और यह फ्लैप (<2.0 सेमी) या फ्लैप आघात के आकार को कम करने जैसे तापमान या तनाव का स्तर जैसे कारकों में मामूली बदलाव, भी जन्म दे सकती है, यह दर्शाता है नेक्रोसिस पैदा कर सकता है कि पाया गया था एक चूहे से एक और 5 के लिए घाव नमूनों के बीच biochemically पता लगाने योग्य बदलाव के लिए।

ve_content "> सारांश में, 2.0-3.0 चौड़ाई में सेमी और एक रणनीतिक रखा सिलिकॉन चादर से लेकर एक अनुदैर्ध्य, bipedicled फ्लैप के साथ इस मॉडल है, लंबे समय तक ऊतक ischemia के एक विश्वसनीय मॉडल है। उपयोगकर्ता बनाने के लिए तकनीक का उपयोग करने में माहिर है एक बार एक सुसंगत इस्कीमिक घाव, वे अतिरिक्त उम्र और प्रजातियों कृन्तकों के (चूहों शामिल है)। excisional घाव, स्थानिक इलाज किया जा सकता है या आगे पुराने घाव गठन में शामिल तंत्र (एस) का पता लगाने के लिए उपयोग प्रणालीगत उपचार करने के लिए इसे अनुकूलित करने में सक्षम होना चाहिए भड़काऊ प्रतिक्रियाओं, न्यायपालिका angiogenesis और देरी घाव बंद exacerbated।

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Materials

Name Company Catalog Number Comments
Sil-Tec medical grade sheeting Technical Products Inc. 500-3 nonreinforced, 0.01 inches in thickness
Mini Iris scissors, 8 cm, curved, SS World Precision Instruments #503671
Ethilon Nylon Sutures Ethicon 1964G black, size 4.0, PC-3 16 mm needles (3/8 circle)
Laser Doppler Imager Moor Instruments moorLDI2-IR Standard blood flow imager: http://us.moor.co.uk/product/moorldi2-laser-doppler-imager/8
ImageJ NIH free download http://rsb.info.nih.gov/ij/
Mastisol Henry Schein Cat # 7289210 Fisher Scientific NC9774929
Tegaderm Medical Specialties  3M1624W Fisher Scientific NC9922128

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References

  1. Ansell, D. M., Holden, K. A., Hardman, M. J. Animal models of wound repair: Are they cutting it. Experimental dermatology. 21, (8), 581-585 (2012).
  2. Dorsett-Martin, W. A. Rat models of skin wound healing: a review. Wound repair and regeneration : official publication of the Wound Healing Society [and] the European Tissue Repair Society. 12, (6), 591-599 (2003).
  3. Davidson, J. M. Animal models for wound repair. Arch Dermatol Res. 290, (S1-11), (1998).
  4. Finn, G., Magnus, S. A., Tonny, K. Models for use in wound healing research: A survey focusing on in vitro and in vivo adult soft tissue). Wound Repair and Regeneration. 8, (2000).
  5. Gould, L. J., Leong, M., Sonstein, J., Wilson, S. Optimization and validation of an ischemic wound model. Wound repair and regeneration : official publication of the Wound Healing Society [and] the European Tissue Repair Society. 13, (6), 576-582 (2004).
  6. Loots, M. A., et al. Differences in cellular infiltrate and extracellular matrix of chronic diabetic and venous ulcers versus acute wounds. The Journal of investigative dermatology. 111, (5), 850-857 (1998).
  7. Schwartz, D. A., Lindblad, W. J., Rees, R. R. Altered collagen metabolism and delayed healing in a novel model of ischemic wounds. Wound Repair Regen. 3, (2), 204-212 (1995).
  8. Chen, C., et al. Molecular and mechanistic validation of delayed healing rat wounds as a model for human chronic wounds. Wound Repair and Regeneration. 7, (1999).
  9. Zhang, Q., Chang, Q., Cox, R. A., Gong, X., Gould, L. J. Hyperbaric oxygen attenuates apoptosis and decreases inflammation in an ischemic wound model. The Journal of investigative dermatology. 128, (8), 2102-2112 (2008).
  10. Zhang, Q., Gould, L. J. Hyperbaric oxygen reduces matrix metalloproteinases in ischemic wounds through a redox-dependent mechanism. The Journal of investigative dermatology. 134, (1), 237-246 (2013).
  11. Moor, A. N., et al. Consequences of age on ischemic wound healing in rats: altered antioxidant activity and delayed wound closure. Age (Dordrecht, Netherlands). 36, (2), 733-748 (2014).
  12. Roy, S., et al. Characterization of a preclinical model of chronic ischemic wound). Physiological genomics. 37, (3), 211-224 (2009).
  13. Biswas, S., et al. Hypoxia inducible microRNA 210 attenuates keratinocyte proliferation and impairs closure in a murine model of ischemic wounds. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107, (15), 6976-6981 (2010).
  14. Winocour, S., Vorstenbosch, J., Trzeciak, A., Lessard, L., Philip, A. CD109, a novel TGF-beta antagonist, decreases fibrotic responses in a hypoxic wound model. Exp Dermatol. 23, (7), 475-479 (2014).
चूहा इस्केमिक त्वचा घाव मॉडल का प्रदर्शन
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Trujillo, A. N., Kesl, S. L., Sherwood, J., Wu, M., Gould, L. J. Demonstration of the Rat Ischemic Skin Wound Model. J. Vis. Exp. (98), e52637, doi:10.3791/52637 (2015).More

Trujillo, A. N., Kesl, S. L., Sherwood, J., Wu, M., Gould, L. J. Demonstration of the Rat Ischemic Skin Wound Model. J. Vis. Exp. (98), e52637, doi:10.3791/52637 (2015).

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