Protocol
1. הכנת הזחלים
- כדי לנתח זחל רצוי להעדפת תנועה או עמדה, לגדול זחלים בתנאים סטנדרטיים לגיל הרצוי לassay 10 באמצעות מזון זבוב סטנדרטי 11.
- הפוך מסנן רשת על ידי מתיחת ניילון כיתה משי הרשת מעל משפך. אבטח את הרשת בצוואר המשפך עם גומייה. מניחים את המשפך בכוס.
- לאסוף זחלים לניתוח, לגרוף מרית מלאה של מזון המכיל זחלי ליקוט מבקבוק התרבות ולשטוף במים ברז RT על מסנן הרשת, איסוף זחלים בודדים ישירות מהרשת עם מכחול 10.
2. הכנת Assay צינורות
- כדי להכין לחבר צינורות assay, להרתיח בזהירות ג'ל אגר 4% ויוצקים לתוך צלחת פטרי לעומק של 1.5 סנטימטר. זה יספק התוספת לכל צד של הצינור כאשר חיה מוקפת. פתרון 4% הוא צפוף מספיק כדי למנוע מזחלי עמ 'enetrating התקעים.
- ודא שצינורות נקיים וברור לפני הכניסה של זחל. אם הם לא, זה עלול לחסום תנועות ממוקלטות.
- כדי להבטיח לי זחלי לחות מספקת לתנועה, להכין בקבוק לחיץ המכיל כמות קטנה של מים חמים. הפוך את הבקבוק, כוון את היציאה לכיוון כיור בזהירות ולסחוט בעדינות כדי לגרש מים מצינור האיסוף.
- הכנס את שקע הבקבוק לתוך צינור assay. לסחוט את הבקבוק כדי לספק אדי מים לתוך צינור assay עד שכבה דקה של עיבוי מופיעה על הקיר של הצינור. 1 וידאו מראה זחל נע בצינור עם כמות מתאימה של לחות.
- לאטום את הזחל בצינור, להסיר את הג'ל אגר 1.5 סנטימטרים עובי מצלחת פטרי ומניח על משטח רשת כדי לאפשר זרימת אוויר מתחת לאגרתי כך שתקע אגר יכול להיות מוכנס לתוך הצינור. לחץ קצה אחד של צינור assay לתוך הג'ל פעמיים כדי להכניס שני תקעים של ג'ל לקצה אחד.
- עם paintbלמהר, למקם את הזחל אחד לתוך הצינור כ 1.5 אינץ 'עמוק ולאטום את הצינור על ידי לחיצה על הסוף קרוב הזחל לתוך הג'ל אגר. הלחץ וכתוצאה מכך יאלץ את התקע השני של ג'ל אגר מהקצה השני ולאטום את החיה בתוך הצינור.
- צינורות מקום במכשיר MB5 Multi-Beam תסיסנית פעילות הצג (DAM), ולהתאים את עמדות הצינורות כך שבעלי החיים לא יכולים להתקדם מעבר לטווח של החיישנים.
- כדי להבטיח assay שצינורות לא להחליק מחוץ למסגרת קריאת אינפרא אדום של המכשיר במהלך הובלה, להחזיק את השפופרת במקום על ידי חיזוק טבעת של מרק סביב צינור אחד שבו אנשי קשר במכשיר ההקלטה.
פעילות 3. מדידה
- שיא פעילות בחממה כדי למנוע קריאות לא מדויקות שעלולות להתרחש כתוצאה מצללים, אורות ניאון או לשינויים בטמפרטורה במעבדה. ראה איור 5 להסדר מוצע של המערכת.
- הגדר חממה עד 20 ° C (ראה איור 1). כדי להימנע מהקלטות שווא בשל הפרעות ממקורות אור הליבון במהלך הקלטה, לכבות את האורות חממת ניאון ולהשתמש במקור אור LED נפרד בעת ההקלטה בחממה. לבצע ניסוי ללא כל בעלי חיים על מנת להבטיח שתנאי התאורה לא aberrantly לעורר חיישנים. לא צריך להיות שום נתונים תנועה נרשמו לאחר בדיקה זו.
- לאפשר זחלים להסתגל לטמפרטורה של 20 מעלות הגדרות C חממה ל5 דקות לפני תחילת assay.
- כדי להגדיר את מערכת DAM למרווחי הקלטה רצויה (למשל, 1 דקות), להבטיח תוכנת הקלטת מערכת סכר היא הורידה לארח מחשב 12 ולפתוח את קובץ מערכת DAM לפני החיבור לתא ההקלטה לממשק PSIU.
- כדי להגדיר את התדירות הרצויה ההקלטה שבה נתונים יישמרו, בחרו העדפות ולאחר מכן לחץ על מעל או מתחת לאפשרות מרווח הקריאה לבחירת מסגרות זמן שונה שבו נתוניםיאוחסן. לדוגמא, בחר לקרוא פעמים מרווח משניות 1 עד שעה 1.
- כדי לבחור פרמטר שונה לנתונים הקלטה, לבחור את העדפות ולאחר מכן בחר את התיבות המתאימות בסוג נתוני פלט (ספירה, מהלכים, עמדות ולהתעכב, ראה טבלה 1). כל פרמטר מספק ניתוח ייחודי של פעילות הזחל בתוך הצינור.
- כדי להתחיל בהקלטה, חבר את הצג לאספקת חשמל ממשק היחידה (PSIU) באמצעות כבל טלפון CAB6. חבר את PSIU לשקע חשמל. אור ירוק יציין חיבור מתאים.
- חבר את PSIU באמצעות כבל אפיק טורי אוניברסלי (USB) למקינטוש או Windows PC להקלטת נתונים. פתח את תכנית DAM SystemMB1v6x במחשב כדי להתחיל בהקלטת נתונים באופן אוטומטי.
- לאחר זמן האוסף הרצוי הוא שלם, בחר צא, ולאחר מכן צא עכשיו על מסך פעילות DAM; הנתונים לאחר מכן ניתן יהיו נשמרים באופן אוטומטי תחת מערכת נתונים DAM. קח קובץ נתונים זה (למשל, לעקוב אחר 1) וגרור לתוך תיקייה נפרדת. זה יהיה לאחסן את הנתונים הגולמיים מהתוכנה DAM, כך שהם יכולים מאוחר יותר להיות מעובד.
4. הכנת נתונים לעיבוד (DAM FileScan)
- כדי לעבד את המידע הגולמי לפורמט מובן לפתוח את יישום DAM FileScan ובחר תיקיית נתוני קלט בחר. לאחר מכן בחר את תיקיית הנתונים ואת הקובץ הרצוי, ובחר את אפשרות הסריקה. לבסוף בחר באורך בן לתקופה הקריאה הרצויה. זה יהיה לארגן את המידע הגולמי לפרמטרים שנקבעו על ידי המפעיל והתכנית תדווח את הנתונים שנאספו בטווח מסוים.
- בחר את סוג נתוני תפוקה לנתח את הגדרת התנועה הרצויה (ספירות צג, מהלכים, תשכנו). בתפריט קריאה נוספת, סכום בחר לפח (זה אם אורך בן גדול ממרווח קריאת המערכת שנבחר).
- שם הקובץ כראוי ולשמור. הקובץ יישמר באותו המיקום כמו התיקייה מצעד 3.9.
- כדי לאסוף מהלכים ממוצע, תהליך הנתונים הגולמיים המופקים מצעד 4. כדי ליצור טבלה בתוכנת גיליונות אלקטרוניים, לפתוח את הקובץ שנשמר בעבר (שלב 4.3), וכאשר חלון אשף יבוא הטקסט מופיע, גימור בחר לפתוח קבצי נתונים בפורמט גיליון אלקטרוני.
הערה: בהתאם לסוג הנתונים מנותח, הגיליון האלקטרוני יהיה לקרוא בצורה שונה. בדרך כלל למדידת מהלכי צג או ספירה, תקופת המחקר הזמן תירשם מספרית, בזמן שכל צינור קריאה בודד יקבל מכתב מיועד. בעת הצגת הנתונים בגיליון האלקטרוני, עמודות KZ מייצגות את החריצים לצינורות assay 1-16 בהתאמה. השורות מייצגות את נקודות נתונים שנאספו. - לדוגמא, אם מהלכים נאספו במשך 20 דקות במרווחי 1 דקות, בממוצע 20 השורות לחישוב מספר ממוצע של מהלכים / דקות ומדידות אחרות.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
איור 1 מציג את התוצאות ממחקר תגובת טמפרטורה של זחלי instar השלישי שליטה, w 1,118, שימוש במכשיר הניטור כדי לזהות הבדלים בתנועת זחל בשבע טמפרטורות שונות. הזחלים נשטפו והניחו למכשיר פעילות DAM כפי שתוארו לעיל, והניחו בחממה להגדיר לטמפרטורה הרצויה. המנגנון היה אז מותר להסתגל לסביבה במשך 5 דקות לפני ההקלטה החלה. כל זחל נותח בנפרד עבור תנועה על פני תקופה של 20 דקות והמספר הממוצע של מהלכים לדקה חושב לכל בעל חיים וממוצע לכל קבוצה של 32 בעלי חיים. הנתונים נותחו וגרף באמצעות תוכנת גיליונות אלקטרוניים. זחלים הציגו פעילות להגדיל באופן משמעותי כטמפרטורה עלתה בהתאם 5-35 מעלות צלזיוס במרווחים של 5 מעלות, למעט הפסקה במגמה זו בטמפרטורה של 20 מעלות צלזיוס ו -25 מעלות צלזיוס.
כדי לוודא שcou הבדליםLD להתגלות בין שליטה ומוטציה שתוארה בעבר כhypoactive, זחלים לא פעילים (iav 1) נבדקו. הנתונים נותחו כמהלכים / דקות לכל 32 בעלי החיים וממוצע היה אז מחושב. כפי שניתן לראות באיור 2, הניתוח מצביע על כך שזחלים לא פעילים היו באופן משמעותי פחות מאשר נייד שליטה. בזמן שהם קטנים בהרבה מזחלי instar שלישיים, פעילות של זחלי instar הראשונים והשני הייתה גם למדידה, כפי שמוצג באיור 3. הפעילות של זחלי instar שלישיים בכל דקה של assay 20 דקות הוצגה להישאר עקבי יחסית לאורך כל התקופה ( איור 4).
איור 1. w 1,118 תנועת זחל נרשם בטמפרטורות הנעות בין 5 ° C -. 35 מעלות צלזיוס EAC טור h מייצג את התנועה הממוצעת של 32 בעלי חיים instar שלישיים עם מהלכים בודדים לדקה בממוצע בקרב הקבוצה. * כל הממוצעים שונים באופן משמעותי מזה חוץ 10 מעלות צלזיוס ו -15 מעלות צלזיוס (p = .116) (אותיות שונות מצביעים על הבדל משמעותי, מבחן t סטודנטים).
זחלי איור 2. instar השלישי שליטה בהשוואה לזחלים לא פעילים (iav 1) בתערוכת זחלים 20 מעלות צלזיוס. iav 1 פחות באופן משמעותי בהשוואה לניידות שליטה.
איור 3. מדידה של פעילות של זחלי instar הראשונים, שני והשלישי על מרווח הקלטה 20 דקות ב 20 מעלות צלזיוס. N = 32 עבור כל שלב זחל.
לשמור-together.within עמודים = "תמיד">: 
איור 4. היסטוגרמה מוצגות מספר ממוצע של מהלכים המתרחשים בכל דקה של הפסקת הקלטת 20 דקות. 32 זחלי instar שלישיים היו assayed ב 20 ° C. הקו האדום מייצג את מספר המהלכים לדקה בממוצע למרווח של 20 דקות השלם.
תרשים איור 5. הממחיש את הגדרת תסיסנית פעילות הצג והקישוריות שלה ליחידת ממשק PSIU ומחשב שולחני. בתוך החממה מתואר, אך במהלך הקלטת החממה היא לסגור.
| תיאור | פרמטר |
| הנתונים רשומות בכל פעםזחל עובר קרן, וספירה נוספת נרשמת אם מהלכי הזחל בעוד בקרן אחת. | ספירה |
| הנתונים רשומות רק כאשר זבוב ממקם מחדש בין קורות נפרדות, זה לא להקליט תנועה בתוך קרן. | מהלכים |
| רושם את עמדת בעלי החיים בכל שנייה על מרווח הקלטה. נתונים אלה מגלים העדפת מיקום כפונקציה של הזמן בילה בכל חיישן במהלך assay. | לָשֶׁבֶת |
| הגדרה זו מנתחת את העמדה הכללית של החיה בתוך הצינור, המציין שחיישן בעלי החיים מפעילה בתנועה. | עמדה |
| הגדרה זו קובעת את התדירות שבה נתונים שנאספו במהלך מסגרת זמן שנקבע נשמרים במחשב שולחני. | מרווח הקלטה |
תיאור טבלה 1. measuפרמטרים rement (ספירות, מהלכים, להתעכב ופוזיציות).
וידאו צינור assay מערכת 1. DAM לפני הכניסה למכשיר הפעלה. הלחות מסופקת על ידי עיבוי מנשימה. רמה זו היא מספיק כדי לשמור על תנועת זחל לאורך כל תקופת המחקר מבלי לגרום לבעלי החיים לצוף או לשחות. אנא לחץ כאן כדי לצפות בסרטון זה.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
פעילות של זחלים תסיסנית מושפעת על ידי מגוון של גורמים, כולל גנוטיפ 8, גיל 13 וסביבת טמפרטורה 2. למרות ששיטות videographic חזקות מסוגלים ניתוח מפורט ביותר שפותחו על ידי אלה שלומדים תנועה 5, זה ברמה של פרט עשויה להיות מיותרת למי שרוצה לקבוע פרמטרים בסיסיים של פעילות. השיטה המתוארת כאן מעסיקה מכשיר שזמין במעבדות רבות, קל לתפעול, מייצרת תוצאות מאוד לשחזור, וניתן לשליטה גם למי שעיקר מחקר מתמקד לא תנועה. תוצאות הדוגמא להוכיח כי assay זה יכול לשמש כדי לזהות שינויים משמעותיים בתנועתיות בזחלים נתון לטמפרטורות שונות (איור 1) ושל גנוטיפים שונים (איור 2).
כאשר זחלים נמדדו בטמפרטורות הנעות בין 5 ° C - 35 ° C, שלהםפעילות מוגברת עם טמפרטורה, למעט הפסקה במגמה בין 20 ° C ו 25 ° C (איור 1). הוכח על ידי איינסלי ועמיתים לעבודה שזחלים שלישיים מוקדמים ליקוט instar מעדיפים טמפרטורות בתוך +/- 2 מעלות צלזיוס בטמפרטורה של 25 מעלות צלזיוס התרבות הטיפוסית. עם זאת, כאשר זחלים להיכנס נדודי אמצע שלב שלישי instar הם מעדיפים טמפרטורות קרירים מעט 2. ממצא זה עולה בקנה אחד עם התצפית שהפעילות של תנועה לזחלים שלישיים instar-גדולה ב 20 מעלות צלזיוס מ -25 מעלות צלזיוס, מה שמרמז שחלק מסוים של בעלי החיים assayed היה בשלב הנדודים ויותר פעיל בטמפרטורות קרירה, ופחות מכך ב טמפרטורת התרבות הנורמלית של 25 מעלות צלזיוס.
שיטה זו מציעה פשטות, אובייקטיביות ותפוקה חזקה, אבל יש מגבלות. היישומים שתוארו לעיל מייצגים מבחני המתרחשים על פני פרק זמן קצר יחסית, בין שאר משום שההגדרה הנוכחית יחסי הציבור לאזחלי ovide עם מקור מזון. הבטחת תזונה הולמת תהיה צורך ללמוד את השינויים בפעילות לאורך תקופות ממושכות של זמן או למדוד קצב היממה בטווח הארוך יותר. התקעים אגר 4% עלולים להגביל חילוף גזים בין התא והסביבה החיצונית, שעלול לגרום לזחלים חווים תנאי חוסר חמצן. עם זאת זו אינה מופיעה כדי להשפיע על פעילות בתוך תקופה assay 20 דקות, משום שכאשר מהלכים לדקה של זחלים ממוצע בכל דקה של התקופה נותחו, זחלים לא מופיעים לא להציג כל שינוי בפעילות בהשוואה לתקופה ההקלטה (איור 4) .
בגלל עמדת תקליטי מכשיר ברציפות שהוא מייצג שיפור בלכידת תנועה יותר בהשוואה לשיטות אוטומטיות שאינן מצוטטות, עם זאת כמה תנועה עושה לברוח זיהוי. מאוד תנועות קטנות של בעלי חיים לא יכולות לעורר תגובה ממכשיר זה, וזחלים יכולים לנוע בצורה היקפית באינפרא אחדקרן אדומה בלי לשבור קורות שכנות, וכתוצאה מכך בקריאה מדויקת נמוכה. עם זאת, מאז זה סוג של שגיאה שניתן היה לצפות שיתרחש בכל קבוצות הטיפול, אין זה סביר לגרום לתוצאות מטעות. למרות זחלי instar שלישיים הם המוקד העיקרי של ניתוח זה, המכשיר מסוגל למדוד את התנועה של זחלי instar הראשון והשני הרבה יותר קטנים, כמו גם (איור 3). כצפוי, מספר המהלכים שנרשמו לדקה בבעלי החיים הצעירים הוא נמוך מזה של בעלי החיים instar שלישיים הגדולים יותר.
למרות המגוון הרחב של שימושים למכשיר זה טרם הוכיח, יש מגוון של עיבודים אחרים שיכולים לגוון את השימושים של מנגנון זה למחקרים שכלל זחלים. לדוגמא, המכשיר מאפשר מדידה "להתעכב", המייצג את הזמן שבילה באזור שנקבע של הצינור. זה עשוי לספק מידע רב ערך כאשר הועסק בדרוזופילה השונות זחל מוניותssays. על ידי הצבת המכשיר על צידו כך שהצינורות הם בכיוון אנכי במקום אופקי, אפשר למדוד geotaxis זחל. כדי למדוד Phototaxis, שיפוע קל יכול להיות שהוקם בצינורות, בודק אם יש לי זחלי העדפה לאור או היעדרה. ללמוד chemotaxis, כימי בדיקה יכולה להיות ממוקם באחד מהתקעים אגר ואת המיקום של הזחלים אולי אז יגלו לקבוע העדפתם לאו הימנעות מכימית.
מערכת הצג מאפשרת הניתוח של פרמטרים שונים בתנועה, מסוכמים בטבלה 1. על ידי בחירה כל הפרמטרים במהלך ההתקנה מראש assay (ראה שלב 3.6), הנסיין יכול לבחור איזה פרמטר לנתח לאחר assay. עם זאת, אם כל הגדרה לא נבחרה, נתונים שלא יהיו זמינים לניתוח שלאחר הוק. יש לציין שלאחר כל פרק זמן מסוים, נתונים קפואים בספירה נוכחית ונשמרו במחשב המארח. איסוף הנתונים ולאחר מכן מאפס לאפס לאחר תקופה זו ומתחילה שוב, מתן סדרה של נקודות נתונים מרווח זמן. יש להפסיק באופן ידני כדי לסיים את ההקלטה נתונים.
מחקרים עתידיים הכרוכים בשיטה זו יתמקדו בשימוש בפרמטר להתעכב והיישומים השונים שלה. כמו כן ייתכן שניתן לפתח פרוטוקול שיאפשר ללימודים להתרחש על פני תקופה ארוכה של זמן, כגון מחקרי היממה, על ידי מתן מזון והחלפת אטמים אגר לחומר גז חדיר יותר 14. רמות הלחות היו צריכים להיות בשליטה, כמו גם, כתנאים יבשים לעכב תנועה 15. נכון לעכשיו, פרוטוקול זה מספק שיטה מדויקת, פשוט, יעיל וחסכונית כדי להעריך פרמטרים בסיסיים של פעילות זחל תחת מגוון רחב של תנאי ניסוי.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Drosophila Activity Monitor, Multibeam, 16 tubes, including wires | TriKinetics Inc. | MB5 | |
| Power Supply Interface for Activity Monitor | TriKinetics Inc. | PSIU24 | |
| Glass 80 x 5 mm tubes for Activity Monitor (100) | TriKinetics Inc. | PGT 5x80 | |
| DAMsystemMB1v6x Data Acquisitions Software for Macintonsh OSX (Intel) | www.trikinetics.com | free download | |
| DAMFileScan 108x software for Macintosh | www.trikinetics.com | free download | |
| USB software (PSIUdrivers.zip). | www.trikinetics.com | free download | |
| DAMSystem Notes 308 | www.trikinetics.com | free download | |
| Zeiss Stemi 2000C- Stereo Microscope | Spectra Services | SP-STEMI2000C-BS | |
| Carbon Dioxide | Maine Oxy | anaesthesia | |
| Fly Pad | Genesee | 59-114 | surface for sorting anaesthetized flies |
| Small paint brush | Winsor & Newton | #2 ROUND | or similar, used for sorting anaesthetized flies |
| Silk Screen Printing Mesh (160) | msj-gallery.com | SM160W63-3YD | pore sized used in this protocol was ~ 0.1 mm |
| Tegosept | Genesee | 20-258 | preservative |
| Ethanol (190proof) | Pharmco | 111000190 | used to dissolve Tegosept |
| 6 oz Square Bottom Bottle (PP) | Genesee | 32-130 | |
| "Flugs" for Plastic Fly bottles | Genesee | 49-100 | |
| Drosophila Vials, Wide (PS) | Genesee | 32-117 | |
| Flugs for wide plastic vials | Genesee | 49-101 | |
| Yellow Degerminated Corn Meal | Gold Medal | ||
| Drosophila agar | LabScientific | FLY 8020 | |
| Baker's Yeast - Red Star | King Arthur Flour | 1270 | |
| Granulated Sugar - Extra Fine | Domino |
References
- Tracey, W. D. Jr, Wilson, R. I., Laurent, G., Benzer, S. painless, a Drosophila.gene essential for nociception. Cell. 113, 261-273 (2003).
- Ainsley, J. A., Kim, M. J., Wegman, L. J., Pettus, J. M., Johnson, W. A. Sensory mechanisms controlling the timing of larval developmental and behavioral transitions require the Drosophila.DEG/ENaC subunit. Pickpocket1. Dev. Biol. 322 (1), 46-55 (2008).
- Pandey, U. B., Nichols, C. D. Human disease models in Drosophila. melanogaster.and the role of the fly in therapeutic drug discovery. Pharmacol. Rev. 63 (2), 411-436 (2011).
- Cattaert, D., Birman, S. Blockade of the central generator of locomotor rhythm by noncompetitive NMDA receptor antagonists in Drosophila.larvae. J. Neurobiol. 48 (1), 58-73 (2001).
- Caldwell, J. C., Miller, M. M., Wing, S., Soll, D. R., Eberl, D. F. Dynamic analysis of larval locomotion in Drosophila. hordotonal organ mutants. PNAS. 100 (26), 16053-16058 (2003).
- Nichols, C. D., Bechnel, J., Pandey, U. B. Methods to assay Drosophila behavior. J. Vis. Exp. (61), (2012).
- Godoy-Herrera, R. The development and genetics of digging behavior in Drosophila. arvae. Heredity. 56, 33-41 (1986).
- Sinadinos, C., Cowan, C. M., Wyttenbach, A., Mudher, A. Increased throughput assays of locomotor dysfunction in Drosophila. larvae. Journal of Neuroscience Methods. 203 (2), 325-334 (2012).
- Homyk, T., Sheppard, D. E. Behavioral mutants of Drosophila melanogaster. I. Isolation and mapping of mutations which decrease flight ability. Genetics. 87 (1), 95-104 (1977).
- Chattopadhyay, A., Gilstrap, A. V., Galko, M. J. Local and global methods of assessing thermal nociception in Drosophila. larvae. J. Vis. Exp. (63), e3837 (2012).
- Model Organisms I: yeast, Drosophila and C. elegans. Science Education Database. , JoVE. Cambridge, MA. Available from: https://www.jove.com/science-education-database/3/essentials-of-biology-1-yeast-drosophila-and-c-elegans (2015).
- Woods, J. K., Kowalski, S., Rogina, B. Determination of the spontaneous locomotor activity in Drosophila melanogaster. J. Vis. Exp. (86), e51449 (2014).
- Troncoso, B., Godoy-Herrera, R., Waldo, M. The development of larval movement patterns in Drosophila). Heredity. 58 (1), 321-329 (1987).
- Helfrich, C., Engelmann, W. Circadian rhythm of the locomotor activity in Drosophila. melanogaster.and its mutants ‘sine oculis’ and ‘small optic lobes. Physiological Entomology. 8 (3), 257-272 (1983).
- Johnson, A. W., Carder, W. J. Drosophila, ociceptors mediate larval aversion to dry surface environments utilizing both the painless TRP channel and the DEG/ENaC subunit, PPK1. PLoS ONE. 7 (3), (2012).
