Introduction
형질 전환 마우스 모델은 알츠하이머 병 (AD)의 병태 생리학뿐만 아니라, 치료 적 개입의 가능성을 평가하는 수단이되어왔다. 이러한 모리스 물 미로 (MWM)인지 적 작업은 일반적으로 기억력 결핍의 분자 상관 관계를 파악하고 전임상 약물의 효능을 평가하기 위해 이러한 모델과 함께 사용된다. 이는인지 작업의 동적 범위는 치료 효과 미묘한 검출 충분히 넓은 것이 그러나 중요하다. 광고의 마우스 모델,인지 적자는 일반적으로 나이에 따라 달라집니다, 그리고 마우스는 성능이 점진적 감소를 표시 (예를 들면, 1). 민감한 태스크인지를 사용하여 동물 노화와 관련된 비용을 줄일 이전 동물의 생명에 미묘한 차이를 검출 할 수있다. 예를 들면, 해마 의존적 반스 훈련 실험의 수를 줄이는 것이 15-5 미로 D 결과, 작업의 어려움을 증가보다 이른 나이에 3xTg 모델에서 적자의 금 속 탐은 이전에 2를보고했다. 적자 이전 검출뿐만 아니라 이것은 또한인지 결핍의 기초 분자의 변화를 식별 할 수있는 가능성이 높아, 상당한 시간과 비용 절감을 제공한다.
인지 작업의 감도에 영향을 미치는 하나의 요인은 마우스 모델의 유전 배경 균주이다. 예를 들어, BALB / c 마우스는 C57BL / 6 (3)과 같은 다른 균주에 비해 과제 학습 및 기억에 우수한 성능을 나타낸다. F1 FVB / N X 129S6 배경은 AD의 가장 널리 사용되는 모델 Tg2576 및 RTG (TauP301L) 4510 모델이 사용된다. 이 균주는 B6 / SJL 마우스 (4)를 포함하여 다른 균주에 MWM 상대적으로 우수한 학습 능력을 나타낸다. 이 때문에 우수한 학습 능력, 광범위한 훈련 후 단일 프로브의 사용은 오버 - 트레이닝으로 인한 그룹 차이를 마스크 할 수있다. 또한, sensitivit프로브 시험의 Y는 연령에 따라 달라질 수 있습니다. 우리는 이전에 이전 프로브 시험은 제한 숨겨진 플랫폼 훈련 후,보다 젊은 형질 전환 유전자 음성 한배의 새끼 컨트롤에 비해 젊은 Tg2576의 차이에 더 민감 더 광범위한 훈련 (5) 다음에 삽입 프로브 시험 있음을 보여 주었다. 이전 프로브 시험 5보다 대조적으로, 광범위한 교육을 다음과 같은 검사 시험은 이전 한배 새끼에 비해 Tg2576 마우스 이전 (20 ~ 25 월)에 더 민감하다. 길이 시험이 수행되고, 특정 프로브 시험의 감도 연령 의존적 인 경우 특히 훈련 내내 프로브 시험을 산재하여 민감한 재판이 식별 될 가능성이 증가된다. 1 F1 FVB / N (X)의 우수한 성능을 보여준다 더 광범위한 훈련 프로토콜에서 훈련 B6 / SJL 배경의 마우스에 비해이 변형에 최적화 된 프로토콜에 따라 129S6 마우스.
MWM은일반적으로 시간과 실험실 (6) 모두에서 재현 할 수있는 신뢰할 수있는 수단을 제공하기 위해 생각했다. 예를 들어, 원래 우리의 미네소타 실험실 1,7에서 사용되는 기본 프로토콜이 성공적으로 웨스트 버지니아 대학 8에 약간의 수정으로 구현되었습니다. 마찬가지로, 손상 동등한 수준 무균 또는 통상 조건 하에서 구 수납 경우 한배 새끼를 제어하기 위해 4510 생쥐 상대 RTG (TauP301L)에서 관찰되었다. 그러나, 테스트 환경 MWM 태스크의 민감도에 영향을 미칠 수있다. 같은 실내 조명, 환기구, 온도 구배 및 소음 등의 모든 요소가 궁극적으로 성능에 영향을 미칠 수있는 환경 단서 4에 기여한다. 우리 미네소타 실험실 동물 사육장은 신축 이동 하였을 때, 최대 야생형 성능의 38 % 감소는 실질적으로 작업 및 트랜스 - 관련 결핍을 탐지 할 수있는 능력의 동적 범위를 감소가 관찰되었다. PE의 변화rformance 동등한 크기 및 구성으로 검사실을 설계하고, 동일한인가 시각적 큐를 사용에도 불구하고 발생 하였다. 본래의 프로토콜 A "재 최적화가"새로운 테스트 환경에서 MWM 태스크의 동적 범위를 증가시키기 위해 요구되었다.
여기에 F1 FVB / N와 함께 사용하기위한 맞춤형 원래 프로토콜은 129S6 배경 5 설명 X. 일부 연구는 응력을 제시하기 때문에 성능 (11)이 스트레스 유도 결손 완화 불량한 MWM 성능 (10) 및 사전 처리와 연결되어, 사전 처리 프로토콜은 풀의 도입 및 제거 전에 MWM 테스트 행에 쥐를 순응하도록 설계되었다 . 사전 처리 후, 마우스 제기 플랫폼 플래그가 표시되는 볼 플랫폼 교육을 받다. 눈에 보이는 플랫폼 훈련은 감각 이상과 관련된 성능 문제로 쥐를 식별하는 데 사용됩니다. 제자에 설명 된 배제 기준을 사용하여ocol 섹션, 성능 무능한 마우스 숨겨진 플랫폼 교육 및 프로브 시험 이후의 시험에서 제거됩니다. 감각 성능 데이터에서 고려되기 때문에 숨겨진 플랫폼 교육 및 프로브 시험에서 장애인지 적자로 해석됩니다. 가시 플랫폼 훈련 종료 후, 마우스는 플랫폼을 물에 잠긴 외부 큐에 대해 동일한 위치에 유지된다 숨겨진 플랫폼 트레이닝을 시작. 플랫폼 (프로브 시험)을 제거하는 시험이 추가 교육의 영향을 평가하기 위해 숨겨진 플랫폼 교육 전반에 걸쳐 산재되어있다. 프로브 실험은 하루의 시작 부분에서 발생하기 때문에 추가적인 숨겨진 플랫폼 트레이닝 전에, 프로브 실험은 20 시간 지연에 따라 플랫폼의 위치를 기억하는 동물의 능력을 측정하고, 기준 메모리 (12)의 측정 값을 고려 하였다. 마지막으로, 방법은이 프로토콜은 원래 다시 최적화 될 때 테스트 환경 변화중단 제어 성능이 설명되어 있습니다.
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Protocol
모든 실험 절차는 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)의 기준에 따라 수행과 웨스트 버지니아 대학의 IACUC에 의해 승인되었다.
1. 사전 처리
- 풀 설정
- 이 편안한 높이로 상승되도록 사전 처리 풀 소품.
- 약 1cm의 레벨로 사전 - 처리 풀에 물 2 L (21 ℃에서)를 놓는다.
참고 : 색상을 추가하지 마십시오.
- 순서
- 테스트 룸에 동식물 사육장에서 쥐를 가져와.
- 주제 식별 확인 (대상 번호, 꼬리 문신, 귀 클립, 등.).
- 영구 마커 마크 마우스의 꼬리는 테스트 할 남아있는 것과 테스트를 미리 처리받은 케이지 내에서 마우스를 구별한다. 같은 색으로 한 장에 모든 쥐를 표시합니다.
- approxima위한 전사 비이커에 마우스를 놓고tely 5 초. 그런 다음, 부드럽게 사전 처리 풀에 비커에서 마우스를 붓는다.
- 타이머를 사용하여, 마우스를 20 초 동안 풀에 남아 있도록.
- 20 초 후, 부드럽게 마우스의 앞에 (를 낚시를하지 않고) 특종을 배치합니다. 간단히 마우스가 특종을 탐구 할 수 있도록, 필요한 경우, 천천히 들어올 리면서 부드럽게 마우스의 특종을 밀어 국자에 얻을 수있는 마우스를 권장합니다. 국자와 마우스를 놀라게하지 않도록주의하십시오.
- 마우스 국자로되면, 유지 케이지로 다시 전송.
- 십일을 위해 하루에 한 번 케이지에서 각 마우스에 대해이 절차를 반복합니다. (각 동물 한 것과 같이) 일정한 간격으로, 그물을 사용하여 풀에서 배설물 boli과 침구를 선택합니다.
- (마우스의 케이지의 완료 후 예) 일정한 간격으로 물을 전송 비이커를 씻어.
- 이 단계가 완료되면, 물로 여러 번 전송 비이커 린스 물을 덤프풀은, 물과 풀을 약 2 회 헹군다.
2. 눈에 보이는 플랫폼 교육
- 설치 마우스 성능 추적 소프트웨어 예 : 뷰어 (재료의 표 참조).
- "필터와 객체"탭 - '설정'에서 미로의 크기에 맞게 비디오를 보정합니다.
- 소프트웨어가 배경에서 마우스를 구별 할 수 있도록 필터를 설정합니다.
- 추적 소프트웨어는 동물을 식별하도록 "배경 화면 필터"영역 아래 "민감도"를 조정한다.
- 추적 소프트웨어가 동물을 식별하면 "동의 함"옵션을 클릭합니다. 미로 영역 이외의 영역을 블랙 아웃 할 수있는 "편집"옵션을 선택합니다.
- 해당 "동물 필터"와 "분을 선택합니다. 동물의 크기 ".
- 실행 시트를 만들기 <OL>
- 각 마우스를 나열하는 실행 시트, 각각의 잠재적 위치 및 비정상적인 동작에 대한 정보를 포함하는 메모 공간을 만듭니다.
- 생쥐의 각 그룹에 대해 동일한 표시 플랫폼 테스트 위치를 미리 결정. 따라서, 제 재판, 플랫폼은 마우스가 벽에 가까운 오른쪽에, 미로에 배치되는 위치에 반대 측에 배치되는 것을 사전에 결정한다. 제 재판, 플랫폼은 각각의 마우스에 대한 방벽을 따라 다른 위치에 배치 될 것임을 미리 결정하고 이는 6 실험마다 계속 될 것으로.
- 방 놀아 커튼 있도록 모든 공간 단서가 가려한다.
- 는 "구성"의 구성 설정와 일치하는 미로를 확인하여 추적 소프트웨어의 구성과 일치하도록 욕조를 배치 - "존 정의"탭을 선택합니다. 참고 : 시간elps는 욕조 욕조는 한번의 충전 이전되지 않는 물로 충전하기 전에 적절한 위치에 있는지 확인합니다.
- 수돗물 욕조를 입력하고 온도계를 사용하여 물 온도가 약 21 ℃를 확인합니다. 세 쥐 (8)을 사용하는 경우 차가운 물이 특히 성능에 영향을 미칠 수있는 물이, 테스트를 통해이 온도 1도에서 남아 있는지 확인합니다.
참고 : 색상을 추가하지 마십시오. - 소정의 위치를 사용하여, 13cm의 높이에 도달하여 터브의 제 1 위치에서 굵은 "S"그것에 양각 모양의 문자와 4.5 cm가 X 4.5 cm이다 장착 플래그가 플랫폼을 배치되도록 그것 대략 1 인치 수면 위에.
- 비커에 정확한 색상의 영구 마커를 사용하여 꼬리, 그리고 장소를 표시, 케이지에서 첫 번째 마우스를 가지고 주제 ID를 확인합니다.
- 부드럽게 MOUS를 배치터브 내로 E는, 타이머를 시작하고, 추적 소프트웨어는 동물 추적되도록. 2 분에 마우스까지 플랫폼을 찾을 수 있습니다. 마우스가 플랫폼을 찾으면, 플랫폼에서 마우스 20 초를 할 수 있습니다.
- 동물이 플랫폼을 찾아 이동 또는 낙하로 진행하는 경우, 마우스를 특종과 플랫폼에 마우스를 놓습니다. 마우스를 이동하거나 플랫폼을 떨어져 계속되면, 플랫폼에서 마우스를 잡고, 그래서 마우스가 플랫폼에 남아있는 욕조에서 탈출 리드 것을 배운다.
참고 : 마우스가 20 초에 결합 된 시간 동안 플랫폼에 남아 있어야한다; 마우스가 5 초 후에 꺼 점프한다면, 플랫폼에 남아있는 시간은 15 초이며, 20 초에 다시 설정하지 않습니다. - 동물은 2 분주기에서 플랫폼을 찾는 데 실패하면, 마우스를 국자 20 초 동안 플랫폼에 배치.
- 플랫폼에서 20 초 후, 사전 처리 훈련 수행으로 플랫폼에서 마우스를 제거하고 일에 마우스를 올려전자 가열 케이지는 종이 타월로 늘어서 30 초 동안 가열 패드와 가열 램프에 의해 ~ 31 ° C를 따뜻하게. 특정 연령에서 마우스 또는 쥐의 특정 균주를 보장하기 위해 직장 온도계로 체온의주기적인 평가를 수행 물에 노출에 의해 유도 저체온증에 차동 민감하지 않습니다.
- 가열 램프 지주 케이지 2 분 후, 시험 사이에서 복구만을 가열 패드, 그러나 가열 램프로 유지 케이지에 마우스를 옮긴다. 결국, 테스트 기간 동안 동일한 유지 케이지에 하나의 홈 케이지에서 마우스를 모두 넣습니다.
- 각 마우스는 시험을 완료 한 후 후각 신호를 방해, 그물 파편의 미로를 청소합니다.
주 : 플랫폼 단일 시험 동안 각 마우스에 대해 동일한 위치에 남아되고계속되는 시련의 다른 소정의 위치로 이동. 이것은, 2), 따라서 그대로 시각적 인 능력을 보여, 눈에 보이는 플랫폼에 직접 수영에서 탈출 할 수있는 플랫폼이 배우고 3)에는 모터 적자가 없습니다) 그 쥐 1을 보장하기위한 것입니다.
주 : 손 타이머의 사용은 또한 추적 소프트웨어의 정확도를 보장하는 것이 유익 할 수있다.
3. 모리스 물 미로 숨겨진 플랫폼 교육
- 에스객실 업 등
- 실험실에서 공간 단서를 모호하게 방에 커튼을 끊습니다.
- 커튼에 전략적으로 신호를 놓습니다. 단서가 큰 것을 확인하고 더 나은 가시성 대조 색상을 (예 : 흑백)을 포함한다. 그들은 욕조 내부에서 마우스로 볼 수 있습니다 거리와 높이에 꽉 큐. 참고 : 큐는 정적 및 테스트 과정에서 이동하지 않습니다.
- 마우스 성능 추적 소프트웨어 설치
- "필터와 객체"탭 - '설정'에서 미로의 크기에 맞게 비디오를 보정합니다.
- 소프트웨어가 배경에서 쥐를 구별 할 수 있도록 필터를 설정합니다.
- 눈에 보이는 플랫폼 테스트에 설명 된대로 모리스 물 미로 숨겨진 플랫폼 훈련에 대한 필터를 설정 (2.1.2.1-2.1.2.3 단계)과 동일한 방법을 사용합니다.
- 미로 내부에 네 개의 동일한 사분면 만들기
- 클릭"존 정의"탭에서 "타원"옵션을 먼저하고 화면의 미로와 일치하는 원을 만듭니다. 참고 :이 탭에서 설정 한 실제 미로 표시, 그래서 실제 미로 설정과 컴퓨터 설정에 맞게 옵션을 할 수있다.
- "사각형"옵션을 클릭하고 네 개의 동일한 사각형을 만들 수 있습니다. 새로 생성 된 원 안에 네 개의 동일한 사분면을 생성 화면에서 다음 사각형을 배치합니다.
- 미로의 플랫폼을 만듭니다.
- "타원"옵션을 선택하고 원에게 사용되는 플랫폼의 크기를 만들 수 있습니다. 주 : 미로의 플랫폼을 배치하면 사전에 타원에게 플랫폼의 정확한 크기를 만드는 데 도움이 될 수 있습니다.
- 대상 사분면의 중심에 새로 만든 플랫폼의 위치를 놓습니다. (그것은 나머지에서 올바른 플랫폼을 구분하기 위해이 객체 "대상"을 이름을 권장). 중요한 단계 : 상자에서 바로 벨"그리드"아야, 대상 플랫폼을위한 "트리거"에서 "중지"옵션을 선택합니다. 이 마우스가 플랫폼에 도달하면 프로그램이 중지 될 것입니다.
- 다른 세 동일한 플랫폼 영역을 생성하고 다른 사분면의 정확한 위치에 배치합니다. 선택하지 마십시오 "트리거"옵션에서 "정지".
- 실행 시트 만들기
- 각 마우스, 각 시험, 플랫폼에 도달하는 시간을 쓸 수있는 공간을 나열하는 실행 시트 및 비정상적인 행동 (표 1) 참고로 공간을 만듭니다.
- 의사 랜덤 방식으로 각 마우스의 릴리스 포인트를 미리 결정한다. 플랫폼에 처음부터 의사 - 랜덤 플랫폼까지의 거리가 4 위치 각각 똑같이 사용되고, 매일 동일하도록 선택하고, 각도를 사용 (예., 왼쪽 또는 오른쪽) 내에서 일 사이에 균형을 이룬다.
참고 : 플랫폼의 위치를 실행에시트는 원래 위치로부터 이동하지 않는 플랫폼의 위치를 보장한다. 플랫폼 추적 소프트웨어에서 만들어진 네 영역 중 하나의 중심에 있는지 확인.
참고 : 세로 테스트가 다양한 연령대에서 수행되는 경우, 각각의 나이에 새 위치로 플랫폼을 이동합니다.
- 미로 설정
- "존 정의"탭 - 물 미로 미로하고 "구성"의 구성 설정 사이의 일치가되도록 카메라를 조정합니다.
- 미로 (N, S, E, W)의 네 보이지 않는 사분면 레이블. 쥐를 보장하기 위해 추적 소프트웨어의 구성이 일치하는 정확한 시작 지점에서 방출되고 있음을 확인합니다.
중요한 단계 : 장소 미로의 외부 미로 내에서 큐가 아닌 공간, 비 해마 의존하는 작업을 구성 주어진 수영 동물의보기 중이 라벨. - 탭 식 수용으로 미로를 채우R (대략 21 ° C) 플랫폼은 수면 아래 약 5mm가되도록.
- 소정의 위치에 플랫폼을 놓습니다.
참고 : 플랫폼의 위치는 모든 일 시험을 통해 테스트중인 모든 마우스에 대해 동일하게 유지됩니다. - 물이 불투명하기 위해 비 독성 흰색 템페라 페인트를 사용합니다. 플랫폼의 상단이 수영하는 동안 동물의 눈높이에서 눈에 보이지 않는 것을 확인하기 위해이 작업을 수행합니다.
- 순서
- 케이지에서 마우스를 가지고 정확한 색상의 영구 마커를 사용하여 꼬리를 표시하고 비커에 넣습니다.
- 이 벽을 마주 진입하도록 부드럽게, 미로에 마우스를 붓는다. 주 : 각 마우스 고유 재판 동일 개시 위치에 배치 될 것이다.
- 마우스의 초기 릴리스에서, 타이머를 시작하고 테스터가되지 쉽게 볼 마우스입니다 지역에 서있다. 그 동물 추적 소프트웨어가 제대로 동물을 추적해야합니다. 동물이 플랫폼에 도달하면, 그것은 15 초 동안 플랫폼에 남아 있도록.
참고 :이 방 내에서의 공간 위치로 방향을 동물을 수 있습니다. - 플랫폼에서 15 초 후, 미로에서 동물을 제거하고 가열 케이지에 마우스를 반환합니다.
- 마우스가 플랫폼을 발견하고 뛰어 15 초 전에 떨어져로 진행하는 경우, 마우스를 퍼 마우스가 탈출과 플랫폼을 연결하는 학습 있도록 15 초 나머지 플랫폼에 다시 배치합니다.
- 마우스가 60 초 이내에 플랫폼을 찾지 않는 경우, 부드럽게 마우스를 특종과 플랫폼에 놓습니다. 그 다음, 15 초 동안 플랫폼에 남아있는 국자 동물을 제거하고 가열 케이지로 다시 가져올 수 있습니다.
- 후각 신호를 방해 그물 파편의 미로를 청소합니다.
- 그룹의 나머지 마우스에 대해이 절차를 반복합니다. 따라서, 테스트 일 4 ~ 9을 위해, 숨겨진 플랫폼 열차의 네 가지 시험을 실시각 시험 사이에 약 20 분으로 하루 보내고.
- 각 시험의 시작 위치 pseduorandomly을 변경합니다. 이에 따라, 시험 기간 동안 1, 그 후, 동일 개시 위치에서 마우스를 모두 해제 계속되는 실험에 다른 초기 위치로부터 절차를 반복한다. 매일, 비 공간 비 해마 의존적 운동 근육 전략을 개발하지 않는 동물을 위해 릴리스 포인트를 변화. 생쥐가 첫날에 N, S, E, W 및 포인트로부터 방출되는 경우, 예를 들어, 다음과 같은 일이 순서로 해제하지 않는다.
- 숨겨진 플랫폼 훈련 동안, 플랫폼, 동물의 경로 길이 및 시간의 비율에 도달 또는 동물 미로 각 사분면에 보낸다 거리를 지연 시간을 측정하기 위해 동물 추적 소프트웨어를 사용한다. "실험 목록"에서 "물 미로"탭에서 이러한 측정을 얻고 Excel 스프레드 시트에 직접 내보낼 수 있습니다.
주 : 손 타이머의 사용은 추적의 정확성을 보장소프트웨어.
4. 프로브 시험
- 마우스 성능 추적 소프트웨어 설치
- 한 가지 예외 (3.2.1-3.2.4.3 단계) 모리스 물 미로 숨겨진 플랫폼 절차와 동일한 절차를 사용합니다. 중요한 단계 : 프로브 시험은 "트리거"에 대한 "중지"옵션을 보장 프로브 시험 중에 전원이 꺼집니다. 이것은 마우스가 플랫폼 영역을 교차 할 때 중지하는 프로그램을 방지한다.
- 실행 시트 만들기
- 각 마우스, 각 시험 및 비정상적인 행동을주의 할 공간을 나열하는 실행 시트를 만듭니다. 그들은 플랫폼 반대 양측 교대하도록 프로브 시험 중에 릴리스 포인트를 미리 결정한다. 따라서, 사전 - 결정 생쥐 플랫폼에 인접하는 양측으로부터 해제되지 않도록 릴리스 포인트.
- 순서
- excep와 함께, 숨겨진 플랫폼 훈련과 유사한 프로브 시험을 실시어떤 플랫폼이 미로에없는 기.
- 소정 릴리스 포인트에서 마우스를 놓습니다. 프로브 재판 과정에서 플랫폼을 제거하고 마우스 미로에서 수영하는 60 초 있습니다.
- 테스트하는 동안, 4 프로브 시험을 실시하고 있습니다. 프로브 시험의 마우스의 릴리스 포인트를 변경합니다. 따라서, 이전 프로브 시험과는 전류 프로브 재판의 릴리스 포인트를 변경합니다.
- 프로브 시험 동안, 동물의 경로 길이를 추적하기 위해 동물 추적 소프트웨어를 사용하여, 동물 미로의 각 사분면에서 소비 시간의 비율, 그리고 동물들이 이전를 플랫폼 영역 위에 수영 횟수. Excel 스프레드 시트에있는 "데이터 분석"탭과 "실험 목록"에서 "물 미로"탭, 직접 수출에서 이러한 측정을 얻습니다.
주 : 손 타이머의 사용은 또한 추적 소프트웨어의 정확도를 보장하는 것이 유익 할 수있다. - 이전에 프로브 시험을 실시일 6, 7, 8, 10 (그림 2)에 숨겨진 플랫폼 훈련. 이 프로브 시험 후, 매일 훈련 숨겨진 플랫폼의 4 임상 시험을 실시한다. 따라서, 10 일에 프로브 재판 후 추가 숨겨진 플랫폼 훈련을 수행하지 않는, 반대로 3 절에 설명 된대로 먼저, 즉시 동일한 절차를 사용하여 모든 마우스에 대한 숨겨진 플랫폼 훈련 다음에 프로브를 수행합니다.
5. 분석
- 눈에 보이는 플랫폼 교육
- ANOVAs 개별적으로 (a) 경로 길이에 대해, (b) 대기 시간이 플랫폼을 찾기 위해, 그리고 (c) 사이에 피사체 변수 일 또는 트레이닝 블록들만큼 (예를 들면 치료로, 또는 다른 변수) 유전자와, 수영 속도 반복 측정을 실시 피험자 내 변수입니다. 참고 : 더 복잡한 설계를 들어, 통계와 상담 유용 할 수 있습니다. 그룹에 대한 자세한 내용은 8, 13 참조 제대로 알츠하이머 병의 일반적으로 사용되는 모델이 작업에 전력을 공급하기에 충분한 크기7; 병.
- 성능 무능력
- 시험의 절차 적 요소를 획득, 숨겨진 플랫폼과 프로브 성능의 후속 통계 분석에서 이러한 쥐를 제거하지 않는 시각적 또는 모터 무능력을 보여 마우스, 또는 동물을 포함하여, 성능 무능한 마우스를 식별합니다.
- 평균 대기 시간을 계산하고 각 마우스 볼 플랫폼 훈련의 마지막 날을 위해 속도를 수영. 이 모터 나 시각 장애를 나타내는 수있는 바와 같이, 그룹 위의 2 표준 편차의 의미 수단 쥐를 제거합니다.
- 확인하고 동양에 실패 쥐를 제거하거나 탈출 특종을 따라, 또는 코르크 스크류 수영 또는 부동 같은 비정상적인 행동을 보이는 생쥐,.
- 시험의 절차 적 요소를 획득, 숨겨진 플랫폼과 프로브 성능의 후속 통계 분석에서 이러한 쥐를 제거하지 않는 시각적 또는 모터 무능력을 보여 마우스, 또는 동물을 포함하여, 성능 무능한 마우스를 식별합니다.
- 모리스 물 미로 숨겨진 플랫폼 교육
- (a) 경로 길이에서 반복 측정을 실시 ANOVAs, (b) 대기 시간이 숨겨진 플랫폼을 찾기 위해, (c)는 속도, (d) %의 시간 또는 퍼센트 수영피험자 내 변수로 간 주제 변수 및 시험 등의 유전자와 사분면의 거리.
- 프로브 시험
- 수영 속도
- 피험자 내 변수로 간 주제 변수와 실험으로 유전자와 프로브 시험을 통해 수영 속도에 반복 측정의 ANOVAs을 실시한다.
- 플랫폼 교차 색인
- 다른 세 사분면에 동등한 위치의 평균 횡단 - 마우스 대상 위치를 가로 지르는 횟수 PCI = 번호 : 각각의 마우스에 대해 프로브 시험 구성을 사용하여, 플랫폼 횡단 지수 (PCI)는 다음 식을 이용하여 계산된다.
주 : 더 훈련 플랫폼 위치 위에 횡단 또는 thigmotaxic 수영 비 공간 전략에 의해 나타낸 바와 같이, 모두 4 개소에 걸쳐 대략 동일한 교차점으로 나타낸 바와 같이 이것은, 마우스 공간 탐색 방법을 사용하고 있는지 여부를 결정하기 위해 수행된다. - 행동을 반복피험자 내 변수로 사이에 대상 변수와 시험과 같은 유전자를 가진 PCI에 측정 ANOVAs.
- 다른 세 사분면에 동등한 위치의 평균 횡단 - 마우스 대상 위치를 가로 지르는 횟수 PCI = 번호 : 각각의 마우스에 대해 프로브 시험 구성을 사용하여, 플랫폼 횡단 지수 (PCI)는 다음 식을 이용하여 계산된다.
- 백분율 시간이나 사분면 %의 거리
- %의 시간을 계산하거나 각 마우스 미로의 네 사분면에서 소비 거리. 피험자 내 변수로 간 주제 변수와 실험으로 유전자로, 시간의 퍼센트, 또는 거리에서 반복 측정 ANOVAS을 실시한다. 공간 탐색 방법이 사용되는지 여부를 결정하기 위해 시간 퍼센트를 사용한다; 대상 사분면에 약 25 %의 시간의 결과는 쥐가 기회 레벨에서 수행하고 공간 검색 전략을 사용하지 않는 나타냅니다.
- O / N은 잊고
- 전날의 최종 재판 플랫폼을 찾기 위해 대기 시간에 프로브 재판 플랫폼 영역 횡단의 대기 시간을 비교한다. 참고 : 프로브 재판의 플랫폼 교차의 대기 시간 플랫폼,을 찾을 수있는 대기 시간보다 훨씬 긴 경우전날에 숨겨진 플랫폼의 마지막 재판 중에 M, 플랫폼 위치의 다음 O / N의 망각이 발생한다.
- 수영 속도
- 사후 분석
- 각각의 재판에서 형질 전환 유전자의 사후 비교에 중요한 RMANOVAs을 따르십시오.
새 테스트 환경에 대한 재 최적화 6. 예
- 사전 처리. 주택 방에서 사전 처리를 실시한다. 전체 세션에 대한 전송 카트에 뚜껑없이 케이지를 놓습니다.
참고 : 사전 처리 절차의 수정을위한 목적이 더 점진적으로 핸들러 조작 및 노출 운송 장치에 대한 소개 (비이커를 국자)과 시간 마우스는 자신의 새장의 microisolator 뚜껑없이 외부의 홈 케이지에 증가하는 오픈 필드와 밝은 조명 조건.- 1 일 및 2
- 마우스 케이지에있는 손에 적응 할 수 있도록 허용, 부드러운 터치하여 다음문신 검사 및 꼬리의 마킹 해제되는 하였다. 사전 처리의 2 일에 시작, 뚜껑 9 제거 된 동안 둥지 건물과 쉼터에 대한 추가 자료를 제공하기 위해 새장에 추가 둥지 재료를 놓습니다.
- 3 일 및 4
- , 전송 비커를 놓고 특 종, 사전 처리 상자에 보이는 플랫폼의 국기와 마우스는 시험 당 2 분에서 2 시험에 대해 탐구 할 수 있습니다.
- 사전 처리 과정이 프로토콜에 물을 사용하지 마십시오. 오히려, 상자 바닥을 커버하기에 충분한 깨끗한 침구를 포함하고 남녀가 테스트중인 경우 여성과 남성 오염 쓰레기 소량의 냄새가되어 있는지 확인합니다. 매일 침구를 변경합니다.
- 5 일
- 20 초마다 가볍게 오염 된 쓰레기 3 시험에 대한 눈에 보이는 플랫폼 플래그를 포함하는 사전 처리 상자에 넣어 마우스. 및 상자에서 마우스를 수송하는 비커와 국자를 사용합니다.
- 눈에 보이는 플랫폼 교육
- (정기적으로 미네소타 테스트 환경에 사용) 27 ° C에서 설정 수온.
- 큐 플랫폼을 획득시 홈 케이지에 마우스를 돌려줍니다.
- 60 초까지 마우스는 눈에 보이는 플랫폼을 획득 할 수 있습니다.
- 5 일간 하루 3 시험으로 구성된 교육 과정을 실시한다.
- 숨겨진 플랫폼 교육
- 시각적 단서를 수정합니다. 하나의 큰 커튼 핸들러를 모호 어느 제거하거나 풀 주변 좁은 다른 커튼을 만드는 것을 제외 더 개방 공간을 갖도록. 방에 대한 추가 개체를 배치 (예를 들어, 노출 선반, 흰색 기호, 검은 색과 흰색 비치 볼, 큰 검은 퍼널, 노트북 및 검은 동물 인형 블랙 패브릭 포스터) 균형하지만 더 다양한 시각 cue- 결과, 이전에 사용보다 설정합니다.
- 눈에 보이는 플랫폼 traini의 숨겨진 플랫폼 교육 72 시간 다음 완료를 시작하기NG, 시험 사이에 약 30 분 간격으로.
- 팔일 2 시험으로 구성된 교육 과정을 실시한다.
- 프로브 시험
- 프로브 시험 72 숨겨진 교육 시험 (8) 다음 시간, 12, 16.Include 시험 8-9 사이에 3 일 간격, 교육의 12 ~ 13을 수행합니다.
- 30 초 동안 프로브 지속 시간을 설정합니다.
- 1 일 및 2
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Representative Results
우리는 그림 3은 베타 - 아밀로이드 (Tg2576 마우스) 및 돌연변이 P301L 타우 공간 참조 메모리 (RTG (TauP301L) 4510 마우스) (예를 들면, 1,5,7,8).의 효과를 연구하기 위해 모리스 물 미로를 사용했다 대표적인 결과는 모터 및 시각적 능력을 평가하기 위해 테스트 환경 A.을 이용하는, 학습 및 기억 8 성인 발병 P301L 타우 발현의 효과를 조사 연구에서보고 된 마우스는 각 트레이닝 블록으로 이루어져 볼 플랫폼 트레이닝 블록들간에 비교 하였다 3 시험. 눈에 보이는 플랫폼 훈련 경로 길이는 유전자가 긍정적 인 제안, 컨트롤 및 TauP301L 마우스 (그림 3A) 사이에 차이가 없었다 음의 마우스는 비교 수영을 나타내는 두 그룹은 시각적 (플래그) 플랫폼을 표시를 볼 수 있습니다. 어떠한 마우스 배제 기준에 따라 성능 무능으로 확인되지 않았다. 숨겨진 플랫폼 훈련 블록에서 다음, 성능, 여기서 각각 비교 하였다블록은 교육의 일일 (4 시험)으로 구성되어 있습니다. 마우스는 플랫폼의 위치를 알게 된 바와 같이, 플랫폼을 찾기 위해 경로 길이 및 시간이 감소 하였다. 그러나 경로 길이는 공간 학습이 TauP301L 마우스에서 손상 된 제안 각각의 훈련 블록 (그림 3B)에서 컨트롤에 비해 훨씬 더 TauP301L 마우스에 있었다. 플랫폼이 제거 된 네 개의 프로브 시험은 숨겨진 플랫폼 훈련에 걸쳐 산재하고 이전에 숨겨진 플랫폼 훈련의 시작, 하루의 시작 부분에 일어났다. 따라서, 이러한 프로브 시험은 공간 참조 메모리를 측정 하였다. 대상 사분면 증가 시간으로 표시된 바와 같이 네 가지 프로브 실험을 통해 비교, 크게, 추가 교육 (그림 3C) 개선 제어합니다. 반면, TauP301L 마우스는 추가 교육을 개선하지 않았다. 따라서,이 나이에 두 그룹 사이의 가장 큰 차이는 이러한 데이터를 나타내는 프로브 시험 (4)에서 발생하는 P301L 타우 식공간 학습과 공간 참조 메모리 적자 모두와 연결되어 있습니다. 물 미로 작업 절차 일부 차이가 상대적으로 안정적 일 수 있지만, F1 FVB / N은 129S6 배경 균주 특정 환경 변화에 특히 민감 할 수 X. 설명 첫 번째 프로토콜은 성공적 환경 (B)에 사용되었다 (예., 1,7). 그러나, 야생형 프로브의 성능은, 환경 C. 재 최적화 프로토콜 상당히 개선 야생형 프로브의 성능 (도 4) 제 1 프로토콜은 제 위치에서 사용될 때 상당히 낮았다.
그림 1 :. 배경 변형에 대한 프로토콜 최적화 야생 형 7~8개월 된 마우스는 같은 신호를 사용하여 환경을 테스트하는 훈련을했다. F1 FVB / N은 (N = 24) 129S6를 X와 B6 / SJL (N = 16) 마우스는 처음으로 18, 24 볼 PLA를 받았다TForm의 교육 실험은 각각 각각 하루에 6, 8 시험에 전달했다. 두 균주는 하루에 4 숨겨진 플랫폼 훈련 재판을 받았다. F1 FVB / N은 129S6 마우스를 X의 경우, 프로브 시험은 8, 12, 16, 24 훈련 시험을 다음과 같은 20 시간을 실시 하였다. B6 / SJL 마우스의 경우, 프로브 시험은 12, 24, 36 훈련 시험을 다음과 같은 20 시간을 실시 하였다.
그림 2 :. 타임 라인 마우스 6 일 하루 4 시험에 대한 숨겨진 플랫폼 훈련 다음에 3 일, 하루 6 시험 볼 플랫폼 훈련을 받았다. 네 프로브 시험은 8, 12, 16, 24 숨겨진 훈련 후 20 시간 시험을 실시 하였다.
그림 3 :. 인간의 피를 운반하는 모리스 물 미로 TauP301L 마우스에 대한 대표 결과301L 타우 유전자 (각 그룹의 남성과 여성의 거의 동일한 번호로 N = 41 tauP301L 및 n = 46 컨트롤) P301L 타우 식 3 개월 후 나이의 약 6.5 개월로 조사 하였다. 눈에 보이는 플랫폼 훈련 (A) 경로 길이는 컨트롤과 TauP301L 마우스 (P S> 0.05) 사이에 차이가 없었다. F (5, 415) = 0.6141, P = 0.69 :; 형질 전환 유전자 × 블록 F (1, 83) = 41.96, P <0.0001 : 숨겨진 플랫폼 훈련 중 (B)는, TauP301L 마우스는 모든 훈련 블록에 걸쳐 (형질 전환 유전자를 훨씬 더 긴 경로 길이를 입증 ). TauP301L 마우스는 (:; F (3, 270) = 4.91, P = 0.008 형질 전환 유전자 × 시험 F (1, 83) = 29.1, P <0.0001 형질 전환 유전자를)하지 않았다 반면 (C) 컨트롤, 네 개의 프로브 시험을 통해 개선. 각각의 훈련 블록은 눈에 보이는 플랫폼 훈련을위한 3 시험 또는 hidd 4 시험 구성플랫폼 훈련 갖추고 있습니다. 사후 Tukey에 분석 : * P <0.05, ** P <0.01, *** P <0.001. Hunsberger에서 재판 그림 3의 일부 등., 성인 발병 P301L 타우 식 마우스 메모리 적자의 효과 크기, Behav 뇌 해상도, 집. (272), PP. 181-95. 저작권 2014, 엘스 비어의 허가.
그림 4 :. 프로브 점수는 크게 타우 음의 F1 FVB의 세 그룹 / N은 129S6 마우스는 8, 12, 다음과 같은 유의 한 차이 프로브 점수 생성 된 훈련 프로토콜 및 테스트 환경의 다양한 조합을 사용하여 훈련 X 테스트 환경과 교육 프로토콜에 의해 영향을받는, 16 훈련 있습니까 시험 (그룹 : F (2, 42) = 14.89, P <0.0001, 그룹 X의 시험 : F (4, 84) = 1.10, P = 0.36). 마우스는 프로토콜 1 SAM을 이용하여 훈련을받은환경 B에 비해 환경 C에서 상당히 낮은 프로브 점수를 표시인가 단서의 E 세트 (환경 : F (1, 25) = 28.58, P <0.0001, 환경 X 평가판 : F (2, 50) = 1.93, P = 0.16) . 신호를 수정하고 재 최적화 된 프로토콜 (2) 이용 마우스 원래 단서 및 프로토콜 1 (프로토콜 사용 훈련을받은 비교했을 때 환경 C에서 교육을받은 마우스는 상당히 높은 프로브 점수를 표시 : F (1, 30) = 15.32, P <0.001; 프로토콜 X 평가판 : F (2, 60) = 0.91, P = 0.41) ** P <0.001; *** P <0.0001..
| 1 일 | 모리스 물 미로 - 코호트 : | 날짜 : _________ | ||||||
| SE 사분면의 플랫폼 | 테스터 &# 160; 시작 시간 : 종료 시간 : 물 온도를 : | 1m 최대 시험 시간 / 플랫폼에 15S는 / * 플랫폼에 배치 | ||||||
| 그룹 1 | ||||||||
| 시험 1 | ||||||||
| 동물 ID | 표시 | 케이지 # | 끝 시간 | 해제 포인트 | 플랫폼 위치 | 플랫폼을 찾기? | 시간 | 노트 (즉, 이상한 행동) |
| W | SE | |||||||
| W | SE | |||||||
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| W | SE | |||||||
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| 20분 ITI | ||||||||
| 시험 2 | ||||||||
| 전자 | SE | |||||||
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| 20분 ITI | ||||||||
| 시험 3 | ||||||||
| N | SE | |||||||
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| 20분 ITI | ||||||||
| 시험 4 | ||||||||
| 에스 | SE | |||||||
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| 에스 | SE | |||||||
| 에스 | SE | |||||||
| 에스 | SE | |||||||
| </ TD> | 에스 | SE | ||||||
| 에스 | SE | |||||||
| 에스 | SE | |||||||
표 1. 숨겨진 플랫폼 실행 시트 플랫폼 남동쪽 위치되는 예시적인 실행 시트 (SE) 사분면이 제공된다. 실험은 마우스의 ID 번호, 꼬리 또는 귀, 그리고 케이지 그룹의 모든 식별 부호를 작성해야합니다. 릴리스 포인트가 시트 상에 표시되고, 단계 3.3.2에 기술 된 바와 같이 의사 - 랜덤하게 결정되어야한다. 마우스가 플랫폼과 플랫폼을 발견하는 시간을 찾는 지 기록한다. 부동 또는 thigmotaxis 포함 이상한 행동,해야 지적했다.
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Discussion
MWM 태스크 널리 공간 학습 및 기억을 평가하는 데 사용된다. 그러나,이 작업의 안정성은 많은 요인들에 의해 영향을 배경 균주 및 테스트 환경 모두의 최적화를 필요로 할 수있다. 도 4는 동일한 트레이닝 프로토콜에 나타낸 두 개의 다른 테스트 실 (동등한 크기 및 레이아웃)에 사용되는 시각적 적용된 상당히 상이한 프로브의 성능을 수득 하였다. 테스트 룸의 많은 기능이 공간 큐 4에 기여할 수 있기 때문에,이 두 개의 객실이 시험을 더 어렵게 만든 알 수없는 방식으로 유의 한 차이가 있다고 추측했다. 추가 미로 큐 수정에서는 효과적으로 시각적 큐의 수를 늘리는 것을 정했다. 또한, 커튼의 사용을 최소화하여, 존재할 수도있는 청각이나 후각 큐는 변경되고 있습니다. 두 개의 테스트 룸의 조명 수준은 그러나 새로운 동식물 사육장에서 홈 케이지 빛 레벨이 결과, 낮았다, 상당했다높은 조명 수준 차이에서 시험 방에 홈 케이지에서 갈 때. 그것은 BALB / c 마우스는 광 레벨을 제공하는 MWM 태스크를 수행 할 수있는 것으로 제안되어왔다 (14)은 충분히 낮다. 그러나 실패 (게시되지 않은 관찰)이었다 저하 시험 실내 조명 수준으로 성능을 개선하기 위해 시도합니다. 현재까지, 그것은 어떤 요소 (들)은 새로운 테스트 환경에서의 성능 저하에 기여 공지되지 않고, 수정 전 처리, 단서, 및 훈련 프로토콜 프로브 점수 상당히 증가시킬 수도.
가능한 경우, 특히 테스트 환경 학습 최적 프로브 배치 속도를 평가하는 실험을 계획대로 야생형 또는 동일한 배경 균주의 대조군 마우스 연령 그룹 테스트 의뢰한다. 쥐의 약 절반이 가능한 긍정적 인 검색 바이어스 (target≥35의 %의 - 시간) 마지막 프로브 표시 할 때 이상적으로, 첫 번째 프로브 배치대부분의 제어 마우스는 양의 검색 바이어스를 표시하고 성능 고원에 도달했습니다. 이 전략은 우수한 공연 (F1 FVB / N은 129S6을 x)와 더 천천히 배운 배경에 대한 프로브 위치를 결정하는 데 사용되었다 (혼합 C57BL / 6 × FVB / N X 129S6), 마우스의 약 절반은 대상 사분면 아큐했다 경우 ≥35의 그룹과 각각 8 시험 18 시험은 첫 번째 프로브 약 35 % - 시간의 의미 후. 이어서 프로브는 25 % - 시간의 기준선에 비하여 적어도 15 점 차이가 이상적으로 이러한 방식으로 설정된 경우 제보다 더 높아야한다. 적당히 낮은 프로브 점수 (~ 35 % - 시간)을 비교하면,이 4,5 사분면 비 대상 대상을 비교하여, 대상 따라서 유효한 차이에 대한 상당한 편견을 나타낸다는 것을 확인합니다. 또한, 최소 그룹 평균 기준 또는 확률 성능 간주되는 목표 사분면에서 25 % - 시간,보다 실질적으로 낮은이어야한다. 비교 TARG비 표적 점유에 등은 예를 들어 방 편견은, 인접 사분면 중 하나 이상 반대 사분면에 더 많은 시간을 보내고 마우스가 예기치 않은 검색 패턴 것,이 있는지 확인하는 데 도움이 될 수 있습니다.
테스트를 진행하는 동안 몇 가지 권장 사항 처리 및 실험자 사이에 스타일을 테스트하는 변동성을 줄이기 위해 1 개인에게 동물의 각 코호트를 테스트하는 사람들의 수를 제한하고, 매일 같은시기에 시험을 수행하는 것을 포함한다. 또한, 마우스는 1 일 2 시험은 15 일 당 4 시험을받는 것과 거의 빨리 배우는 것을 제안 받아왔다. 그것은 하나 이상의 코호트 일 동안 실행되어야하는 경우 다른 균주 / 배경 / 처리 군 동물로부터 각 테스트 그룹으로 표현되는 것이 필수적이다. 저체온이 성능에 영향을 성별 16 종속 배경 균주 수 마지막으로, 치료는 마우스 저체온이되지 않도록주의해야한다. 제 비록여기에 사용되는 전자 간 시험 간격 (20 분) 저체온증을 방지하기에 충분해야한다, 다른 방법은, 물의 온도를 조절하는 시도 사이 가열 보유 케이지 생쥐를 배치하거나, 필요에 따라 두 가지의 조합 등. 그러나, 물의 온도는 양 방향으로 성능에 영향을 미칠 수 있음을 유의해야한다. 발정 쥐가 차가운 상태 (19 ° C) (17)에서 더 잘 수행하는 반면 예를 들어, proestrous 쥐, 따뜻한 조건 (33 ℃)에서 더 잘 수행 할 수 있습니다. 따라서, 치료 실험에서 물 온도를 통제하기 위해주의해야합니다. 저체온증은 특정 동물에 대한 문제가 될 경우, 실험자들은 후 수영을 신랑 또는 저체온 행동의 표시를 제공하기 위해 실패 이벤트에 종이 타월로 그 동물을 건조 손 수 있습니다. 조건을 확보 할 수 체온 주기율표 평가 저체온증을 방지하기에 충분하다.
또 다른 절차 적 고려 사항은 눈에 보이는 플랫폼 traini에 관한NG. 젊은 마우스 또는 다른 변형 적은 눈에 보이는 플랫폼 교육 실험을해야 할 수도 있습니다. 제안 된 가이드 라인은 대조군 실험군 동등한 성능을 표시 제공 최종 3-6 연속 훈련 시도 동안 성능의 바닥에 도달 할 때까지 훈련한다. 실험 설계는 젊은이와 노인 모두 쥐가 포함되어있는 경우, 성능 (5)의 바닥에 도달하기 위해 교육 시험의 가장 높은 수를 필요로하는 그룹에 대한 눈에 보이는 플랫폼 훈련 기간을 설정합니다. 또한, 눈에 보이는 플랫폼 운반 시험 절차 생쥐 순응 향해 효과적 일 수 있고, 제 시험 인간 취급 변형 시험되는 과도 혐오 아닐 때 마우스 매우 어린 아닌 경우 사전 처리의 필요성을 미연에 방지 할 수있다.
식품 기반의 작업에 해마에 의존 말다툼의 척도로서 그 유효성을 비교 모리스 물 미로의 폭 넓은 혜택은 동기 부여 요인에 상대적 무감각 포함IAL 탐색 및 레퍼런스 메모리, 및 종간 효능 15. 기술의 잠재적 인 제한이 프로토콜은 특정한 배경 균주 맞춤되기 때문에, 그것은 다른 동물 또는 마우스의 다른 배경 균주 효과적이지 않을 수 있다는 것이다. 또한, 프로토콜의 일부로서, 시도 생성하고 전략적으로 mazing 룸에 걸쳐 식별 신호를 배치하게된다. 그러나, 방 주위 신호를 배치 할 때 최적 정확한 무엇 높이 불분명하다. 따라서, 크고 서로 구별 단서는 효과적인 훈련을 위해 필요하다.
요약하면, 특정 배경 균주 사용 MWM 태스크를 최적화하고 테스트 환경은 상당히 많은 시간과 비용 절감 효과 태스크의 동적 범위를 증가시킬 수있다.
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Disclosures
저자가 공개하는 게 없다.
Acknowledgments
신경 질환 및 뇌졸중의 국립 연구소, -이 작품은 일반 의료 과학 국립 연구소 (U54GM104942 리드 / 잉글 러 - Chiurazzi)에 의해 지원되었다 (애쉬 - R01NS33249, R01NS63249 및 R01NS79374), 코 브레 (잉글 러 - Chiurazzi - P20GM109098) 알츠하이머 협회 (리드 - NIRG-12-242187), WVU 교수 연구 상원 그랜트 (리드), 의학 딘의 사무실의 WVU 대학 (잉글 러 - Chiurazzi)에서 WVU PSCOR 보조금 (리드) 및 내부 자금. 내용은 전적으로 저자의 책임이며 반드시 NIH 또는 알츠하이머 협회의 공식 견해를 대변하지 않습니다.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Viewer Tracking software | Biobserve | This particular software is not a requirement - there are other tracking systems available | |
| Pre-handling pool | Dimensions approximately 1 foot wide x 2 feet long x 1.5 feet deep | ||
| Plastic beaker | 1 L | ||
| Scoop | |||
| Small net | |||
| Stopwatch | |||
| Non-toxic white tempera paint | Any color paint can be used; however, most tracking software programs require that the paint contrast with the color of the animal. | ||
| Visible platform | Color should contrast that of maze | ||
| Curtain rod | |||
| Curtains | |||
| Circular tub | Usually white in color; approximately 4 feet in diameter | ||
| Hidden platform | Painted same color as the water |
References
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