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Behavior

मॉरिस पानी की भूलभुलैया टेस्ट: माउस तनाव और परीक्षण पर्यावरण के लिए अनुकूलन

doi: 10.3791/52706 Published: June 22, 2015

Introduction

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ट्रांसजेनिक माउस मॉडल अल्जाइमर रोग (ई) के pathophysiology, साथ ही उपचारात्मक उपायों की क्षमता का मूल्यांकन करने में महत्वपूर्ण भूमिका निभाई है। ऐसे मॉरिस पानी भूलभुलैया (MWM) के रूप में संज्ञानात्मक कार्य, सामान्यतः स्मृति घाटे की आणविक संबद्ध पहचान करने के लिए और पूर्व नैदानिक ​​दवाओं की प्रभावकारिता का आकलन करने के लिए इन मॉडलों के साथ किया जाता है। यह संज्ञानात्मक कार्य के गतिशील रेंज सूक्ष्म उपचार प्रभाव का पता लगाने के लिए पर्याप्त चौड़ी हो, तथापि, कि महत्वपूर्ण है। विज्ञापन के माउस मॉडल के साथ, संज्ञानात्मक घाटे आम तौर पर उम्र पर निर्भर कर रहे हैं, और चूहों प्रदर्शन में प्रगतिशील गिरावट आती प्रदर्शन (उदाहरण के लिए, 1)। एक संवेदनशील संज्ञानात्मक कार्य का प्रयोग करें जिससे उम्र बढ़ने जानवरों के साथ जुड़े लागत को कम करने, पहले जानवर के जीवन में सूक्ष्म अंतर का पता लगाने की अनुमति कर सकते हैं। उदाहरण के लिए, हिप्पोकैम्पस पर निर्भर बार्न्स में प्रशिक्षण परीक्षणों की संख्या को कम करने 15-5 भूलभुलैया डी, जिसके परिणामस्वरूप काम की कठिनाई वृद्धि हुईकी तुलना में एक पहले की उम्र में 3xTg मॉडल में घाटे के etection पहले से 2 की सूचना दी। घाटे के पूर्व का पता लगाने के लिए न केवल यह भी संज्ञानात्मक घाटे अंतर्निहित आणविक परिवर्तन पहचाना जा सकता है कि संभावना बढ़ जाती है, काफी समय और लागत बचत प्रदान करता है।

संज्ञानात्मक कार्यों की संवेदनशीलता को प्रभावित एक पहलू माउस मॉडल की आनुवंशिक पृष्ठभूमि तनाव है। उदाहरण के लिए, BALB / ग चूहों ऐसे C57BL 6/3 के रूप में अन्य तनाव, की तुलना में सीखने और स्मृति कार्यों में बेहतर प्रदर्शन दिखा रहे हैं। एफ 1 FVB / एन एक्स 129S6 पृष्ठभूमि विज्ञापन का सबसे व्यापक रूप से कार्यरत मॉडल, Tg2576 और RTG (TauP301L) 4510 मॉडल के दो के लिए प्रयोग किया जाता है। इस तनाव बी -6 / SJL चूहों 4 सहित अन्य उपभेदों के लिए MWM सापेक्ष में बेहतर सीखने की क्षमता को दर्शाती है। इस वजह से बेहतर सीखने की क्षमता की वजह से, व्यापक प्रशिक्षण के बाद एक भी जांच के इस्तेमाल को लेकर प्रशिक्षण से उत्पन्न समूह मतभेद मुखौटा हो सकता है। इसके अलावा, sensitivitजांच के परीक्षणों के y उम्र पर निर्भर हो सकता है। हम पहले से पहले जांच परीक्षणों, सीमित छिपा मंच प्रशिक्षण के बाद, की तुलना में युवा transgene नकारात्मक littermate नियंत्रण की तुलना में युवा Tg2576 में मतभेद के प्रति संवेदनशील हैं और अधिक व्यापक प्रशिक्षण 5 के बाद डाला जांच परीक्षणों हैं कि पता चला है। पहले जांच परीक्षणों 5 की तुलना में इसके विपरीत, व्यापक प्रशिक्षण के बाद जांच परीक्षणों पुराने littermates की तुलना में Tg2576 चूहों पुराने (20-25 महीने) में अधिक संवेदनशील होते हैं। अनुदैर्ध्य परीक्षण किया जाता है और एक विशेष जांच परीक्षण की संवेदनशीलता उम्र पर निर्भर है, खासकर अगर प्रशिक्षण के दौरान जांच परीक्षणों interspersing करके, एक संवेदनशील परीक्षण की पहचान की जाएगी संभावना है कि, बढ़ जाती है। 1 एफ 1 FVB / एन एक्स के बेहतर प्रदर्शन से पता चलता है और अधिक व्यापक प्रशिक्षण के साथ एक प्रोटोकॉल के तहत प्रशिक्षित बी -6 / SJL पृष्ठभूमि के चूहों की तुलना में इस तनाव के लिए अनुकूलित प्रोटोकॉल के तहत 129S6 चूहों।

MWM हैआम तौर पर समय और प्रयोगशालाओं 6 दोनों भर प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य हैं कि विश्वसनीय उपाय प्रदान करने के लिए सोचा। उदाहरण के लिए, मूल रूप से हमारी मिनेसोटा प्रयोगशाला 1,7 द्वारा इस्तेमाल के लिए प्राथमिक प्रोटोकॉल सफलतापूर्वक पश्चिम वर्जीनिया विश्वविद्यालय 8 में मामूली संशोधनों के साथ लागू किया गया था। इसी तरह, हानि के बराबर के स्तर रोगज़नक़ मुक्त या पारंपरिक शर्तों 9 के तहत रखे अगर littermates नियंत्रित करने के लिए 4510 चूहों रिश्तेदार RTG (TauP301L) में मनाया गया। हालांकि, परीक्षण पर्यावरण MWM कार्य की संवेदनशीलता को प्रभावित कर सकते हैं। इस तरह के कमरे में प्रकाश व्यवस्था, हवा vents, तापमान ढ़ाल, और शोर के सभी कारक के रूप में अंततः प्रदर्शन को प्रभावित कर सकते हैं कि पर्यावरण cues 4 में योगदान। हमारे मिनेसोटा प्रयोगशाला और मछली पालने का बाड़ा एक नई इमारत में स्थानांतरित कर रहे थे, ऊपर जंगली प्रकार के प्रदर्शन में एक 38% कमी करने के लिए काफी काम और transgene से संबंधित घाटे पता लगाने की क्षमता के गतिशील रेंज को कम करने, मनाया गया। पीई में यह बदलावrformance बराबर आकार और विन्यास के होने के लिए परीक्षण के कमरे डिजाइनिंग, और एक ही एप्लाइड दृश्य cues का उपयोग करने के बावजूद हुआ। मूल प्रोटोकॉल के एक "फिर से अनुकूलन" नए परीक्षण के वातावरण में MWM कार्य के गतिशील सीमा को बढ़ाने के लिए आवश्यक था।

यहाँ एफ 1 FVB / एन के साथ प्रयोग के लिए सिलवाया मूल प्रोटोकॉल 129S6 पृष्ठभूमि 5 में वर्णित है एक्स। कुछ अध्ययनों से तनाव का सुझाव क्योंकि प्रदर्शन 11 में इस तनाव प्रेरित घाटा कम कर सकते हैं गरीब MWM ​​प्रदर्शन 10 और पूर्व से निपटने के साथ जुड़ा हुआ है, एक पूर्व से निपटने प्रोटोकॉल पूल की शुरूआत और हटाने से पहले MWM परीक्षण करने के लिए चूहों acclimate करने के लिए डिजाइन किया गया था । पूर्व से निपटने के बाद, चूहों एक ऊंचे मंच को ध्वज के साथ चिह्नित किया जाता है, जो में दिखाई दे मंच प्रशिक्षण, गुज़रना पड़ता है। दर्शनीय मंच प्रशिक्षण ज्ञानेन्द्रिय असामान्यताओं से संबंधित प्रदर्शन की समस्याओं के साथ चूहों की पहचान के लिए प्रयोग किया जाता है। Prot में वर्णित बहिष्कार मानदंडों का उपयोगocol अनुभाग, प्रदर्शन के अयोग्य चूहों छिपा मंच प्रशिक्षण और जांच के परीक्षणों के बाद परीक्षाओं से हटा रहे हैं। ज्ञानेन्द्रिय प्रदर्शन डेटा से बाहर सकारात्मक असर है क्योंकि छिपा मंच प्रशिक्षण और जांच परीक्षणों में impairments संज्ञानात्मक घाटे के रूप में व्याख्या कर रहे हैं। दृश्यमान मंच प्रशिक्षण पूरा करने के बाद, चूहों मंच पानी में डूबे हुए हैं और बाहरी संकेतों को एक ही स्थिति के सापेक्ष में रहता है जहां छिपा मंच प्रशिक्षण शुरू करते हैं। मंच (जांच परीक्षण) निकाल दिया जाता है, जिसमें परीक्षण के अतिरिक्त प्रशिक्षण के प्रभाव का आकलन करने के लिए छिपा मंच प्रशिक्षण के दौरान interspersed हैं। जांच के परीक्षणों के प्रत्येक दिन की शुरुआत में पाए जाते हैं, क्योंकि अतिरिक्त छुपा मंच प्रशिक्षण से पहले, जांच परीक्षण के एक 20 घंटा देरी निम्न मंच के स्थान को याद करने के लिए पशु की क्षमता को मापने, संदर्भ स्मृति 12 का एक उपाय माना जाता है। अंत में, रास्ते में जो इस मूल प्रोटोकॉल फिर से अनुकूलित किया गया था जब परीक्षण के पर्यावरण में परिवर्तनबाधित नियंत्रण प्रदर्शन वर्णित हैं।

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Protocol

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सभी प्रयोगात्मक प्रक्रियाओं संस्थागत पशु की देखभाल और उपयोग समिति (IACUC) के मानकों के अनुसार आयोजित की और पश्चिम वर्जीनिया विश्वविद्यालय के IACUC द्वारा अनुमोदित किया गया।

1. पूर्व हैंडलिंग

  1. पूल सेट अप
    1. यह एक आरामदायक ऊंचाई के लिए उठाया है ताकि पूर्व से निपटने पूल आराम मिलता है।
    2. लगभग 1 सेमी के स्तर तक पूर्व से निपटने के पूल में पानी के 2 एल (21 डिग्री सेल्सियस) रखें।
      नोट: रंग न जोड़ें।
  2. प्रक्रिया
    1. परीक्षण के कमरे के लिए मछली पालने का बाड़ा से चूहों लाओ।
    2. विषय पहचान सत्यापित (विषय नंबर, पूंछ टैटू, कान क्लिप, आदि।)।
    3. एक स्थायी मार्कर के साथ मार्क माउस की पूंछ का परीक्षण किया जा रह है कि उन लोगों से परीक्षण के पूर्व से निपटने आया है कि पिंजरे के भीतर चूहों भेद करने के लिए। एक ही रंग के साथ एक पिंजरे में सभी चूहों को चिह्नित।
    4. Approxima के लिए स्थानांतरण बीकर में एक माउस रखेंtely 5 सेकंड। फिर, धीरे-पूर्व से निपटने के पूल में बीकर के बाहर माउस डालना।
    5. एक टाइमर का उपयोग करना, माउस 20 सेकंड के लिए पूल में रहने की अनुमति देते हैं।
    6. 20 सेकंड के बाद, धीरे माउस के सामने (यह angling) के बिना स्कूप जगह है। संक्षेप में माउस स्कूप का पता लगाने के लिए अनुमति देते हैं, और यदि आवश्यक हो तो, धीरे धीरे उठाने जबकि धीरे माउस के तहत स्कूप फिसलने से स्कूप पर प्राप्त करने के लिए माउस को प्रोत्साहित करते हैं। स्कूप के साथ चूहों को डराने के लिए नहीं ख्याल रखना।
    7. माउस स्कूप में एक बार, होल्डिंग पिंजरे करने के लिए इसे वापस परिवहन।
    8. 10 दिनों के लिए प्रति दिन एक बार पिंजरे में प्रत्येक माउस के लिए इन प्रक्रियाओं को दोहराएँ। (प्रत्येक जानवर के बाद उदाहरण के लिए) नियमित अंतराल पर, एक शुद्ध प्रयोग पूल से मल बोली और बिस्तर उठाओ।
    9. (चूहों के एक पिंजरे के पूरा होने के बाद जैसे) नियमित अंतराल पर पानी के साथ स्थानांतरण बीकर कुल्ला।
    10. इन चरणों को पूरा कर रहे हैं एक बार, पानी कई बार साथ स्थानांतरण बीकर कुल्ला से पानी बाहर डंपपूल, और पानी के साथ पूल में लगभग दो बार कुल्ला।

2. दर्शनीय प्लेटफार्म प्रशिक्षण

  1. सेटअप माउस प्रदर्शन ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर जैसे दर्शक (सामग्री की तालिका देखें)।
    1. "फिल्टर और वस्तुओं" टैब - '' विन्यास के तहत भूलभुलैया के आयामों से मिलान करने के लिए वीडियो जांचना।
    2. सॉफ्टवेयर पृष्ठभूमि से एक माउस अंतर कर सकते हैं कि इतना फिल्टर सेट करें।
      1. ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर जानवर को पहचानती है इतना है कि "पृष्ठभूमि फिल्टर" क्षेत्र के नीचे "संवेदनशीलता" समायोजित करें।
      2. ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर जानवर को पहचानती है एक बार "स्वीकार" विकल्प पर क्लिक करें। भूलभुलैया क्षेत्र के बाहर के क्षेत्रों अंधकार को "संपादित करें" विकल्प चुनें।
      3. उपयुक्त "पशु फिल्टर" और "मिनट का चयन करें। पशु आकार "।
  2. भागो शीट बनाने <राजभाषा>
  3. प्रत्येक माउस लिस्टिंग एक रन चादर, प्रत्येक संभावित स्थान, और न्यायपालिका के व्यवहार के बारे में जानकारी युक्त नोटों के लिए एक जगह बनाने के।
  4. चूहों के प्रत्येक समूह के लिए ही कर रहे हैं कि दिखाई दे मंच परीक्षण के लिए स्थानों को पहले से जाना। इस प्रकार, पहले परीक्षण के लिए, मंच माउस दीवार के पास सही पक्ष पर, भूलभुलैया में रखा गया है, जहां की ओर विपरीत पर रखा जाएगा कि पूर्व निर्धारित करते हैं। दूसरा परीक्षण के लिए, मंच प्रत्येक माउस के लिए पीछे की दीवार के साथ एक अलग स्थान में रखा जाएगा कि पूर्व निर्धारित करने और इस 6 परीक्षणों में से प्रत्येक के लिए जारी रहेगा।
  • कक्ष सेट करें
    1. कमरे में चारों ओर लटका पर्दे इतना है कि किसी भी स्थानिक संकेतों छिप कर रहे हैं।
  • टब की स्थापना की।
    1. यह "विन्यास" पर विन्यास सेटअप के साथ मैच भूलभुलैया सुनिश्चित करने के द्वारा ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर में विन्यास से मेल खाता है ताकि टब, जगह - "क्षेत्र की परिभाषा" टैब। नोट: यह जelps टब टब आसानी से एक बार भरा दूसरी जगह नहीं है के रूप में पानी के साथ भरने के लिए पहले उचित स्थान में है सुनिश्चित करने के लिए।
    2. नल के पानी के साथ टब भरें, और एक थर्मामीटर का उपयोग, पानी का तापमान लगभग 21 डिग्री सेल्सियस है सुनिश्चित करते हैं। आयु वर्ग के चूहों 8 का उपयोग करते समय ठंडा पानी, विशेष रूप से प्रदर्शन को प्रभावित कर सकते हैं के रूप में पानी, परीक्षण के दौरान इस तापमान से एक डिग्री के भीतर रहता है सुनिश्चित करें।
      नोट: रंग न जोड़ें।
    3. पूर्व निर्धारित स्थानों का उपयोग करना, 13 सेमी की ऊंचाई तक पहुँच और टब के पहले स्थान में एक बोल्ड "एस" इस पर उभरा आकार का चरित्र के साथ 4.5 सेमी x 4.5 सेमी है कि एक घुड़सवार ध्वज होता है मंच है, जो जगह इतना है कि यह लगभग 1 इंच पानी की सतह से ऊपर है।
  • प्रक्रिया
    1. बीकर में सही रंग का एक स्थायी मार्कर का उपयोग कर पूंछ, और जगह चिह्नित, पिंजरे से पहले माउस ले विषय पहचान की पुष्टि करें।
    2. धीरे समझौता ज्ञापनों जगहटब में ई, टाइमर शुरू, और ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर पशु ट्रैकिंग है कि सुनिश्चित करते हैं। 2 मिनट के लिए माउस को मंच का पता लगाने के लिए अनुमति दें। माउस मंच रेखांकित करने के बाद, मंच पर माउस 20 सेकंड अनुमति देते हैं।
    3. पशु मंच पाता है और कूद या गिर करने के लिए आय, तो माउस स्कूप और मंच पर माउस जगह है। माउस कूद या मंच से गिर करने के लिए जारी है, मंच पर माउस पकड़ है, तो माउस मंच पर शेष टब से भागने की ओर जाता है कि सीखता है।
      नोट: माउस 20 सेकंड के एक संयुक्त समय के लिए मंच पर रहना चाहिए; माउस 5 सेकंड के बाद बंद कूदता इस प्रकार, यदि मंच पर छोड़ दिया है समय की राशि 15 सेकंड और 20 सेकंड के लिए रीसेट नहीं है।
    4. पशु 2 मिनट की अवधि में मंच को खोजने के लिए विफल रहता है, माउस स्कूप और 20 सेकंड के लिए मंच पर जगह है।
    5. मंच पर 20 सेकंड के बाद, पूर्व से निपटने के प्रशिक्षण में पूर्ण के रूप में मंच से माउस को हटाने और वीं में माउस जगहई गरम पिंजरे कागज तौलिये के साथ लाइन में खड़ा है और 30 सेकंड के लिए एक हीटिंग पैड और गर्मी दीपक द्वारा करने के लिए ~ 31 डिग्री सेल्सियस गर्म। एक निश्चित उम्र में चूहों या चूहों की है कि कुछ उपभेदों सुनिश्चित करने के लिए एक गुदा थर्मामीटर के साथ शरीर के तापमान के आवधिक मूल्यांकन प्रदर्शन के पानी के लिए जोखिम से प्रेरित हाइपोथर्मिया के लिए विभिन्न अतिसंवेदनशील नहीं कर रहे हैं।
    6. हीटिंग दीपक के साथ पकड़े पिंजरे करने के लिए 2 मिनट के बाद, परीक्षणों के बीच ठीक करने के लिए, केवल एक हीटिंग पैड है, लेकिन कोई गर्मी दीपक के साथ पकड़े पिंजरे के लिए माउस का हस्तांतरण। अंत में, परीक्षण के दौरान एक ही पकड़े पिंजरे में एक ही घर के पिंजरे से सभी चूहों जगह है।
    7. प्रत्येक माउस के एक परीक्षण पूरा कर लिया है के बाद घ्राण संकेतों को बाधित करने के लिए, एक शुद्ध के साथ मलबे की उलझन को साफ करें।
  • समूह में प्रत्येक माउस के लिए इन चरणों को दोहराएँ। प्रत्येक माउस पहला परीक्षण पूरा कर लिया है के बाद, दूसरा पूर्व निर्धारित स्थान पर मंच चाल है।
    नोट: मंच एक भी सुनवाई के दौरान प्रत्येक माउस के लिए एक ही स्थान में रहेगा और हो जाएगाआगामी परीक्षण के लिए अन्य पूर्व निर्धारित स्थानों पर चले गए। यह 2), इस प्रकार बरकरार दृश्य क्षमता का प्रदर्शन, दिखाई मंच करने के लिए सीधे तैरने से बचने के लिए एक मंच नहीं है जानने के लिए और 3) कोई मोटर घाटा है) कि चूहों 1 सुनिश्चित करने के लिए किया जाता है।
  • परीक्षण के पहले 3 दिनों के लिए 6 परीक्षण के लिए इन प्रक्रियाओं का प्रदर्शन। इस प्रकार, प्रत्येक परीक्षण के बीच लगभग 10 मिनट (चित्रा 2) के साथ, परीक्षण के दिनों में 1, 2, और 3 पर दिखाई प्रशिक्षण प्रदर्शन करते हैं।
  • दृश्यमान मंच प्रशिक्षण के दौरान, मंच तक पहुँचने के लिए विलंबता को मापने के जानवर की pathlength को ट्रैक करने के लिए पशु ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर का उपयोग करें, और गति तैरना। एक एक्सेल स्प्रेडशीट के लिए "प्रायोगिक सूची" और सीधे निर्यात के तहत "पानी की भूलभुलैया" टैब से इन माप प्राप्त करते हैं।
    ध्यान दें: एक हाथ टाइमर का उपयोग भी ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर की सटीकता सुनिश्चित करने के लिए फायदेमंद हो सकता है।
  • 3. मॉरिस पानी की भूलभुलैया छिपा मंच प्रशिक्षण

    1. एसकमरे तक एट
      1. प्रयोगशाला में स्थानिक संकेतों अस्पष्ट करने के लिए कमरे में पर्दे रखती।
      2. पर्दे पर रणनीतिक रूप संकेतों रखें। संकेतों बड़े हैं कि यह सुनिश्चित करने के लिए और बेहतर दृश्यता के लिए रंग विषम (पूर्व .: काले और सफेद) होते हैं। वे टब के अंदर से चूहों को दिखाई दे रहे हैं, जहां एक दूरी और ऊंचाई पर लटका संकेतों। नोट: संकेतों स्थिर रहे हैं और परीक्षण के दौरान कदम नहीं है।
    2. माउस प्रदर्शन ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर सेटअप
      1. "फिल्टर और वस्तुओं" टैब - '' विन्यास के तहत भूलभुलैया के आयामों से मिलान करने के लिए वीडियो जांचना।
      2. सॉफ्टवेयर पृष्ठभूमि से चूहों को अलग कर सकते हैं ताकि फिल्टर सेट करें।
        1. दृश्यमान मंच परीक्षण में वर्णित के रूप में मॉरिस पानी भूलभुलैया छिपा मंच के प्रशिक्षण के लिए फिल्टर स्थापित करने के लिए (2.1.2.1-2.1.2.3 कदम) एक ही प्रक्रियाओं का प्रयोग करें।
      3. भूलभुलैया अंदर चार बराबर चतुर्भागों बनाएँ
        1. क्लिक करें"क्षेत्र की परिभाषा" टैब के अंतर्गत "दीर्घवृत्त" विकल्प पहले, और स्क्रीन पर भूलभुलैया मैच एक वृत्त बना। नोट: इस टैब पर, की स्थापना की वास्तविक भूलभुलैया प्रदर्शित, तो यह वास्तविक भूलभुलैया स्थापना के साथ कंप्यूटर सेटअप मैच के लिए विकल्प की अनुमति देता है।
        2. "आयत" विकल्प पर क्लिक करें और चार बराबर चौकों पैदा करते हैं। नव निर्मित सर्कल के भीतर चार बराबर चतुर्भागों बनाने के लिए स्क्रीन पर इन वर्गों रखें।
      4. भूलभुलैया में प्लेटफार्मों बनाएँ।
        1. "दीर्घवृत्त" विकल्प का चयन करें, और एक सर्कल में इस्तेमाल किया जाएगा कि मंच का आकार बनाते हैं। नोट: भूलभुलैया में मंच रखकर पहले से एक दीर्घवृत्त मंच का सही आकार बनाने के लिए फायदेमंद हो सकता है।
        2. लक्ष्य वृत्त का चतुर्थ भाग के केंद्र में नव निर्मित मंच पांच रखें। (इसे आराम से सही प्लेटफार्मों भेद करने के लिए इस वस्तु "लक्ष्य" नाम की सिफारिश की है)। महत्वपूर्ण कदम: बॉक्स में बस बेल"ग्रिड" ओउ, लक्ष्य मंच के लिए "ट्रिगर" के तहत "रोक" विकल्प का चयन करें। इस माउस मंच तक पहुँच जाता है एक बार इस कार्यक्रम को रोकने के लिए कारण होगा।
        3. तीन अन्य समान मंच क्षेत्रों बना, और अन्य quadrants में सटीक स्थानों में उन्हें जगह है। चयन न करें "ट्रिगर" विकल्प में "रोक"।
    3. भागो शीट बनाने
      1. प्रत्येक माउस, प्रत्येक परीक्षण, मंच तक पहुँचने के लिए समय नीचे लिखने के लिए एक अंतरिक्ष लिस्टिंग एक रन शीट, और न्यायपालिका व्यवहार (तालिका 1) नोट करने के लिए एक जगह बनाने के।
      2. एक pseudorandom तरीके से एक माउस की रिहाई बिंदु पूर्व निर्धारित करते हैं। मंच करने के लिए शुरू से ही छद्म यादृच्छिक मंच की दूरी 4 स्थानों में से प्रत्येक को समान रूप से प्रयोग किया जाता है, प्रत्येक दिन के बराबर होता है कि इस तरह के चयन, और कोण का प्रयोग करें (अर्थात।, बाएं या दाएं से) के भीतर और दिनों के बीच संतुलित है।
        नोट: मंच के स्थान रन परचादर मूल स्थान से कदम नहीं करता मंच के स्थान सुनिश्चित करने के लिए। मंच ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर पर बनाए गए चार क्षेत्रों में से एक के केंद्र में है कि सुनिश्चित करें।
        नोट: अनुदैर्ध्य परीक्षण के विभिन्न युगों में आयोजित किया जा रहा है, प्रत्येक उम्र में एक नए स्थान के लिए मंच चाल है।
    4. भूलभुलैया सेट अप
      1. "क्षेत्र की परिभाषा" टैब - पानी भूलभुलैया या भूलभुलैया और "विन्यास" पर विन्यास सेटअप के बीच एक मैच है कि इस तरह के कैमरे या तो समायोजित करें।
      2. भूलभुलैया (एन, एस, ई, डब्ल्यू) के चार अनदेखी चतुर्भागों लेबल। चूहों को सुनिश्चित करने के लिए ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर में विन्यास के साथ इन मैच सही शुरू अंक से जारी किया जा रहा है कि जाँच करें।
        महत्वपूर्ण कदम: प्लेस भूलभुलैया के बाहर और भूलभुलैया के भीतर cues के एक गैर-स्थानिक, गैर हिप्पोकैम्पस निर्भर कार्य का गठन दी है कि एक स्विमिंग जानवर के दृश्य से बाहर इन लेबलों।
      3. नल wate के साथ भूलभुलैया भरेंआर (लगभग 21 डिग्री सेल्सियस) मंच पानी की सतह के नीचे लगभग 5 मिमी है कि इतनी।
      4. पूर्व निर्धारित स्थान में मंच रखें।
        नोट: मंच के स्थान सभी दिनों और परीक्षण के पार परीक्षण किया जा रहा है सभी चूहों के लिए एक ही रहेगा।
      5. पानी अपारदर्शी बनाने के लिए गैर विषैले सफेद तापमान रंग का प्रयोग करें। मंच के ऊपर तैर रहा है, जबकि पशुओं 'आंख के स्तर से अदृश्य है कि यह सुनिश्चित करने के लिए यह मत करो।
    5. प्रक्रिया
      1. पिंजरे से माउस ले सही रंग का एक स्थायी मार्कर का उपयोग कर पूंछ के निशान, और बीकर में जगह है।
      2. यह दीवार का सामना करना पड़ में प्रवेश करती है इसलिए धीरे, भूलभुलैया में माउस डालना। नोट: प्रत्येक माउस के एक अनूठा परीक्षण के लिए ही शुरू स्थान में रखा जाएगा।
      3. माउस के आरंभिक रिलीज में, टाइमर शुरू और परीक्षक नहीं आसानी से दिखाई चूहों के द्वारा होता है, जहां एक क्षेत्र में खड़े हो जाओ। उस जानवर ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर ठीक से पशु ट्रैक कर रहा है सुनिश्चित करें। पशु मंच में पहुँचता है, यह 15 सेकंड के लिए प्लेटफार्म पर बने रहने की अनुमति देते हैं।
        नोट: इस कमरे के भीतर अपनी स्थानिक स्थान पर ओरिएंट करने के लिए पशु की अनुमति देता है।
      4. मंच पर 15 सेकंड के बाद, भूलभुलैया से पशु हटा दें और गर्म पिंजरे करने के लिए माउस वापसी।
      5. माउस मंच पाता है और कूद या 15 सेकंड के लिए पहले से गिर करने के लिए आय, तो माउस स्कूप और माउस के भागने के साथ मंच संबद्ध करने के लिए सीखता है ताकि 15 सेकंड के शेष के लिए मंच पर इसे वापस जगह है।
      6. माउस 60 सेकंड के भीतर मंच का पता लगाने नहीं करता है, धीरे माउस स्कूप और मंच पर जगह है। यह तो, 15 सेकंड के लिए प्लेटफार्म पर बने रहने स्कूप के साथ पशु हटाने और गरम पिंजरे में वापस लाने के लिए अनुमति दें।
      7. घ्राण संकेतों को बाधित करने के लिए एक तंत्र के साथ मलबे की उलझन को साफ करें।
      8. समूह में शेष चूहों के लिए इन प्रक्रियाओं को दोहराएँ। इस प्रकार, परीक्षण के दिनों में 4 से 9 तक के लिए, छिपा मंच रेलगाड़ी के चार परीक्षण संचालितप्रत्येक परीक्षण के बीच लगभग 20 मिनट के साथ प्रति दिन आईएनजी।
      9. प्रत्येक परीक्षण के लिए शुरू होने वाले पांच pseduorandomly बदलें। इस प्रकार, 1 ट्रायल के दौरान, फिर, एक ही मूल्य उस स्थान से सभी चूहों को रिहा आगामी परीक्षण के लिए एक अलग शुरू करने की स्थिति से प्रक्रिया को दोहराने। प्रत्येक दिन, एक गैर-स्थानिक, गैर हिप्पोकैम्पस निर्भर motoric रणनीति विकसित नहीं है जानवरों सुनिश्चित करने के लिए रिलीज अंक बदलती हैं। चूहों एक दिन पर एन, एस, ई, और डब्ल्यू अंक से जारी कर रहे हैं, तो उदाहरण के लिए, अगले दिन कि उसी क्रम में उन्हें रिहा नहीं है।
      10. छिपे हुए मंच के प्रशिक्षण के दौरान, मंच, जानवर के pathlength, और समय का प्रतिशत तक पहुंचने या जानवर प्रत्येक भूलभुलैया चक्र में खर्च करता है दूर करने के लिए विलंबता को मापने के लिए पशु ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर का उपयोग करें। "प्रयोग सूची" के तहत "पानी की भूलभुलैया" टैब से इन माप प्राप्त और एक एक्सेल स्प्रेडशीट के लिए सीधे निर्यात किया जा सकता है।
        ध्यान दें: एक हाथ टाइमर के उपयोग पर नज़र रखने की सटीकता सुनिश्चित करता हैसॉफ्टवेयर।

    4. जांच: शुल्क परीक्षण

    1. माउस प्रदर्शन ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर सेटअप
      1. एक अपवाद के साथ (3.2.1-3.2.4.3 कदम) मॉरिस पानी भूलभुलैया छिपा मंच की प्रक्रिया के रूप में ही प्रक्रियाओं का प्रयोग करें। महत्वपूर्ण कदम: जांच परीक्षण के लिए, "ट्रिगर" के लिए "रोक" विकल्प सुनिश्चित जांच परीक्षण के दौरान बंद कर दिया है। यह एक माउस मंच क्षेत्र को पार कर जब रोक से कार्यक्रम को रोकने जाएगा।
    2. भागो शीट बनाने
      1. प्रत्येक माउस, प्रत्येक परीक्षण, और न्यायपालिका व्यवहार नोट करने के लिए एक अंतरिक्ष लिस्टिंग एक रन चादर बनाएँ। वे मंच के सामने दो पक्षों के बीच वैकल्पिक कि इस तरह की जांच के ट्रायल के दौरान जारी बिंदु पूर्व निर्धारित करते हैं। इस प्रकार, पूर्व निर्धारित करने चूहों मंच के निकट हैं कि दोनों पक्षों से रिहा नहीं कर रहे हैं कि इस तरह की रिहाई अंक।
    3. प्रक्रिया
      1. अपवाद के साथ, छिपा मंच प्रशिक्षण के लिए इसी तरह की जांच परीक्षण संचालितकोई मंच भूलभुलैया में है कि tion।
      2. एक पूर्व निर्धारित जारी बिंदु से एक माउस छोड़ दें। जांच के परीक्षण के दौरान, मंच हटाने और माउस भूलभुलैया में तैरने के लिए 60 सेकंड है।
      3. परीक्षण के दौरान, 4 की जांच के परीक्षणों का संचालन। जांच के परीक्षणों के बीच चूहों की रिहाई के बिंदु को बदल। इस प्रकार, पिछले जांच परीक्षण के उस से मौजूदा जांच परीक्षण की रिहाई के बिंदु बदल जाते हैं।
      4. जांच के परीक्षणों के दौरान, जानवर के pathlength को ट्रैक करने के लिए पशु ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर का उपयोग करें, पशु भूलभुलैया के प्रत्येक चक्र में खर्च करता है समय का प्रतिशत, और एक जानवर पहले से platformed क्षेत्र के ऊपर तैरती की संख्या। एक एक्सेल स्प्रेडशीट के लिए "डेटा विश्लेषण" टैब और "प्रायोगिक सूची" के तहत "पानी की भूलभुलैया" टैब, और सीधे निर्यात से इन माप प्राप्त करते हैं।
        ध्यान दें: एक हाथ टाइमर का उपयोग भी ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर की सटीकता सुनिश्चित करने के लिए फायदेमंद हो सकता है।
      5. पूर्व में जांच परीक्षण आचरणदिन 6, 7, 8 और 10 (चित्रा 2) पर छिपा मंच प्रशिक्षण। इन जांच के परीक्षणों के बाद, प्रत्येक दिन के प्रशिक्षण छिपा मंच के 4 परीक्षणों के लिए बाहर ले। इस प्रकार, 10 दिन पर जांच परीक्षण के बाद अतिरिक्त छुपा मंच प्रशिक्षण प्रदर्शन नहीं करते, इसके विपरीत धारा 3 में वर्णित के रूप में पहले, तुरंत उसी प्रक्रिया का उपयोग सभी चूहों के लिए छिपे हुए मंच के प्रशिक्षण के बाद जांच करते हैं।

    5. विश्लेषण

    1. दर्शनीय प्लेटफार्म प्रशिक्षण
      1. ANOVAs अलग से (क) pathlength के लिए, (ख) विलंबता मंच लगता है, और (ग) के बीच-विषय चर और दिन या प्रशिक्षण ब्लॉक के रूप में के रूप में (जैसे कि इलाज के रूप में, या किसी अन्य चर) transgene के साथ, गति तैर दोहराया उपायों का संचालन भीतर-विषय चर। नोट: अधिक जटिल डिजाइन के लिए, एक सांख्यिकीविद् के साथ परामर्श के लिए उपयोगी हो सकता है। समूह के बारे में जानकारी के लिए 8,13 देखें ठीक से अल्जाइमर का अधिक इस्तेमाल किया मॉडल के साथ इस कार्य को करने के लिए बिजली पर्याप्त आकार7; रोग।
      2. प्रदर्शन अक्षमता
        1. परीक्षण की प्रक्रिया संबंधी घटकों के अधिग्रहण, और छुपा मंच और जांच के प्रदर्शन के बाद के सांख्यिकीय विश्लेषण से इन चूहों को दूर नहीं करते कि दृश्य या मोटर अक्षमता दिखाना है कि चूहों, या पशुओं सहित, प्रदर्शन के अयोग्य चूहों को पहचानें।
          1. मतलब विलंबता की गणना और प्रत्येक माउस के लिए दिखाई दे मंच प्रशिक्षण के अंतिम दिन के लिए गति तैरना। इस मोटर या दृष्टि दोष का संकेत हो सकता है, के रूप में समूह के ऊपर 2 मानक विचलन का मतलब यह मतलब के साथ चूहों को निकाल दें।
          2. पहचान करने और ओरिएंट में नाकाम रहने के चूहों को हटाने या भागने स्कूप का पालन करें, या इस तरह के कॉर्क स्क्रू तैराकी या अस्थायी रूप न्यायपालिका व्यवहार का प्रदर्शन चूहों,।
    2. मॉरिस पानी की भूलभुलैया छिपा मंच प्रशिक्षण
      1. (क) pathlength पर दोहराया उपायों ANOVAs आचरण, (ख) विलंबता छिपा मंच लगता है, (ग) गति, और (घ) प्रतिशत समय या प्रतिशत तैरनाभीतर-विषय चर के रूप में बीच-विषय चर और परीक्षण के रूप में transgene के साथ चक्र में दूरी।
    3. जांच: शुल्क परीक्षण
      1. तैरने की गति
        1. भीतर-विषय चर के रूप में बीच-विषय चर और परीक्षण के रूप में transgene के साथ जांच परीक्षण के पार तैरने की गति पर दोहराया उपायों ANOVAs आचरण।
      2. प्लेटफार्म पार करने के सूचकांक
        1. अन्य 3 quadrants में बराबर स्थान की औसत क्रॉसिंग - माउस लक्ष्य स्थान को पार टाइम्स के PCI = संख्या: प्रत्येक माउस के लिए जांच परीक्षण विन्यास का उपयोग करना, प्लेटफार्म पार करने सूचकांक (पीसीआई) निम्न सूत्र का उपयोग कर की जाती है।
          नोट: अधिक प्रशिक्षित मंच स्थान पर क्रॉसिंग, या thigmotaxic तैराकी की एक गैर-स्थानिक रणनीति के संकेत के रूप में सभी चार स्थानों पर लगभग बराबर क्रॉसिंग से संकेत के रूप में यह, माउस एक स्थानिक खोज रणनीति उपयोग कर रहा है कि क्या यह निर्धारित करने के लिए आयोजित किया जाता है।
        2. आचार दोहरायाभीतर-विषय चर के रूप में के बीच इस विषय चर और परीक्षण के रूप में transgene के साथ PCI पर उपायों ANOVAs।
      3. प्रतिशत समय या चक्र में प्रतिशत दूरी
        1. प्रतिशत समय की गणना या प्रत्येक माउस भूलभुलैया के चार quadrants में खर्च करता दूरी। भीतर-विषय चर के रूप में बीच-विषय चर और परीक्षण के रूप में transgene के साथ, समय का प्रतिशत, या दूरी पर दोहराया उपायों ANOVAS आचरण। एक स्थानिक खोज रणनीति का प्रयोग किया जा रहा है कि यह निर्धारित करने के लिए प्रतिशत समय का उपयोग करें; लक्ष्य चक्र में लगभग 25% समय के निष्कर्षों चूहों मौका स्तर पर प्रदर्शन और एक स्थानिक खोज रणनीति का उपयोग नहीं कर रहे हैं संकेत मिलता है।
      4. हे / एन भूल
        1. पिछले दिन के अंतिम परीक्षण पर मंच का पता लगाने के लिए विलंबता को जांच परीक्षण पर मंच क्षेत्र को पार करने की विलंबता की तुलना करें। नोट: जांच परीक्षण पर प्लेटफार्म पार करने की विलंबता platfor लगता है विलंबता की तुलना में काफी लंबे समय तक हैपिछले दिन पर छिपा मंच की अंतिम सुनवाई के दौरान मी, मंच के स्थान के तत्कालीन हे / एन भूलकर उत्पन्न हो रही है।
    4. तेजी से इसका विश्लेषण
      1. प्रत्येक मुकदमे में transgene की पोस्ट हॉक तुलना के साथ महत्वपूर्ण RMANOVAs का पालन करें।

    एक नए परीक्षण पर्यावरण के लिए फिर से अनुकूलन के 6. उदाहरण

    1. प्री-हैंडलिंग। आवास के कमरे में पूर्व से निपटने के आचरण। पूरे सत्र के लिए एक परिवहन गाड़ी पर पलकों के बिना पिंजरों रखें।
      नोट: पूर्व से निपटने की प्रक्रिया के संशोधन के लिए उद्देश्य अधिक धीरे-धीरे हैंडलर जोड़तोड़ और लोगों तक पहुंचाने के लिए परिवहन उपकरणों के लिए परिचय (बीकर और स्कूप) और समय चूहों एक में अपने पिंजरे की microisolator पलकों के बिना और बाहर घर के पिंजरे में हैं बढ़ाने के लिए कर रहे हैं खुले मैदान और उज्जवल प्रकाश की स्थिति।
      1. दिन 1 और 2
        1. चूहों पिंजरे में किया जा रहा है हाथ करने के लिए acclimate करने की अनुमति दें, कोमल छू द्वारा पीछाटैटू निरीक्षण और पूंछ के अंकन के लिए उठाया जा रहा है द्वारा पीछा किया। पूर्व से निपटने के दिन 2 पर शुरू, पलकों 9 हटा दिया गया है, जबकि घोंसला इमारत और आश्रय के लिए अतिरिक्त सामग्री उपलब्ध कराने के लिए पिंजरे में पूरक घोंसले के शिकार सामग्री जगह है।
      2. दिन 3 और 4
        1. , परिवहन बीकर रखें स्कूप, और पूर्व से निपटने बॉक्स में दिखाई दे मंच का झंडा और चूहों परीक्षण प्रति 2 मिनट के 2 परीक्षण के लिए पता लगाने के लिए अनुमति देते हैं।
        2. पूर्व से निपटने के दौरान इस प्रोटोकॉल में पानी का प्रयोग न करें। बल्कि, बॉक्स मंजिल को कवर करने के लिए पर्याप्त स्वच्छ बिस्तर में शामिल है और दोनों लिंग परीक्षण किया जा रहा है अगर महिला और पुरुष गंदे कूड़े की एक छोटी राशि के साथ सुगंधित है सुनिश्चित करते हैं। प्रत्येक दिन बिस्तर बदलें।
      3. 5 दिन
        1. 20 सेकंड प्रत्येक के लिए हल्के से गंदे कूड़े और 3 परीक्षण के लिए दिखाई दे मंच झंडा, जिसमें पूर्व से निपटने बॉक्स में जगह चूहों। करने के लिए और बॉक्स से चूहों के परिवहन के लिए बीकर और स्कूप का प्रयोग करें।
      4. दर्शनीय प्लेटफार्म प्रशिक्षण
        1. (नियमित मिनेसोटा परीक्षण पर्यावरण के लिए प्रयोग) 27 डिग्री सेल्सियस पर सेट पानी का तापमान।
        2. Cued मंच प्राप्त करने पर घर पिंजरे में चूहों लौटें।
        3. 60 सेकंड के लिए ऊपर चूहों दिखाई दे मंच का अधिग्रहण करने की अनुमति दें।
        4. 5 दिनों के लिए प्रति दिन 3 परीक्षणों से मिलकर प्रशिक्षण सत्र आयोजित।
      5. छिपे हुए प्लेटफार्म प्रशिक्षण
        1. दृश्य cues संशोधित करें। एक बड़े पर्दे हैंडलर अस्पष्ट, या तो खत्म करने या पूल के आसपास संकरा अन्य पर्दे बनाने के लिए के अलावा एक और अधिक खुला कमरा है इतनी के रूप में। कमरे के बारे में अतिरिक्त वस्तुओं जगह (उदाहरण के लिए, उजागर ठंडे बस्ते में डालने, एक सफेद प्रतीक है, एक काले और सफेद समुद्र तट गेंद, बड़े काले फनल, नोटबुक, और एक काले भरवां जानवर के साथ काले कपड़े पोस्टर) एक संतुलित, लेकिन अधिक विभिन्न दृश्य cue-, जिसके परिणामस्वरूप पहले से इस्तेमाल की तुलना में निर्धारित किया है।
        2. दृश्यमान मंच traini के छिपे मंच प्रशिक्षण 72 घंटा निम्नलिखित पूरा होने शुरूएनजी, परीक्षणों के बीच लगभग 30 मिनट के अंतराल के साथ।
        3. 8 दिनों के लिए 2 परीक्षणों से मिलकर प्रशिक्षण सत्र आयोजित।
      6. जांच: शुल्क परीक्षण
        1. जांच परीक्षणों 72 छिपा प्रशिक्षण परीक्षणों 8 निम्नलिखित घंटा, 12, और 16.Include परीक्षणों 8-9 के बीच एक 3 दिन के अंतराल, और प्रशिक्षण के 12-13 प्रदर्शन करते हैं।
        2. 30 सेकंड के लिए जांच की अवधि के समय निर्धारित करें।

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    Representative Results

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    हम यह आंकड़ा 3 बीटा amyloid (Tg2576 चूहों) और उत्परिवर्ती P301L ताऊ स्थानिक संदर्भ स्मृति पर (RTG (TauP301L) 4510 चूहों) (जैसे, 1,5,7,8)। के प्रभाव का अध्ययन करने के लिए मॉरिस पानी भूलभुलैया का इस्तेमाल किया है प्रतिनिधि परिणाम मोटर और दृश्य क्षमताओं का आकलन करने के लिए परीक्षण पर्यावरण ए के उपयोग, सीखने और स्मृति 8 पर वयस्क शुरुआत P301L ताऊ अभिव्यक्ति के प्रभाव की जांच के हमारे अध्ययन में बताया, चूहों प्रत्येक प्रशिक्षण ब्लॉक के शामिल है, जहां से दिखाई मंच प्रशिक्षण ब्लॉक, भर की तुलना में थे 3 परीक्षण। दृश्यमान मंच प्रशिक्षण में Pathlength transgene सकारात्मक सुझाव दे, नियंत्रण और TauP301L चूहों (चित्रा 3) के बीच अलग नहीं किया था और नकारात्मक चूहों तुलनीय तैराकी का प्रदर्शन और दोनों समूहों के दृश्य क्यू (झंडा) मंच अंकन देख सकते हैं। कोई चूहों बहिष्कार मानदंडों के आधार पर प्रदर्शन-अयोग्य के रूप में पहचान की गई। छिपे हुए मंच प्रशिक्षण ब्लॉक में अगला, प्रदर्शन, जहां प्रत्येक तुलना में थाब्लॉक प्रशिक्षण के 1 दिन (4 परीक्षण) के होते हैं। चूहों मंच के स्थान सीखा है, मंच लगता है pathlength और समय की कमी हुई। हालांकि, pathlength स्थानिक सीखने TauP301L चूहों में बिगड़ा गया था सुझाव दे प्रत्येक प्रशिक्षण ब्लॉक (3B चित्रा) पर नियंत्रण, की तुलना में काफी लंबे समय तक TauP301L चूहों में किया गया था। मंच हटा दिया गया था, जिसमें चार जांच परीक्षणों, छिपा मंच प्रशिक्षण भर interspersed थे और पूर्व छिपा मंच प्रशिक्षण की शुरुआत करने के लिए, दिन की शुरुआत में जगह ले ली। इस प्रकार, इन जांच परीक्षणों स्थानिक संदर्भ स्मृति मापा जाता है। लक्ष्य चक्र में वृद्धि की समय से संकेत के रूप में इन चार जांच परीक्षण के पार मुकाबले काफी, अतिरिक्त प्रशिक्षण (चित्रा -3 सी) के साथ सुधार नियंत्रित करता है। इसके विपरीत, TauP301L चूहों अतिरिक्त प्रशिक्षण के साथ सुधार नहीं किया। इस प्रकार, इस उम्र में दो समूहों के बीच सबसे बड़ा मतभेद इन आंकड़ों से संकेत मिलता है कि जांच परीक्षण 4. पर हुई कि P301L ताऊ अभिव्यक्तिस्थानिक सीखने और स्थानिक संदर्भ स्मृति घाटे दोनों के साथ जुड़ा हुआ है। पानी की भूलभुलैया कार्य कुछ प्रक्रियात्मक मतभेद के अपेक्षाकृत स्थिर हो सकता है, एफ 1 FVB / एन 129S6 पृष्ठभूमि तनाव कुछ पर्यावरण परिवर्तन करने के लिए विशेष रूप से संवेदनशील हो सकता है एक्स। उल्लिखित पहले प्रोटोकॉल भी सफलतापूर्वक पर्यावरण बी में उपयोग किया गया था (जैसे।, 1,7)। हालांकि, जंगली प्रकार की जांच के प्रदर्शन, पर्यावरण सी फिर से अनुकूलित प्रोटोकॉल में काफी सुधार हुआ जंगली प्रकार की जांच के प्रदर्शन (चित्रा 4) पहले प्रोटोकॉल एक तिहाई स्थान में इस्तेमाल किया गया था जब काफी कम थी।

    चित्र 1
    चित्रा 1:। पृष्ठभूमि तनाव के लिए प्रोटोकॉल के अनुकूलन के जंगली प्रकार 7-8 महीने पुराने चूहों में एक ही संकेतों का उपयोग करने और पर्यावरण के परीक्षण के लिए प्रशिक्षित किया गया। एफ 1 FVB / एन (एन = 24) 129S6 एक्स और बी -6 / SJL (एन = 16) चूहों पहले 18 और 24 दृश्यमान पीएलए प्राप्तtform प्रशिक्षण परीक्षणों क्रमश: क्रमश: प्रति दिन 6 और 8 परीक्षणों पर दिया। दोनों उपभेदों प्रति दिन 4 छिपा मंच प्रशिक्षण परीक्षणों प्राप्त किया। एफ 1 FVB / एन 129S6 चूहों एक्स के लिए, जांच परीक्षणों 8, 12, 16, और 24 प्रशिक्षण परीक्षणों निम्नलिखित 20 घंटा प्रदर्शन किया गया। बी -6 / SJL चूहों के लिए, जांच परीक्षणों 12, 24, और 36 प्रशिक्षण परीक्षणों निम्नलिखित 20 घंटा प्रदर्शन किया गया।

    चित्र 2
    चित्रा 2:। इस समय चूहे 6 दिन, प्रति दिन 4 परीक्षण के लिए छिपे हुए मंच के प्रशिक्षण के द्वारा पीछा किया, 3 दिन, प्रति दिन 6 परीक्षणों के लिए दिखाई दे मंच प्रशिक्षण प्राप्त किया। चार जांच परीक्षणों 8, 12, 16, और 24 छिपा प्रशिक्षण परीक्षण के बाद 20 घंटा प्रदर्शन किया गया।

    चित्र तीन
    चित्रा 3:। मानव पी ले जाने मॉरिस पानी की भूलभुलैया TauP301L चूहों के लिए प्रतिनिधि परिणाम301L ताऊ जीन (प्रत्येक समूह में पुरुषों और महिलाओं के लगभग समान संख्या के साथ N = 41 tauP301L और एन = 46 नियंत्रण) P301L ताऊ अभिव्यक्ति के तीन महीने के बाद उम्र के लगभग 6.5 महीने में जांच की गई। दृश्यमान मंच प्रशिक्षण में (ए) Pathlength नियंत्रण और TauP301L चूहों (पी एस> 0.05) के बीच अलग नहीं किया था। एफ (5, 415) = 0.6141, पी = 0.69:; Transgene × ब्लॉक एफ (1, 83) = 41.96, पी <0.0001: छुपे हुए मंच के प्रशिक्षण के दौरान (बी), TauP301L चूहों सभी प्रशिक्षण ब्लॉकों के पार (Transgene काफी लंबे समय तक pathlengths का प्रदर्शन )। TauP301L चूहों (:;: एफ (3, 270) = 4.91, पी = 0.008 Transgene × ट्रायल एफ (1, 83) = 29.1, पी <0.0001 Transgene) नहीं किया था जबकि (सी) नियंत्रण, चार जांच परीक्षण के पार सुधार हुआ। प्रत्येक प्रशिक्षण ब्लॉक दिखाई दे मंच के प्रशिक्षण के लिए 3 परीक्षण या hidd के लिए 4 परीक्षणों के शामिलमंच प्रशिक्षण एन। पोस्ट-हॉक Tukey का विश्लेषण करती है: * पी ​​<0.05; ** पी <0.01; *** पी <0.001। Hunsberger से reprinted चित्रा 3 के भाग एट अल।, वयस्क शुरुआत P301L ताऊ अभिव्यक्ति के साथ चूहों में स्मृति घाटे का प्रभाव आकार, बिहेव ब्रेन रेस, वॉल्यूम। 272, पृ। 181-95। कॉपीराइट 2014, एल्सेविअर से अनुमति के साथ।

    चित्रा 4
    चित्रा 4:। जांच स्कोर्स गौरतलब है कि ताऊ नकारात्मक एफ 1 FVB के तीन समूहों / एन 129S6 चूहों 8, 12 निम्नलिखित काफी अलग जांच के स्कोर उत्पन्न प्रशिक्षण प्रोटोकॉल और परीक्षण पर्यावरण के विभिन्न संयोजनों का उपयोग कर प्रशिक्षित x परीक्षण पर्यावरण और प्रशिक्षण प्रोटोकॉल से प्रभावित है, और 16 प्रशिक्षण दिया जाता है परीक्षण (समूह: एफ (2, 42) = 14.89, पी <0.0001; ग्रुप एक्स ट्रायल: एफ (4, 84) = 1.10, पी = 0.36)। चूहे प्रोटोकॉल 1 और सैम के उपयोग प्रशिक्षितपर्यावरण बी की तुलना में पर्यावरण सी के तहत काफी कम जांच स्कोर को प्रदर्शित एप्लाइड cues के ई सेट (पर्यावरण: एफ (1, 25) = 28.58, पी <0.0001, पर्यावरण एक्स ट्रायल: एफ (2, 50) = 1.93, पी = 0.16) । संकेतों संशोधित और फिर से अनुकूलित प्रोटोकॉल 2 उपयोग किया चूहों को मूल संकेतों और 1 प्रोटोकॉल (प्रोटोकॉल का उपयोग प्रशिक्षित तुलना में थे जब पर्यावरण सी के तहत प्रशिक्षित चूहे काफी अधिक जांच के स्कोर प्रदर्शित: एफ (1, 30) = 15.32, पी <0.001; प्रोटोकॉल एक्स ट्रायल: एफ (2, 60) = 0.91, पी = 0.41) ** पी <0.001; *** पी <0.0001।।

    पहला दिन मॉरिस पानी की भूलभुलैया - पलटन: तारीख: _________
    एसई चक्र में प्लेटफार्म परीक्षक: &# 160; प्रारंभ समय: पूरा समय: जल अस्थायी: 1m अधिकतम परीक्षण समय / मंच पर 15s / * मंच पर रखा
    समूह 1
    1 ट्रायल
    पशु आईडी चिह्नित केज # समाप्त
    समय
    रिहाई
    बिंदु
    मंच
    स्थान
    मंच का पता लगाएं? समय नोट्स (यानी अजीब व्यवहार)
    डब्ल्यू एसई
    डब्ल्यू एसई
    डब्ल्यू एसई
    डब्ल्यू एसई
    डब्ल्यू एसई
    डब्ल्यू एसई
    डब्ल्यू एसई
    डब्ल्यू एसई
    डब्ल्यू एसई
    डब्ल्यू एसई
    20 मिनट आईटीआई
    2 ट्रायल
    एसई
    एसई
    एसई
    एसई
    एसई
    एसई
    एसई
    एसई
    एसई
    एसई
    20 मिनट आईटीआई
    3 ट्रायल
    एन एसई
    एन एसई
    एन एसई
    एन एसई
    एन एसई
    एन एसई
    एन एसई
    एन एसई
    एन एसई
    एन एसई
    20 मिनट आईटीआई
    ट्रायल 4
    एस एसई
    एस एसई
    एस एसई
    एस एसई
    एस एसई
    एस एसई
    एस एसई
    </ टीडी> एस एसई
    एस एसई
    एस एसई

    तालिका 1:। हिडन मंच चलाने शीट मंच से दक्षिण पूर्व में स्थित है, जिसमें एक उदाहरण रन शीट (एसई) वृत्त का चतुर्थ भाग प्रदान की जाती है। प्रयोगकर्ता माउस का आईडी नंबर, पूंछ या कान, और पिंजरे समूहीकरण पर किसी भी पहचान के निशान लिखना चाहिए। जारी बिंदु शीट पर संकेत दिया है और कदम 3.3.2 में वर्णित के रूप में छद्म बेतरतीब ढंग से निर्धारित किया जाना चाहिए। माउस मंच और मंच को खोजने के लिए समय निकालने लगे कि क्या रिकॉर्ड है। अस्थायी या thigmotaxis सहित अजीब व्यवहार करना चाहिए, का उल्लेख किया।

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    Discussion

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    MWM कार्य व्यापक रूप से स्थानिक सीखने और स्मृति का आकलन करने के लिए प्रयोग किया जाता है। हालांकि, इस कार्य की मजबूती कई कारकों से प्रभावित और पृष्ठभूमि तनाव और परीक्षण पर्यावरण दोनों के लिए अनुकूलन की आवश्यकता हो सकती है। चित्रा 4, एक ही प्रशिक्षण प्रोटोकॉल में दिखाया गया है और दो ​​अलग-अलग परीक्षण के कमरे (बराबर आकार और लेआउट) में इस्तेमाल किया दृश्य cues के रूप में लागू काफी अलग जांच प्रदर्शन झुकेंगे। परीक्षण के कमरे के कई सुविधाओं के स्थानिक संकेतों 4 में योगदान हो सकता है, यह दो कमरों परीक्षण और अधिक कठिन बना दिया है, जो किसी अज्ञात तरीके से काफी अलग थे कि अनुमान लगाया गया था। अतिरिक्त भूलभुलैया संकेतों को संशोधित करने में, हम प्रभावी रूप से दृश्य cues की संख्या में वृद्धि करने का विकल्प चुना। इसके अलावा, पर्दे के उपयोग को कम करके, मौजूद हो सकता है कि किसी भी श्रवण या घ्राण संकेतों बदल दिया गया हो सकता है। दो परीक्षण के कमरे की रोशनी स्तर हालांकि नई मछली पालने का बाड़ा में घर पिंजरे प्रकाश स्तर है, जिसके परिणामस्वरूप कम थी, बराबर थेएक उच्च प्रकाश स्तर अंतर में परीक्षण के कमरे में घर के पिंजरे से जा रहा है। यह BALB / ग चूहों प्रकाश के स्तर प्रदान करने MWM कार्य को करने में सक्षम हैं कि सुझाव दिया गया है 14 पर्याप्त रूप से कम कर रहे हैं। हालांकि, असफल (अप्रकाशित टिप्पणियों) थे घटाने परीक्षण के कमरे प्रकाश के स्तर से प्रदर्शन में सुधार करने के लिए प्रयास करता है। तिथि करने के लिए, यह क्या कारक (एस) के नए परीक्षण के वातावरण में प्रदर्शन में गिरावट के लिए योगदान नहीं जाना जाता है, लेकिन संशोधित पूर्व हैंडलिंग, संकेत, और प्रशिक्षण प्रोटोकॉल जांच के स्कोर में एक उल्लेखनीय वृद्धि हुई है।

    यदि संभव हो तो, यह विशेष रूप से परीक्षण पर्यावरण के लिए सीखने और इष्टतम जांच नियुक्ति की दर का आकलन करने की योजना बनाई प्रयोग के रूप में जंगली प्रकार या एक ही पृष्ठभूमि तनाव के नियंत्रण चूहों और उम्र के एक समूह का परीक्षण करने की सलाह दी है। चूहों के लगभग आधे से एक संभावित सकारात्मक खोज पूर्वाग्रह (target≥35 में% टाइम) और पिछले जांच जब प्रदर्शित कर रहे हैं जब आदर्श रूप में, पहले जांच रखा गया हैसबसे अधिक नियंत्रण चूहों एक सकारात्मक खोज पूर्वाग्रह दिखाने के लिए और प्रदर्शन पठार तक पहुँच चुके हैं। इस रणनीति के बेहतर प्रदर्शन (एफ 1 FVB / एन 129S6 x) और अधिक धीरे सीखा जो एक पृष्ठभूमि के लिए जांच प्लेसमेंट का निर्धारण करने के लिए इस्तेमाल किया गया है (मिश्रित C57BL 6 / एक्स FVB / एन एक्स 129S6), चूहों का लगभग आधा लक्ष्य वृत्त का चतुर्थ भाग ऑक्यूपेंसी था जहां ≥35 के एक समूह के साथ क्रमश: 8 परीक्षणों या 18 परीक्षणों पहले जांच के लिए लगभग 35% टाइम का मतलब के बाद। इसके बाद जांच में 25% टाइम की आधारभूत की तुलना में कम से कम एक 15 सूत्री अंतर के साथ आदर्श रूप में, इस फैशन में सेट अगर पहले से अधिक होना चाहिए। मामूली कम कर रहे हैं, जो जांच के स्कोर (~ 35% टाइम) की तुलना करते हैं, तो इस 4,5 quadrants गैर लक्ष्य के लिए लक्ष्य की तुलना द्वारा लक्ष्य है और इसलिए एक वैध अंतर के लिए एक महत्वपूर्ण पूर्वाग्रह का प्रतिनिधित्व करता है कि सुनिश्चित करते हैं। इसके अलावा, न्यूनतम समूह मतलब आधारभूत या मौका प्रदर्शन पर विचार किया जाएगा जो लक्ष्य चक्र में 25% टाइम, की तुलना में काफी कम नहीं होना चाहिए। मुकाबले Targगैर लक्ष्य अधिभोग के लिए एट जैसे कमरे पूर्वाग्रहों, आसन्न चतुर्भागों से किसी से भी विपरीत चक्र में अधिक समय खर्च चूहों एक अप्रत्याशित खोज पैटर्न होगा, अगर वहाँ रहे हैं की पहचान करने में मदद मिल सकती है।

    परीक्षण का आयोजन है, जबकि कुछ सिफारिशों को संभालने और प्रयोगकर्ताओं के बीच शैलियों के परीक्षण में परिवर्तनशीलता को कम करने के लिए 1 व्यक्ति के लिए पशुओं के प्रत्येक पलटन का परीक्षण कर रहे लोगों की संख्या को सीमित करने के लिए, और प्रत्येक दिन एक ही समय के आसपास के परीक्षण से बाहर ले जाने में शामिल हैं। इसके अलावा, यह चूहों प्रति दिन 2 परीक्षणों दिन 15 प्रति 4 परीक्षणों प्राप्त करने वाले के रूप में लगभग के रूप में जल्दी से सीख प्राप्त सुझाव दिया गया है। यह अधिक से अधिक एक पलटन एक दिन के दौरान चलाने के लिए की जरूरत है विभिन्न प्रकारों / पृष्ठभूमि / उपचार समूहों से पशुओं प्रत्येक परीक्षण के समूह में प्रतिनिधित्व किया है कि आवश्यक है। हाइपोथर्मिया के प्रदर्शन को प्रभावित और सेक्स और 16 निर्भर पृष्ठभूमि तनाव है सकते हैं के रूप में अंत में, देखभाल, चूहों hypothermic नहीं हो जाते हैं सुनिश्चित करने के लिए लिया जाना चाहिए। वें हालांकियहां इस्तेमाल ई अंतर परीक्षण अंतराल (20 मिनट) हाइपोथर्मिया को रोकने के लिए पर्याप्त होना चाहिए, अन्य तरीकों, पानी के तापमान को समायोजित परीक्षणों के बीच एक गर्म पकड़े पिंजरे में चूहों दे, या जरूरत के रूप में दो के कुछ संयोजन शामिल हैं। हालांकि, यह पानी का तापमान दोनों दिशाओं में प्रदर्शन को प्रभावित कर सकते हैं कि ध्यान दिया जाना चाहिए। Estrous चूहों ठंड की स्थिति (19 डिग्री सेल्सियस) 17 के तहत बेहतर प्रदर्शन जबकि उदाहरण के लिए, proestrous चूहे, गर्म स्थितियों (33 डिग्री सेल्सियस) के तहत बेहतर प्रदर्शन करते हैं। इस प्रकार, देखभाल प्रयोगों भर में पानी के तापमान के लिए नियंत्रित करने के लिए लिया जाना चाहिए। हाइपोथर्मिया एक विशेष जानवर के लिए एक चिंता का विषय होना चाहिए, प्रयोगकर्ता वे के बाद तैरना दूल्हा या hypothermic व्यवहार के किसी भी संकेत देने में विफल है कि घटना में एक कागज तौलिया के साथ जानवर है कि सूखे के हाथ सकता है। शर्तों सुनिश्चित कर सकते हैं शरीर के तापमान के आवधिक मूल्यांकन हाइपोथर्मिया को रोकने के लिए पर्याप्त हैं।

    एक और प्रक्रियात्मक विचार दिखाई दे मंच traini के लिए संबंधितएनजी। युवा चूहों या अन्य तनाव कम दिखाई दे मंच प्रशिक्षण परीक्षणों की आवश्यकता हो सकती है। एक सुझाव दिया दिशानिर्देश नियंत्रण समूह प्रयोगात्मक समूह समकक्ष प्रदर्शन को प्रदर्शित करता है, उपलब्ध कराने के अंतिम 3-6 लगातार प्रशिक्षण ट्रायल के दौरान प्रदर्शन की मंजिल तक पहुँच गया है जब तक प्रशिक्षित करने के लिए है। प्रयोगात्मक डिजाइन दोनों जवान और बूढ़े चूहों शामिल हैं, तो प्रदर्शन 5 की मंजिल तक पहुँचने के लिए प्रशिक्षण परीक्षणों की संख्या सबसे ज्यादा आवश्यकता है जो समूह, के लिए दिखाई दे मंच प्रशिक्षण अवधि निर्धारित किया है। इसके अलावा, दिखाई मंच से निपटने और परीक्षण प्रक्रिया के लिए चूहों acclimatizing की दिशा में कारगर हो सकता है और पहले परीक्षण किया है या मानव हैंडलिंग तनाव परीक्षण किया जा रहा करने के लिए जरूरत से ज्यादा प्रतिकूल नहीं है जब चूहों बहुत युवा नहीं हैं, तो पूर्व से निपटने के लिए की जरूरत नहीं रहेगी सकता है।

    , खाद्य आधारित कार्यों के लिए हिप्पोकैम्पस पर निर्भर विवाद का एक उपाय के रूप में अपनी वैधता तुलना में मॉरिस पानी भूलभुलैया की व्यापक लाभ प्रेरक कारक को उसके रिश्तेदार असंवेदनशीलता शामिलial नेविगेशन और संदर्भ स्मृति, और इसके पार प्रजातियों प्रभावकारिता 15। तकनीक का एक संभावित सीमा इस प्रोटोकॉल एक विशिष्ट पृष्ठभूमि तनाव के लिए तैयार की गई है, क्योंकि यह अन्य जानवरों या चूहों के अन्य पृष्ठभूमि उपभेदों के साथ प्रभावी नहीं हो सकता है, कि है। इसके अतिरिक्त, प्रोटोकॉल के हिस्से के रूप में, प्रयास और बनाने के लिए रणनीतिक रूप से mazing कमरा भर में पहचाने जाने योग्य संकेत के स्थान के लिए बना रहे हैं। हालांकि, यह कमरे के चारों ओर संकेतों रखकर जब इष्टतम है क्या सटीक ऊंचाई स्पष्ट नहीं है। इस प्रकार, बड़े हैं और एक दूसरे से अलग पहचाना जाता है कि संकेतों प्रभावी प्रशिक्षण के लिए आवश्यक हैं।

    सारांश में, एक विशेष पृष्ठभूमि तनाव के साथ प्रयोग के लिए MWM कार्य के अनुकूलन और परीक्षण के वातावरण में काफी काफी समय और लागत बचत में जिसके परिणामस्वरूप कार्य के गतिशील रेंज बढ़ा सकते हैं।

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    Disclosures

    लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है।

    Acknowledgments

    मस्तिष्क संबंधी विकार और स्ट्रोक के लिए राष्ट्रीय संस्थान, - इस काम जनरल मेडिकल साइंसेज के राष्ट्रीय संस्थान (U54GM104942 रीड / Engler-Chiurazzi) द्वारा समर्थित किया गया (ऐश - R01NS33249, R01NS63249 और R01NS79374), Cobre (Engler-Chiurazzi - P20GM109098), अल्जाइमर एसोसिएशन (रीड - NIRG-12-242187), एक WVU संकाय अनुसंधान सीनेट अनुदान (ईख), मेडिसिन डीन कार्यालय के WVU कॉलेज (Engler-Chiurazzi) से एक WVU PSCOR अनुदान (ईख), और आंतरिक धन। सामग्री केवल लेखकों की जिम्मेदारी है और जरूरी एनआईएच या अल्जाइमर एसोसिएशन के अधिकारी विचारों का प्रतिनिधित्व नहीं करता है।

    Materials

    Name Company Catalog Number Comments
    Viewer Tracking software Biobserve This particular software is not a requirement - there are other tracking systems available
    Pre-handling pool Dimensions approximately 1 foot wide x 2 feet long x 1.5 feet deep
    Plastic beaker 1 L
    Scoop
    Small net
    Stopwatch
    Non-toxic white tempera paint Any color paint can be used; however, most tracking software programs require that the paint contrast with the color of the animal.
    Visible platform Color should contrast that of maze
    Curtain rod
    Curtains
    Circular tub Usually white in color; approximately 4 feet in diameter
    Hidden platform Painted same color as the water

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    References

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    मॉरिस पानी की भूलभुलैया टेस्ट: माउस तनाव और परीक्षण पर्यावरण के लिए अनुकूलन
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    Weitzner, D. S., Engler-Chiurazzi, E. B., Kotilinek, L. A., Ashe, K. H., Reed, M. N. Morris Water Maze Test: Optimization for Mouse Strain and Testing Environment. J. Vis. Exp. (100), e52706, doi:10.3791/52706 (2015).More

    Weitzner, D. S., Engler-Chiurazzi, E. B., Kotilinek, L. A., Ashe, K. H., Reed, M. N. Morris Water Maze Test: Optimization for Mouse Strain and Testing Environment. J. Vis. Exp. (100), e52706, doi:10.3791/52706 (2015).

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