Introduction
Modelos de ratones transgénicos han sido instrumentales en la evaluación de la fisiopatología de la enfermedad de Alzheimer (AD), así como el potencial de las intervenciones terapéuticas. Tareas cognitivas, como el laberinto de agua de Morris (MWM), son comúnmente utilizados con estos modelos para identificar los correlatos moleculares de los déficits de memoria y evaluar la eficacia de los fármacos preclínicos. Es crucial, sin embargo, que el rango dinámico de la tarea cognitiva ser lo suficientemente amplia como para detectar los efectos sutiles de tratamiento. Con modelos de ratones de AD, los déficits cognitivos son típicamente dependiente de la edad, y los ratones muestran descensos progresivos en el rendimiento (por ejemplo, 1). El uso de una tarea cognitiva sensible puede permitir la detección de diferencias sutiles temprano en la vida del animal, reduciendo así los costos asociados con el envejecimiento de los animales. Por ejemplo, reducir el número de ensayos de entrenamiento en los Barnes dependiente del hipocampo laberinto de 15 a 5 aumentó la dificultad de la tarea, lo que resulta en el detección de déficits en el modelo 3xTg a una edad más temprana que se informó anteriormente 2. La detección temprana de los déficits no sólo ofrece un considerable ahorro de tiempo y costes, sino que también aumenta la probabilidad de que los cambios moleculares que subyacen a los déficits cognitivos pueden ser identificados.
Uno de los factores que influyen en la sensibilidad de las tareas cognitivas es la genética cepa fondo del modelo de ratón. Por ejemplo, los ratones BALB / c exhiben un rendimiento superior en las tareas de aprendizaje y memoria en comparación con otras cepas, tales como la C57BL / 6 3. La F1 FVB / N x 129S6 fondo se utiliza para dos de los modelos más ampliamente empleadas de la EA, la Tg2576 y RTG (TauP301L) 4510 modelos. Esta cepa exhibe la capacidad de aprendizaje superior en el MWM en relación con otras cepas, incluyendo B6 ratones SJL / 4. Debido a esta capacidad de aprendizaje superior, el uso de una única sonda después de una amplia formación puede enmascarar diferencias grupo resultante de un exceso de formación. Además, la SENSIBILIDADy de los ensayos de la sonda puede ser dependiente de la edad. Hemos demostrado anteriormente que los ensayos de sondas anteriores, después del entrenamiento plataforma oculta limitado, son más sensibles a las diferencias en la joven Tg2576 comparación con jóvenes controles littermate-transgénicos negativo que son ensayos de sondas insertadas después de más amplia capacitación 5. Por el contrario, los ensayos de sonda siguientes amplia formación son más sensibles en los mayores (20-25 meses) en comparación con los ratones Tg2576 camada son mayores de ensayos de sondas anteriores 5. Por intercalando ensayos de sonda a lo largo de la formación, la probabilidad de que un ensayo sensible será identificado se incrementa, sobre todo si la prueba se realiza longitudinal y la sensibilidad de un ensayo de sonda en particular es dependiente de la edad. La Figura 1 muestra el rendimiento superior de F1 FVB / N x ratones 129S6 bajo el protocolo optimizado para esta cepa en comparación con los ratones de los antecedentes B6 / SJL entrenado bajo un protocolo con una formación más amplia.
El MWM espensado generalmente para proporcionar medidas confiables que son reproducibles en todo tiempo y laboratorios 6. Por ejemplo, el protocolo primario originalmente utilizado por nuestro laboratorio de 1,7 Minnesota se aplicó con éxito, con modificaciones menores en West Virginia University 8. Del mismo modo, se observaron niveles equivalentes de deterioro en RTG (TauP301L) 4,510 ratones relación con el control de camada si alojados en condiciones libres de patógenos o convencionales 9. Sin embargo, el entorno de prueba puede influir en la sensibilidad de la tarea MWM. Factores tales como la iluminación de la habitación, las salidas de aire, los gradientes de temperatura y ruidos contribuyen a señales ambientales 4 que en última instancia pueden influir en el rendimiento. Cuando nuestro laboratorio y vivero de Minnesota fueron trasladados a un nuevo edificio, hasta una reducción del 38% en el rendimiento de tipo salvaje se observó, lo que reduce considerablemente el rango dinámico de la tarea y la capacidad de detectar los déficits relacionados con transgenes. Este cambio en el performance ocurrió a pesar de el diseño de la sala de pruebas para ser de tamaño y configuración equivalente, y utilizando las mismas claves visuales aplicadas. Un "re-optimización" del protocolo original se requiere para aumentar el rango dinámico de la tarea MWM en el nuevo entorno de prueba.
Aquí el protocolo original adaptado para su uso con la F1 FVB / N x 129S6 fondo 5 se describe. Debido a que algunos estudios sugieren estrés está asociado con pobre desempeño MWM 10 y pre-tratamiento puede aliviar este déficit inducido por estrés en el rendimiento de 11, un protocolo de pre-tratamiento fue diseñado para aclimatar los ratones a la introducción y la eliminación de la piscina antes de la prueba MWM . Después de pre-tratamiento, los ratones sometidos a entrenamiento plataforma visible, en el que una plataforma elevada está marcado con una bandera. Capacitación plataforma visible se utiliza para identificar los ratones con problemas de rendimiento relacionados con anomalías sensoriomotoras. El uso de los criterios de exclusión descritos en la protsección ocol, ratones rendimiento incompetente se eliminan de los exámenes posteriores de los ensayos de formación de la plataforma y de la sonda ocultos. Deficiencias en los ensayos de formación de la plataforma y de la sonda ocultos se interpretan como déficits cognitivos porque el rendimiento sensoriomotor es factor de los datos. Después de la terminación de la formación plataforma visible, los ratones comienzan la formación plataforma oculta donde la plataforma se sumerge en agua y permanece en la misma posición relativa a las señales externas. Ensayos en los que se elimina la plataforma (ensayos de sonda) se intercalan a lo largo de la formación plataforma oculta para evaluar la influencia de la formación adicional. Dado que los ensayos de sondas se producen al comienzo de cada día, antes del entrenamiento plataforma oculta adicional, ensayos de sondas miden la capacidad del animal para recordar la localización de la plataforma después de un retardo de 20 hr, considerada una medida de la memoria de referencia 12. Finalmente, formas en que fue re-optimizados este protocolo original cuando los cambios en el entorno de pruebasse describen el rendimiento del control perturbado.
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Protocol
Todos los procedimientos experimentales se realizaron de conformidad con las normas de el Cuidado y Uso de Animales Comité Institucional (IACUC) y aprobados por IACUC de la Universidad de Virginia Occidental.
1. Pre-tratamiento
- Configuración de la piscina
- Prop la piscina pre-tratamiento por lo que se eleva a una altura cómoda.
- Coloque 2 L de agua (21 ° C) en la piscina pre-manejo a un nivel de aproximadamente 1 cm.
Nota: No agregue el colorante.
- Procedimiento
- Llevar los ratones del vivero a la sala de pruebas.
- Verifique la identificación del sujeto (número tema, cola tatuaje, clip de oreja, etc.).
- Marque la cola de ratón con un marcador permanente para distinguir los ratones dentro de la jaula que se han sometido a las pruebas de las que aún no se han probado antes de su uso. Marque todos los ratones en una jaula con el mismo color.
- Coloque un ratón en el vaso de transferencia para approximately 5 seg. Luego, vierta suavemente el ratón fuera del vaso en la piscina antes de la manipulación.
- El uso de un contador de tiempo, permita que el ratón para permanecer en la piscina durante 20 segundos.
- Después de 20 segundos, coloque suavemente la primicia (sin inclinándola) delante del ratón. Brevemente permitir el ratón para explorar la primicia, y si es necesario, fomentar el ratón para conseguir en la primicia deslizando suavemente la pala bajo el ratón mientras se levanta lentamente. Tenga cuidado de no asustar a los ratones con la primicia.
- Una vez que el ratón está en la primicia, el transporte de vuelta a la jaula de retención.
- Repita estos procedimientos para cada ratón en la jaula una vez al día durante 10 días. A intervalos regulares (por ejemplo, después de cada animal), recoger fecal boli y ropa de cama de la piscina con una red.
- Enjuague el vaso de transferencia con agua a intervalos regulares (por ejemplo, después de la finalización de una jaula de ratones).
- Una vez completados estos pasos, enjuague el vaso de transferencia con agua varias veces, volcar el agua dela piscina, y enjuagar la piscina aproximadamente dos veces con agua.
2. Formación Plataforma Visible
- Configuración del seguimiento Performance Mouse Software por ejemplo Viewer (Ver Tabla de Materiales).
- Calibrar el vídeo para que coincida con las dimensiones del laberinto bajo la 'Configuración' - "Filtros y objetos" de la ficha.
- Establecer filtros para que el software puede diferenciar un ratón del fondo.
- Ajuste la "sensibilidad" por debajo de la zona de "filtro de fondo" para que el software de seguimiento identifica el animal.
- Haga clic en la opción de "aceptar" una vez que el software de seguimiento identifica el animal. Elija la opción "editar" para apagón zonas fuera del área laberinto.
- Seleccione el "filtro animal" apropiada y "min. tamaño animal ".
- La creación de las Hojas Run <ol>
- Crear una hoja de ejecución lista cada ratón, cada posible ubicación, y un espacio para notas que contienen información sobre el comportamiento aberrante.
- Predeterminar lugares para la prueba de plataforma visible que son el mismo para cada grupo de ratones. Así, para el primer ensayo, pre-determinar que la plataforma se colocará en el lado opuesto a donde el ratón se coloca en el laberinto, en el lado derecho cerca de la pared. Para el segundo ensayo, pre-determinar que la plataforma se colocará en un lugar diferente a lo largo de la pared del fondo para cada ratón y que esto continuará por cada uno de los 6 ensayos.
- Cuelgue cortinas alrededor de la habitación para que queden ocultas las claves espaciales.
- Coloque la bañera para que coincida con la configuración en el software de seguimiento, garantizando el laberinto partidos con la configuración de configuración en "Configuración" - pestaña "Zona Definición". Nota: Se hELPS para asegurar la bañera está en la ubicación adecuada antes de llenarlo de agua como la bañera no se trasladó una vez llena fácilmente.
- Llene la tina con agua del grifo, y el uso de un termómetro, asegúrese de que la temperatura del agua es de aproximadamente 21 ° C. Asegúrese de que el agua se mantiene dentro de un grado de esta temperatura durante toda la prueba, ya que el agua más fría puede afectar al rendimiento especialmente cuando se utilizan ratones envejecidos 8.
Nota: No agregue el colorante. - Uso de los lugares predeterminados, coloque la plataforma, que tiene una bandera montada que alcanza una altura de 13 cm y es 4,5 cm x 4,5 cm con una "S" bold carácter en forma de grabado en ella, en la primera ubicación de la bañera de manera que es de aproximadamente 1 pulgada por encima de la superficie del agua.
- Tome el primer ratón de la jaula, verificar la identificación del sujeto, marque la cola con un marcador permanente del color correcto, y el lugar en el vaso.
- Coloque suavemente el mouse en la bañera, iniciar el temporizador, y asegúrese de que el software de seguimiento es el seguimiento del animal. Deje que el ratón hasta 2 minutos para localizar la plataforma. Una vez que el ratón se localiza la plataforma, permitir que el ratón 20 seg en la plataforma.
- Si el animal se encuentra la plataforma y procede a saltar o caerse, recoger el ratón y colocar el ratón sobre la plataforma. Si el ratón sigue saltar o caer de la plataforma, mantenga el ratón en la plataforma, por lo que el ratón se entera de que la permanencia en la plataforma lleva a escapar de la bañera.
Nota: El ratón debe permanecer en la plataforma durante un tiempo combinado de 20 seg; por lo tanto, si el ratón salta después de 5 segundos, la cantidad de tiempo que queda en la plataforma es de 15 segundos y no se restablece a 20 seg. - Si el animal no puede encontrar la plataforma en el período de 2 minutos, saque el ratón y colocarlo en la plataforma durante 20 segundos.
- Después de 20 segundos en la plataforma, quite el ratón desde la plataforma como se hace en la formación pre-manipulación y colocar el ratón in the jaula climatizada forrado con toallas de papel y se calentó a ~ 31 ° C por una almohadilla de calefacción y lámpara de calor durante 30 seg. Realizar la evaluación periódica de la temperatura corporal con un termómetro rectal para asegurar que ciertas cepas de ratones o ratones a una cierta edad no son diferencialmente susceptibles a la inducida por la exposición al agua hipotermia.
- Después de 2 minutos a la jaula de retención con la lámpara de calefacción, transferir el ratón a la jaula de retención con sólo una almohadilla eléctrica, pero sin lámpara de calor, para recuperarse entre los ensayos. Finalmente, coloque todos los ratones de un solo jaula en la misma explotación jaula durante la prueba.
- Limpie el laberinto de escombros con una red después de cada ratón se ha completado un ensayo, para interrumpir señales olfativas.
Nota: La plataforma se mantendrá en la misma ubicación para cada ratón durante una sola prueba y serátrasladado a los otros lugares predeterminados para los ensayos siguientes. Esto se hace para asegurar que los ratones 1) aprender hay una plataforma para escapar de, 2) nadar directamente a la plataforma visible, demostrando así la competencia visual intacto, y 3) no tienen déficits motores.
Nota: El uso de un temporizador de mano también puede ser beneficioso para asegurar la precisión del software de seguimiento.
Entrenamiento 3. Morris agua laberinto Plataforma Oculta
- Sy hasta la habitación
- Colgar las cortinas en la habitación para ocultar señales espaciales en el laboratorio.
- Colocar señales estratégicamente en las cortinas. Asegúrese de que las señales son grandes y contienen colores contrastantes (ej .: blanco y negro) para una mejor visibilidad. Colgar señales a una distancia y altura donde son visibles para los ratones de dentro de la bañera. Nota: Las señales son estáticos y no se mueven durante el transcurso de la prueba.
- Configuración del software de seguimiento de Performance Mouse
- Calibrar el vídeo para que coincida con las dimensiones del laberinto bajo la 'Configuración' - "Filtros y objetos" de la ficha.
- Establecer los filtros de modo que el software puede diferenciar los ratones del fondo.
- Utilice el mismo procedimiento que se describe en la prueba de plataforma visible (pasos 2.1.2.1-2.1.2.3) para configurar los filtros de laberinto de agua de Morris formación plataforma oculta.
- Crear cuatro cuadrantes iguales el interior del laberinto
- Haga clic enla opción "Elipse" en la pestaña "Zona Definición" primero, y crear un círculo que coincide con el laberinto en la pantalla. Nota: En esta pestaña, se muestra el laberinto real establecido, por lo que permite la opción para que coincida con la configuración de la computadora con la configuración real del laberinto.
- Haga clic en la opción "Rectángulo" y crear cuatro cuadrados iguales. Coloque estos cuadrados en la pantalla para crear cuatro cuadrantes iguales dentro del círculo de nueva creación.
- Crear las plataformas en el laberinto.
- Seleccione la opción "Elipse", y crear un círculo del tamaño de la plataforma que se utilizará. Nota: La colocación de la plataforma en el laberinto de antemano puede ser beneficioso para crear una elipse el tamaño exacto de la plataforma.
- Coloque la localización de la plataforma recién creada en el centro del cuadrante objetivo. (Se recomienda nombrar a este objeto "objetivo" para distinguir las plataformas correctas del resto). Paso crítico: En el cuadro solo below "Grid", seleccione la opción "stop" en "gatillo" para la plataforma de destino. Esto hará que el programa se detenga una vez que el ratón llega a la plataforma.
- Crear otras tres áreas de plataforma idénticos, y colocarlos en los lugares exactos en los otros cuadrantes. No seleccione "stop" en la opción de "gatillo".
- La creación de las Hojas Run
- Crear una hoja de ejecución lista cada ratón, cada ensayo, un espacio para anotar el tiempo para llegar a la plataforma, y un espacio para observar el comportamiento aberrante (Tabla 1).
- Pre-determinar el punto de liberación de cada ratón de una manera pseudoaleatoria. Utilice la selección pseudo-aleatoria tal que la distancia a la plataforma es igual cada día, cada uno de los 4 lugares se utiliza igualmente, y el ángulo desde el principio a la plataforma (es decir., De izquierda o derecha) está equilibrada dentro y entre días.
Nota: la ubicación de la plataforma en la carrerahoja para asegurar la ubicación de la plataforma no se mueve de la posición original. Asegúrese de que la plataforma está en el centro de una de las cuatro zonas que se crearon en el software de seguimiento.
Nota: Si el análisis longitudinal se lleva a cabo en diferentes edades, mueva la plataforma a una nueva ubicación en cada edad.
- Configuración del Laberinto
- Ajuste bien el laberinto de agua o la cámara de tal manera que hay una coincidencia entre el laberinto y la configuración de configuración en "Configuración" - "Zona Definición" ficha.
- Etiquetar los cuatro cuadrantes invisibles del laberinto (N, S, E, W). Compruebe que estos coinciden con la configuración del software de seguimiento para garantizar los ratones están siendo liberado de los puntos de partida correctos.
Paso crítico: Place estas etiquetas fuera del laberinto y fuera de la vista de un animal de natación dado que las señales dentro del laberinto constituyen una tarea no dependiente-espacial, no hipocampo. - Rellene el laberinto con grifo finalesr (aproximadamente 21 ° C) de modo que la plataforma es de aproximadamente 5 mm por debajo de la superficie del agua.
- Colocar la plataforma en la ubicación predeterminada.
Nota: La ubicación de la plataforma seguirá siendo el mismo para todos los ratones que se están probando en todos los días y los ensayos. - Use no tóxicos pintura al temple blanco para que el agua opaca. Haga esto para asegurarse de que la parte superior de la plataforma es invisible desde altura de los ojos de los animales mientras que la natación.
- Procedimiento
- Tome el ratón de la jaula, marque la cola con un marcador permanente del color correcto, y el lugar en el vaso.
- Vierta suavemente el ratón en el laberinto, por lo que entra en cara a la pared. Nota: Cada ratón se colocará en el mismo lugar de partida para un ensayo único.
- En la versión inicial del ratón, iniciar el temporizador y de pie en una zona donde el probador no es fácilmente visible por los ratones. Asegúrese de que el software de rastreo de animales está siguiendo correctamente el animal. Una vez que el animal llega a la plataforma, permitirá que permanezca en la plataforma durante 15 segundos.
Nota: Esto permite que el animal para orientar a su ubicación espacial dentro de la habitación. - Después de 15 segundos en la plataforma, quite el animal del laberinto y regresar el ratón a la jaula con calefacción.
- Si el ratón encuentra la plataforma y procede a saltar o caerse antes de 15 segundos, saque el ratón y vuelva a colocarlo en la plataforma para el resto de los 15 segundos por lo que el ratón aprende a asociar la plataforma con fuga.
- Si el ratón no localiza la plataforma dentro de 60 segundos, saque suavemente el ratón y colóquelo en la plataforma. Deje que se quede en la plataforma durante 15 segundos, luego retire el animal con la primicia y traerlo de vuelta a la jaula se calienta.
- Limpie el laberinto de escombros con una red para interrumpir señales olfativas.
- Repita estos procedimientos para los ratones restantes en el grupo. Por lo tanto, para los días de prueba 4 a 9, llevar a cabo cuatro ensayos de tren plataforma escondidaing por día con aproximadamente 20 minutos entre cada prueba.
- Cambie el pseduorandomly ubicación inicial para cada ensayo. Así, durante el ensayo 1, liberar a todos los ratones del mismo lugar de partida, a continuación, repita el procedimiento desde una posición de partida diferente para los ensayos siguientes. Cada día, varían los puntos de liberación para asegurar los animales no desarrollan una estrategia depende no espacial, no hipocampo motora. Por ejemplo, si los ratones son liberados de N, S, E y W puntos en el primer día, no ponerlos en libertad en ese mismo orden del día siguiente.
- Durante el entrenamiento de plataforma oculta, utilizar el software de seguimiento de los animales para medir la latencia para alcanzar la plataforma, la longitud de la trayectoria del animal, y el porcentaje de tiempo o distancia que el animal pasa en cada cuadrante laberinto. Obtener estas mediciones desde la pestaña "laberinto de agua" en "lista Experimento" y pueden ser exportados directamente a una hoja de cálculo Excel.
Nota: El uso de un temporizador de mano asegura la exactitud de la seguimientosoftware.
4. Los ensayos de sonda
- Configuración del software de seguimiento de Performance Mouse
- Utilice los mismos procedimientos que en el procedimiento de plataforma oculta laberinto acuático de Morris (pasos 3.2.1-3.2.4.3) con una excepción. Paso crítico: Para los ensayos de sonda, garantizar la opción de "stop" de "gatillo" se apaga durante los ensayos de la sonda. Esto evitará que el programa se detenga cuando un ratón cruza el área de la plataforma.
- La creación de las Hojas Run
- Crear una hoja de ejecución lista cada ratón, cada ensayo, y un espacio para observar el comportamiento aberrante. Pre-determinar el punto de liberación durante los ensayos de la sonda de tal manera que se alternan entre los dos lados opuestos de la plataforma. Por lo tanto, pre-determinar los puntos de liberación de tal manera que los ratones no son liberados desde los dos lados que son adyacentes a la plataforma.
- Procedimiento
- Realizar ensayos de sondas similares a la formación plataforma escondida, con la excepla que no plataforma está en el laberinto.
- Suelte el ratón desde un punto de liberación predeterminado. Durante el juicio de la sonda, retire la plataforma y el ratón tiene 60 segundos para nadar en el laberinto.
- Durante las pruebas, llevar a cabo 4 ensayos de sonda. Alterar el punto de los ratones entre los ensayos de sonda de liberación. Por lo tanto, cambiar el punto de la prueba sonda de corriente de liberación de la de la sonda de prueba anterior.
- Durante los ensayos de sonda, utilizar el software de seguimiento de los animales para rastrear la longitud de la trayectoria del animal, el porcentaje de tiempo que el animal pasa en cada cuadrante del laberinto, y el número de veces que un animal nada sobre el área previamente platformed. Obtener estas mediciones desde la pestaña "Análisis de datos" y la ficha "laberinto de agua" en "lista Experimental", y exportar directamente a una hoja de cálculo Excel.
Nota: El uso de un temporizador de mano también puede ser beneficioso para asegurar la precisión del software de seguimiento. - Llevar a cabo un ensayo de la sonda antes de laformación plataforma oculta en los días 6, 7, 8 y 10. (Figura 2). Después de estos ensayos de sonda, realizar 4 pruebas de la plataforma escondida entrenamiento cada día. Por lo tanto, lleve a cabo una investigación en primer lugar, seguido inmediatamente por el entrenamiento plataforma oculta para todos los ratones utilizando los mismos procedimientos descritos en la sección 3. Por el contrario, no realice entrenamiento plataforma oculta adicional después de la sonda de prueba en el día 10.
5. Análisis
- Formación Plataforma Visible
- Llevar a cabo medidas repetidas ANOVAs separado para (a) longitud de trayectoria, (b) la latencia para encontrar la plataforma, y (c) nadar velocidad, con transgén (u otra variable, como tratamiento) como el entre-sujetos variable y día o como bloques de entrenamiento la variable dentro del sujeto. Nota: Para los diseños más complejos, una consulta con un especialista en estadística puede ser útil. Ver 8,13 para obtener información sobre los tamaños de grupo suficiente para alimentar adecuadamente esta tarea con los modelos de uso común de Alzheimer7; s enfermedad.
- Incompetencia Rendimiento
- Identificar los ratones rendimiento incompetente, incluyendo ratones que demuestran incompetencia visual o motora, o animales que no adquieren los componentes de procedimiento de la prueba, y eliminar estos ratones a partir de análisis estadísticos posteriores de la plataforma oculta y el rendimiento de la sonda.
- Calcular la latencia media y nadar velocidad para el último día de entrenamiento plataforma visible para cada ratón. Retire los ratones con medios 2 desviaciones estándar por encima de la media del grupo, ya que esto puede ser indicativo de motor o impedimentos visuales.
- Identificar y eliminar los ratones en su defecto para orientar o seguir la primicia de escape, o los ratones que exhiben comportamiento aberrante, como la natación sacacorchos o flotante.
- Identificar los ratones rendimiento incompetente, incluyendo ratones que demuestran incompetencia visual o motora, o animales que no adquieren los componentes de procedimiento de la prueba, y eliminar estos ratones a partir de análisis estadísticos posteriores de la plataforma oculta y el rendimiento de la sonda.
- Formación laberinto acuático de Morris Plataforma Oculta
- Llevar a cabo medidas repetidas ANOVAs sobre (a) de paso de luz, (b) la latencia para encontrar la plataforma oculta, (c) la velocidad de natación, y (d) el tiempo por ciento o cientodistancia en el cuadrante con el transgén como la variable entre sujetos y ensayos como la variable intrasujeto.
- Ensayos Probe
- Velocidad de nado
- Llevar a cabo medidas repetidas ANOVAs sobre velocidad de nado entre los ensayos de la sonda con transgén como la variable entre sujetos y ensayos como la variable intrasujeto.
- Índice cruce Plataforma
- Utilizando la configuración de prueba de la sonda para cada ratón, el índice de cruce de plataforma (PCI) se calcula utilizando la siguiente fórmula: PCI = número de veces que el ratón cruza la ubicación de destino - cruces promedio de la ubicación equivalente en los otros 3 cuadrantes.
Nota: Esta se lleva a cabo para determinar si el ratón está utilizando una estrategia de búsqueda espacial, según lo indicado por más cruces sobre la localización de la plataforma entrenado, o una estrategia no-espacial de thigmotaxic natación, según lo indicado por aproximadamente iguales cruces sobre los cuatro lugares. - Conducta repiteMedidas ANOVAs en PCI con transgén como la variable entre sujetos y ensayos como la variable intrasujeto.
- Utilizando la configuración de prueba de la sonda para cada ratón, el índice de cruce de plataforma (PCI) se calcula utilizando la siguiente fórmula: PCI = número de veces que el ratón cruza la ubicación de destino - cruces promedio de la ubicación equivalente en los otros 3 cuadrantes.
- Porcentaje de tiempo o distancia por ciento en el cuadrante
- Calcular el porcentaje de tiempo o distancia que cada ratón pasa en los cuatro cuadrantes del laberinto. Llevar a cabo medidas repetidas ANOVAS en el porcentaje de tiempo o distancia, con el transgén como la variable entre sujetos y ensayos como la variable intrasujeto. Utilice el tiempo por ciento para determinar si se está utilizando una estrategia de búsqueda espacial; resultados de tiempo de aproximadamente 25% en el cuadrante objetivo indican los ratones están realizando a nivel de oportunidad y no usar una estrategia de búsqueda espacial.
- O / N olvidar
- Comparar la latencia de cruce área de la plataforma en el juicio de la sonda a la latencia para encontrar la plataforma en la prueba final de la jornada anterior. Nota: Si la latencia de la plataforma de cruce en la sonda de prueba es significativamente más larga que la latencia para encontrar la platform durante la última prueba de la plataforma escondida en el día anterior, a continuación, O / N olvido de la localización de la plataforma se está produciendo.
- Velocidad de nado
- Análisis post hoc
- Siga RMANOVAs significativas con comparaciones post hoc de los transgenes en cada ensayo.
6. Ejemplo de Re-optimización para un nuevo entorno de pruebas
- Pre-manipulación. Realizar pre-tratamiento en la sala de la vivienda. Coloque las jaulas sin tapas en un carro de transporte para toda la sesión.
Nota: Objetivos para la modificación del procedimiento de pre-tratamiento son introducir más gradual manipulaciones controlador y la exposición a los dispositivos de transporte (vaso y cuchara) y aumentar los ratones de tiempo están en la jaula sin tapas microisolator y fuera de su jaula en un campo abierto y las condiciones de luz más brillantes.- Días 1 y 2
- Permitir que los ratones se aclimaten a las manos que están en la jaula, siguieron tocando suave, Seguido de ser levantado para la inspección del tatuaje y el marcado de la cola. A partir del día 2 de pre-tratamiento, colocar material de nidificación suplementario en la jaula para proporcionar material adicional para la construcción del nido y refugio, mientras que las tapas se han quitado 9.
- Días 3 y 4
- Poner el vaso de transporte, cucharada, y la bandera de la plataforma visible en el cuadro de pre-tratamiento y permiten ratones para explorar durante 2 ensayos en 2 min por juicio.
- No use agua en este protocolo durante la pre-manejo. Más bien, asegurar la caja contiene suficiente ropa de cama limpia para cubrir el suelo y se aromatiza con una pequeña cantidad de basura sucia femenina y masculina, si ambos géneros se están probando. Cambiar la ropa de cama cada día.
- Día 5
- Coloque los ratones en la caja de pre-tratamiento que contienen arena poco sucia y la bandera plataforma visible para los 3 ensayos, durante 20 segundos cada uno. Utilice el vaso de precipitados y la pala para el transporte de los ratones hacia y desde la caja.
- Formación Plataforma Visible
- Ajuste la temperatura del agua a 27 ° C (se utiliza de manera rutinaria para el entorno de prueba de Minnesota).
- Regreso a los ratones a la jaula al adquirir la plataforma con claves.
- Permitir a los ratones hasta 60 segundos para adquirir la plataforma visible.
- Llevar a cabo sesiones de capacitación que consta de 3 pruebas por día durante 5 días.
- Formación Plataforma Oculta
- Modificar las señales visuales. Excepto por una gran cortina para oscurecer el controlador, o bien eliminar o hacer más estrechos otras cortinas que rodean la piscina con el fin de tener una habitación más abierta. Coloque objetos adicionales por la habitación (por ejemplo, estanterías expuesta, cartel de tela negro con un símbolo blanco, una pelota de playa blanco y negro, grandes embudos negro, cuadernos, y un peluche negro), lo que resulta en una cue visual equilibrado pero más variada establecer que utilizado anteriormente.
- Comience oculto formación plataforma de 72 horas tras la finalización de traini plataforma visibleng, con un intervalo de aproximadamente 30 min entre los ensayos.
- Llevar a cabo sesiones de capacitación que consta de 2 ensayos durante 8 días.
- Ensayos Probe
- Realizar ensayos de sonda de 72 horas después de ensayos de entrenamiento ocultos 8, 12 y 16.Include un intervalo de 3 días entre los ensayos 8-9, y 12-13 de la formación.
- Ajuste el tiempo de duración de la sonda durante 30 segundos.
- Días 1 y 2
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Representative Results
Hemos utilizado el laberinto acuático de Morris para estudiar los efectos de beta-amiloide (ratones Tg2576) y mutante tau P301L (RTG (TauP301L) 4,510 ratones) en la memoria de referencia espacial (por ejemplo, 1,5,7,8). Figura 3 es el resultado representante informó en nuestro estudio que examinó el efecto de comienzo adulto expresión tau P301L en el aprendizaje y la memoria 8, utilizando pruebas de Medio Ambiente A. Evaluar las capacidades motoras y visuales, los ratones fueron comparados a través de bloques de formación de la plataforma visible, donde cada bloque de entrenamiento consistió en 3 ensayos. Longitud de trayectoria en la formación de la plataforma visible no fue diferente entre los controles y ratones TauP301L (Figura 3A), lo que sugiere transgén positivo y negativo ratones exhiben natación comparables y ambos grupos se puede ver la señal visual (la bandera) que marca la plataforma. No hay ratones fueron identificados como rendimiento incompetente basado en los criterios de exclusión. A continuación, el rendimiento en el bloque de formación plataforma oculta se comparó, donde cadabloque consta de 1 día (4 ensayos) de la formación. Como los ratones aprendió la ubicación de la plataforma, la longitud de trayectoria y tiempo para encontrar la plataforma disminuyeron. Sin embargo, longitud de trayectoria fue significativamente mayor en los ratones TauP301L en comparación con los controles en cada bloque de formación (Figura 3B), lo que sugiere el aprendizaje espacial se vio afectada en los ratones TauP301L. Cuatro ensayos de sonda, en el que se eliminó la plataforma, se intercalan a lo largo de la formación plataforma oculta y se llevaron a cabo al principio del día, antes del inicio de la formación plataforma oculta. Por lo tanto, estos ensayos de sondas miden la memoria de referencia espacial. La comparación entre estos cuatro ensayos de sonda, controles mejorado significativamente con una formación adicional (Figura 3C), según lo indicado por un mayor tiempo en el cuadrante objetivo. En contraste, los ratones TauP301L no mejoraron con el entrenamiento adicional. Por lo tanto, las mayores diferencias entre los dos grupos de esta edad se produjeron en el juicio de la sonda 4. Estos datos indican que la expresión de tau P301Lse asocia tanto con el aprendizaje espacial y los déficits de memoria de referencia espacial. Mientras que la tarea del laberinto de agua puede ser relativamente estable a algunas diferencias de procedimiento, el F1 FVB / N x 129S6 cepa fondo puede ser particularmente sensibles a ciertos cambios ambientales. El primer protocolo descrito también se utilizó con éxito en Medio Ambiente B (ej., 1,7). Sin embargo, el rendimiento de la sonda de tipo salvaje fue significativamente menor cuando se utilizó el primer protocolo en un tercer lugar, Medio Ambiente C. El protocolo de re-optimizado mejorado significativamente el rendimiento de la sonda de tipo salvaje (Figura 4).
Figura 1:. Optimización del Protocolo para la cepa de tipo salvaje de fondo 7-8 meses de edad ratones fueron entrenados utilizando las mismas claves y probando medio ambiente. F1 FVB / N x 129S6 (N = 24) y B6 / SJL (N = 16) ratones recibió por primera vez el 18 y 24 de pla visibleensayos de entrenamiento TForm respectivamente, entregaron a los 6 y 8 ensayos por día respectivamente. Ambas cepas recibieron 4 ensayos ocultos formación plataforma por día. Para F1 FVB / N x 129S6 ratones, se realizaron ensayos de sonda 20 horas después de 8, 12, 16, y 24 ensayos de entrenamiento. Para B6 ratones / SJL, se realizaron ensayos de sonda 20 horas después de 12, 24 y 36 ensayos de entrenamiento.
Figura 2:. Línea de tiempo Los ratones recibieron capacitación plataforma visible durante 3 días, 6 ensayos por día, seguido de la formación plataforma oculta durante 6 días, 4 ensayos por día. Cuatro ensayos de sonda se realizaron 20 horas después de 8, 12, 16, y 24 ensayos de entrenamiento ocultos.
Figura 3: Resultados representante de los ratones Morris Water Maze TauP301L llevan el P humano.Gen tau 301L se examinaron a aproximadamente 6,5 meses de edad, después de tres meses de la expresión de tau P301L (n = 41 tauP301L yn = 46 controles con un número aproximadamente igual de hombres y mujeres en cada grupo). (A) de longitud de paso en la formación de la plataforma visible no fue diferente entre los controles y ratones TauP301L (p s> 0,05). (B) Durante el entrenamiento de plataforma oculta, los ratones TauP301L demostró longitudes de trayectoria significativamente más largos a través de todos los bloques de formación (transgen: F (1, 83) = 41,96, p <0,0001; transgen × Block: F (5, 415) = 0,6141, p = 0,69 ). (C) Los controles mejorados en los cuatro ensayos de sonda, mientras que los ratones TauP301L no (transgénica: F (1, 83) = 29,1, p <0,0001; transgénica Trial X: F (3, 270) = 4,91, p = 0,008). Cada bloque de entrenamiento consistió en 3 ensayos para la formación plataforma visible o 4 ensayos para hidden la formación de la plataforma. Tukey post-hoc de análisis: * p <0,05; ** p <0,01; *** p <0,001. Algunas partes de la figura 3 una reimpresión de Hunsberger et al., Tamaño del efecto de los déficits de memoria en ratones con expresión de tau P301L del adulto, Behav Brain Res, vol. 272, pp. 181-95. Derechos de Autor 2014, con permiso de Elsevier.
Figura 4: Sonda puntuaciones son significativamente afectados por la Prueba de Medio Ambiente y el Protocolo de Formación Tres grupos de FVB F1 negativa tau / N x 129S6 ratones entrenados usando varias combinaciones de protocolo de entrenamiento y entorno de pruebas generadas significativamente diferentes puntuaciones de la sonda después de 8, 12 y 16 de entrenamiento. ensayos (Grupo: F (2, 42) = 14.89, p <0,0001; Grupo x Trial: F (4, 84) = 1.10, p = 0.36). Ratones entrenados utilizando Protocolo 1 y el same conjunto de señales aplicadas mostradas puntajes sonda significativamente más bajos en Entorno C en comparación con el Medio Ambiente B (Medio Ambiente: F (1, 25) = 28.58, p <0,0001; Medio Ambiente x Trial: F (2, 50) = 1.93, p = 0.16) . Los ratones entrenados en Entorno C muestra las puntuaciones significativamente más altas de la sonda cuando se modifican las señales y el Protocolo de re-optimizado 2 fueron utilizados en comparación con los ratones entrenados utilizando las señales originales y Protocolo 1 (Protocolo: F (1, 30) = 15,32, p <0,001; Protocolo x Trial: F (2, 60) = 0,91, p = 0,41) ** p <0,001; *** p <0,0001..
| Día 1 | Laberinto acuático de Morris - Cohorte: | Fecha: _________ | ||||||
| Plataforma en el sureste de cuadrante | Tester: &# 160; Hora de inicio: Hora de finalización: Temperatura del agua: | 1m contrarreloj max / 15s en la plataforma / * colocados en la plataforma | ||||||
| Grupo 1 | ||||||||
| Prueba 1 | ||||||||
| Animal ID | Marcado | Jaula # | Fin tiempo | Liberación punto | Plataforma ubicación | Encuentra plataforma? | Tiempo | Notas (es decir, comportamiento extraño) |
| W | SE | |||||||
| W | SE | |||||||
| W | SE | |||||||
| W | SE | |||||||
| W | SE | |||||||
| W | SE | |||||||
| W | SE | |||||||
| W | SE | |||||||
| W | SE | |||||||
| W | SE | |||||||
| 20 minutos ITI | ||||||||
| Prueba 2 | ||||||||
| E | SE | |||||||
| E | SE | |||||||
| E | SE | |||||||
| E | SE | |||||||
| E | SE | |||||||
| E | SE | |||||||
| E | SE | |||||||
| E | SE | |||||||
| E | SE | |||||||
| E | SE | |||||||
| 20 minutos ITI | ||||||||
| Prueba 3 | ||||||||
| N | SE | |||||||
| N | SE | |||||||
| N | SE | |||||||
| N | SE | |||||||
| N | SE | |||||||
| N | SE | |||||||
| N | SE | |||||||
| N | SE | |||||||
| N | SE | |||||||
| N | SE | |||||||
| 20 minutos ITI | ||||||||
| Trial 4 | ||||||||
| S | SE | |||||||
| S | SE | |||||||
| S | SE | |||||||
| S | SE | |||||||
| S | SE | |||||||
| S | SE | |||||||
| S | SE | |||||||
| </ Td> | S | SE | ||||||
| S | SE | |||||||
| S | SE | |||||||
Tabla 1:. Ocultos Plataforma Run Hoja Una hoja run ejemplo en el que la plataforma se encuentra en el sureste se proporciona (SE) cuadrante. El experimentador debe escribir el número de identificación del ratón, las marcas de identificación en la cola o las orejas, y la agrupación jaula. El punto de liberación se indica en la hoja y debe ser pseudo-azar determinó como se describe en el paso 3.3.2. Graba si el ratón encuentra la plataforma y el tiempo para encontrar la plataforma. Comportamiento extraño, incluyendo thigmotaxis flotante o, si se indique.
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Discussion
La tarea MWM es ampliamente utilizado para evaluar el aprendizaje espacial y la memoria. Sin embargo, la robustez de esta tarea puede estar influenciada por muchos factores y requiere la optimización tanto para la cepa de fondo y entorno de pruebas. Como se muestra en la Figura 4, el mismo protocolo de entrenamiento y aplicada señales visuales utilizadas en dos habitaciones de ensayo diferentes (tamaño equivalente y de diseño) produjo significativamente diferente rendimiento de la sonda. Dado que muchas características de la sala de pruebas podrían contribuir a las señales espacial 4, se especuló que las dos habitaciones fueron significativamente diferentes de alguna manera desconocida que hizo la prueba más difícil. En la modificación de las señales extra-laberinto, optamos por aumentar efectivamente el número de señales visuales. Además, reduciendo al mínimo el uso de cortinas, cualquier señales auditivas o olfativas que puedan existir pueden haber sido alterados. El nivel de luz de las dos salas de ensayo fueron equivalentes, sin embargo el nivel de luz jaula en el nuevo vivero fue menor, lo que resultaen un diferencial más alto nivel de luz al pasar de jaula de sala de pruebas. Se ha sugerido que los ratones BALB / c son capaces de realizar la tarea MWM proporcionar los niveles de luz son suficientemente baja 14. Sin embargo, los intentos para mejorar el rendimiento mediante la reducción de los niveles de iluminación de las habitaciones de pruebas no tuvieron éxito (observaciones no publicadas). Hasta la fecha, no se sabe qué factor (s) contribuyó a la disminución en el rendimiento en el nuevo entorno de pruebas, pero el pre-tratamiento modificado, señales, y protocolo de entrenamiento se han traducido en un aumento significativo en las puntuaciones de la sonda.
Si es posible, se aconseja poner a prueba un grupo de tipo salvaje o ratones de control de la misma cepa de fondo y la edad como el experimento planeado para evaluar la tasa de aprendizaje y la colocación de la sonda óptimo para el entorno de prueba en particular. Idealmente, la primera sonda se coloca cuando aproximadamente la mitad de los ratones se muestra un sesgo positivo probable de búsqueda (% -tiempo en target≥35) y la última sonda cuandomayoría de los ratones de control muestran un sesgo de búsqueda positiva y han alcanzado meseta rendimiento. Esta estrategia se ha utilizado para determinar la colocación de la sonda para los artistas superiores (F1 FVB / N x 129S6) y un fondo que aprendió más lentamente (mixta C57BL / 6 x FVB / N x 129S6), donde aproximadamente la mitad de los ratones tenían ocupaciones cuadrante diana de ≥35 después de 8 ensayos o 18 ensayos, respectivamente, con un grupo de medios de aproximadamente 35% -tiempo para la primera sonda. Sondas posteriores deberían ser más alta que la primera si se establece de esta manera, a ser posible con al menos una diferencia de 15 puntos respecto al valor basal de 25% -tiempo. Si la comparación de las puntuaciones de sonda que son moderadamente baja (~ 35%) -Tiempo, asegurar que esto representa un sesgo significativo para el objetivo y por lo tanto una diferencia válida, comparando el objetivo de no diana cuadrantes 4,5. Además, la media del grupo mínimo no debe ser sustancialmente menor que 25% -El tiempo en el cuadrante objetivo, que se considera la línea de base o el rendimiento oportunidad. Comparando target de la ocupación no objetivo puede ayudar a identificar si hay sesgos de las habitaciones, por ejemplo, los ratones que pasan más tiempo en el cuadrante opuesto que cualquiera de los cuadrantes adyacentes serían un patrón de búsqueda inesperada.
Algunas recomendaciones mientras que la realización de pruebas incluyen la limitación del número de personas de pruebas cada cohorte de animales para 1 persona para reducir la variabilidad en el manejo y prueba de estilos entre los experimentadores, y la realización de pruebas en torno a la misma hora cada día. Además, se ha sugerido que los ratones que recibieron 2 ensayos por día aprender casi tan rápidamente como los que recibieron 4 ensayos por día 15. Es esencial que los animales de diferentes cepas / backgrounds / grupos de tratamiento pueden representar en cada grupo de prueba si más de una cohorte necesita ser ejecutado durante un día. Por último, se debe tener cuidado para asegurar que los ratones no se conviertan en hipotermia, como la hipotermia puede afectar el rendimiento y es el sexo y los antecedentes dependientes 16 cepa. Aunque ªe intervalo inter-ensayo utilizado aquí (20 min) debe ser suficiente para prevenir la hipotermia, otros métodos incluyen el ajuste de la temperatura del agua, la colocación de los ratones en una jaula de sujeción se calienta entre los ensayos, o alguna combinación de los dos, según sea necesario. Sin embargo, debe tenerse en cuenta que la temperatura del agua puede influir en el rendimiento en ambas direcciones. Por ejemplo, las ratas proestro se desempeñan mejor en condiciones cálidas (33 ° C), mientras que las ratas en estro se desempeñan mejor en condiciones de frío (19 ° C) 17. Por lo tanto, se debe tener cuidado para controlar la temperatura del agua a través de experimentos. En caso de hipotermia ser una preocupación para un animal en particular, el experimentador podía entregar seque ese animal con una toalla de papel en caso de que no logran novio después de nadar o dar alguna indicación de la conducta hipotermia. La evaluación periódica de la temperatura corporal puede garantizar las condiciones son suficientes para evitar la hipotermia.
Otra consideración de procedimiento se refiere a traini plataforma visibleng. Los ratones más jóvenes o otra cepa pueden necesitar menos ensayos de entrenamiento plataforma visibles. Una pauta sugerida es de entrenar hasta que el grupo de control ha alcanzado baja de rendimiento durante los últimos 3-6 ensayos de entrenamiento consecutivos, siempre que el grupo experimental muestra un rendimiento equivalente. Si el diseño experimental incluye los ratones jóvenes y viejos, establecer la duración visibles formación plataforma para el grupo, lo que requiere un mayor número de ensayos de entrenamiento para llegar a piso de rendimiento 5. Además, la plataforma visible puede ser eficaz hacia aclimatación ratones para el procedimiento de manipulación y de prueba y puede obviar la necesidad de pre-manejo de si los ratones no son muy jóvenes cuando probó por primera vez o la manipulación humana no es excesivamente aversivo a la cepa se está probando.
Beneficios generales del laberinto acuático de Morris incluyen su relativa insensibilidad a los factores de motivación respecto a las tareas basadas en los alimentos, su validez como medida de la disputa del hipocampo-dependientenavegación ial y la memoria de referencia, y su eficacia 15 especies cruzadas. Una limitación potencial de la técnica es que, debido a este protocolo se adapta para una cepa de fondo específico, puede no ser eficaz con otros animales u otras cepas de fondo de ratones. Además, como parte del protocolo, se hacen intentos para crear y estratégicamente colocar señales identificables en toda la habitación mazing. Sin embargo, no está claro qué altura exacta es óptimo cuando la colocación de señales alrededor de la habitación. Por lo tanto, las señales que son grandes y se distinguen unos de otros son necesarios para una formación eficaz.
En resumen, la optimización de la tarea MWM para su uso con una cepa de fondo particular y probar medio ambiente puede aumentar significativamente el rango dinámico de la tarea, lo que resulta en un considerable ahorro de tiempo y de costes.
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Disclosures
Los autores no tienen nada que revelar.
Acknowledgments
Este trabajo fue apoyado por el Instituto Nacional de Ciencias Médicas Generales (Reed / Engler-Chiurazzi - U54GM104942), el Instituto Nacional de Trastornos Neurológicos y Accidentes Cerebrovasculares (Ashe - R01NS33249, R01NS63249 y R01NS79374), Cobre (Engler-Chiurazzi - P20GM109098), el Asociación de Alzheimer (Reed - NIRG-12 a 242.187), una WVU Facultad de Investigación del Senado Grant (Reed), una subvención WVU PSCOR (Reed), y los fondos internos de la Escuela WVU de la Oficina de Medicina Dean (Engler-Chiurazzi). El contenido es responsabilidad exclusiva de los autores y no representa necesariamente la opinión oficial de los NIH o la Asociación de Alzheimer.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Viewer Tracking software | Biobserve | This particular software is not a requirement - there are other tracking systems available | |
| Pre-handling pool | Dimensions approximately 1 foot wide x 2 feet long x 1.5 feet deep | ||
| Plastic beaker | 1 L | ||
| Scoop | |||
| Small net | |||
| Stopwatch | |||
| Non-toxic white tempera paint | Any color paint can be used; however, most tracking software programs require that the paint contrast with the color of the animal. | ||
| Visible platform | Color should contrast that of maze | ||
| Curtain rod | |||
| Curtains | |||
| Circular tub | Usually white in color; approximately 4 feet in diameter | ||
| Hidden platform | Painted same color as the water |
References
- Ramsden, M., et al. Age-dependent neurofibrillary tangle formation, neuron loss, and memory impairment in a mouse model of human tauopathy (P301L). The Journal of Neuroscience. 25, 10637-10647 (2005).
- Attar, A., et al. A shortened barnes maze protocol reveals memory deficits at 4-months of age in the triple-transgenic mouse model of Alzheimer's disease. PLoS One. 8, e80355 (2013).
- Johnson, J. M., Bailey, J. M., Johnson, J. E., Newland, M. C. Performance of BALB/c and C57BL/6 mice under an incremental repeated acquisition of behavioral chains procedure. Behavioural Processes. 84, 705-714 (2010).
- Crawley, J. N. What's wrong with my Mouse Behavioral phenotyping of transgenic and knockout mice. , 1st edition, Wiley-Liss. 94-95 (2000).
- Westerman, M. A., et al. The relationship between abeta and memory in the Tg2576 mouse model of Alzheimer's disease. The Journal of Neuroscience. 22, 1858-1867 (2002).
- D'Hooge, R., De Deyn, P. P. Applications of the morris water maze in the study of learning and memory. Brain Research Reviews. 36, 60-90 (2001).
- Santa Cruz, K., et al. Tau suppression in a neurodegenerative mouse model improves memory function. Science. 309, 476-481 (2005).
- Hunsberger, H. C., et al. Effect size of memory deficits in mice with adult-onset P301L tau expression. Behavioural Brain Research. 272, 181-195 (2014).
- Yue, M., Hanna, A., Wilson, J., Roder, H., Janus, C. Sex difference in pathology and memory decline in rTg4510 mouse model of tauopathy. Neurobiology of Aging. 32, 590-603 (2011).
- Sandi, C. The role and mechanisms of action of glucocorticoid involvement in memory storage. Neural plasticity. 6, 41-52 (1998).
- Hölscher, C. C. impairs performance in spatial water maze learning tasks. Behavioural Brain Research. 100, 225-235 (1999).
- Morris, R. Developments of a water-maze procedure for studying spatial learning in the rat. Journal of Neuroscience Methods. 11, 47-60 (1984).
- Reed, M. N., Liu, P., Kotilinek, L. A., Ashe, K. H. Effect size of reference memory deficits in the morris water maze in Tg2576 mice. Behavioural Brain Research. 212, 115-120 (2010).
- Huang, Y., Zhou, W., Zhang, Y. Bright lighting conditions during testing increase thigmotaxis and impair water maze performance in BALB/c mice. Behavioral Brain Research. 226, 26-31 (2012).
- Baker, R. Water maze. , Available from: http://www.watermaze.org (2013).
- Ivonen, H., Nurminen, L., Harri, M., Tanila, H., Puolivali, J. Hypothermia in mice tested in Morris water maze. Behavioural Brain Research. 141, 207-213 (2003).
- Rubinow, M. J., Arseneau, L. M., Beverly, J. L., Juraska, J. M. Effect of estrous cycle on water maze acquisition depends on the temperature of the water. Behavioral Neuroscience. 118 (4), 863-868 (2004).
