Summary
在这个视频中，我们将演示如何从中央与实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠神经系统中分离单个核细胞。
Abstract
无论是研究中枢神经系统（CNS），如实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE，1），或免疫反应的中枢神经系统，如小儿麻痹症，莱姆neuroborreliosis，或神经梅毒感染的一种自身免疫性疾病，它往往是需要隔离的中枢神经系统浸润的免疫细胞。
在这个视频协议，我们将演示如何分离单个核细胞（跨国公司）与EAE大鼠中枢神经系统的。此过程的第一步，需要用生理盐水的解决方案，以确保无血灌溉中枢神经系统血液中的船只仍然的啮齿类动物的心脏灌注。任何血液污染，人为地增加了明显的中枢神经系统浸润跨国公司的数量，可能会改变免疫渗透的明显组成。然后，我们演示了如何删除随后dilaceration大鼠的大脑和脊髓准备一个单细胞悬液。这种悬挂是两层Percoll梯度分离，分离出的跨国公司。洗涤后，这些细胞，然后准备接受任何需要的程序。
使用此过程中分离出的单个核细胞是可行的，可用于电，流式细胞仪（FACS），或生物化学。如果该技术是在无菌条件下进行（在组织培养罩中使用无菌文书）的细胞还可以生长在组织培养液中。一个特定的细胞群，可进一步纯化要么磁选程序或一个流式细胞仪。
Protocol
- 深麻醉大鼠。喷雾用70％乙醇，用PBS做10分钟的心脏灌注细胞从血管中删除（切开右心房和左心室灌注通过）。
- 取出含有50毫升的冰冷PBS管的脑和脊髓和地点。在70毫米的细胞过滤器放置在一个10厘米的培养皿含有10毫升冰冷的PBS的菜切的大脑和脊髓。记者通过细胞过滤器使用1毫升无菌注射器推杆背面的每一块器官。收集到50毫升管上冰的单细胞悬液。用PBS洗净细胞过滤器和添加到管，直到解决的办法是明确的。
- 离心390克为8-10分钟
- 重悬细胞20毫升PBS + 30％Percoll和覆盖到10毫升的PBS + 70％Percoll。
- 在390克离心机在室温为20分钟。
- 卸下管上的脂肪。从接口收集细胞，用PBS洗两次。计数。
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Discussion
此过程中，为所有涉及活体动物的程序，必须由您机构的动物使用及护理委员会批准。我们建议，兽医师或兽医技术员在执行第一次心肌灌注，以确保有足够的麻醉水平是程序之前和期间的动物，和动物不进行不必要的痛苦或困扰。
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Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| PBS, 1x, sterile | Reagent | GIBCO, by Life Technologies | 14190-250 | |
| Cell strainer, 70 um | Tool | Fisher Scientific | 08-771-2 | |
| Percoll | Reagent | Sigma-Aldrich | P1644 |
References
- Beeton, C., Chandy, K. G. Induction and clinical scoring of chronic-relapsing experimental autoimmune encephalomyelitis. Journal of Visualized Experiments. 5, Forthcoming.
