Денвер Папиллы Протокол объективного анализа грибовидных сосочков

Summary

Здесь мы приводим протокол для измерения плотности грибовидные сосочка из цифровых фотографий. Этот метод основывается приоритетов и объективные показатели, характерные в исходное описательной работы на грибовидных сосочков Миллера и Риди (1990).

Abstract

Цель Денвере сосочков протокола является использование дихотомического ключа, чтобы определить приоритеты и характеристики грибовидных сосочков (FP) для обеспечения последовательного счет между бомбардиров. Этот протокол основывается офф необходимости, возникшей из последних двух десятилетий вкус исследований с использованием FP в качестве прокси для плотности вкус пор. Плотность FP исторически были проанализированы с помощью Миллера & Риди в 1990 характеризации их морфологии: круглый, окрашенных светлее, большой, и повышение. В этой работе, авторы предупреждали, что строгие определения FP морфологии, необходимой для быть изложены. Несмотря на это призыв к действию, следить за литературой было недостаточно, и в большинстве исследований, продолжающих привести Миллера & Риди в оригинальное произведение. Следовательно, отчеты плотности FP были весьма изменчивы и, в сочетании с малыми размерами образца, может внести свой вклад в несоответствующих выводы о роли FP в вкусовой чувствительности. Генетика вкуса Лаборатории исследовали эту очевидную Inconсогласованность при подсчете и обнаружили, что бомбардиров индивидуально приоритетов важность этих характеристик по-разному и не было никаких указаний на когда сосочек были некоторые, но не все, из сообщенных качеств FP. Результатом этого субъективности сильно варьирует FP отсчетов на одном языке изображения. Денвер Папиллы протокол был разработан для решения этой следствие путем использования дихотомического ключа, который дополнительно определяет и приоритет отдается важность характеристик, выдвинутых Миллером и Риди. Предложенный метод может помочь создать стандартный способ количественного FP для исследователей в области вкуса и питательных исследований.

Introduction

Сосочки видимые неровности на поверхности языка в. Есть четыре типа сосочков: грибовидные (ФП), лиственный, circumvallate и нитевидные. В то время как нитевидные сосочки расположены на поверхности языка, circumvallate локализованы только на задней части языка, а лиственный находятся на сторонах. В противоположность этому, FP расположены в направлении передней части языка. FP, лиственный и circumvallate сосочки считаются вкусовые, потому что они имеют потенциал, чтобы содержать вкусовые рецепторы, а нитевидные нет. Вкусовые рецепторы представляют собой кластеры клеток, ответственных за обнаружения химических Tastants и трансдукции стимулы в вкусового сигнала в мозге. Слюна и продовольствие молекулы вступают в вкусовых рецепторов через отверстия называемых вкусовые поры, где вкус молекулы, то есть потенциал активации вкусовые клетки.

Интересно, что есть большие индивидуальные различия в плотности вкус почки, впервые наблюдались в гистологического исследования языковот 18 трупов (Miller, 1988) ^1. Вкусовые рецепторы сами не видны на поверхности языка, однако, вкус поры видны при использовании надлежащих методов увеличения, освещения и окраски, которые привели Миллер & Риди (1990) разработать метод определения вкусовые поры и грибовидные сосочки, используя видеомикроскопии в жизни люди ^2. Количество лабораторий изменили свой первоначальный метод видеомикроскопии, используя фотосъемки и немного или нет увеличение. Однако, поскольку грибовидные сосочки гораздо легче, чем визуализировать поры, использующие эти последние методы, лаборатории обратился к подсчета грибовидные сосочки в месте вкусовых пор. При этом предполагается, что плотность грибовидные сосочка является разумным прокси мерой плотности вкус пор, хотя многие грибовидные сосочки не содержат вкусовые поры или вкусовые рецепторы ^3; не только ФП более заметным и доступным, чем circumvallate и лиственный сосочков, но их захвата изображения меньше Tiмне много чем анализ вкус пор через альтернативный метод видеомикроскопии ^2,4. В 1990 году Миллер и Риди использовал эту технику, чтобы найти, что вкус плотности пор коррелируют с ПС плотности ^3, который дополнительно подтверждены в Бартошук др. ⁵ В дополнение к этому анатомической отношений, Миллер и Риди также обнаружили, что 8 лиц в верхней половина вкуса распределения плотности пор также оценил сахарозу, NaCl, и пропилтиоурацил (проп), как значительно более интенсивным, чем это делали другие 8 лиц ^3. Последующая работа Бартошук др. (1994) наблюдали корреляцию между интенсивностью сверхпороговой ПРОПОРЦ.УСИЛЕНИЕ вкус и плотности грибовидные сосочка, а также плотность вкус пор, в 42 субъектах ^5. Это удобный способ привело к влиятельных исследований, сообщающих, что субъекты, чьи языки имеют много сосочки вызывают сильную реакцию на многих, в том числе Tastants горькой Tastants фенилтиокарбамид (РТС) и PROP ^6,7.

PTC и PROP хорошо изученные Tastants часто используемые из-за четкой связи между фенотипом вкусовой чувствительности человека и их генотипа. Популяционные исследования показали, что люди, которые имеют гомозиготной рецессивной diplotype гена, TAS2R38, имеют значительно более низкую чувствительность, чтобы поддержать, чем носителей доминирующего или гетерозиготной варианта гена ^8-10. Это наследственная явление было впервые сообщено в 1932 году, когда Артур Л. Фокс объявила о своем открытии "вкус слепотой", чтобы PTC ^11. Среди людей, способных по вкусу эти горькие соединения, интенсивность вкуса сообщили могут варьироваться от слегка неприятно мучительно горькой ^6. Для учета дисперсии, которые не могут быть объяснены TAS2R38, теория была выдвинута, что это может быть связано с плотностью FP на языке ^4.

Как вкус исследование прогрессировала, Field была разделена на две школы мысли вокруг этой теории о роли FP и горького вкусовой чувствительности. Хотя многие исследования подтвердили первоначальную претензию, что плотность ФП является фактором PROP значениям чувствительности ^4,6,12,13, было мало, но важно, что непредвиденные нашла доказательств, чтобы опровергнуть это, сообщая неспособность воспроизвести роль ^{10, 14,15,16.} Delwiche др. (2001) предупредил, что тенденция сильно варьирует; Плотность FP не равномерно учета различий в чувствительности горечи через субъектов, и только доказуемо для субъектов с по крайней мере умеренной чувствительностью к Опора ^7. В дополнение к использованию менее строго определены методом Miller & Reedy о том, как количественно FP, важно отметить, что с исключением Beaver Dam Study Потомство ^15, проведенного Фишера и др., Большинство из вышеупомянутых исследований была небольшой образец размеры, которые также могут внести вклад в противоречивые результаты поРоль FP по вкусу.

Вкратце, в Миллера & Риди семенных методологии бумаги (1990), авторы окрашивали языки синие количественно FP, потому что ФП остается розовый, а нитевидных сосочков поглощают краску и синим. Они классифицированы как "FP закругленными розовых структур около 0,5 мм в диаметре" ^2. Хотя авторы сообщили, что, прежде чем использовать этот метод для дальнейшей аналитической работы, FP характеристики должны быть более строго определены и пришли к выводу, что изменение уже отмечалось в литературе "может быть связано с различных предметных групп населения, различных методов и различными исследователями" ^2, их Исследование привело к общепринятым характеристикам, что ФП являются круглые ^17,18, большой ^2, розового или окрашенные светлее ^2, и повышенный ^4. Взятые по номинальной стоимости, эти характеристики появляются очень прямо вперед. В генетике вкуса Lab (ПРТ Lab или Lab), использование встретилсяХод был осложнен отдельными попытками бомбардиров "в квалификации и приоритетов важность вышеуказанных характеристик, когда некоторые, но не все, характеристики присутствовали. Эти осложнения включали небольшое сосочки, которые появились розовые в разгар гораздо большей сосочков; Весь язык поглощает синий краситель, таким образом, устраняя классификацию, основанную на изменение цвета; продолговатые сосочки вместо круглый; и народов и языков, не имеющие различия в высоте, все из которых способствовали бомбардиров отчетности широко разнообразные FP пунктам тот же образ.

Эти изменения в анализе привело нас к обзор литературы для того, чтобы точно определить субъективность, выявления каких-либо исключений для общепринятых характеристик ПС и, в конечном счете разработать протокол, чтобы точно и объективно определить и набрать FP.

Во-первых, форма ФП описан в литературе как округлой, грибной, как структура, ^17,18. Тем не менее, отметить, кромеИоны также упоминается. Миллер подчеркнул, что термин "грибовидные" является неправильным и что многие ФП не грибовидные, но может варьироваться в широких пределах в размере и морфологии ^18. Мелис др. (2013) также описал несколько сосочков, которые считались "искаженный", где диаметр FP в одном направлении, по крайней мере на два стандартных отклонения больше, чем в другом направлении ^19. Кроме того, Чен и Робинсон обнаружил, что при указании FP окрашиванием, они варьировались от плоской вершиной, чтобы удлиненные по внешнему виду ^20. Отмечая выше исключения, характеристика из FP быть круглые и появляется грибовидные слишком узким определением.

Во-вторых, цвет FP описывается как "розовых кругов на фоне синего" ⁷ после окрашивания язык с синим красителем. Хотя окрашивания легче было самым последовательным критерием FP всей литературе еще не было однородным классификатор. Чэн & ; Робинсон отметил, что ФП не всегда легко окрашенных, делая выявление сложной и неопределенной ^20. Похоже, то, что языки поглощают краску по-разному и в то время как контраст проявляется на многих языках, некоторые становятся полностью синий без различия, а другие сразу же терять след синего красителя ^21.

Третья характеристика, размер FP, было достаточно последовательно среди бумаг, в пределах от 0,5 мм до 0,97 мм ^6,18. В литературе Миллер отметил, что есть два диапазоны размера сосочков на дорсальной передней части языка. Сосочки с большими диаметрами были, прежде всего, грибовидные сосочки и конические, а сосочки с меньшим диаметром в основном нитевидный ^18. Тем не менее, за исключением Бивер Дэм Offspring Study ^21, размер не появляются, чтобы определить, если структура FP в литературе, но было предусмотрено сосочков, уже классифицированных как "грибовидные".

_content "> Наконец, высота указана в качестве четвертого FP характерным ^4, хотя Миллер отметил, что различие между нитевидные сосочки и грибовидных трудно при использовании этого критерия рядом с краем языка. Он дал два примера FP, что значительно изменялись по высоте, из которых 0,8 мм в высоту, а другой был меньше, чем 0,1 мм в высоту, но еще два вкусовые поры, которые были отчетливо наблюдается ^18. Это наблюдение было также следуют вверх и подтверждается Shahbake др. ⁴

Эти определения и их исключения сообщили показывают, что поле вкус давно признала несостоятельность характеризуя FP и недостатки обычно используемой протоколом от Миллера и Риди. Действительно, Миллер и Риди призвал поле для дальнейшего определения особенностей FP ^2. Мы предположили, что бомбардиров давали разный вес с характеристиками и приоритетов их важность по-разному, когда Папillae не отвечают всем критериям, например, когда сосочек большой и грибовидный, но окрашенных синим. Это было аргументировано, что следователи ранее опубликованных исследований, вероятно, сделал то же самое, которое, в сочетании с малыми размерами образца, может составлять многообразные результаты исходя из использования этого метода.

ПРТ Лаборатория обратился этот пробел в методологии FP по разработке руководящего, который определяет каждый характеристику с помощью объективных измерений и приоритезации характеристики указать, какие имеет приоритет в анализе. Этот метод Папиллы протокол Денвер (ДПП), дихотомическое ключ с ясных и отчетливых характеристик FP, чтобы обеспечить точные и воспроизводимые рассчитывает из цифровых фотографий языка. DPP является предлагаемый способ стандартизировать, использованный ранее Миллер и Риди метод, таким образом, удаление индивидуальной интерпретации и обеспечения более достоверные результаты при анализе плотности FP. Поступая таким образом, ГП может быть использован для более уверенно гetermine роль FP вкуса.

Языка фотографии, сделанные из субъектов были проанализированы учеными граждан (бомбардиры) из лаборатории, которые являются истинными субъектами этого исследования. Ядро Лаборатории ученых граждан состоит из членов общины в диапазоне возраста (лет) от 16 до середины 80-х. Итоговая оценка отчета по заказу музея в 2012 году описывает ученых граждан, как имеющих большой интерес к науке и две трети заработав степень бакалавра в научной дисциплины ^22. Ученые кандидат гражданин в настоящее время работу с помощью уст в уста, должны успешно завершить процесс интервью с ветеранами добровольцев в музее, и пройти испытательный срок в постоянной экспозиции здоровья музея, экспедиции здравоохранения, прежде чем они имеют возможность подать заявку на положение в Лаборатория. После того, как принято в Лаборатории ученые гражданин пройти 12-недельную стажировку в, чтобы стать сертифицирована поступать человеческий субъектс. После этой сертификации, они могут взять учебные модули по различным методам лаборатории (например, сосочки подсчета, выделения ДНК) и следующих дополнительных сертификатов и регулярные меры по контролю качества, эти ученые гражданин имеет возможность активно участвовать в анализе данных. Ученые гражданин добровольно свое время и не компенсируются за их вклад в музее.

Protocol

Изображения, набранные в этом исследовании, были собраны в рамках более широкого исследования, проведенного вкус в генетике вкуса Lab в Денвере Музей природы и науки (музей) ^10. Субъекты крупного исследования, были посетители музея (п = 1195) в возрасте от 18-93. В то время как субъекты пришли из шести из семи континентов, участники были в основном европейского происхождения. Данные каждого субъекта были собраны в одном 30 мин лаборатории сессии. Западная Экспертный совет утвердил протокол, письменное информированное согласие было дано, и предметы добровольно свое время и не были компенсированы за участие в исследовании.

1. Сбор данных

1. Захват изображений
   1. Показать подвергает фотографию, как ставить себя (рисунок 1) и что захваченное изображение будет выглядеть.
      Рисунок 1: Захват изображения Поза.
   2. Прямые предметы, чтобы высохнуть свой язык с бумажным полотенцем и оставить язык выступающие из их уст.
   3. Применение приблизительно 3 мл голубой пищевой краситель при концентрации 1:36 до вершины шпунта, используя стерильный аппликатор, вискоза с 1-дюймовым наконечника в. Есть предметы вернуться языком рот и проглотить, чтобы удалить лишнюю краску.
   4. Есть предметы представляют себя, как показано на рисунке 1, с подбородком на руки и локти подпирали на столе для стабильности. Прямые предметы, чтобы продлить свой язык удобное расстояние и закрепите его нежно между зубами.
   5. Придерживайтесь 2,5 см кусок фильтровальной бумаги с диаметром 10 мм круговой вырез перфорированной в этом наконечнике передней части левой стороны, рядом с языком средней линии (рисунок 1).
   6. Взять хотя бы три крупным планом изображения языка, Калифорнияpturing весь 10 мм круговой вырез для обеспечения визуализации всех FP внутри этой области. Используйте параметр макроса цифровой точки и снимать камерой высокого качества, установленной на штатив для устойчивости.
      1. Увеличить до степени, что вся вырез сфотографировали в то же время в рекомендуемом диапазоне зумирования камеры. Убедитесь, что плоскость объектива камеры параллельна плоскости языка и вырез появляется циркуляр на фото, а не продолговатые. Просмотрите фотографии, чтобы убедиться, что они являются высокое качество и полезной для подсчета.
2. Изображение Выбор и подготовка
   1. Загрузить фотографии на компьютере.
   2. Из снимков, сделанных языка и тот же предмет, выберите только один для дальнейшего анализа на основе четкого определения между структурами на языке на самом высоком зумом и наименее искаженной углом так, язык является широким и плоским к камере.
   3. Откройте выбранную необработанного снимка в открытом источнике, такftware, ImageJ. Нажмите на кнопку "Плагины" и в выпадающем меню прокрутки, чтобы "Анализ" и нажмите "Счетчик клеток." Когда откроется Счетчик клеток, нажмите "Инициализация", чтобы связать изображение с клеточной счетчика.
      Примечание: Здесь, использовать ImageJ 1,45 сек с 32-разрядной версии Java 1.6.0_10.
      1. Используйте стандартный увеличение на 50% по согласованности между бомбардиров, а также для использования в последующих шагов, чтобы забить FP. Перемещение изображения в левой части экрана рядом с клеточной счетчика. Это изображение будет называться копировать (рисунок 2, левая сторона экрана).
3. Откройте вторую копию исходного изображения (копия B) для измерения диаметров сосочков время количественно. Увеличение и уменьшение масштаба по мере необходимости предпочтение индивидуального бомбардиром на протяжении всего процесса скоринга. Перемещение эту копию в правой стороне экрана, так что две копии не случайно путать. (Смотрите рисунок 2, правую сторонуэкран)
4. Нажмите на инструмент линии. Использование копирования B, зум, как, сколько необходимо, чтобы точно нарисовать диаметр по всей внутренней окружности фильтровальной бумаги 10 мм под любым углом и нажмите "Анализ" и "Set Scale". Заполните "известное расстояние", чтобы быть "10 . "Проверьте масштаб является правильным путем измерения альтернативный угол и обеспечить диапазон диаметров между 9.8-10.2 мм. Если это не так, повторите этот шаг.

Рисунок 2: Копирование и Копировать Б. Копирование (слева) связан с окном счетчика клеток и остается на 50% увеличение на согласованность с бомбардиру чтобы забившего в то время экземпляр B (справа) может быть увеличено от предпочтений индивидуума.

2. Подсчет FP Использование Денвер сосочков протокол дихотомических ключ

1. Для каждого кандидата papilла, используйте следующую дихотомичный ключ (шаг 2,2-2,5) с подробным критерии для определения, если это ФП. Обратитесь к рисунку 3 для визуального сосочков, которые классифицируются как FP и на те, которые были отклонены на каждом этапе процесса.
   Рисунок 3: FP против Отклонено сосочками. Рисунок 3а язык с несколькими отборочного FP, а 3b-3e кружили области, которые нарушают каждое правило. (3b) площадь является аморфным; (3в) сосочки слишком малы; 3d) сосочек является синий сравнению с теми, вокруг него, (3e) сосочек встраиваемые сравнению с теми, вокруг него.
2. Форма
   1. Определите, если кандидат сосочек является аморфным (бесформенная). В 50% увеличении увидеть, если есть, обычно признанный геометрическая форма (овальная, кубический, круглые).
   2. Если есть геометрическая форма (рис 3а), перейти к шагу 2.3.
   3. Если термое не геометрическая форма (рис 3b), перейдите к окну счетчика клеток и нажмите "Тип 1.« О копировать (50% увеличение), нажмите кандидатскую сосочек, чтобы отметить его как аморфное и не FP. Нажатие на 1-4 типов в этом и последующих шагов позволяет бомбардиров знать, что они обратились все кандидатскую сосочки и классифицирует, какое правило было нарушено при отклонении структуру, которая поможет в обсуждении на этапе 2.7.2.
3. Цвет
   1. См скопировать на 50% увеличить и определить, есть ли любой цвет дифференциация по поверхности языка. Если это так, переходите к следующему 2.3.2. Если нет, не используйте цвет в качестве определяющего фактора; переходите к шагу 2.4.
   2. Определить, если кандидат сосочка легче, чем ткани или сосочков вокруг него (рис 3а). Если какая-либо часть кандидата соска осталась розовый или окрашенные светлее, переходите к шагу 2.4.
   3. Если кандидат сосочек синий и окружающие сосочкилегче (рис 3в), перейдите к окну счетчика клеток и нажмите "Тип 2" на мобильный прилавок. На скопировать, нажмите кандидат пометить как слишком синий, а не FP.
4. Размер
   1. Использование копирования B, масштаба и расстояние, на котором можно с комфортом увидеть очертания кандидата соска.
   2. Нажмите на инструмент линии и измерить по наибольшему размеру кандидата соска. Нажмите "Анализ", а затем "меру". Если измеренная длина составляет 0,5 мм или больше (рис 3а), переходите к шагу 2.5.
   3. Если измеренная длина 0,499 мм или менее, еще раз измерить, чтобы гарантировать точность. Если он по-прежнему 0,499 мм или менее (см F igure 3D), нажмите кнопку "Тип 3" в окне счетчика клеток и скопировать, нажмите кандидатскую сосочек, чтобы отметить это как слишком мала и не FP.
5. Спад
   1. Использование копирования, оценить, если кандидат сосочек либо равномерное онIGHT с остальной частью языка или повышенный. Если сосок находится в щели, определить его высоту по сравнению с другими структурами в щель, а не поверхности языка. Если соска ниже, чем сосочков вокруг него (рис 3e), использовать "Тип 4" и скопировать, нажмите кандидатскую сосочек, чтобы пометить его как встраиваемые, а не FP.
   2. Если кандидат сосочка либо одинаковой высоты с остальной частью языка или повышенной (рис 3а), использовать "Тип 5", чтобы мыши и отмечают, что это ФП. Этот тип 5 Всего сырой балл FP. Не закрывайте копии в этой точке, как ImageJ не сохранить результаты на мобильный прилавок, ни цветные следы от типов 1-5 на копии А.
6. Сохранение Копировать
   1. Запишите в блокнот сырой балл FP.
   2. В окне счетчика клеток, нажмите "Экспортировать изображение". Сохранить с желаемой системы именования лаборатории. Это позволит открытия КСу в будущем, чтобы сохранить цветные следы от типов 1-5. Это не спасет сырой балл FP.
7. Контроль Качества
   1. Оценка каждую фотографию по двум отдельным бомбардиров и сравнить ^7.
   2. Если выше, ФП сырье оценка находится в пределах 10% от нижнего FP-сырца счет, в среднем два баллы вместе счетом консенсус FP. Если два FP сырье забивает отличаться более чем на 10%, потяните обе набрал фотографии на экране.
      1. Используйте счетчик типа 1-4, чтобы помочь в обсуждении расхождений и совещаться по окончательной оценке консенсуса. Если консенсус не может быть достигнут в ходе обсуждения, отдохнуть от скоринга. На более позднем этапе, rescore изображение и обсудить. Если консенсуса по-прежнему не может быть достигнут, тянуть в третьей бомбардиром. Спросите их, чтобы забить изображения и диалог с двумя другими.

3. Учебные Голы использовать DPP

1. Фон по подготовке
   1. Есть два бомбардиров рассчитывать различные образы,забив индивидуально и присвоении регулярно, чтобы обеспечить, что они используют одни и те же критерии. Только тогда, когда отдельные счетчики были последовательно в пределах 10% друг от друга для каждого из изображений при забил был метод (завершена выше) считается приемлемым и называется DPP.
   2. Выберите 15 официальные изображения и 15 учебных изображений (Справочная Цифры 2-17) в последовательном порядке, чтобы набрать. Если изображение было признано несчетное при выборе, перейти на изображении и выберите следующий последовательный образ.
      Примечание: Эти изображения различаются по качеству и размеру, как они были выбраны в то время как Лаборатория еще овладения правильной техникой фотографии. Один из выбранных изображений считался несчетное через этот процесс первичного подсчета, но остался, чтобы гарантировать, что бомбардиры смогли сделать этот призыв, когда это необходимо. Поэтому есть 16 изображений, данные стажеров, хотя только 15 забил изображений.
   3. Использование DPP, уже упомянутые выше бомбардиров рассчитывать учебные изображения 15 и создать консенсусСчет для каждого.
   4. Дайте слушателям в 15 официальные изображения и попросить, чтобы выиграть, используя Миллер & Риди, чтобы создать базовую линию. Запись баллы. Провести обучение группу, которая затем шаг 3.2. После того, как шаг 3.2 была завершена, имеют бомбардиров набрать 15 официальные изображения снова и записывать свои результаты.
2. Обучение после отчетной бомбардиров на DPP
   1. Дайте обучения бомбардиров первый учебный образ и продемонстрировать DPP в течение нескольких сосочков на этом изображении. Обсудить рассуждения для выбора или отказа каждый сосочек как FP. Разрешить стажеров и впредь практиковать счет для остальной части этой фотографии и совещаться с консенсус-номер (для ряда консенсуса получил Лаборатории и тип маркеров 1-5 см дополнительного Рисунок 1). Для этого фото обсуждать любые расхождения, независимо от 10% для обеспечения понимания DPP.
   2. Дайте его следующим бомбардиров второй учебный образ и есть их оценка с помощью DPP.
   3. Если стажер сырье оценка FP является в течение десятипроцентов от установленного консенсуса рассчитывать из раздела 3.1.3., позволяют стажер, чтобы перейти на следующий изображения и повторите шаги.
   4. Если оценка выходит за пределы диапазона десять процентов, использовать цветные метки обучаемого, представляющие типы 1-5, чтобы понять и определить несостоятельность, а затем обратиться с расхождениями понимание DPP.
   5. Дайте обучающемуся возможность rescore изображение и проверить новый счет еще раз. В случае успеха, стажер переходит на следующем изображении, пока все изображения не будут завершены.

Representative Results

Здесь представитель фотография забил два отдельных бомбардиров при использовании широко используемых Miller & Риди методологию для идентификации FP на основе стандартов полевых раунде, большой, розовый или окрашенные светлее, и повышение, а затем то же самое фотография забил два бомбардиров с помощью DPP. Счетчики Указаны представитель высокой дисперсии наблюдается с помощью оригинального метода по сравнению с нижней дисперсии с использованием DPP.

Рисунок 4:. Миллер и Риди Количественное против DPP количественной Изображение слева является представителем пунктам двух бомбардиров "с использованием Миллер и Риди метода. Изображение справа представляет два пункта бомбардиров ", используя DPP. Красный бомбардиром 1, Желтый бомбардиром 2, Зеленый бомбардиров 1 & 2.

Статистическая надежность DPР ранее изучались с помощью линейной смешанной модели для оценки изменчивости ^10. Вкратце, для получения данных для оценки роли DPP играет в последовательности баллов, пятнадцать изображения забили дважды. В первой партии баллов, DPP наивные бомбардиров используется метод Miller & Риди ^2. Бомбардиров затем обучены использовать DPP и изображения индивидуально rescored без заключительном этапе консенсус, описанной в разделе 2.7 подробно контроля качества (рис 5). Набор счет данных ФП был затем использован в смешанной модели для оценки комбинированных различия в связи с протоколом (рисунок 6), в-бомбардир изменчивости и взаимодействия между ними. Эта модель показала значительную разницу в выигрыше при использовании метода Миллера и пронзительные по сравнению с DPP (р-значение <1 х 10 ^-6) с DPP, ведущей к более высоким счетом в 6.99 (SE = 0,99); 5.2% изменчивости в счете было связано с обучением, 25,9% из-за бомбардира, и оставшиеся из-заизменчивости характерных для изображения ^10. Далее, для получения данных для определения внутри-бомбардиру изменчивость, серия из тридцати изображений в произвольном порядке забили 11 человек. Без ведома бомбардиров, это серия изображений включал три изображения, которые были неоднократные. Мы наблюдали резкое различие в изменчивости баллов по сравнению различных изображений versusrepeated изображения.

Рисунок 5:. DPP-наивного против сообщение ДПП Обучение Панели обеспечивают присущи рефлективный, вербальный партитур оппонентом для 15 изображений до и после обучения Денвер Папиллы протокол. Для каждого boxplot, заполнено в круг указывает на среднее, тогда как открытый круг указывает на выброс.

Рисунок 6:. Изменение бомбардир дисперсии серый представляет тон дисперсии для отдельных бомбардиров до DPP обучения. Черный же бомбардиром после ДПП обучение.

Discussion

Использование DPP, дисперсия в изображении рассчитывает через независимых бомбардиров и рассчитывает в течение бомбардиром снизилась значительно. Хотя этот метод делает визуальный анализ плотности FP без видеомикроскопии менее субъективным, следует отметить, что этот метод оценки лишь FP. DPP не может гарантировать, что структуры, классифицированные как FP есть вкусовые поры и, следовательно, вкусовая сосочки, ни что на счету отражают реальный вкус плотности бутона ^20,23 .Отель природа этого метода является то, что он устанавливает надежность через консистенции и точности; Однако, это может быть смещение результаты в том же направлении. Чтобы проверить точность по сравнению с другими методами с использованием истинную меру плотности бутона вкуса (например, видеомикроскопии) будет выходить за рамки данного study.However, характеризуя морфологию FP более строго и создание дихотомичный ключ, этот метод рассматривает Миллер & заряд Reedy на поле, что более характеристик FPдолжно быть сделано для того, чтобы иметь консенсус по их морфологии и количественного ^2. Кроме того, они указали, что эта характеристика может «прояснить некоторые различия между субъектами и объяснить некоторые из разрозненных результатов среди исследователей ^2." Предоставляя унифицированный метод количественного, многие из расхождений по вопросу о роли FP вкуса и питанием связанные исследование может быть исправлено.

Дихотомическое ключ может быть настроен для различных методов получения изображений. Известно расстояние для измерительной шкалы может быть легко установлен в диаметре, используемой в каждой лаборатории и рецессии нельзя сбрасывать со счетов, если сарана обертывание или стекло были помещены на языке для захвата изображения. В ПРТ Lab, было установлено, что нейтральный язык при условии, лучшее определение сосочков. Это может быть связано с количеством света в лаборатории что вызвало Saran Wrap или стекла, чтобы отражать свет обратно в камеру создания бликов, который сделал ословпасо трудно. Некоторые лаборатории сказали, что они найти краситель сложнее рассчитывать, но ПРТ Лаборатория нашел разбавленный голубой пищевой краски в концентрации 1:36, предоставленной идеальный контраст между грибовидные и нитевидных сосочков на большинство языков.

Создание дихотомической ключа для FP характеристики позволят исследователям в различных лабораториях, используя различные методы получения изображений, последовательно проанализировать структуры на язык и есть уверенность в отчетности их результатов. Наконец, использование дихотомического ключа может иметь цели в других областях научной методологии, где качества сооружений или объектов, обеспечивающих противоречивые цифры от исследования к исследованию.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Image J	National Institutes of Health	http://rsb.info.nih.gov/ij
Food dye, Deep Blue Shade	Esco	http://escofoods.com/blue-food-coloring.html
Sterile Rayon Tipped OB/GYN Applicators	Puritan	25-808 1PR
Grade 1 Filter Paper	Whatman	Whatman No.: 1001-325
Coolpix P100 (10.3 megapixels) and P500 (12.1 megapixels)	Nikon	http://imaging.nikon.com/lineup/coolpix/	neither model appears to be available on the website any longer
Paper Hand Towels	Kleenex	https://www.kleenex.com/HandTowelsDetail.aspx