Summary
המטרה של תג אוריינטציה הדגימה (SPOT) היא לתפקד ככלי נטייה לסייע בזיהוי רקמה בודד בלוקים פרפין רב-רקמה. פרוטוקולים אלה מדגימים כיצד הוא נבנה בקלות מחומרי היסטולוגיה משותפות, עלות נמוכה ומשמש כסמן חזותי אמין בלוקים פרפין וחתכים.
Abstract
בלוקים פרפין רב-רקמה לספק ניתוח תפוקה גבוה עם התייעלות, אחידות ניסיונית, וזמן מופחת ועלות. microarrays רקמות מרכיבים את רוב לוקי פרפין רב-רקמה, אבל יותר ויותר, חוקרים משתמשים בלוקים-ערוך שאינם מכילים רקמות גדולות יותר מאנשים רבים אשר יכול לספק רב של היתרונות של microarrays רקמות ללא השקעה משמעותית בתכנון ובציוד. מרכיב קריטי בכל ניתוח רב-רקמה הוא שיטת הנטייה משמשת לזיהוי כל רקמה בודדת. למרות ששיטות קיימות כדי לשמור על התמצאות וזיהוי של רקמות בלוקים רב-רקמה תקינה, רובם לא מתאימים היטב ללוקים-ערוך עישון, עשוי לצרוך שטח יקר בתוך מערך ו / או קשים לייצר במעבדה היסטולוגיה סטנדרטית. תג אוריינטציה הדגימה (SPOT) הוא כלי פשוט, נמוך נטייה עלות שנראית בבירור בלוקים פרפין וכל סעיפי הרקמות FOr זיהוי דגימה אמין בפריסות ערוכות ולא ערוכים. המקום מספק יתרונות על פני שיטות נטייה קיימות בלוקים-ערוך שאינם כפי שהוא אינו דורש כל שינוי ישיר לרקמות ומאפשר גמישות בסידור של יצירות רקמה.
Introduction
היכולת להטביע דגימות רקמה מאנשים מרובים בבלוק פרפין יחיד מאפשרת השוואת Side-by-צד קל בין טיפולים ויחידים, מבטלת השתנות בין שקופיות, ומפחיתה את העלות ועומס עבודה של חתך ומכתים דגימות. בלוקים רבי רקמות אלה מיוצרים בדרך כלל כשני microarrays הרקמות (TMA) או בלוקים פרפין המכיל רקמות מאנשים רבים בפריסה הלא מערך. תחזוקה של זהות מדגם היא קריטית להצלחתו של כל ניתוח רב-רקמה. החוקרים השתמשו TMAs מאז פיתוחם כדי לשפר את היעילות של ניתוח, להפחית וריאציה בין שקופיות, לחסוך במשאבים יקרי ערך רקמה, ולהפחית את הזמן ועלות של ניסויי 1. כיוון נכון של TMAs יכול להיות מושלם תוך שימוש במגוון של שיטות, כולל רווחים, שורות או עמודות ריקות בין ליבות רקמת 2-4, הסדר סימטרי של קבוצות ליבה 3, 5 (למשל, ניהול עבודותl לעומת טיפול), ליבות "מגדלור" 6, וליבות אורינטציה מיועדות ממוקמות מחוץ למטריצת TMA 3. למרות ששיטות אלו עובדות היטב עבור TMAs, רוב לצרוך שטח יקר ליבת TMA וTMAs עם פערים וחללים כמזהים עלולים להיות מבלבלים כמו ליבות רקמה מותשות לאורך זמן. בנוסף, שיטות אלה אינן מתאימות לשימוש בבלוקים רב-רקמה בלי פורמט מערך כי הם מסתמכים על חריגות בדפוס הורה ההדוקה של ליבות microarray אחידות כמזהים. רוב לוקים רב-רקמה-ערוך שאינם חייבים להכיל רקמות לא אחידים ו, מעצם הגדרתו, אינו מציגים את רשת המערך המובנה שגורמת סטיות אלה עומדות בתור ציוני דרך.
למרות שיש יתרונות רבים לשימוש TMA, אחד החסרונות הגדולים ביותר הוא בגודל הקטן של הליבות וזה לא תמיד נציג של רקמה במידה רבה הטרוגנית 1. בלוקים רב-רקמה ערוכות שאינם מספקים רבים של tהוא היתרונות של TMA, אך מכיל דגימות רקמה גדולות יותר, או איברים שלמים ממחקרים בבעלי חיים. microarrays רקמות באמצעות ליבות יחידים ששונה התאמה עם חלקי רקמות שלמים המבוססים על החלבון של עניין ורב דורשים ליבות מרובות עבור התאמה מוגברת 7-11. בשל המורכבות והטבע הטרוגנית של כמה פנוטיפים סמן ביולוגי, TMAs באמצעות אפילו מספר גדול של ליבות (> 10) עדיין יכול להיות מספק ועשויה לדרוש שיטות אחרות מאשר microarrays לניתוח 8. בנוסף, בניית TMA היא לצרוך זמן, תובעני מבחינה טכנית, ודורשת את העלות הראשונית והשקעה באו גישה לarrayer רקמה. בלוקים רב-רקמה ללא ערוכה יכולים להתבצע בכל מעבדה בסיסית עם פחות זמן ומאמץ והוא אלטרנטיבה חוקית ללימודים שדורשים יותר מאשר רקמת מערכים לאפשר או כאמצעי כדי לקצץ בעלויות ולפשט את הניתוח.
בלוקים רב-רקמה-ערוך שאינו דומים דורשים אמין אוientation סמן כדי לעקוב אחר זיהוי מדגם, עם זאת, הפיתוח של סמנים אלה היה מוגבל. חלק גדול מהספרות המתארת אוריינטצית רקמות מתמקד בנטייה פיזיולוגית נכונה להטבעת חתיכות רקמה בודדות, כגון קעקוע הרקמה עם דיו 12, טרום הטבעת רקמות באגרו-ג'לטין לפני עיבוד 13, וסימון רקמות מסוימות עם חריצים 14 או 15 תפרים . למרות פונקציונלי, שיטות אלה אינן אידיאליים כסמנים בלוקים רבי רקמות בשל המגבלות שלהם. תפר יהיה מחולק במהירות ולא יכול להיות גלוי בכל סעיף. טרום הטבעת טכניקות באמצעות אגר-ג'לטין עשוי לשמור על הרקמה בכיוון נכון בזמן עיבוד והטבעה, אך אינו מספק רמז חזותי להבחין בין דוגמאות רבות בבלוק פרפין ושקופיות. חריצים או צבע על הרקמה עלולים לסבך ניתוח או לחסום פרטים מורפולוגיים חשובים. לחלופין, זהות רקמהבגוש רב-רקמה-ערוך שאינו יכול להישמר באמצעות הטבעה של חתיכות רקמה בהסדר סימטרי, אבל זה דורש 3 או יותר חתיכות רקמה ועשוי שלא לאפשר להסדר אופטימלי של רקמות לצורך הניתוח.
תג אוריינטציה הדגימה (SPOT) פותח כשיטת קלה וזולה לזיהוי רקמות בלוקים רב רקמה באופן ברור ומציע יתרונות רבים על פני שיטות נטייה קיימות. הנקודה היא קטנה, צבעונית, מורכבת מליבת ג'ל Hydroxyethyl agarose עיבוד וצבע סימון רקמה, והסתננה עם פרפין (איור 2 ג). ליבת המקום מוטבעת על קצה ליד רקמה יחידה בבלוק פרפין רב-רקמה ומופיעה כנקודה צבעונית בגוש ובכל סעיף (איור 1 א - ד), באופן ברור המעידה על הכיוון הנכון של הבלוק וחתכים לזיהוי רקמות קל.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. בנייה של המקום
- הוסף 50 מ"ג של סרום שור אלבומין (BSA) 1 צבע סימון מיליליטר רקמות בצינור 15 מיליליטר חרוטי או 2 מיליליטר צינור microfuge ומערבולת דקות 1 או עד שהיא נמסה לחלוטין.
הערה: פרוטוקול זה, להשתמש ביוכימיים כיתה BSA. ואילו בכיתות וpurities אחרים לא נבדקו, צפוי כי בכיתה וטוהר לא היו השפעה משמעותית על ההצלחה של המקום. - חום 9 ג'ל מיליליטר hydroxyethyl עיבוד agarose בצינור חרוטי 15 מיליליטר במיקרוגל בעצמה של 30% במשך 10 שניות במרווחים עד הג'ל נמס לחלוטין.
- לשלב ג'ל העיבוד נמס ופתרון הצבע-BSA בצינור חרוטי 15 מיליליטר אחת ומערבבים היטב עם טפטפת. מערבולת הפתרון.
- מניחים את צינור חרוטי במקרר לכמה שעות או עד מוצק.
- השתמש,, מרית מתכת דקה ארוכה או בדיקה בעדינות כדי לשחרר את תקע ג'ל בצבע מצינור חרוטי.
- השתמש בלהב סכין מנתחים או סכין גילוח למ"קt ג'ל לחבר רוחבי ל5 מ"מ חלקים עבים. הסר את הקצוות מעוגלים ולהשליך לפח האשפה (איור 2 א).
- מניחים את חלקי תקע ג'ל שטוחים בקלטות היסטולוגיה ולהחזיק ב -70% אתנול עבור שעה 1. לשנות את פתרון אתנול 70% בכל שעות 2-4 לפחות 3 שינויים לאורך תקופה של 24 שעות.
- ידני לעבד את חלקי ג'ל באמצעות סדרת אתנול (1 שעה כל אחד: 70% אתנול, 80% אתנול, 95% אתנול, 100% אתנול (שינויי 3x), אז ברורים בניקוי 3x פתרון לשעה 1 כל אחד (לדוגמא, פחמימנים aliphatic ( xylenes תחליף)) היה בשימוש בפרוטוקול זה, xylenes גם מקובל), ולחדור עם פרפין המותך (3x עבור שעה 1 כל אחד), באופן ידני או בProcesser רקמה.
הערה: לפני התייבשות מלאה ב 100% אתנול, הצבע עלול לדלוף מתקע ג'ל שעלול להשפיע על רקמות אחרות וריאגנטים נוזליים במעבד רקמות אוטומטי. כהתייבשות כגון, הוראות מומלצת מאוד, עיבוד עם זאת אוטומטי הוא סוסיםברית יעילה. - סעיפים להטביע מרובים מעובד ג'ל באמצעות פרפין הסטנדרטי הטבעת המתודולוגיה (איור 2). לאפשר בלוקים לקירור ולהקשיח ואז מגיעים לטמפרטורת חדר.
- שימוש במחט אגרוף עורי של גודל רצוי להסיר ליבות נקודה מסעיפי ג'ל מוטבעים עד הבלוק הוא מותש (איור 2 ג). בלוק אחד עשוי לספק עד 20 x 2 מ"מ 2 ליבות. אחסן את הליבות באזור קריר. השתמש אגרוף עורי בפרוטוקול זה ראה איורים, 1.5 מ"מ (1D דמויות, ו2D) או 2 מ"מ (1B דמויות, 1C, 2C ו).
2. שימוש כתמים ללוקים-ערוכים ללא אוריינט
- צור תרשים אוריינטצית רקמות כדי לציין את המקומות הרצויים וזהותם של כל חלקי הרקמה הבודדים להיות משובצים ביחד, ואת מיקומו של המקום.
הערה: תרשים הנטייה הרקמה היא מפה מאוירת הכוללת את עמ 'מקומות hysical של כל חלקי הרקמה שכותרתו עם מזהים והמיקום של הנקודה. זה יכול להיות שנוצר באופן אלקטרוני או יכול להיות מצויר ביד. התרשים צריך להיות שנוצר באמצעות כל שיטה המתאימה ביותר לטכנאי וחוקר שימוש במוצר הסופי. מפה זו תשמש כמדריך לחוקר כך ניתן לזהות בקלות דגימות במהלך ניתוח מיקרוסקופי. מפת שימוש בפרוטוקול זה היה מצוירת ביד. הוא מתאר שקופיות מיקרוסקופ בלוק וזכוכית רקמה עם כל פיסת הרקמה והמקום נמשך ושהכותרת באותה התנוחה כמו בלוק הרקמה בפועל ושקופיות. - לעבד את פיסות הרקמה בדרך כלל, על מנת להבטיח שהם יישארו מזוהים כראוי לאורך כל שלבי גילום ועיבוד. לפרוטוקול זה, לעבד את הרקמות לשעה 1 בכל: אתנול 70%, 80% אתנול, 95% אתנול, 100% אתנול (שינויי x3), פחמימנים aliphatic (תחליף xylenes) (שינויי x3), ופרפין חדירת רקמה המותך ב 60 ° C (שינויי x3).
הערה:צריכים להיות מעובד רקמות ll הבא נהלי מעבדה היסטולוגיה סטנדרטית. זה עשוי להיות משתנה בשל הליך מעבדה בודד, גודל וסוג רקמה, אבל זה לא ישפיע על היכולת להשתמש במקום ככלי אורינטציה. - לארגן פיסות רקמה בתחנת ההטבעה במקומות שהוקצו הנכונים על פי תרשים הנטייה רקמה. השתמש בתרשים התמצאות הרקמה כנקודת התייחסות כדי להנחות את הטכנאי על איך לסדר את חתיכות נקודה ורקמות בכל בלוק.
הערה: בפרוטוקול זה טכנאי ההטבעה לשים מפת ההתמצאות המצוירת ביד ליד תחנת ההטבעה וסידרה את חתיכות הרקמה בתחנת ההטבעה בדיוק באותו הסדר כפי שצייר בתרשים. הדבר מבטיח כי כל חלקי הרקמה יישארו בצורה נכונה לזיהוי במוצר הסופי. זה קריטי לשימוש המוצלח של בלוקים רב-רקמה. - ודא ליבת הנקודה היא גבוהה יותר מכל חלקי הרקמה להיות מוטבעים בגוש.
- להטביע את פיסות רקמה ולאחר מכן את המקום בסופו של דבר (רוחבי) במקומות הנכונים על פי תרשים אוריינטצית רקמות באמצעות מתודולוגיה הטבעה סטנדרטית. בהתאם לצורך, להחזיק את המקום (ים) זקוף עם מלקחיים עד פרפין בסס מספיק שהמקום (ים) לא ייפול על (1-2 דקות).
- סעיפי סעיף ופרפין הכתם עם המקום באמצעות מתודולוגיה סטנדרטית.
- לאפשר הסעיפים לצוף על אמבט מים ב 40 ° C ודבקו שקופיות זכוכית טעונות חיובי (שקופיות בלתי טעונות לא נבדקו). ייבש את השקופיות בתנור ייבוש ב 60 מעלות צלזיוס במשך לפחות 20 דקות.
- מניחים את השקופיות בstainer אוטומטית ומעובד באמצעות חומרים כימיים הבאים: xylenes (xylenes 1-5 דקות, xylenes 2 ו3-2 דקות, כל אחד), 100% אתנול (2 דקות), 95% אתנול (1 דקות), 80 % אתנול (30 שניות), 70% אתנול (30 שניות), במים ברז זורמים (2 דקות), hematoxylin (1.5 דקות), במים ברז זורמים (3 דקות), אלכוהול חומצה (1 דקות), במים ברז זורמים (2 דק ' ), BLמגיב uing (1 דקות), מים זורמים (2 דקות), 80% אתנול (30 שניות), eosin (1 דקות), מים זורמים (10 שניות), 80% אתנול (1 דקות), 100% אתנול (3 שינויים, 2 דקות כל אחד), xylenes (3 שינויים, 30 שניות כל אחד).
- לכסות את השקופיות עם coverslips זכוכית, רכוב עם ההרכבה בינונית.
הערה: בפרוטוקול זה, histotechnician מחולק בלוקים פרפין על microtome ב5 מיקרומטר סעיפים. לפרוטוקול זה השתמשנו stainer אוטומטי, אך ניתן להשיג תוצאות שווים באמצעות צביעה ידנית.
3. מקום בTMAs (ערכת TMA ידנית)
- צור תרשים נטייה רקמה, כפי שתואר ב2.1 ולהקצות את המיקום הרצוי (ים) של המקום.
- ממלא את תבנית TMA עם פרפין נמס בתחנת הטבעה. כעובש קירור, להטביע את המקום (ים) בסופו של דבר בשולי תבנית TMA במקומות הרצויים שצוינו על ידי תרשים הנטייה רקמה. בהתאם לצורך, להחזיק את המקום (ים) זקוף עם מלקחיים עד חה פרפיןים הגדילו מספיק שהמקום (ים) לא ייפול על (1-2 דקות).
- להרכיב את ליבות TMA פי הוראות יצרן ובנוגע למיקומו של המקום (ים) בשולי המערך (איור 2 ד), ואחרי פרוטוקולי חתך וצביעה סטנדרטיים.
הערה: אנא ראה שלב 2.6 לראות את שיטות חתך והכתים שימוש בפרוטוקול זה.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
המקום נראה כמו סיבוב, נקודה צבעונית בבלוק פרפין (איור 1 א ו 2 ד), בכל סעיפי פרפין, ונשאר בשקופית הזכוכית בהליך צביעת H & E או IHC (1B המספרים - 1D, ו2D). עזרים זה ברור חזותי קיו שני histotechnician והחוקר בזיהוי כל פיסת רקמה בודדת ומפשט תקשורת כhistotechnician יכולים להשתמש רמז חזותי זה כדי לציין את הסדר של חלקי הרקמה לחוקר איסוף נתונים מהשקופיות במיקרוסקופ. תרשים הנטייה הרקמה צריך להיות כלול עם השקופיות הניתנות לחוקר והסביר בפירוט כל כך לא יהיה בלבול במהלך ניתוח מיקרוסקופי. איור 2 א מציג את התוצאות של חתך התקעים הקרושה, צבעוניים agarose ג'ל. איור 2 מראה את התוצאה של הטבעה תקע agarose ג'ל מחולקים בגוש פרפין. איור 2 ג מראה את התוצאות של שימוש באגרוף עורי כדי לייצר את ליבות המקום.
איור 1: ליבות מקום נוצרות בקלות וגלויה בקלות בלוקים ושקופיות רקמת נקודות () גלויות לעין בגוש המוטבע.. נקודות (ב ') לאפשר להתמצאות קלה וזיהוי רקמות ללוקים רב-רקמה המכילים רקמות המופיעות דומות מקבוצות אנשים / טיפול שונה. כתמים (ג) לאפשר לכל ליבה של Microarray רקמות להיות מנוצלת לדגימות רקמה יקרות. צפה ב( ד) מיקרוסקופ של מקום סמוך לליבת TMA. חצים מצביעים על המקום. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו. 
איור 2:. הכנת ליבות נקודת תקעי agarose () הגדילו Hydroxyethyl משתחררים מצינורות Eppendorf ולחתוך רוחבי ל5 פרוסות מ"מ. מספר פרוסות (ארוחת בוקר) משובצות בבלוק פרפין אחת ואגרוף עורי (C) משמש להסרת כתמי ליבות. כתמים (ד) משובצים בשולי Microarray רקמות. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
הכנה וניצול מוצלחת של הכתמים דורשים דבקות מקפידה כמה צעדים טכניים. היתוך של agarose hydroxyethyl צריך להיעשות לאט ובחום נמוך. התכה במהירות בחום גבוה יכולה לגרום להתמוטטות של כמה agarose פחות מתוצאות אופטימליות. בעת חיתוך תקעי הצבע-לאדן לחתיכות לעיבוד, להבטיח כי העובי של כל חתיכה גדולה מ -4.5 מ"מ ואינו עולה על 7 מ"מ. הקצוות מעוגלים יוסרו כפסולת כמו שהם לא אחיד 5 מ"מ עובי. חתיכות פחות מ -5 מ"מ תגרום ליצירת כתמים קצרים שמסתכנים מותשת מחתך לפני מיצוי חומר רקמות סמוך. כדי להבטיח את המקום נמצא בשלמות של הבלוק, החתיכות צריכים להיות לפחות 4.5-5 מ"מ. כדי להבטיח חדירה נכונה של שעווה, לעומת זאת, החלקים לא יעלו על 7 מ"מ. כאשר התייבשות חתיכות הצבע לחדירת שעווה, הצבע יהיה לסנן מעט מהחתיכות בלאוריכוזי r של אתנול. השטיפה אינו משפיעה על המוצר הסופי, הכתמים עדיין תהיינה מאוד צבועות ונראה בבירור. השטיפה עלולה להשפיע רקמות אחרות, אם כי, כך סעיפי רקמות לא צריכים להיות מעובד באותו האמבטיות כחתיכות צבע עד החתיכות הגיעו 100% אתנול.
בעת ביצוע הכתמים לתוך הגושים ערוכים, להבטיח שכל מיקום הרקמות האחר הוא מלא לפני הוספת הנקודה. מאז הנקודה היא שחדר עם שעוות פרפין, השעווה המותכת של בלוק הנמען יכולה להתחיל להמס את ליבת המקום אם זה מותר לשבת יותר מדי זמן. לסדר את כל חתיכות הרקמה ראשונה, להוסיף ליבת המקום ומייד להעביר את הבלוק לצלחת קרה כדי למנוע כל היתוך של המקום.
המקום יכול להיות שונה כדי להתאים למרבית תהליכי העבודה המעבדה היסטולוגיה. הצבע של הצבע ניתן לשנות לניגוד אופטימלי בכל יישום. צבע אדום או שחור מייצר ניגודיות גבוהה ברורה בשקופיות IHC מוכתמות, while הנקודה האדומה היא לא כמו מושכת את העין בשקופיות H & E מוכתמות סעיפים כליות ערוכים. לשקופיות H & E, כתמים ירוקים או צהובים נוטים לספק ניגודיות גבוהה יותר. בהמשך, תחת חום גבוה במהלך תהליכים כגון שליפת אנטיגן חום מושרה אימונוהיסטוכימיה, agarose hydroxyethyl נמס. BSA מתווסף לצבע במהלך הכנת נקודה כדי לשמור על מקום צבעוני בשקופית גם לאחר שיטות אחזור חום גבוה. אם את השקופיות לא תהיה חשופות לחום גבוה, BSA יכול להיות מושמט לייצור נקודה מהר יותר.
ההיבטים הקריטיים ביותר של השימוש במקום נמצאים ביצירה והתחזוקה של מפת התמצאות ברורה ותמציתית והדבקות הנאמנה למפה בעת ביצוע ספוט. כאשר משתמשים בו כראוי, הנקודה מפחיתה בלבול על הסדר רקמה ומפשטת את תקשורת בין טכנאים וחוקרים, כטכנאי הטבעה יכולה פשוט להצביע על מיקומו של המקום ואת היחס של tissues אליו על מפה. המקום נראה בבירור בכל השלבים של הכנת שקופיות מאפשרת לסעיף העקבי ביותר גובר על שקופיות לניתוח במורד הזרם קל יותר. בניגוד לסמנים פיסיולוגיים, המקום נראה בבירור בכל סעיף ולא לשנות את הרקמה בכל דרך, מניעת כניסתה של חפצים או חסימה של מורפולוגיה. בניגוד לשיטה של הטבעת הרקמות סימטרית, המקום מאפשר גמישות טכנאים וחוקרים בהסדר של רקמות כדי לייעל ניתוח חזותי מתחת למיקרוסקופ. בTMAs, המקום יכול להיות ממוקם מחוץ למערך העיקרי, ומבטל את הצורך בחללים ריקים, מכלולים סימטריים, או ליבות מגדלור, המאפשר לכל המערך להיות מורכב מסעיפי רקמות יקרי ערך. גם המקום יכול לשמש כדי לציין כיוון אנטומיים (לדוגמא, דיסטלי או הפרוקסימלי) של דגימות רקמה. הנקודה היא פתרון פשוט ועלות נמוך להתמצאות קלה ועקבית של דגימות רקמה במהלך הבנייה וnalysis של בלוקים רב-רקמה וTMAs.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
יש המחברים אין לחשוף.
Acknowledgments
המחברים מבקשים להודות לד"ר ברנט האריס למתן סקירה ביקורתית של כתב היד. מחקרים אלה נערכו בומברדי המקיף מרכז הסרטן histopathology והמשאבים משותפים רקמות אשר נתמך בחלקו על ידי P30-CA051008 מענק NIH / NCI. התוכן הוא באחריות בלעדית של הכותבים ולא בהכרח מייצג את הדעות הרשמיות של המכון הלאומי לסרטן או המכונים הלאומי לבריאות.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Histogel Specimen Processing Gel | Thermo Scientific | HG-4000-012 | http://www.thermoscientific.com/en/product/richard-allan-scientific-histogel-specimen-processing-gel.html |
| Tissue Marking Dye | Triangle Biomedical Sciences, Inc. | TMD-5 | Any tissue marking dye would most likely be sufficient. |
| Arraymold Kit A 2 mm (60 core) | Arraymold | 20015A | Any manual tissue arrayer would work similarly. |
References
- Jawhar, N. Tissue microarray: a rapidly evolving diagnostic and research tool. Ann. Saudi. Med. 29 (2), 123-127 (2009).
- Dhir, R.
- Parsons, M., Grabsch, H. How to make tissue microarrays. Diagn. Histopath. 15 (3), 142-150 (2009).
- Saxena, R., Bade, S. Ch. 7 Tissue Microarray – Construction and Quality Assurance. Immunohistochemical Staining Methods 6th ed. , Available from: http://www.dako.com/08002_ihc_staining_methods_5ed.pdf (2013).
- Nocito, A., Kononen, J., Kallioniemi, O., Sauter, G. Tissue microarrays (TMAs) for high-throughput molecular pathology research. Int. J. Cancer. 94, 1-5 (2001).
- Rangel, C. The tissue microarray: helpful hints. J.Histotech. 25 (2), 93-100 (2002).
- Hammer, A., Williams, B., Dietz, H., Hamilton-Dutoit, S. High-throughput immunophenotyping of 43 ferret lymphomas using tissue microarray technology. Vet. Path. 44, 196-203 (2007).
- Eckel-Passow, J., Lohse, C., Sheinin, Y., Crispen, P., Krco, C., Kwon, E. Tissue microarrays: one size does not fit all. Diagn Pathol. 5, 48-57 (2010).
- Lin, Y., Hatem, J., Wang, J., Quinn, A., Hicks, D., Tang, P. Tissue microarray-based immunohistochemical study can significantly underestimate the expression of HER2 and progesterone receptor in ductal carcinoma in situ of the breast. Biotech. Histochem. 86 (5), 345-350 (2011).
- Wampfler, J., et al. Determining the optimal numbers of cores based on tissue microarray antibody assessment in non-small cell lung cancer. J Cancer Sci. Ther. 3, 120-124 (2011).
- Quagliata, L., Schlageter, M., Quintavalle, C., Tornillo, L., Terracciano, L. M. Identification of new players in hepatocarcinogenesis: Limits and opportunities of using tissue microarray (TMA). Microarray. 3, 91-102 (2014).
- Miettinen, M. A simple method for generating multitissue blocks without special equipment. Immunohistochem. Mol. Morphol. 20 (4), 410-412 (2012).
- Jones, M., Calabresdi, P. Agar-gelatin for embedding tissues prior to paraffin processing. BioTechniques. 42, 569-570 (2007).
- Carson, F., Hladik, C. Histotechnology: A Self-Instructional Text. , 3rd ed, American Society for Clinical Pathology Press. Chicago, IL. (2009).
- Suvarna, S., Layton, C., Bancroft, J. Bancroft’s Theory and Practice of Histological Techniques. 7th ed. , 7th ed, Churchill Livingstone Elsevier Ltd. London, UK. (2013).
