Spot de Tejidos correcta cada vez que en los bloques de múltiples tejidos

Resumen

El propósito de la Orientación Tag Espécimen (spot) es funcionar como una herramienta de orientación para ayudar en la identificación de tejidos individuales en bloques de parafina de múltiples tejidos. Estos protocolos demuestran cómo se construye fácilmente de materiales histológicos comunes de bajo costo y sirve como marcador visual confiable en bloques de parafina y secciones.

Resumen

Los bloques de parafina Multi-tejido proporcionan análisis de alto rendimiento con una mayor eficiencia, la uniformidad experimental, y reducción del tiempo y coste. Microarrays de tejidos constituyen la mayoría de los bloques de parafina de varios tejidos, pero cada vez más, los investigadores están utilizando bloques no son de arrays que contienen los tejidos más grandes de varios individuos que pueden proporcionar muchas de las ventajas de microarrays de tejidos sin una inversión sustancial en la planificación y el equipo. Un componente crítico de cualquier análisis de múltiples tejidos es el método de orientación utilizado para identificar cada tejido. Aunque existen métodos para mantener la orientación adecuada y la identificación de los tejidos en bloques de varios tejidos, la mayoría no son muy adecuados a los bloques no dispuestos, puede consumir el espacio valioso dentro de una matriz y / o son difíciles de producir en el laboratorio de histología normal. La Orientación Tag Espécimen (spot) es una herramienta simple, de bajo costo que la orientación es claramente visible en los bloques de parafina y todas las secciones de tejido FOr identificación de la muestra de confianza en diseños dispuestos y no dispuestos. El SPOT ofrece ventajas sobre los métodos de orientación existentes para bloques no dispuestos, ya que no requiere ninguna modificación directa al tejido y permite flexibilidad en la disposición de piezas de tejido.

Introducción

La capacidad de incrustar muestras de tejido de múltiples individuos en un solo bloque de parafina permite una fácil comparación lado a lado entre los tratamientos y los individuos, elimina la variabilidad entre las diapositivas, y reduce el costo y la carga de trabajo de seccionamiento y tinción de muestras. Estos bloques de múltiples tejidos se producen típicamente ya sea como microarrays de tejidos (TMA) o bloques de parafina que contienen tejido de varias personas en un diseño no-matriz. Mantenimiento de la identidad de la muestra es crítica para el éxito de cualquier análisis multi-tejido. Los investigadores han estado usando TMA desde su desarrollo para mejorar....

Protocolo

1. Construcción de la mancha

1. Añadir 50 mg de albúmina de suero bovino (BSA) a 1 ml de tejido tinte de marcado en un tubo cónico de 15 ml o 2 ml tubo de microcentrífuga y agitar durante 1 min o hasta que esté completamente disuelto.
   Nota: Para este protocolo, utilice bioquímica Grado BSA. Mientras que otros grados y purezas no han sido probados, se espera que el grado y la pureza no tendrían un impacto significativo en el éxito de la mancha.
2. Heat 9 ml hidroxietil gel de agarosa de procesamiento en un tubo cónico de 15 ml en un microondas a potencia 30% para incrementos de 10 seg hasta que el gel se funde completamente.
3. Combinar el....

Resultados

El spot aparece como una ronda, punto de colores brillantes en el bloque de parafina (Figura 1A y 2D), en todas las secciones de parafina, y permanece en el portaobjetos de vidrio a través del procedimiento de tinción H & E o IHC (Figuras 1B - 1D y 2D). Este obvias ayudas señal visual tanto la histotechnician e investigador en la identificación de cada pieza de tejido individuo y simplifica la comunicación como el histotechnician pu.......

Discusión

Preparación exitosa y la utilización de los lugares requiere una cuidadosa adhesión a unos pasos técnicos. Fusión de la agarosa hidroxietil debe hacerse lentamente y al fuego lento. Melting rápidamente a fuego alto puede dar lugar a alguna ruptura de la agarosa por menos de unos resultados óptimos. Al cortar los tapones en colorantes cargados en trozos para el procesamiento, garantizar que el espesor de cada pieza es mayor que 4,5 mm y no excede de 7 mm. Los extremos redondeados se eliminan como residuos, ya que no son .......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Histogel Gel de Procesamiento de Muestras	Thermo Scientific	HG-4000-012	http://www.thermoscientific.com/en/product/richard-allan-scientific-histogel-specimen-processing-gel.html
Tissue Marking Dye	Triangle Biomedical Sciences, Inc.	TMD-5	Lo más probable es que cualquier tinte para marcar tejidos sea suficiente.
Kit Arraymold A 2 mm (60 núcleos)	Arraymold	20015A	Cualquier arrayer de tejido manual funcionaría de manera similar.