Introduction
Miljöberikning (EE) är en experimentell paradigm som används för att undersöka effekterna av en komplex och utmanande miljö som inte betona djur 1. EE är ett djurstall teknik består av ökad utrymme, fysisk aktivitet och sociala interaktioner, vilket i sin tur ökar sensoriska, kognitiva, motor och social stimulans 2. Igloos, löphjul, tefat hjul, rör labyrinter och andra föremål i boendemiljön främja denna sensoriska kognitiva, sociala och motorisk stimulering genom att främja prospektering och interaktion. Layouten av objekten i inneslutningen ändras regelbundet för att presentera en ny miljö, som mössen tvingas att anpassa sig. Denna strategi ger milda och korta utmaningar som inducerar en fördelaktig, godartad och hälsosam adaptiva svar, som kallas eustress, i motsats till en mer obehaglig, fientlig miljö eller maladaptiv nöd 3,4. Genom att främja eustress och begränsa skadliga nöd, mössvisar en mängd olika gynnsamma fenotyper.
EE är en tillförlitlig experimentell modell med ett brett spektrum av tillämpningar, samtidigt som saknar element som traditionellt tänkt på så stressigt 1. Effekterna av EE på gnagare har studerats i mer än ett halvt sekel. I början av 1960-talet visade studier som kortikala kolinesterashämmare nivåer minskat och subkortikal kolinesterashämmare nivåerna ökade hos råttor som hölls i miljöer med ökad livsrum, ökat antal råttor, och en mängd träleksaker, labyrinter, och plattformar 5,6. Dessutom är EE associerad med många adaptiva förändringar i hjärnan, beteende, och metabolism i möss av olika åldrar och genetiska bakgrunder. Därför är EE en användbar paradigm för ett brett tillämpningsområde experiment som studerar effekterna av miljön på möss. EE effekter kan observeras hos möss så snabbt som en veckas exponering, och kan ses hos djur som gammal som arton månader 7. EE är ofta used i neurovetenskap och neurobehavioral experiment för att studera återhämtning av funktion, inlärning och minne 2. Dessutom har EE betydande inverkan på fenotypen av en mängd toxin kallas och transgena djurmodeller av mänskliga neurologiska sjukdomar inklusive Huntingtons sjukdom, Alzheimers sjukdom, Parkinsons sjukdom, epilepsi, stroke, och mer 2.
Men under årens lopp har det funnits oförenlighet med anrikningen designen gör jämförelser mellan studier från olika laboratorier svårt. Till exempel, var och en av studierna på EE effekter i förhållande till mänskliga neurologiska sjukdomar som anges ovan hade varierande parametrar till anrikning. Studien på Huntingtons sjukdom inrymt 4-6 möss i stora burar (44 x 28 x 12,5 cm 3) som innehåller kartonger, tunnlar, och lakan, samt trä- och plastföremål som byttes varannan dag 8,9. En av de studier som gjorts på Alzheimer &# 8217; s inrymt 20 möss i en större bur (1 m 3) innehållande 2 löphjulen, plaströr, kartonger och bomaterial som ändrades eller omarrangeras vecka 10. Många inställningar av EE har liknande teman som objekt att köra på eller gömmer sig i, men antalet möss per EE bostäder, vardagsrummet, och tiden för att ändra miljön varierar mycket.
De inkonsekventa utformningar av EE har lett till misslyckade replikering av EE effekter. Våra data om cancer och metabolism föreslår tillsammans att kombinationen av stimuleringar som i den följande detaljerade EE bostäder protokoll leda till betydande anti-cancer och anti-fetma effekter 14,15. Men skillnaden mellan EE inställningar som antagits av olika laboratorier kan påverka resultaten av EE, såsom framgår av ett misslyckat försök att återskapa EE effekter på tillväxten av specifika cancertumörer implanterade i möss 11. De olika resultaten kan bero på en mängd olika skäl sträcker from olika tillväxttakten för de tumörcellkulturer till vilken typ av tvättmedel som används för rengöring av bostäder utrustning 11. För att replikera resultat sett i våra experiment, krävs en speciell utformning av anrikning och djurhållning. Följande procedur detaljer EE bostäder som gör det möjligt för andra forskare att framgångsrikt replikera vår effektiva anriknings modell.
Protocol
De förfaranden som beskrivs nedan har godkänts av Institutional Animal Care och användning kommittén (IACUC) i Ohio State University.
1. Framställning av berikad miljö Före Bostads Möss
- Rengöring och underhåll av instrument.
- Kör stora anrikningslåren (120 cm X 90 cm X 76 cm) genom en bur tvätt. En typisk Animal Facility bur tvättprotokoll innehåller 5 till 6 tvättcykler, med den sista cykeln når 82 ºC. Hela tvätt bör ta cirka 40 minuter. Lufttorka bin.
- Om den stora anriknings bin, och andra bostads instrument, inte kan skickas via bur tvätt, sedan spraya och torka av insidan av behållaren med sporicid desinfektionsmedel enligt tillverkarens anvisningar. Torka av bin med en kranvatten indränkt pappershandduk eller 30% etanol och torka med en pappershandduk för att bli av med någon doft från föregående desinfektionsmedel.
- Använd plastic slangar, igloos med tefat typ hjul, och andra diverse plast Hutch liknande leksaker i EE. Tvätta dessa leksaker genom en bur tvätt. Om du inte har tillgång till en bur tvätt följa steg 1.1.1.1.
- Använd metall löphjulen i EE. Tvätta hjulen via en bur tvätt. Om färgen på hjulen börjar blekna så att hjulet blir bullriga när djuren körs på det, applicera en liten mängd vaselin där hjulet och axel ansluta.
- Använd trä stockar i EE. Rengör loggarna genom att ta bort alla sängkläder eller annat skräp för hand. Sterilisera sedan loggarna genom autoklavering dem på en torr cykel eller textil cykel, som når en temperatur på 121 ° C i 15 minuter.
- Använd burar mellan dimensionerna 29 cm x 18 cm x 12,5 cm och 30,5 cm x 19 cm x 14 cm för att hålla en utfodring och dricka tråd rack.Cut ett hål minst 5 cm i diameter från den främre botten av buren för möss att gå in och ut ur från EE. Rengör dessa utfodring burar genom bur tvätt.
- Kör stora anrikningslåren (120 cm X 90 cm X 76 cm) genom en bur tvätt. En typisk Animal Facility bur tvättprotokoll innehåller 5 till 6 tvättcykler, med den sista cykeln når 82 ºC. Hela tvätt bör ta cirka 40 minuter. Lufttorka bin.
- Ställa in miljön
- Häll ¼-tums majskolv försöksdjurs sängar i det stora anriknings bin. Täck hela golvytan av behållaren till ett djup av 2-2,5 cm med strö.
- Placera två eller tre stockar i ett hörn av behållaren. Placera loggar i hörnet för att binda en yta på ca 1225 cm 2. I området binds av stockarna, placera tre igloos med tefat hjul på toppen. Se till att hjulen inte vidrör väggarna i soptunnan, loggarna, eller varandra, så att det finns tillräckligt med utrymme för hjulen att snurra fritt.
- Piece ihop plaströr så att flera vapen gren ut från centeral anslutningsstycket. Placera denna slang i mitten av behållaren.
- Vid två hörn av bin, placera en matnings bur varje fylld med samma strö som bin, och hålet på framsidan av matnings buren ska vara vänd mot mitten av facket. Ovanpå dessa utfodring burar en ren mat och vatten trådbör placeras för att hålla mat och vatten. Placera inte locket på buren. Få mat och vatten i buren trådarna.
- Placera tre metallhjul i papperskorgen, men inte alla bredvid varandra. De tre olika typerna av hjul är en 11,5 cm hjul, en 20,5 cm hjul, och ett 28 cm hjul. Placera sedan 4-5 mer plast hutch liknande leksaker eller tunnlar i hela anriknings bin.
- Täck bin med mikro-isolatorfilterpapper. Använd bindemedel klipp att klippa filterpapper för facket.
- Novelty är viktigt för EE. Använd denna inställning som ramen för EE och variera placeringen av ovan nämnda burar, objekt och leksaker för att skapa en ny miljö för djuren.
2. Bostads djuren
- Ras djur för experiment i regelbundna laboratoriet bostäder och inte EE. Eventuellt placera djuren i EE så tidigt som 21 dagars ålder vid avvänjning. Genotyp och öron punch / tagg djur före EE bostäder.
- När du placerardjur i anriknings bin från en vanlig bur, placera buren i papperskorgen på sin sida så att djuren kan röra sig fritt från standard buren till anriknings bin. Låt inte de häckande material som skall överföras till anriknings bin.
- House 10-20 djur i samma ålder, kön och genetiska stam i EE.
3. att bevara miljön och observera möss under studietiden
- Dagligen
- Lugnt följa djuren efter tecken på sjukdom eller ångest. Om det behövs, försiktigt hanterar djuren för att ytterligare kontrollera hygienkrav. Spela onormala observationer och konsultera en hälso tekniker eller veterinär personal om djuret visar tillstånd som kräver avlägsnande från experimentet.
- Ge topikal behandling med trippel anti-biotiska salva för små sår eller sårskorpor. Om ett djur måste bort på grund av en kronisk sjukdom eller skada, ta bort djuret från försöket för dödshjälp. Om djuruppfylla tidiga kriterier för tillsyn djurförsök vård kommitté eller veterinär borttagning, inte tillbaka djuren tillbaka till EE.
- Två gånger i veckan
- Kontrollera foder och vattennivåer. Se till att foder och vatten kommer att pågå under de närmaste 3-4 dagarna. Räta upp löphjul och anriknings leksaker så att de sprids ut och kan användas av möss. Byt ut som är alltför smutsiga.
- Veckovis
- Ersätt vattenflaskor med rena vattenflaskor. Ordna berikningsanordningar på ett sätt som följer setup i avsnitt 1.2. men skiljer sig från installationen av föregående vecka.
OBS: Om ett experiment kräver att djuren tas bort från berikad miljö för en verksamhet (inspelning kroppsvikt, blodprovstagning, beteende test, etc.) är det bäst att ordna miljön medan djuren är borta från anriknings bin. - Rengör matnings burar i EE för hand eller skicka det via bur tvättasom beskrivs i avsnitt 1.1.5. Byt tråd rack som håller mat och vatten med rena galler också.
- Följ anvisningarna i avsnitt 2.2. när du placerar djuren tillbaka i vinst. Spot kontrollera resten av den stora anriknings bin och ren, om så erfordras, genom att ösa ut smutsiga strö och sprider ner nya rena sängkläder.
- Ersätt vattenflaskor med rena vattenflaskor. Ordna berikningsanordningar på ett sätt som följer setup i avsnitt 1.2. men skiljer sig från installationen av föregående vecka.
- Varannan vecka
- När du utför vecko djurhållning, rengör leksaker för hand eller skicka via bur tvätt som beskrivs i avsnitt 1.1.2. Om det behövs, placeras mössen i en standard mikro-isolator bur för den tid som krävs för att rengöra.
- Månadsvis
- Rengör majoriteten av strö ut genom att flytta anriknings leksaker och utfodring burar och skopar upp kull. Ersätt med färska strö. Säkerställ att det finns en tum av sängkläder på alla områden av buren. Om det behövs, placeras mössen i en standard mikro-isolator bur för den tid som krävs för att rengöra.
- Varje treMånader (eller i slutet av experiment)
- Ta bort alla sängkläder och leksaker och rena och desinficera anriknings bin som beskrivs i avsnitt 1.1.1. Om experimentet pågår, ersätt med nya sängkläder, utfodring burar, sortiment av leksaker och sedan tillbaka mössen till papperskorgen.
- Desinficera hela anriknings bin oftare än var tredje månad om det krävs av forskningsinstitution där EE är inrymd. Om detta är nödvändigt och en annan stor anrikning container finns, inrätta ytterligare anrikning behållaren som beskrivs i avsnitt 1.2. och överföra djuren till den nya behållaren, medan den föregående är att rengöras.
4. Kontrollboendeförhållanden
- Hysa djur i kontrollgruppen i mikro-isolatorburar med dimensionerna 30,5 cm x 19 cm x 14 cm. Inkludera en trådställning i buren för att hålla livsmedel och en vattenflaska, om buren inte är ansluten till ett automatiskt bevattningssystem.
- Ge samma majskolv sängkläder på kontroll bur som är i EE. Tillhandahålla en 4 cm x 4 cm nestlet för mössen att göra ett bo av.
- Byt ut och / eller rengör burar, utfodring ledningar, mat och vatten en gång i veckan. Rena burar och galler genom bur tvätt eller som beskrivs i avsnitt 1.1.1.1. Rengör burarna oftare om djur urinerar oftare eller om dricksvatten läcker på sängkläder.
- Övervaka djurens hälsa i kontrollhuset dagligen. Se till att djuren har gott om mat och vatten.
- House 3 ~ 5 möss av samma kön i vanlig mus bur. Inte ge någon leksak, rör, eller hutch i buren.
- Institutionella försöksdjurs vårdinrättning hälsa och laboratorietekniker kan ge djurhållning för dessa kontrollmöss.
- Håll djur på en 12 timmars ljus / mörker-cykel som är för mössen i EE.
Representative Results
EE påverkar tillväxtfaktor uttryck ökar nybildning av nervceller och överlevnad av celler i det centrala nervsystemet (CNS) 12,13. Senare studier har visat att denna teknik för EE leder till en märklig undertryckande av cancertillväxt i tre mus cancermodeller inklusive B16 melanom, MC38 tjocktarmscancer och APC min / + mus som innehåller en nedärvda mutation och är mycket känslig för spontan adenom bildning i tarmarna 14. Resultaten i figur 2 bekräftar undertryckandet av B16-melanom tumörtillväxt implanteras i möss som exponerats för EE i 5 veckor (~ 80% minskning av tumörmassa). Cancer tillväxthämning var även observerats hos möss när EE inleddes efter det att tumören hade fastställts 14. EE resulterade i större inhibering av melanom tillväxt i fettrik kost-inducerad fetma möss (~ 70% minskning av tumörmassa) än i möss med normal vikt (~ 50% minskning av tumörmassan) 14. EE ind uced signatur förändringar i serum biomarkörer inklusive robust droppe leptin, minskning av IGF-1, en ökning med adiponectin nivåer 14.
Dessutom, denna teknik för EE minskar fetma ökar energiförbrukningen, leder till resistens mot dietinducerad fetma, och inducerar ett vitt till brunt fett fenotypisk omkopplare genom att aktivera hypotalamus-sympathoneural-adipocyt axeln 15. Minskningen av fetma sågs så tidigt som sex dagar som utsätts för EE (Figur 3A, B) och bekräftades på nytt i djur som utsatts för EE i fyra veckor (Figur 3C, D). Det är också viktigt att notera att en anti-cancer och anti-fetma effekter i samband med EE kan inte redovisas av fysisk aktivitet ensam, och, två, kan EE effekter återges genom överuttryck av BDNF (BDNF ) i hypotalamus 14,15.
2874fig1.jpg "/>
Figur 1: Berikad miljö bin ställa in berikad miljö har en yta på 120 cm x 90 cm och har två modifierade burar, löphjul, igloos med fat hjul, plastslangar, trä stockar och andra leksaker plast anrikning..
Figur 2: Berikad miljön minskar tumörtillväxt i C57BL / 6 hanmöss Tre veckor gamla hanmöss var huset i EE eller kontroll burar för 5 veckor före tumörympning.. B16 melanom-tumörvikten vid 17 dagar efter inokulering av 10 5 celler per djur subkutant ovanför den högra flanken (n = 10 per grupp. Students t-test, * p <0,05).
s / ftp_upload / 52.874 / 52874fig3c.jpg "/> 
Figur 3: Berikad miljön minskar fetma i C57BL / 6 hanmöss Tre veckor gamla möss utsattes för EE;. en grupp för 6 dagar, en annan för fyra veckor. (A) Sex dagar i EE minskade fettkudden vikter (n = 5 per grupp. Students t-test, * p <0,05). (B) Sex dagar i EE minskade fettkudde vikter i förhållande till kroppsvikt (n = 5 per grupp. Students t-test, * p <0,05). (C) Fyra veckor i EE minskade fettkudden vikter (n = 5 per grupp. Students t-test, * p <0,05). (D) Fyra veckor i EE minskade fettkudde vikter i förhållande till kroppsvikt (n = 5 per grupp. Students t-test, * p <0,05). BAT: brun fettvävnad, IWAT: inguinal vit fettvävnad, EWAT: epididymal vit fettvävnad,RWAT: retroperitoneal vit fettvävnad.
Discussion
De robusta effekter EE på genuttryck i hjärnan, minskad fetma och cancertillväxt hos möss är starkt beroende av forskarens förmåga att upprätthålla den nya miljön och hantera djuren på ett sätt som främjar fysisk aktivitet, social interaktion, och kognitiva utmaningar, men inte nöd djuren. Det finns två viktigaste stegen i förfarandet att komma ihåg. Först kom ihåg att ändra placeringen av leksaker, objekt och burar varje vecka. Även om leksaker och objekt kan vara densamma från föregående vecka, mössen uppfattar miljön som romanen. Ändra leksaker och föremål sig med olika listor varannan vecka. För det andra, kom ihåg att hålla miljön ren. Om den smutsiga strö inte får avlägsnas, kan de ökade kvävehalter vara en stressfaktor för djuren.
Dessutom finns det många tekniker för att notera i detta EE protokoll. Användningen av olika eller unika leksaker och olikamotiv av plastslang labyrinter uppmuntras. Miljön kan vara utmanande men bör inte utgöra ett hot mot djurens hälsa. Dessutom, akta dig för leksaker som är dysfunktionell, eftersom dysfunktionella leksaker ökar risken för armar och ben mus fastnar, eller kan vara giftigt för djuren om de konsumeras genom att tugga på det. En konstant EE är användningen av tre tefat hjul ovanpå igloos, sekvestrerade till ett hörn eller på sidan av facket med 2-3 stockar. Denna inställning att köra tefat bakom stockarna har funnits i alla våra studier anriknings. I termer av användning och placering av de andra objekten, ovan är beskrivningen av layouten en grundläggande blå utskrift av EE installationen. Variation av installationen med denna grundläggande ramen för plaströr, löphjul, kör tefat, burar och loggar bör ge en tillräcklig ny miljö för att återge de rapporterade resultaten.
Om man arbetar med transgena djur som har diabetes eller andra metaboliskasjukdomar, ägna stor uppmärksamhet åt mat och vattenförbrukning för att säkerställa att djuren inte får slut på mat och vatten. Om djuren har diabetes, kommer de att kissa mer, så strö av EE huset kan behöva plats kontrolleras och rengöras oftare. Platserna i EE huset som behöver strö avlägsnas oftast är hörnen. Kom ihåg att justera hjulen och andra leksaker, så att de kan användas av djuren. Djuren är kapabel att köra tefat hjul i sängkläder och knackar löphjul över. Om djuren är unga, 3 till 5 veckors ålder, kan de gräva under burarna i EE och gömma samman under det, lämnar forskaren clueless om var djuren är. När du tar bort nedsmutsade sängkläder, byte av leksaker, eller rengör burar, föreslås det att sätta djuren i en ren standard bur så att inte stressa dem när du justerar sin omgivning. Det är lättare att få alla djuren i en bur om de har färre ställen att gömma sig i ENVironment. Därför, ta bort leksaker före binda djuren i en bur gör processen enklare. Dessutom, inte placera mer än 5-6 djur i en enda standard bur i väntan för rengöring eller anpassa sin EE miljö. De handjur i EE kan vara aggressiv i synnerhet när EE initieras i vuxenlivet. Därför är det viktigt att observera miljön för alla sårade eller döda djur.
Dessutom typiska antalet djur som vi hus i EE för denna stora storleken på behållaren är 10-20 möss. Antalet djur andra forskare använder för EE varierar, med hjälp av cirka 10 eller mindre möss, och storleken på buren eller bin skall beaktas vid beräkningen av antalet djur som hus i EE. Med alltför många djur i en levande miljö kan leda till aggression hos hanmöss. Mössen vi har inrymt i EE har varit C57BL / 6 bakgrunder. Möss av andra stammar kan vara mer eller mindre aggressiva, eller mer benägna att hälsofrågor idenna EE inställning. Detta bör beaktas vid fastställandet av djurhållning plan för mössen och berikad miljö.
Fyra veckor EE bostäder är tillräcklig för att inducera minskning av fetma, droppe leptin nivå, och hämning av B16 melanom tillväxt. Längre EE kan leda till starkare effekter på metabolism och cancer hämning. Om möss genomgår kirurgiska ingrepp under eller före exponering för EE, kan de hållas med suturer intakta. Huruvida djur svarar bra på just detta EE installation med kirurgiska häftklamrar eller katetrar intakta har inte studerats. Dessutom är vi för närvarande undersöker hur denna EE påverkar livslängden eller healthspan av äldre djur. Preliminära data tyder på att kvinnliga C57BL / 6-möss, 10 månaders ålder, svara på EE på samma sätt som unga möss. En begränsning av EE huset är tillmötesgående en så stor bin i djuranläggning utrymme, och företrädesvis i ett könsspecifika rum. Således framtida studier på effjekt av EE i mindre skala, samt att hitta leksaker som är lätta att rengöra, tåla rengöring hög temperatur och är säkra att djurens hälsa, kommer att förbättra tillämpningar av EE i metabola och cancerforskning.
Disclosures
Författarna förklarar ingen intressekonflikt.
Acknowledgments
Detta arbete stöddes av NIH bidrag CA163640, CA166590 och AG041250 till LC.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Large enrichment bin (120 cm x 90 cm x 76 cm) | Custom made. | Custom made. | Made of polypropylene. Edges of the bin are 1.5 cm thick. |
| Large enrichment bin alternative (120 cm x 110 cm x 76 cm) | Global Industrial | 155202 | If necessary, this bin works as an alternative to the one above. |
| Habitrail Mini tubes | Habitrail | 62720; 62705; 62725; 62715; 62054 | - |
| Plastic igloos with saucer wheels | Bio Serv | K3327; K3250 | - |
| Metal Running Wheels | Super Pet | 61392; 61394; 61396 | - |
| Manzanita Wood Gnawing Sticks, 3" | Bio Serv | W0016 | |
| Mouse Tunnels | Bio Serv | K3322 | - |
| Mouse cages that go in the large EE bin. | Lab Products Inc | 10027 Mouse Cage | - |
| Cage Klenz 180 Alkaline Cage Wash Detergent, Cage Klenz 250 Acid Detergent | Steris Life Sciences | 1K1802; 1K2502 | These detergents are used in the cage wash for the toys, large enrichment bins, and cages. |
| Sporklenz | Steris Life Sciences | 6526Q8 | Alternative sporicide/disinfectant to washing toys, bins, and cages in cage wash. |
| Bed-O-Cobs 1/4" bedding | The Andersons, Inc. | 4B | Corn cob bedding is 1/4" in diameter. |
| Nestlets for control housed mice | Ancare | Cotton squares |
References
- Cao, L., During, M. J. What is the brain-cancer connection. Annu. Rev. Neurosci. 35, 331-345 (2012).
- Nithianantharajah, J., Hannan, A. J. Enriched environments, experience-dependent plasticity and disorders of the nervous system. Nat. Rev. Neurosci. 7, 697-709 (2006).
- Milsum, J. H. A model of the eustress system for health/illness. Behav. Sci. 30, 179-186 (1985).
- Selye, H. Stress Without Distress. , McClelland and Stewart. Toronto. (1974).
- Krech, D., Rosenzweig, M. R., Bennett, E. L. Effects of environmental complexity and training on brain chemistry. J. Comp. Physiol. Psychol. 53, 509-519 (1960).
- Rosenzweig, M. R., Krech, D., Bennett, E. L., Diamond, M. C. Effects of environmental complexity and training on brain chemistry and anatomy: A replication and extension. J. Comp. Physiol. Psychol. 55, 429-437 (1962).
- Frick, K. M., et al. Effects of Environmental Enrichment on Spatial Memory and Neurochemistry in Middle-Aged Mice. Learn. Mem. 10 (3), 187-198 (2003).
- Dellen, A., Blakemore, C., Deacon, R., York, D., Hannan, A. J. Delaying the onset of Huntington’s in mice. Nature. 404, 721-722 (2000).
- Spires, T. L., et al. Environmental enrichment rescues protein deficits in a mouse model of Huntington’s disease, indicating a possible disease mechanism. J. Neurosci. 24 (9), 2270-2276 (2004).
- Jankowsky, J. L., et al. Environmental enrichment mitigates cognitive deficits in a mouse model of Alzheimer’s disease. J. Neurosci. 25 (21), 5217-5224 (2005).
- Westood, J. A., Darcy, P. K., Kershaw, M. H. Environmental Enrichment does not impact on tumor growth in mice. F1000Research. 2, 140 (2013).
- Cao, L., et al. VEGF links hippocampal activity with neurogenesis, learning. Nat. Genet. 36 (8), 827-835 (2004).
- Young, D., Lawlor, P. A., Leone, P., Dragunow, M., During, M. J. Environmental enrichment inhibits sponta- neous apoptosis, prevents seizures and is neuroprotective. Nat. Med. 5 (4), 448-453 (1999).
- Cao, L., et al. Environmental and genetic activation of a brain-adipocyte BDNF/leptin axis causes cancer remission and inhibition. Cell. 142 (1), 52-64 (2010).
- Cao, L., et al. White to brown fat phenotypic switch induced by genetic and environmental activation of a hypothalamic-adipocyte axis. Cell Metab. 14 (3), 324-338 (2011).
