Burada büyük kortikal infarkt ve sürekli açıklarını oluşturmak için karotis arter eşzamanlı tıkanıklığı olan yaşlı dişi farelerde kalıcı distal orta serebral arter oklüzyonu üretmek için bir protokol mevcut. Biz 24 saat ve inme sonrası 8 hafta yapısal MRI kullanarak lezyon büyüklüğü teyidini göstermektedir.
İnme, tipik olarak karotid (veya başka bir arteryel), ateroskleroz, yüksek tansiyon, obezite ve diyabet gibi eşlik eden bir dizi yaşlı kişilerde ortaya çıkar. Hayvanlarda inme tedavileri değerlendirirken Buna göre, mükemmel yüz geçerliliği olan bir model seçmek önemlidir. İskemik inme, tüm inmelerin% 80'ini ve bunların büyük çoğunluğu genellikle vücudun karşı tarafta kalıcı plegia veya parezi neden sensorimotor korteks etkileyen infarkt uyaran, orta serebral arter (MCA) topraklarında meydana gelir. Biz bu video sürekli sensörimotor sakatlık ve önemli kortikal infarkt neden yaşlı sıçanlarda iskemik inme, üretmek için bir yöntem ortaya koymaktadır. Özel olarak, bu arter kısa bir bölümü kapamak için diatermi forseps kullanılarak, yaşlı dişi farelerde sürekli uzak orta serebral arter oklüzyonu (MCAO) neden olur. lezyona ipsilateral tarafta karotis arter p daha sonraermanently tıkanmıştır ve kontralateral karotid arter geçici 60 dakika kapatıldı. Biz 24 saat ve inme sonrası 8 hafta yapısal T2 ağırlıklı manyetik rezonans görüntüleme (MRG) ile infarkt boyutunu ölçmek. Bu çalışmada, ortalama enfarkt hacmi 24 saat sonra aynı taraftaki yarıkürenin% 2.0 (standart sapma) ±% 4.5 (Gerriet denklemi kullanarak şişme beyin için düzeltilmiş, s = 5). o patofizyolojik mekanizmalar ve yeni tedavilerin aydınlatılması açısından önemlidir sürekli sensörimotor açıkları uyarılmasını, izin gibi bu modelin mümkün ve klinik olarak önemlidir.
İnme şu anda dünya çapında üçüncü ölüm en sık nedenidir ve sakatlık 1 önde gelen nedenidir. Tüm inmelerin% 80'ini oluşturur İskemik inme, sık sık etkilenen taraf 2-4 motor fonksiyon ve dikkat duyu kaybı (örneğin, propriyosepsiyon), neden kortekste infarkt sonuçlanır. Orta serebral arter (MCA) Willis çevresinden tedarik çizer ve internal karotis arter 5 kaynaklanıyor gemilerin en büyüğüdür. MCA bu bölgede inme tüm iskemik inme 6,7% 65 için muhasebe ile en yaygın iskemik inme etkilenen beyin damarı vardır. MCA oklüzyonu 7 tam yerini bağlı olarak değişir kortikal ve subkortikal bölgeler ve MCA inme nedeniyle nörolojik anormallikler hem tedarik etmektedir. Proksimal MCA tıkanıklıklar hem corti kapsayan geniş infarkt lenticulostriatal arterler ile derin toprakları etkiler ve nedencal ve subkortikal bölgeler. Buna karşılık, kan akımının sadece kortikal bölgeleri mahrum daha uzak tıkanıklıklar küçük kortikal infarktlar üretme eğilimindedir.
Büyük popülasyon çalışmalarında, insan inme lezyonlar ipsilateral hemisferde 8,9 5-14% aralığında; Malign inme inmelerin% 10'unu ve intrakranial basıncı azaltmak için bir hemikraniektomi gerektiren, büyük infarktlar yol açmaktadır ve daha küçük lezyonları olan hastalar 10 hayatta kalmak için daha olasıdır. Biz birçok insan vuruş olarak yarımkürede benzer bir oranda işgal lezyonlar üreten bir tekrarlanabilir bir model ortaya koymaktadır.
İnme heterojen bir hastalık olduğu; iskemik inmelerin% 75 (intrakranial küçük damarların tıkanması) ya laküner infarktlar tarafından uyarılmaktadır; kardiyoembolik inme; inmelerin% 30'unu veya büyük arter aterosklerozu. Semptomatik ateroskleroz en sık noktasında ortak c gözleniriç ve dış karotid arter 11 içine arotid arter (CCA) dalları.
onun fizyopatolojisini simülasyonu ve inme risk faktörleri içermelidir mümkün olduğunca inme klinik öncesi modellerde insan durumuna benzer olmalıdır. Iskemik inme% 92 65 yaş üstü kişilerde ortaya çıkar ve daha önce 12 tartışıldığı gibi diğer risk faktörleri, obezite, yüksek tansiyon ve ateroskleroz yer alır. daha bu risk faktörlerini temsil etmek, doğal durumun patofizyolojik bazı özellikleri paylaşabilir bir model kullanılması tavsiye edilir. Bu protokol, biz karotid arter yoluyla ileri yaş ve tıkalı kan akışını dahil ettik.
Orta serebral arter tıkanıklığı klasik modeli (MCAO) kan anterior akışı ve orta serebral arterler azaltır proksimal MCA tıkanıklığı, intraluminal filament modelidir. Bu modeli kullanarak kısa tıkanıklığı süreleri l odaklanırsubkortikal bölgeye esion, uzun tıkanma süreleri yaşlı farelerde daha yüksek bir ölüm oranı elde hem kortikal ve subkortikal alanlarda alanları, işe büyük lezyonlar neden olabilir oysa. Buna karşılık, bizim grup tarafından kullanılan model kraniotomi ve bipolar dağlama forseps kullanarak MCA küçük bir kısmının kan ve imha pıhtılaşması ardından dura açılmasını kullanılmasını içermektedir. Bu diatermi modeli Tamura ve ark 1981 kağıt uyarlanmıştır. 23 ve kranyektominin kullanımı intrakranial kapalı kafatasının bir özelliktir basıncı, ve daha yüksek tekrarlanabilirlik sonuçları ve cerrahi kohortta daha düşük ölüm oranına yükseltilmiş sınırlayabilir başka bir model 13 ile karşılaştırıldığında. Tekrarlanabilir infarkt ve sürekli sakatlık üretmek için biz (Chen ve diğ. 14 Biz kullanmak non-invazif T2-ağırlıklı manyetik rezonans görüntüleme başına MRG distal CCA kalıcı proksimal CCA tıkamak ve geçici tıkamak) Kapsamını ve beyin enfarktüsü konumunu ve sensorimotor kortekste şişme beyinde derecesini değerlendirmek için.
kemirgenlerde MCAO genellikle insan inme modellemek için kullanılan bir tekniktir. Bu model protokolü dikkat edilmesi gereken bir kaç detay var. İlk olarak, enfarktüs büyüklüğünü ve bir çalışmada ölümlerin sayısı etkilediği için deney boyunca hayvanın vücut ısısını korumak için esastır. Doğru CCA geçici oklüzyon sırasında izofluran durdurma ve izofluran maruz kalma azaltarak hayatta kalma oranlarını artırmak için bir ısıtılmış, sessiz bir ortamda sıçan tutmak mümkün olabilir. Araştırmacılar, ek indüksiyon stresinden daha ağır basar kısa anestezi süre olup olmadığını dikkate almalıdır. Sıçanların (örneğin, MCA dallanma) damar sistemi içinde ve hayvanlar 22 kohortu arasında değişmektedir. Yeni bir çalışma başlatırken bu akılda önemlidir. Farklı CCA oklüzyonu katı değerlendirilebilir (ör, 30, 45, 60 ve 90 dakika). Bu çalışmada, 60 dakikalık bir tıkanma süresi kullanılır. Diğer çalışmalarda, biz 45 buldukdk tıkanıklıklar aynı büyüklükte bir kortikal infarkt ama sağkalım oranları anekdot kanıtlar ile neden olmaktadır. Buna göre, cerrahlar kısa tıkanıklığı süre ile başlamak gerekiyor (örneğin, 30 dk) Gerektiğinde tıkanıklığı kez artırmak için ancak o zaman yeterli lezyon hacimleri (ve / veya gerekli davranışsal açıkları) elde edilir olmadığını görmek ve. Davranışsal açıkları aynı tıkanıklığı süreleri ile yaşlı sıçanlara kıyasla erişkin sıçanlarda devam edilmez.
MR lezyon hacimleri çalışma hedeflerinize uygun olup olmadığını (belli bir tıkanıklık süre sonra) yargılamak için kullanılabilir. Küçük bir lezyon (40 üzerinden) az on 0,5 mm koronal dilim yayılan olacaktır. Bir orta boy lezyon on ve yirmi koronal dilimleri arasında yayılan olacaktır. Büyük bir lezyon yirmi otuz koronal dilimleri arasında yayılan olacaktır. Çok büyük bir lezyon kırk dilim fazla otuz yayılan olacaktır. bizim deneyim, çok büyük lezyonlarda (otuzdan fazla dilim) ve / veya herniasyon Acros kanıtı olan sıçanlars orta hat genellikle kötü prognoz: kısa tıkanıklığı süreleri düşünülebilir. MR da enfarktüs konumunu değerlendirmek için yararlıdır: biraz daha kaudal bulunan ve biraz daha rostrally bulunmaktadır.
Her iki karotid arter vagus siniri ayıran ekstra özen gösterin. Ral (törpüleme) inme cerrahi sonrası oluşabilir ve nedeni henüz belli olmasına rağmen bu, bazı hayvanlarda sinir hasarına bağlı olabilir: bizim deneyim, prognoz bu hayvanlar için çok kötü olduğunu ve genellikle insanca onları öldürmek için tavsiye edilir.
tekrarlanabilir kortikal infarktlar ve yaşlı sıçanlarda kabul post-operatif sağkalım oranları kalıcı diatermi MCAO model sonuçları. teknik, bununla birlikte, bir stereo mikroskop altında invaziv cerrahi gerektirir. Hayvanların ameliyat sonrası iyi kurtarmak istiyorsak aseptik teknik korumak için önemlidir. Bakım, teşhir ve arteri koagüle ederken MCA zarar vermemeye dikkat edilmelidirve kortikal yüzeye zarar enfarktüslü alanın bir parçası olabilir korteks, aksi açıkta kalan alanı en aza indirilmelidir. Prosedür geliştirmek ve çalışma, örneğin aday terapileri test gerçekleştirilmeden önce oklüzyon kez tutarlı infarkt elde etmek ve tespit etmek mümkün olduğu kadar çok bir deneyim alınması tavsiye edilir. Deneyci ( "blok randomizasyon") olası cerrahi oturumları içinde herhangi bir tedavi rastgele gerekir. Bu (geçici MCA ligasyon yerine diaterminin kullanılmadığı sürece) bu model MCA reperfüzyon içermeyen fazlalaştı. Ölüm bu büyük kortikal infarktlar yaşlı sıçanlarda yüksek olabilir ama kısa oklüzyon süreleri kullanarak ve mümkün olan yerlerde (örneğin oklüzyon sırasında) genel anesteziye maruz kalma minimize ederek ölümlerini azaltmak mümkün olmalıdır. Izofluran düşük düzeylerde izin verebilecek bir taşıyıcı olarak% 70 N 2 O ve% 30 O 2 kullanımı kullanılacak: isoflu bu azaltılmış pozlamaRANE yüksek hayatta kalma oranları ile sonuçlanabilir.
Başka bir nokta dikkate Bu protokolde akut CCA oklüzyonu ile simüle oysa ateroskleroz, aşamalı bir süreç olmasıdır. Ancak, kan akımı ve sürekli açıklarında da önemli azalma birçok inme hastalarında meydana gelen tandem oklüzyonlarını simüle. Sıçanlarda kalıcı uzak MCAO tandem olmadan CCA oklüzyonu tekrarlanabilir 14 vuruş ikna etmek için başarısız: tandem CCA tıkanıklığı olmadan, dahası, biz bulduk önemli spontan iyileşme olduğunu 8 hafta boyunca felç tedavilerinin uzun süreli davranış değerlendirme engeller oluşur. Bunun aksine, distal MCAO tandem CCA oklüzyonu, yaşlı farelerde uzun vadeli açıkları indüklediğini göstermektedir.
Sonuç olarak, sıçanlarda bu işlem bir yeni tedavilerin ve yeniden aydınlatılması test etkinleştirmek için kullanabileceğiniz sürekli engelli insan durumda görülenlerden boyutu ve konumu benzer felçlere neden oluriskemik inme sonrası çifti mekanizmaları.
The authors have nothing to disclose.
We would like to thank Prof. I Mhairi Macrae and Dr. Debbie Dewar, University of Glasgow, who kindly hosted CW and DD for training in this procedure. The research leading to these results has received funding from the European Research Council under the European Union’s Seventh Framework Programme (FP/2007-2013) / ERC Grant Agreement n. 309731 to LM. This work was also supported by a “Serendipity Grant” from The Dunhill Medical Trust to LM [grant number: SA21/0512].
Carprofen | Norbrook | Vm No; 02000/4229 | give 0.25 mg/kg |
Atropine Sulfate | AmTech | RXATRINJ-100 | |
Alcohol swabs | UHS | 20021 | |
Lidocaine cream (Emla) | AstraZeneca | 0012901 | Apply a pea sized drop to the shaved neck and temporal regions |
Homeothermic Blanket System | Harvard Instruments | 507222F | |
Forceps | Fine Science Tools | 11019-12 | |
Isoflurane | Abbott | B506 | |
Silk sutures | Harvard Apparatus | 723288 | |
Cautery system | Eschmann | ||
0.25 mm Jeweler caurtery forceps | Eschmann | 8330349 | |
fine Dumont forceps | Fine Science Tools | 11251-10 | |
Thumb driven saline drip system | |||
Vacusafe aspirator system | INTEGRA BIOSCIENCES | 158320 | |
16 mm coarse diamond coated Steel burrs | K801 104 016 | ||
Handheld dental drill | NSK | NSKVMAXVRE (Handpiece NSKEX6B) | |
Vannas Spring Scissors | Fine Science Tools | 15000-03 | |
Microvascular scissors | World Precision Instruments | 501790 | |
4-0 Vicryl sutures | Ethicon | ||
Vascular clip and applicator | |||
Operating microscope | Zeiss | ||
Compact Anaesthesia System Isoflurane K/F Single Gas | VetTech Solutions | ||
Carbon Steel Scalpel blades No. 10 | Swann-Morton | 201 | |
25g needles | Terumo | NN-2525R | |
syringes (1 ml and 5 ml) | Terumo | SS+01T1 / SS*05SE1 | |
Saline (Sodium Chloride 0.9%) | Fresenius Kabi | Pl 08828/0178 | |
cotton buds | Johnson and Johnson | 5000207582502 | sterilize before use |
gauze | sterilize before use | ||
Medical Imaging Package (Jim) | Xinapse | Free software | |
Statistical Parametric Mapping Software (SPM8) | UCL | Free software | |
Power Analysis Software (G*Power) | Universität Düsseldorf | Free software |