Summary
このプロトコルは、すぐに水の欠乏または応答を開始するフェージングサッカリン/ショ糖を必要としない標準的な方法とは逆に、ラットでのエタノールの応答をオペラントを開始するための新規かつ効率的な方法を説明します。
Abstract
オペラント経口自己投与方法は、一般に、動物におけるエタノールの補強性を研究するために使用されます。しかし、標準的な方法は、ラットでの応答オペラントを開始するために、サッカリン/ショ糖フェージング、水の欠乏および/または拡張訓練を必要とします。本論文では、すぐに実験者のために便利であるため、エタノールオペラント自己投与試験で甘味料を使用しての潜在的な交絡を排除し、水の欠乏またはサッカリン/ショ糖フェージングを必要としないエタノールの応答をオペラントを開始するための新規かつ効率的な方法を説明します。この方法では、Wistarラットは、典型的には、取得して訓練の2週間以内に20％エタノール溶液の自己投与を維持します。また、血中のエタノール濃度および報酬は正に30分自己投与セッションに相関しています。また、ナルトレキソン、エタノール自己投与を抑制することが示されているアルコール依存症のためのFDA承認薬げっ歯類では、用量依存的にこのようにしてラットにアルコールの補強性を研究するために、この新しいメソッドを使用することを検証し、アルコール摂取とラットの自己投与し、20％エタノール用のアルコールを消費する意欲を低下させます。
Introduction
薬物の強化効果を研究するための動物モデルの開発は、ヒトの薬物嗜癖を研究するための重要なツールであることが証明されました。より具体的には、オペラント自己投与は、経口消費エタノール溶液の正の強化効果を評価するための最も有効な手段の一つであり、広く使用されている行動モデルです。このようなモデルを開発するとともに、早期の問題は、ほとんどのげっ歯類のためのエタノールの高濃度の主要な嫌悪味、アルコールも1とほとんど、またはまったく経験を持つヒトで共有されている現象でした。この障壁を克服するための標準プロトコルは、水の剥奪を必要とする、および/またはサッカリンまたはスクロースは、自己投与の獲得と維持のために退色します。しかし、これら2つのアプローチが有利ではありません。彼らは単にエタノールの応答を開始し、買収の相対的な成功率を得るために、トレーニングの長い期間を必要とします。甘味料の使用はまた、潜在的なバイアスを紹介します自己投与データの解釈。これらの制限は、以下のプロトコルには適用されません。
簡単に言うと、サムソンや同僚2は 20％のショ糖の甘い溶液にエタノールを溶解した後、訓練の4週間にわたって甘さをフェードアウトすると、水中の10％エタノールの応答を開始するために必要とされることが示されています。また、信頼性の高いエタノール摂取は、通常6〜8週間1-3で達成されます。このアプローチは、非常に問題があります。研究者はエタノール自己投与を測定するために開始する前にまず、それは訓練の長時間を必要とします。食物制限された動物での食品配送レバーの薬物前研修の1日、および薬剤の応答を安定は、多くの場合、10で達成される- -対照的に、コカインやヘロインの静脈内自己投与は、0を必要とする12日間4,5。この方法の別の制限は、サッカリンおよびスクロースは、ラットへの非常にやりがいであり、脳の活性化パターンのを誘発するという事実でありますこのようにエタノール自己投与に交絡の可能性を導入する乱用薬物へのimilarは、6-9を研究します。最後に、一貫して失敗した取得および/または不十分な応答速度に起因した実験から除外したラットのかなりの割合で、取得および応答率1,10このメソッドショーの変動を用いて、エタノール溶液の自己投与を獲得したラット。
これとは対照的に、このプロトコルでは、我々は水の欠乏、ショ糖/サッカリンのフェージングまたは拡張アクセス訓練を必要としない水溶液中の20％エタノールの経口自己投与の獲得と維持のためのシンプルで効率的な方法を提示します。最近の研究は、経口エタノールこと自己投与は、このように我々のexperim中の20％エタノール溶液を選択するための理論的根拠を提供し、20％のエタノール濃度で自己投与時の最高エタノール摂取と逆U字型の用量反応曲線を表示見出さ内部のデザイン11。
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Protocol
すべての手順は、実験動物の管理と使用に関するNIHガイドに従って行われています。
1.動物実験住宅
- 逆に12時間の明暗サイクルで、温度（21℃）と湿度が管理された環境でペアで到着時に225グラム - コロニーで到着すると、家のWistar系雄性ラットは200の重量を量ります。
注：実験の理論的根拠によって、ラットは、単一収容されてもよいです。 - ラットは、実験を開始する前に、少なくとも1週間飼育し、光サイクルに順応し、毎日それらを処理することを可能にします。週一回、動物を計量。
- （水の欠乏が12応答を開始する必要はありません）ラットを実験の期間のために水を固形飼料および水道への無料アクセスを提供します。暗い試験室での明暗サイクルの暗期中にすべての行動試験を実施します。
注：私たちは日常的に若年成人Wistar系雄性ラット（生後日62から65）を使用していますが、このPをrotocolは、理論的には他のラットの系統だけでなく、性別および/または年齢の違いを調査するために適切であり得ます。
2.オペラントトレーニング
- 30.5×29.2×24.1センチメートルを測定し、寝具を敷いたグリッドの床と廃棄物のパンを含む同一のオペラントチャンバー内のすべての行動訓練とテストを実施する換気用排気ファンを装備した音減衰キュービクルに収納され、（臭気の手がかりを減らすために、動物の間で変更されました） 。
注意：ラットを訓練の1日目からオペラントコンディションによって訓練されている+ 1時間と暗サイクルの+ 8時間の間（レバー上の応答は、補強材を得ることが必要です）。アルコールのトレーニングの前にアルコール、また食品や流体整形への前露光はありません。 - 刺激が点灯し、シリンジポンプと液体カップレセプタクルに横方向に配置された2つの格納式のレバーで各オペラントチャンバーを装備。適切なソフトウェアを用いてコンピュータによる界面室と制御。
注意：ほとんどのベンダーは、チャンバを制御するために必要な自己投与の必要なすべてのコンポーネントを含むパッケージだけでなく、ソフトウェアおよびインタフェースを提供します。 - 製造元の指示に従って20％エタノール補強材の固定比率（FR）スケジュール（応答が応答のみ指定した数の後に強化されたオペラントスケジュール）を開始オペラントコンディショニングプログラムを書きます。例えば、固定比1において、ラット（FR1プログラムの一例の補助コードファイルのセクションを参照）、補強材を得るために1つの応答を生成しなければなりません。以下のコマンドを実行します。
- セッションの開始をマークするとアルコールの可用性を通知するために2つのレバーを拡張します。
注：エタノールに関連付けられたレバー上の1つのレバーを押して（アクティブ）だけでなく、隣接する飲料中の水に20％のエタノールを100μLの容量の送達によって報わとによって合図5-S付随するタイムアウト時間を開始され、の照明レバー上記キューライト。キュー光が研修の1日目に導入されます。 - それはスケジュールされた結果を持っていないが、タイムアウト期間中に、レコードが応答します。レコードの応答は、他のレバー（非アクティブ）に彼らは行動の結果を持っていることはありませんが、。注：非アクティブレバーは、非特異的挙動を評価するための対照として役立ちます。
- アクティブレバー（応答速度）での応答の数と獲得した20％エタノール報酬の数を記録します。
- 30分が経過した後に、セッションの終了を知らせるとアルコールの可用性の終わりを知らせるために2つのレバーを撤回。
- すべてのデータを保存し、アーカイブします。
- セッションの開始をマークするとアルコールの可用性を通知するために2つのレバーを拡張します。
- トレーニングセッションを開始する前に、各オペラントチャンバー内のすべてのデバイスの適切な機能（リトラクタブルレバー、流体ディスペンサー）を確認します。
- 190プルーフ（95％）を水道水で希釈し、エタノールから20％（v / v）のエタノール溶液を調製します。
注意：エタノール溶液を室温で維持することができます。応じて製造元、在庫エタノール溶液は、最大99.98％であってよいです。また、ほとんどの公開写本で、エタノールの濃度は、通常、ボリューム/ボリュームとして提示されている間、いくつかは、重量/容積としてそれらを提示することができる、ということに注意してください。 - 20％エタノール溶液で注射器を記入し、輸液ライン内に漏れや気泡がないことを確認してください。手動エタノールが正しく最初の補強応答からレセプタクルに配信されることを確認するために、輸液ラインを介してエタノールの小容積を押してください。ペーパータオルで容器を乾燥し、それがセッションを開始する前に空であることを確認してください。
- 20％エタノール補強のFRスケジュールを制御するソフトウェアをロードします
- 30分のセッションの間の水の欠乏のない自己投与の20％エタノールにFR1スケジュールの下operant-訓練および薬物ナイーブラット。
- 輸送ケージを使用して、試験室へのビバリウムからラットを輸送。
- 1室に各ラットを割り当てます。輸送ケージからそれぞれ個々のラットを取り、割り当てられた自己投与室内に置きます。
- 毎日一貫実験の条件を保つようにしてください。そのため、常に毎日同じ自己投与室にほぼ同時にラットをテストします。
- 20％のエタノール補強のFR1スケジュールを開始するソフトウェアを起動します。
- セッションの最後に、自己投与室からラットを削除し、飼育器に戻します。
- 手動で、アルコール溶液は、動物によって消費されていることを確認ペーパータオルを使用し、容器が乾燥しているかどうかを確認するために。代替的に、1または2 mLの注射器を使用して、消費されない体積を推定するために容器内に残留する液体を集めます。
注：より正確な測定（だけでなく、より高価な）のために、それはなめるの正確な数を可能にする液体カップコンセントに接続lickometerシステムで各チャンバを装備することが可能です自己投与セッションの間にラットによって生成sです。 - 表面消毒剤で各チャンバの壁と格子床を清掃してください。
- 使用後、70％エタノール溶液でそれらを洗浄することにより、注入ラインを維持します。使用しないときは、カビやほこりを避けるためにキャップを挿入します。
- 各セッションの後、生成されたデータを収集して分析。具体的には、アクティブレバーを押すの平均数、得られたアルコールの報酬の平均数だけでなく、非アクティブレバー押しの平均数を計算します。
注：ほとんどの論文では、アルコール消費はまた、グラム/キログラム（体重）でのエタノール摂取として提示されています。エタノール摂取は、以下の式を用いて計算することができます。
消費量と（ミリリットル） - 0.789グラム/ mLの - 室温で単一のボリューム/報酬およびエタノールの密度±獲得した報酬の数。
例えば、400グラムの重さのラットは20 REWAを獲得した場合20％（v / v）のエタノール溶液のRDS。
- （15セッションの最小値と最後の3セッション中に獲得した報酬の合計数の15％を超える変化なしとして定義される）性能の安定化までのセッションを5/6週を行っています。
注：ラットはFR1に安定なベースラインに達すると、オペラント条件付けプログラムは、アルコールの報酬を得るために必要な応答の数を増加させるために、製造者の指示に従って変更することができます。固定比は、例えば、偶発的な補強を最小限に抑えるために、FR2またはFR3に増加させることができます。 - 血中エタノール濃度を測定します。
- 自己投与セッションで得た報酬はラットによって消費されていることを確認するために、自己投与後の血中エタノール濃度を測定します。ラットは、安定なベースラインに達した後、直ちに次の外側尾静脈から血液を採取セッション。血管内に23 G針を挿入し、毛細管を使用して、50μLの血液サンプルを収集します。
- 10 mLのヘッドスペースバイアルに、50μLの血液サンプルを移し、1の50μL追加：内部標準として千イソプロピルアルコールを。エタノール標準から300ミリグラム/ dLの標準曲線10を準備します。メーカーの設定に応じてクロマトグラフィーカラム13とヘッドスペースサンプラによるプロセスのサンプル。
- 累進比率
- 報酬14を消費する動物のモチベーションを評価するために、累進比率（PR）スケジュールを使用してください。 PRは、補強材を得るために、応答の数が徐々に増加しているオペラントスケジュールである（他の点では、ラットは、連続する各報酬のために懸命に働くする必要があります）。
注：セッションをFRに反して、PRのセッションがタイムアウトされておらず、わずか30分で完了比ずに経過した一旦終了されます。- 自分に割り当てられたオペラント箱にラットを置き、許可それらは、補強のPRスケジュール下で20％のエタノールのために応答する：内セッション応答の要件やコストを増大させる（ すなわち 、レバー押しの数を除いて、（ステップ2.3参照）FRスケジュールで使用されるものと同一のすべての実験条件をキープ単一エタノール報酬を受信するためにアクティブレバーに必要）以下の式に従って：1、2、3、4、6、8、10、12、16、20、24、28、32 ...注：例PRプログラムは補足コードファイルのセクションで提供されています。
- 30分には報酬なしで経過するとPRのセッションを終了します。
注：ブレークポイントをPRセッション中に最後に完了応答要件として定義されています。
- 報酬14を消費する動物のモチベーションを評価するために、累進比率（PR）スケジュールを使用してください。 PRは、補強材を得るために、応答の数が徐々に増加しているオペラントスケジュールである（他の点では、ラットは、連続する各報酬のために懸命に働くする必要があります）。
3.テストアルコール自己投与のオペラントモデルの予測妥当性
注：ラットは、安定な自己投与のベースラインを取得した後（ステップ2を参照）、モデルの予測的妥当性を評価することが可能ですナルトレキソンの効力を試験する、20％のエタノール自己投与を減少させるのにアルコール依存症のための現在のFDA承認薬。応答が確実に高いときに我々は、トレーニング（FR2）の間に達成された最高FR上でこのテストを行うことをお勧めします。予測的妥当性が確立されると、モデルは、新しい薬物候補を評価するために使用することができます。
- 試験日前に、ラットに皮下生理食塩水の注射を与える二つの連続自己投与セッションの最小中またはエタノールの応答をするまで注入にそれらを慣らすために先立って自己管理セッションへの30分は、生理食塩水の注射によって影響されない（変化なしとして定義最後の2つのセッション中に獲得した報酬の合計数の15％以上）。
- 生理食塩水にナルトレキソンを溶解し、動物に注射を容易にするための中立性に到達するためにpHを調整します。 1.0ミリリットルの体積に薬物を注射/投与の皮下経路を使用して、セッションの30分前にkgです。注：リットルatureは0.1の範囲との間の用量の選択のための十分な証拠を提供 - は1mg / kgであり、そのように0.1、0.3および1mg / kgのは、このプロトコルで使用されています。
注：その効力は皮下注射が30倍より強力腹腔内注射15ということでと異なる場合がありますけれども研究は、ナルトレキソンの管理の両方の皮下および腹腔内経路の使用を示しています。ナルトレキソンの注射のために、このルートを使用することが検証され、0.1及び1mgの間の濃度の範囲内で様々な研究室によって複製されているようにこのような理由から、我々は皮下経路を使用することをお勧めします/ 12,15,16を kgです。 - 試験日の間、30分自己投与セッションの前に4ナルトレキソン投与サイクル（0、0.1、0.3および1mg / kg）を1渡って被験者間デザインでバランス/ランダムな順序でラットを注入します。
- 各投与サイクルの間、ラットは、2つの連続した自己管理セッションの最小またはのために応答するまで、薬物をウォッシュアウトすることができますエタノールは、ベースラインに戻るです。注：その結果、試験の終了時に、全てのラットは、4つの用量のそれぞれに注入されました。
- この段階の後、最も効率的な用量（1 mgの/キログラム）を選択し、プログレッシブ比スケジュールを使用してアルコールを消費する動物の動機にナルトレキソンの効果をテストする（ステップ2.12参照）。
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Representative Results
図1は、水の欠乏またはサッカリン/スクロースフェージングのない自己投与の20％エタノールにFR1スケジュールで訓練を受けoperant-および薬物ナイーブWistarラット（239ラットの合計に相当する8つの異なるコホート）の代表的な自己投与挙動を示しています30分のセッション中。このプロトコルでは、ラットは、すでに最初のセッション（ 図1A）中に10以上の報酬を得て、レバーは非常に迅速にエタノールの報酬を得るために押して開始します。彼らは、0.86グラム/キロの平均エタノール摂取に対応し、FR1（ 図1B）に23.7±0.7の報酬の平均を得、自己投与のセッション10によりアクティブレバー上の安定した応答速度を実現します。
図2は、アルコール自己投与に対するナルトレキソンの異なる用量の効果を示しています。の予測妥当性を評価するために、エタノールシーク、ナルトレキソンの有効性、アルコール依存のため、現在、FDA承認薬の動物モデルは、拡張された固定比率-3（FR3）強化スケジュール下で訓練された動物のグループに検証する必要があります。ナルトレキソンでの処置は、アルコール自己投与の用量依存的減少（ 図2Aおよび2B）、ならびにアルコールを得るための減少動機を生成すると予想される進行性の比率スケジュール（ 図2C）を用いて評価しました。
図1：Wistarラットを取得し、20％エタノールの自己投与を維持します。 ：平均報酬（±SEM）を20％エタノール（N = 239匹）の30分の自己管理セッション（FR1、アクイジション・フェーズ）の間に獲得しました。 B：平均報酬は30分自己投与セッション（FR1、FR2、安定した時に得られます20％（N = 239匹）の位相）。 C：20％（N = 239匹）の30分の自己管理セッション（FR1、FR2、安定相）中に完了する平均アクティブおよび非アクティブレバーを押す（±SEM）。 D：BEC（MG / DL）対1~30分自己投与セッションの間に獲得した報酬の数（N = 36ラット、R 2 = 0.67、p <0.001）。 この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。
図2：ナルトレキソンはアルコールを消費するために、自己管理とモチベーションの両方を低減します。 ：生理食塩水またはナルトレキソン治療（0.1、0.3または1ミリグラム/キログラム）Wistarラットにおける（N = 16）のいずれか、以下の20％エタノールの30分の自己投与セッション（FR3）中に完了する平均アクティブレバーを押す（±SEM） （** = p <0.01、*** = p <0.001）。 B：平均報酬は（SEM±）（生理食塩水またはナルトレキソン治療（0.1、0.3または1ミリグラム/キログラム）Wistarラットにおける（N = 16）のいずれか、以下の20％エタノールの30分の自己投与セッション（FR3）中に獲得しました** = p <0.01、*** = p <0.001）。 C：平均ブレークポイント（±SEM）は、次の20％エタノールのPRセッション中に達するのいずれか生理食塩水またはWistarラットにおけるナルトレキソン処置（1ミリグラム/ kg）の（N = 16）（* = p <0.05）。 D：報酬の数（±SEM）は、生理食塩水またはナルトレキソン治療（1ミリグラム/キログラム）Wistarラットにおける（N = 16）のいずれか、以下の20％エタノールのPRセッション中に獲得した（* = p <0.05）。 この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。
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Discussion
このプロトコルでは、我々は、拡張アクセストレーニングをエタノール自己投与の古典的なモデルとは反対に、水の剥奪の使用を必要としない、ことをラットで20％エタノールの安定した経口自己投与を獲得し、維持するための新しい方法を提示していますまたはサッカリン/スクロースが12フェージング 。さらに、ナルトレキソン、アルコール依存のため、現在、FDA承認薬は、正常にアルコール自己投与し、このプロトコルで訓練を受けたWistarラットのアルコールを消費する意欲を低下させます。それはナルトレキソン非依存ラット16-18においてアルコール消費を低減するのに有効であることを示す以前の報告と一致しているので、この結果は、プロトコルの重要な薬理学的検証を提供します。ナルトレキソンは、アルコール摂取および臨床試験の両方の動物モデルにおいて有望な結果を示しているアヘン剤受容体アンタゴニストです。動物モデルにおいて、ナルトレキソンは、アルコール消費および自己Aを低減するのに効果的です非固有の動作（非アクティブレバーを押す）12に影響を与えることなく非依存動物16,17,19でdministration、。また、食物摂取を減少させるのに効率的であることが証明されています。例えば、それは成功したサッカリンの甘いノンカロリーソリューションだけでなく、非常に味の良いとカロリーチョコレートドリンク20両方のラットの水分摂取量を減少させます。ナルトレキソンはまた、22を設定し 、二ボトルの選択の水剥奪21、ならびにサッカリンの選択後にショ糖自己投与16、水の摂取量を減らすことができます。すべて一緒に、これらの結果は、ナルトレキソンは、おそらく液体強化子のカロリー値を調節することによって応答アルコールに影響を与えないことを示しますが、アルコールの即時やりがいの値を減少させることにより、より可能性が高いです。
このモデルには、いくつかの重要な利点があります。まず、取得期間は、以前のパラダイムよりも高速です。ラットは、関連するル用のアクティブレバーを押す速度に達します1週間におけるエタノール23のVELS。シュガー・フェージングベースのパラダイムは、このように貴重な時間とリソースを浪費し、信頼性の高いエタノール摂取1,3を生成するために、テストの6〜8週間を必要とします。第二に、このモデルは、一般的に、したがって、おそらくエタノール自己投与における損耗率を減少させること、甘味料の除去の後に見られるエタノール消費の著しい低下は、24を研究して排除します。 239 operant-および薬物ナイーブWistarラットの合計に相当するラットの8つの異なるコホートは（最後の3中10アクティブレバーを押すの最小値として定義された自己投与を獲得するために失敗したために、このプロトコルのみ9満たす基準を使用して実行されました安定した固定比1セッション）。したがって、この新規トレーニングプロトコルは、96％の印象的な取得に成功率が得られます。このプロトコルでは、ラットは0.86グラム/キロの平均エタノール摂取の結果、2週間足らずで堅牢な応答速度に達しました。消費のこのレベルは等価ですものは通常/キロ1,2,23,25 0.5と0.8グラムの間の平均消費量を達成ショ糖/サッカリンフェージング手順で訓練を受けたラットで到達します。
さらに、このモデルが原因ラットにおけるサッカリンおよびスクロースの本質的にやりがいの特性に交絡を除去することにより、エタノール自己投与試験の解釈を簡素化します。潜在的な中毒性食品の報酬の性質、より具体糖などの味の良い食品のは、近年関心の対象となって、最終的にエタノール自己投与のより具体的なモデルの必要性を強調しています。例えば、ラットは過剰なショ糖摂取26-28に応じて、このようなbingeing、シーク、および撤退などの行動を表示するようにショ糖自体は、ラットで中毒性のかもしれないという考えを支持する証拠があります。また、スクロースおよびサッカリンは、コカインやアヘン6-8,29及びこれらの甘味料などの乱用薬物よりも強化されていますエタノールや虐待9の他の薬物と同様に側坐核などの脳領域におけるFosの活性化を変化させます。最後に、このモデルは、薬物再発の動物モデルを研究するのに適しています。我々は以前、この手順を使用して訓練された動物はロバスト同様に、通常、エタノール自己投与25の古典的なモデルを用いて得られたものに、アルコール12のためにそれらの応答を消すことができたことを示しています。これらの動物はその後、ストレッサー12を利用することにより、またはキュー光30を再導入することによって復活することができます。
エタノールは、やりがいと嫌悪特性を発揮アンビバレント薬、です。広くエタノールの主要な嫌悪味は特に高濃度の1で、ほとんどのげっ歯類で安定した自己投与を達成するために主要な障壁であると考えられています。しかしながら、エタノール濃度の広い範囲のラットの味覚反応性を調査研究（5〜40％v / v）のsurprisingly快楽が、嫌悪はない数は、口腔顔面応答がより高いエタノール濃度が31で増加する傾向があることを見出しました。ラットは、高エタノール濃度に暴露したときまた、アルコールに繰り返し暴露して、嫌悪口腔顔面応答の数は、（20〜40％v / vの）は、より低い濃度（5〜10％v / vで）で変化しないままで減少しました。同様に、2つのエタノール溶液への同時オペラントアクセスしたラットは、23より低い（10％v / vのより高い濃度（20又は40％v / v）で、主にスクロース/サッカリンフェージングに使用される濃度のために、より応答しました経口エタノールのための手順）と、自己投与は、20％のエタノール濃度11で自己投与時の最高エタノール摂取と逆U字型の用量反応曲線を表示します。これらのデータは、ラットは、O中の20％エタノール自己投与を取得する理由を説明する、エタノールのより高い濃度は、ラットに、よりやりがい未満嫌悪であり得ることを示しますエタノール前露光またはスクロース/サッカリンフェージング手順を必要とせずにウルプロトコル。
しかし、このモデルは、エタノール自己投与および高エタノール血中濃度のエスカレーションレベルを生成しないことに留意することが重要です。したがって、このモデルは、ラットの身体的依存を誘発しない、実験の目的は、げっ歯類における過剰なアルコール消費を誘導することである場合、他のモデルと組み合わされるべきです。
多くの行動のタスクと同様に、最初の重要なパラメータは、毎日できるだけ一貫として、実験の条件を維持することです。より正確には、ラットは常に同じ自己投与チャンバ内で試験されるべきです。セッションは、実験全体を通して同じ時間（±30分）で発生します。チャンバー（ステップ2.2参照）の構成は変化しないままであったはずです。自己管理のトレーニング中に、最初のセッションが重要になる場合があります。特に注意が目に与えられるべきですE薬物送達チューブ、液体カップ受け、レバー及びシリンジポンプ。任意の故障が遅延またはエタノール自己投与の獲得を損なう可能性があるとしてエタノールが正しく、最初の補強応答からレセプタクルに送達されることが重要です。
要約すると、本プロトコールに記載の経口アルコールのオペラント自己投与のためのトレーニングラットの新しいモデルが大きく、取得レートを増加させながらトレーニング時間を減少させることによって効率を向上させる全体的な手順と同様に、結果の解釈を簡素化し、かつ検証されナルトレキソン実験によるエタノール飲用の音モデルとして。このプロトコルは、ラットでアルコールのやりがいと動機付けの特性を調査するのに適しているとエタノール探索行動の神経基盤を評価するためのモデルをreinstatementsのような古典的なオペラント自己管理手順と組み合わせることができます。
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Disclosures
著者らは、開示することは何もありません。
Acknowledgments
この作品は、スウェーデンの研究評議会によってサポートされていました。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Extra Tall MDF Sound Attenuating Cubicle, Interior: 22"W x 22"H x 16"D | Med Associates Inc. | ENV-018MD | |
| Extra Tall Modular Test Chamber with modified Top, Waste Pan and Photobeam | Med Associates Inc. | ENV-007CT-PH | |
| Stainless Steel Grid Floor for Rat or Small Primate | Med Associates Inc. | ENV-005 | |
| Retractable Lever | Med Associates Inc. | ENV-112CM | 2 by SA chambers |
| Stimulus Light, 1" White Lens, Mounted on Modular Panel | Med Associates Inc. | ENV-221M | 2 by SA chambers |
| Dual Cup Liquid Receptacle with 18 ga Stainless Steel Pipes | Med Associates Inc. | ENV-200R3AM | |
| Single Speed Syringe Pump, 3.33 rpm | Med Associates Inc. | PHM-100 | |
| Liquid Delivery Kit | Med Associates Inc. | PHM-122-18 | |
| SmartCtrl 8 Input / 16 Output Package | Med Associates Inc. | DIG-716P2 | |
| MED-PC software | Med Associates Inc. | SOF-735 | |
| http://www.mednr.com/ | Med Associates Inc. | A website that is open-source and has been created to offer researchers a place to exchange MEDState Notation code | |
| Kendall Monoject 20 cc Syringes, Regular Luer Tip | VWR International | MJ8881-520657 | |
| Ethanol, Pure, 190 Proof (95%), USP, KOPTEC | Decon Labs | 2801 | |
| 0.9% Sodium Chloride Injection, USP | Hospira | 0409-4888-50 | |
| Naltrexone hydrochloride | Sigma Aldrich | N3136-1G | |
| 23 G BD PrecisionGlide Needles | BD | 305145 | |
| Minivette POCT 50 µL, K3EDTA | Sarstedt | 17.2113.150 | For capillary blood collection |
References
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