Introduction
Die Lebersinusoide enthalten zahlreiche Leukozytensubtypen verschiedener Immunaktivitäten entscheidend für den Organismus. Zum Beispiel marginating Leber (MH) natürliche Killerzellen (NK), die auch als Pit-Zellen bekannt sind, charakterisiert morphologisch als große granuläre Lymphozyten (LGLs) und funktionell als Leukozyten mit spontaner zytotoxische Kapazität, so dass Leber-Widerstand gegen die Errichtung von blut- getragen Tumormetastasen. Das Ziel des Verfahrens vorgestellt hierin selektive Ernte von MH Leukozyten zu aktivieren, um diese wichtige und einzigartige Zellpopulation zu untersuchen (und Immunraum), und die Auswirkungen der verschiedenen Manipulationen (beispielsweise Immunaktivierung) auf diesen spezifischen Zellen aufzuklären.
Trotz des Ausfalls der Immunität eines Entwicklungsprimärtumor, Nachweis bei Krebspatienten und Tiermodelle zu eliminieren, zeigen an, dass das Immunsystem zirkulierende Tumorzellen steuern können, Mikrometastasen und residual disease through zellvermittelte Immunität (CMI). Es gibt jedoch eine scheinbare Unstimmigkeit zwischen diesen in vivo - Funktionen und in vitro - Studien in Menschen und in Tieren, die zeigen , dass die meisten autologe Tumorzellen - Zytotoxizität durch zirkulierende oder splenic Leukozyten 1,2 resistent sind. Diese Inkonsistenz kann zurückgeführt werden, zumindest teilweise auf die in vivo Existenz einer deutlichen Leukozytensubpopulation, nämlich die marginating-hepatische (Sinusoide) Leukozyten und deren Subpopulation von aktivierten NK - Zellen, nämlich pit Zellen 3. Tatsächlich unpublizierte Daten aus unserem Labor zeigten , daß in F344 Ratten syngene Tumorzellen (MADB106), das Zirkulieren und splenic Leukozyten resistent gefunden, 4 durch MH-NK Zellen lysiert wurden. Somit Tumorzellen, die angeblich "NK-resistant" auf zirkulierende Leukozyten sind, können durch MH-NK-Zellen gesteuert werden. Bemerkenswert ist die verstärkte Aktivität von MH-NK bei Mäusen in vivo nach nur offensichtlich immunStimulation (zB durch die Verwendung von Poly I: C oder CpG-C) 5.
Leberspezifischen NK-Zellen (MH-NK) innerhalb der sinusförmigen Lumens befindet, an die Endothelzellen und Kupffer-Zellen anhaften. MH-NK - Zellen werden durch sphärische dichten Granula und stäbchen entkernt Vesikeln 6, die enthalten saure Phosphatase als lysosomale Enzyme und Perforin und Granzyme als bioaktive Substanzen 7,8 ausschließlich aus. Verglichen mit NK - Zellen zirkulierende weisen MH-NK - Zellen eine höhere Anzahl und Größe der Granula und Vesikel 9-11. Unter entzündlichen Bedingungen wurden MH-NK - Zellen gezeigt höhere Expression von LFA-1 12 aufweisen, im Vergleich zu den NK - Zellen zirkulieren. Diese erhöhte Expression könnte einen Mechanismus dar , mit dem MH-NK - Zellen mehr zytotoxischen gegen bestimmte Tumorzellen sind als NK - Zellen 13,14 zirkuliert. nterestingly nach in vitro - Inkubation mit Interleukin (IL) -2, werden MH-NK - Zellen vergrößert undihre Anzahl und Größe der Körner zu erhöhen, die alle mit einem Pro fi l von Lymphokin-aktivierten Killerzellen (LAK) 15 konsistent sind.
Aktive MH Leukozyten kann nicht ausschließlich durch die Standard Leber Leukozyten Ernteverfahren erhalten werden, die auf Schleif- und biologischen Abbau des Gewebes beruhen. Unser Perfusion Ansatz hier beschriebenen hat zwei wesentliche Vorteile im Vergleich zu den Standard-Ansätzen. Erstens, erntet die Perfusion Ansatz selektiv MH Leukozyten, Verunreinigungen durch andere Leukozyten aus anderen Leberfächer zu verhindern. Zweitens behält die Perfusionstechnik besser, die Integrität, die Aktivität und die physiologischen Milieu MH Leukozyten, im Gegensatz zu der Gewebeverarbeitung dass Zellen schädigen nähert oder ihre Morphologie zu verändern, und aufgrund von Gewebeschäden induzieren die Freisetzung von verschiedenen Faktoren, die deutlich immune modulieren Aktivität.
Die Leber ist ein wichtiges Zielorgan für die Krebsmetastasierung and für verschiedene Infektionen 16. Als MH-Zellen einzigartige Eigenschaften aufweisen, ist es wichtig, diese spezifische Population unter verschiedenen Bedingungen in bezug auf diese Pathologien zu studieren. Zum Beispiel ist es angemessen , dass die systemische Immunaktivierung durch verschiedene BRMs (zB Poly I: C oder CpG-C) zu beachten sind MH-Leukozyten gezeigt mehr zu aktivieren , als Leukozyten 5 zirkuliert.
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Protocol
Ethikerklärung: Verfahren unter Verwendung tierischer Probanden wurden von der Institutional Animal Care und Use Committee (IACUC) an der Universität Tel Aviv genehmigt.
1. Ratten-Protokoll
- Die Vorbereitungen
- Bereiten Sie heparinisiertem PBS (30 Einheiten / ml) Lösung verwendet werden, bei Raumtemperatur (RT) durch Zugabe von 30 Einheiten frei von Konservierungsstoffen Heparin pro ml Phosphat-gepufferte Salzlösung (PBS) 1x Lösung. Berechnen Sie 35 ml pro Tier.
- Pass heparinisiertem PBS durch die peristaltische Pumpe Leitungen und den Schmetterling Nadeln Luftblasen zu beseitigen.
- Sterilisieren chirurgische Instrumente - 2 Paar Scheren, abgestumpft kantigen Zange, 2 hemostats und Zahngewebe Zange (Autoklav bei 121 ° C für mindestens 30 min auf die Schwerkraft (trocken) Einstellung).
- Perfusion der Leber und Sammlung von MH-Leukozyten
- Euthanize das Tier durch eine Überdosis von 8% Isofluran. Als Vorsichtsmaßnahme ein 50-ml-Tube eine Isofluran enthält-soaked Polster um die Ratte den Kopf, bis seine Brusthöhle zu öffnen.
- Öffnen Sie die Peritonealdialyse und Brusthöhlen, die Leber und die Herz-Lungen-Komplex unmittelbar nach Beendigung der Atmung aussetzen. Vermeiden Sie durch diesen Prozess Blutungen.
- Genauer gesagt, starten Sie den Schnitt an der unteren Bauchmittellinie Punkt, ohne Beschädigung der inneren Organe und des Fortschritts zu beiden Seiten schräg zu den Rippen, um durch sie zu oberen Brusthöhle Ebenen schneiden.
- Innerhalb von etwa einer Minute, zu sammeln, so viel Blut wie möglich (~ 6 ml einer 250 g Tier) aus dem rechten Ventrikel in eine Spritze.
- Klemmen Sie die Schwanz Hohlvene mit einem hemostat so nah wie möglich an das Herz, die Sammlung des Perfusat zu ermöglichen.
- Ziehen Sie die Eingeweide heraus und außerhalb des Tieres in die rechte Ecke des Experimentators, die Pfortader zu belichten.
- Legen Sie eine 25 G IV-Katheter, der mit einer Schlauchpumpe in die Pfortader, wie Schwanz- wie möglich,aber rostral der Milzvene.
- Legen Sie eine 25 G Butterfly-Nadel, die mit einer 5-ml-Spritze, in die untere Hohlvene, kaudal der hemostat.
- Schalten Sie die peristaltische Pumpe bei einer Geschwindigkeit von etwa 3 ml / min und sanft die ersten ml Perfusat sammeln, die mit Blut in die Spritze kontaminiert sind. Fortfahren, bis das Perfusat Farbe erblasst rot (ca. 3-5 ml). Beachten Sie, dass die Farbe der Leber verändert sich in Richtung hellbraun.
- Ohne die peristaltische Pumpe zu stoppen, ersetzen Sie die 5 ml Ernte Spritze mit einer 20 ml Ernte Spritze und sammeln mindestens 20 ml Leber Perfusat eine höhere Geschwindigkeit der Perfusion verwendet wird (bis zu 4 ml / min). Kontinuierlich überwacht die Perfusat Strom in die Sammel Spritze, und vermeiden Sie Vakuum, das zu stark ist (was die Nadel durch das Zusammenlegen der Hohlvene Wände verstopfen können).
- Terminate Perfusion, wenn die Farbe der Leber bis hellbraun dreht.
- Leukozyten-Extraktion
- Den Überstand aspirieren
- 10 ml PBS, Zentrifugation bei 400 xg für 10 min und der Überstand absaugen. Basierend auf Studienziele, verwenden Vorbereitung wie es ist, oder zusätzliche Reinigungen durchführen (zB Dichtegradienttrennmittel).
- Insbesondere Schicht 4 ml Perfusat über 4 ml Dichtegradienttrennmittel Masse in einem 50 cc Polypropylen-Zentrifugenröhrchen. Drehen Sie die Röhrchen bei 754 xg, RT, 30 min mit der Pause ab.
- Besorgen Sie sich die einkernigen Schichten an der Dichtegradienttrennmittel-Überstand-Schnittstelle durch manuelles Pipettieren, Waschen in PBS, und legen Sie in einem 5-ml-Tube.
2. Maus-Protokoll
- Die Vorbereitungen
- Bereiten Sie heparinisiertem PBS (30 Einheiten / ml) Lösung bei Raumtemperatur (RT) durch Zugabe von 30 Einheiten frei von Konservierungsstoffen Heparin pro ml Phosphat verwendet werden (PBS) 1x solution. Berechnen Sie 20 ml pro Tier.
- Pass heparinisiertem PBS durch die peristaltische Pumpe Leitungen und den Schmetterling Nadeln Luftblasen zu beseitigen.
- Sterilisieren chirurgische Instrumente - 2 Paar Scheren, abgestumpft kantigen Zange, 2 hemostats und Zahngewebe Zange (Autoklav bei 121 ° C für mindestens 30 min auf die Schwerkraft (trocken) Einstellung).
- Perfusion der Leber und Sammlung von MH-Leukozyten
- Euthanize das Tier durch eine Überdosis von 8% Isofluran. Als Vorsichtsmaßnahme, legen Sie ein 15-ml-Röhrchen eine Isofluran-getränkten Polster um die Maus Kopf bis zum Öffnen seiner Brusthöhle enthält.
- Befestigen Sie die Schenkel der Maus auf ein Bett.
- Öffnen Sie die Peritonealdialyse und Brusthöhlen, die Leber und die Herz-Lungen-Komplex unmittelbar nach Beendigung der Atmung aussetzen, intakt den unteren Aspekt der Membran zu halten (um eine Entleerung Brusthöhle Pool). Vermeiden Sie durch diesen Prozess Blutungen.
- Genauer gesagt, starten Sie den Einschnitt am unterenBauchmittellinie Punkt, ohne Beschädigung der inneren Organe und des Fortschritts zu den beiden diagonal gegenüber den Rippen Seiten, um durch sie zu oberen Brusthöhle Ebenen schneiden.
- Ausziehbares den Darm und außerhalb des Tieres in die rechte Ecke des Experimentators, die Pfortader zu belichten.
- Legen Sie eine 30 g Nadel, verbunden mit einer Schlauchpumpe in die Pfortader rostral der Milzvene.
- Schneiden Sie die untere Hohlvene oberhalb des Zwerchfells Entwässerungs- und Sammlung des Perfusat aus der Brusthöhle zu ermöglichen.
- Schalten Sie die peristaltische Pumpe bei einer Geschwindigkeit von etwa 3 ml / min und Sammeln sanft die ersten 3 ml Perfusat, die mit Blut aus der Brusthöhle Pool kontaminiert sind.
- Entsorgen Sie diesen Perfusat. Wiederholen solch ein Waschen wieder benötigt, wenn durch Kochsalzlösung verwendet, und erst dann starten Leber Perfusat gesammelt werden.
- Wieder initiieren die Perfusion mit einer Geschwindigkeit von bis zu 4 ml / min, und sammeln 10 ml Perfusat aus der Brusthöhle unter Verwendung vonein Schmetterling mit einer Spritze verbunden.
- Terminate Perfusion, wenn die Farbe der Leber bis hellbraun dreht.
- Leukozyten-Extraktion
- Zentrifuge das Perfusat 10 min bei 400 x g.
- Den Überstand aspirieren.
- In 10 ml PBS, Zentrifugation bei 400 × g für 10 min und den Überstand aspirieren Basierend auf Studienziele, verwenden Vorbereitung , wie oder führen zusätzliche Reinigungen (zB Dichtegradienttrennmittel).
- Insbesondere Schicht alle 4 ml Perfusat über 4 ml Dichtegradienttrennmittel Masse in einem 50 cc Polypropylen-Zentrifugenröhrchen. Drehen Sie die Röhrchen bei 754 xg, RT, 30 min mit der Pause ab.
- Besorgen Sie sich die einkernigen Schichten an der Dichtegradienttrennmittel-Überstand-Schnittstelle durch manuelles Pipettieren, Waschen in PBS, und legen Sie in einem 5-ml-Tube.
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Representative Results
In F344 Ratten verglichen wir die Zytotoxizität von NK-MH-Zellen (aus der Leber Sinusoide durch erzwungene Leberperfusion gesammelt) auf die Zytotoxizität der gesamten Leberzellpopulation folgende mechanische Mahlung des Lebergewebes und auf die Zytotoxizität von Leukozyten zirkulieren. Alle Zellpräparationen wurden mindestens 3 Mal, als Routine, die in immunologischen Assays und als Zielzelllinien verwendeten wir die allogenen YAC-1 oder die syngenen MADB106 Zielzelllinien gewaschen. Wie in 1 angedeutet - 4, während MH-NK - Zellen tiefe Zytotoxizität gegen die MADB106 und die YAC-1 - Zielzelllinien (~ 80% und bis zu 100% betragen), die beide die gesamte Leberzellpopulation (1) ausgestellt und Leukozyten (2 und 3) dargestellt tief geringere Zytotoxizität und fast keine Abtötung gegen die syngenen MADB106 Zielzelllinie zirkuliert. Das gleiche relative geringere Zytotoxizität evident waren , als mechanisch bearbeitet Lebern auch Wasch- und Dichtegradienten Trennung unterzogen (Figur 4), Stufen , die in der Literatur typisch sind. So zeigen MH-NK-Zellen einzigartig hohe Zytotoxizität in F344 Ratten. FACS-Analyse wurde durchgeführt und offenbarte grundlegende Unterschiede in der Zusammensetzung der folgenden Zell-Subpopulationen: Monozyten (CD161dim), NK-Zellen (CD161 bright), T-Zellen (CD3), B-Zellen (CD45) und NKT (CD161 und CD3) -Zellen. Wesentliche Unterschiede in der Reifung Profil (CD11b / CD27) zeigten sich auch zwischen den verschiedenen Kammern (5).
Abbildung 1: Ein Vergleich der Cytotoxizität von NK-MH - Zellen, auf Zytotoxizität der Entire Liver Zellpopulation (YAC-1 - Zielzelllinie) MH-NK - Zellen (von der MH-Kompartiment geerntet throu.gh den hier beschriebenen Ansatz) zeigte tiefe zytotoxische Aktivität gegen die YAC-1-Zielzelllinie, während die gesamte Leber-Zellpopulation, durch mechanische Bearbeitung der Leber geerntet, minimal Ebenen angezeigt (p <0,05). X-Achse stellt Effektor-zu-Zielzellen-Verhältnis. Die Daten werden als Mittelwert ± SEM dargestellt. Bitte hier klicken , um eine größere Version dieser Figur zu sehen.
Abbildung 2: Ein Vergleich der Cytotoxizität von NK-MH - Zellen, auf Zytotoxizität von zirkulierenden Leukozyten (YAC-1 - Zielzelllinie). MH-NK-Zellen (geerntet aus dem MH-Raum durch die hier beschriebenen Ansatz) zeigte tiefe Zytotoxizität gegen die YAC-1-Zielzelllinie, während zirkulierenden Leukozyten minimale Mengen an Zytotoxizität angezeigt(P <0,05). X-Achse stellt Effektor-zu-Zielzellen-Verhältnis. Die Daten werden als Mittelwert ± SEM dargestellt. Bitte hier klicken , um eine größere Version dieser Figur zu sehen.
Abbildung 3:. Ein Vergleich der Zytotoxizität von MH-NK - Zellen, zu Zytotoxizität von zirkulierenden Leukozyten (MADB106 Zielzellinie) MH-NK - Zellen (geerntet aus dem MH-Raum durch die hier beschriebenen Ansatz) zeigte tiefe Zytotoxizität gegen die syngenen MADB106 Zielzelllinie, während zirkulierende Leukozyten minimale Mengen an Zytotoxizität (p <0,05) angezeigt. X-Achse stellt Effektor-zu-Zielzellen-Verhältnis. Die Daten werden als Mittelwert ± SEM dargestellt. Bitte klicken Sie hier to eine größere Version dieser Figur sehen.
Abbildung 4: Ein Vergleich der Zytotoxizität von MH-NK - Zellen, zu Zytotoxizität der Entire Leber - Lymphozyten , die durch Dichtegradienttrennmittel (YAC-1 - Zielzelllinie) MH-NK - Zellen (geerntet aus dem MH- Gewaschen und Angereichert wurde. Raum durch die hier beschriebenen Ansatz) zeigte tiefe Zytotoxizität gegen die Zelllinie Ziel YAC-1, während die gesamte Leber-Lymphozyten (im Anschluss an die mechanische Bearbeitung, die durch Dichtegradienttrennmittel gewaschen und angereichert wurde), ein deutlich niedrigeres Niveau der Zytotoxizität angezeigt (bis zu 30%) (p <0,05), die in der Literatur typisch sind. X-Achse stellt Effektor-zu-Zielzellen-Verhältnis. Daten werden als Mittelwert ± SEM dargestellt. Bittehier klicken, um eine größere Version dieser Figur zu sehen.
Abbildung 5:. Ein Vergleich von einkernigen Zellen Subsets und NK - Zell - Populationen aus dem zirkulierenden mononukleären, dem MH-Mononukleäre und die gesamte Leber mononukleärer Zellen FACS - Analyse zeigt deutliche Unterschiede in der Zusammensetzung der folgenden Zell - Subpopulationen: Monozyten (CD161dim), NK - Zellen (CD161 hell), T - Zellen (CD3), B - Zellen (CD45) und NKT (CD161 und CD3 - Zellen) sowie Unterschiede bei der Reifung Profil (CD11b / CD27) zwischen verschiedenen Fächern. Bitte hier klicken , um eine größere Version zu sehen dieser Figur.
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Discussion
Die Methode Leberperfusion hier vorgestellten ermöglicht eine selektive Ernte und das Studium der einzigartigen Population von marginating Leber Leukozyten. Leber NK - Zellen, auch Grube Zellen 3 genannt, bilden eine unverwechselbare NK - Zellpopulation , die in den Leber sinusoids befinden. Sie werden bei Ratten, Mäusen 17 und beim Menschen 18,19 gefunden. Im Vergleich zu isolierten peripheren NK - Zellen zeigte pit Zellen höhere Zytotoxizität gegen YAC-1 und CC531s Zielzelllinien 20 wurden eine höhere Anzahl kleinerer zytoplasmatischen Granula 20 gezeigt zu haben, und eine höhere Expression von Oberflächenantigenen, wie beispielsweise LFA-1 12 . Außerdem, im Gegensatz zu isolierten Blut NK-Zellen können Grube Zellen lysieren NK-resistente P815-Zellen. Ähnlich wie bei der Ratte Pit - Zellen, humane Leber NK - Zellen haben eine höhere Zytotoxizität gegen NK empfindlichen K562 - Zielzellen im Vergleich zu NK - Zellen 18,19 Umlauf und wurden zu lysieren NK-resistente Zielzellen 18 gezeigt. Overall, da die Leber bei verschiedenen Krankheiten speziell und einzigartig beteiligt ist, sollte Immunität innerhalb dieses Organs untersucht werden, und Zellen des MH Raum sollte von parenchymalen, Kupffer und Sternzellen zu unterscheiden.
Wie in der Einleitung erarbeitet, ist Perfusionsmodell Ansatz vorteilhaft gegenüber den üblichen Verfahren mechanischen Schleifen / biologischen Abbau in selektiven Ernte MH Leukozyten und die Integrität einer besseren Erhaltung, die Aktivität und das physiologische Milieu von MH Leukozyten. Tatsächlich Beurteilung NK Zytotoxizität zeigte Leukozyten MH geerntet durch unseren Ansatz eine deutlich höhere NK Zytotoxizität als Leukozyten durch die mechanische Schleifverfahren geerntet, trotz ähnlicher Anzahl von NK-Zellen.
Die hepatische Perfusion Technik ist ausschließlich in Tierstudien. Allerdings spezifische Erkenntnisse aus diesem Ansatz erhalten in Bezug auf deutliche Unterschiede zwischen den Immunfächer können die biologische Frageal und klinische Bedeutung der Beobachtungen beruhen ausschließlich auf Leukozyten zirkulieren. Tierstudien, die Immun Indizes in verschiedenen Immun Abteile messen kann den Grad vorschlagen, auf die jeder immunologische Index im Umlauf reflektiert oder korreliert mit seiner Niveaus im MH Fach. Eine interessante Beobachtung bezieht sich in Mäusen , diese Technik verwendet wird , wo die perfundierten MH-NK - Zellen nur signifikante zytotoxische Aktivität gegen Zielzellen 21 nach einer a-priori Immunstimulation des Tieres nachzuweisen.
Nur wenige kritische Aspekte der Technik sollte angegeben werden. In beiden Ratten und Mäusen, sollte der Brusthöhle nach der vollständigen Einstellung der Atmung, und mit minimaler Blutung weit sofort geöffnet werden. Bei Ratten wird empfohlen, dass die maximale Menge des kardialen Blut vor der Perfusion entnommen wird. Bei Mäusen ist es nicht entnommene Blut aus dem Herzen zu empfehlen, da es den Blutdruck in der Pfortader reduziert undmacht es schwieriger, die Nadel einzuführen, durch den Prozess fortzusetzen. Diese Nadeleinführungs sollte der Milzvene gemacht benachbart aber rostral werden, wie man sicherstellen will, daß der Abstand vom Einsteckende zum Eingang der Pfortader in die Leber ausreichend ist für die Nadel in einer stabilen Lage zu sein, und ermöglicht die ganze Keulen zu erhalten perfundiert. Die Nadel sollte in die Pfortader eingeführt werden, während parallel zu seiner Oberfläche, so dass das Risiko der Gefäßwand Zerreißen minimiert wird. Bei Ratten, während eine Nadel in die Vena cava caudalis für die Sammlung des Perfusats Einsetzen ist es wichtig, den Eintrittspunkt so schmal wie möglich zu halten eine potentielle Leckage von Perfusat zu vermeiden. Bei Mäusen ist es wichtig, die Hohlvene in der Brusthöhle Gefäße ohne aufzureißen andere Blut zu altklug geschnitten oder in die Lungen, um unnötige Blutkontamination zu vermeiden. Der große Vorteil einer peristaltischen Pumpe ist eine stabile Steuerung über die Perfusionsrate, innerhalb und zwischen denTiere. Es ist wichtig, eine niedrige Strömungsrate während des gesamten Verfahrens zu halten, um Bruch der Pfortader zu vermeiden. Als die ersten Milliliter Leber Perfusat mit Blut kontaminiert sind, sollten sie wie gezeigt werden verworfen. Um das zu erreichen Standardisierung zwischen den Tieren zu beginnen, das Kriterium der MH Perfusat Sammeln basiert auf Farbübergang von dunkelbraun bis hellbraun (anstatt Sammlung eines bestimmten Volumens).
Neben der Durchführung des Verfahrens können mehrere Störungen auftreten, aber die meisten sind reversibel. Wenn die Nadel, durch die die PBS in die Leber transfused wird schlüpft aus, ist es empfehlenswert, die peristaltische Pumpe zu stoppen, genießen Sie die Umgebung des Darms (zu erreichen bessere Sichtbarkeit), wieder einsetzen, die Nadel in einer etwas rostral Position, , und starten Sie die Pumpe.
Die Technik Leberperfusion hierin beschrieben ermöglicht eine selektive Ernte der MH Leukozyten-Population in einem ziemlich einfacher Prozess. Gegebendass diese Population Besonderheiten auf Leukozyten von anderen Immun Abteile im Vergleich zeigt, und kann dem Organismus biologischen und klinischen Bedeutung haben, empfehlen wir die Verwendung dieser Methode, wenn möglich, wie Leukozyten aus anderen Fächern nicht das Profil der MH Bevölkerung widerspiegeln. Zusätzlich wird, wie diese Technik nicht machbar beim Menschen ist, empfehlen wir es weiter bei Tieren unter Verwendung spezifischer zirkulierender Biomarker zu klären, die mit den MH Eigenschaften korrelieren, insbesondere bei Leberbezogenen Prozesse und Krankheiten zu studieren.
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Disclosures
Die Autoren haben nichts zu offenbaren.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Autoclud Peristaltic pump | |||
| Butterfly needle | OMG | 26 G | |
| Butterfly needle | OMG | 21 G*3/4" | |
| Syringe | Pic solution | 1 ml | |
| Syringe | Pic solution | 2.5 ml | |
| Syringe | Pic solution | 5 ml | |
| Syringe | Pic solution | 10 ml | |
| Syringe | Pic solution | 25 ml | |
| Blunted-edged forceps | |||
| Scissors | |||
| hemostat | |||
| Tissue forceps | |||
| 22 W Fluorescent Daylight Magnifier Lamp |
References
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