Introduction
karaciğer sinüsoidlerinden organizma için önemli çeşitli immün faaliyetleri pek çok lökosit alt tipleri içerir. Örneğin, aynı zamanda çukur hücreleri olarak bilinen hepatik marginating (MH), doğal katil (NK) hücreler, özelliği, morfolojik olarak büyük granüler limfositler (LGLs) ve fonksiyonel olarak kan-kurulmasına karşı hepatik-direnç sağlayan kendiliğinden sitotoksik kapasiteli lökositler gibi kaynaklı tümör metastazları. Burada sunulan yöntemin amacı bu önemli ve eşsiz hücre popülasyonu (ve bağışıklık bölmesi) araştırmak için MH lökositlerin selektif hasat, etkinleştirmek için, ve bu spesifik hücreler üzerinde çeşitli manipülasyonlar etkisini (örn bağışıklık aktivasyon) aydınlatmak etmektir.
Gelişmekte olan bir primer tümör ortadan kaldırmak için bağışıklık yetersizliği rağmen, kanser hastaları ve hayvan modellerinde kanıtlar bağışıklık sistemi tümör hücrelerini, mikro-metastazı ve Throu rezidüel hastalık sirkülasyon kontrol edilebileceğini gösterirgh hücre aracılı immünite (CMI). Bununla birlikte, in vivo özellikleri ve insanlarda in vitro çalışmalar, en otolog tümör hücrelerinin, dolaşımdaki veya dalak lökositleri 1,2 ile sitotoksisiteye karşı olduğunu göstermek hayvanlar, bu arasında açık bir tutarsızlık yoktur. Bu tutarsızlık, bir tat lökosit alt popülasyonuna, yani marginating-hepatik (sinüzoidler) lökosit ve aktive NK hücreleri, yani çukur hücre 3 kendi alt popülasyonunda in vivo varlığı, en azından kısmen, bağlı olabilir. Gerçekten de, laboratuar yayınlanmamış veriler F344 sıçanlarda singeneik dolaşan tümör hücrelerinin ve dalak lökositleri dirençli bulunmuştur (MADB106), MH-NK hücrelerinin 4 çözülmüştür göstermiştir. Bu nedenle, dolaşımdaki lökositlerin iddia edilen "NK dirençli" olarak tümör hücrelerinin MH NK hücreleri tarafından kontrol edilebilir. Dikkate değer olarak, farelerde MH-NK geliştirilmiş etkinliği sadece bağışıklık vivo aşağıdaki belirgindir(poli I kullanılarak, örneğin: Cı veya CpG-C) uyarma 5.
Karaciğer spesifik NK hücrelerinin (MH-NK) endotel hücreleri ve Kupffer hücreleri bağlı kalarak, sinüzoidal lümen içinde yer almaktadır. MH-NK hücreleri, sadece biyolojik olarak aktif madde 7,8 olarak lizozomal enzimler ve perforin ve granzymes gibi asit fosfataz içeren küresel yoğun granüller ve çubuk özlü veziküllerin 6, ile karakterize edilir. NK hücrelerini dolaşımdaki ile karşılaştırıldığında, MH-NK hücreleri granüller ve veziküller 9-11 daha yüksek bir sayı ve boyut sergilerler. NK hücrelerini dolaşım ile karşılaştırıldığında, inflamatuar koşullar altında, MH-NK hücreleri, LFA-1 12 daha yüksek ifadesini gösterir gösterildi. Bu geliştirilmiş ekspresyon MH-NK hücreleri, NK hücreleri 13,14 dolaşımdaki daha bazı tümör hücrelerine karşı daha fazla sitotoksik olan bir mekanizma oluşturabilir. nterestingly, interlökin (IL) -2 ile in vitro inkübasyondan sonra MH-NK hücrelerinin büyütülmüş hale gelir vebunların sayısı ve granül boyutu pro fi lenfokin ile aktive edilen katil (LAK) hücreler, 15 ile uyumlu olan, her biri, artar.
Aktif MH lökositler özel öğütme ve dokunun biyolojik bozunma göre standart karaciğer lökosit hasat yöntemleri ile elde edilemez. Burada tarif edilen Bizim perfüzyon yaklaşım standart yöntemlere göre iki önemli avantaja sahiptir. İlk olarak, perfüzyon yaklaşımı seçici diğer karaciğer bölmeleri diğer lökositler tarafından kirlenmeyi önleyerek, MH lökositleri hasadın. Doku işleme hasar hücreler yaklaşımların ya da morfolojisi değiştirmek ve doku hasarına bağlı, belirgin bağışıklık modüle çeşitli faktörlerin salınımını teşvik aksine İkincisi, daha iyi perfüzyon tekniği, bütünlük, aktivite ve MH lökositlerin fizyolojik ortamını korur aktivite.
karaciğer kanseri metastazı a için önemli bir hedef organdırnd çeşitli enfeksiyonlara 16. MH hücreleri benzersiz özelliklere sergilerler olarak patolojiler açısından çeşitli koşullar altında bu özel nüfus incelemek önemlidir. Örneğin, çeşitli BRM göre sistemik immün aktivasyon dikkat çekicidir (örneğin poli I: C veya CpG-C) lökosit 5 dolaşımdaki daha MH-lökositler fazla aktif olduğu gösterilmiştir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Etik Beyanı: Hayvan denekleri Prosedürleri Tel-Aviv Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır.
1. Sıçanlar Protokol
- hazırlıklar
- heparinize PBS (30 birim / ml) çözeltisi hazırlayın fosfat ml'si başına koruyucu serbest heparinin 30 adet ekleyerek, oda sıcaklığında (RT) kullanılmak üzere tuzlu su (PBS) ile 1 x çözeltisi tamponlu. hayvan başına 35 ml hesaplayın.
- Hava kabarcıklarını yok etmek için peristaltik pompa hatları ve kelebek iğne yoluyla heparinize PBS geçirin.
- (Yerçekimi (kuru) ayarında en az 30 dakika süreyle 121 ° C'de otoklav) makas 2 çift, körelmiş kenarlı forseps, 2 hemostat ve diş doku forseps - cerrahi aletler sterilize edin.
- MH-lökositlerin Karaciğer ve Toplama perfüzyon
- % 8 izofluran aşırı dozda ile hayvan Euthanize. Önlem olarak, bir izofluran içeren 50 ml'lik bir tüp yerleştirmekonun göğüs boşluğunu açarak kadar sıçan başının etrafında -soaked ped.
- Solunumun durması üzerine hemen karaciğer ve kardiyopulmoner kompleksi ortaya çıkarmak için periton ve göğüs boşlukları açın. Bu süreçte kanama kaçının.
- Özellikle, üst göğüs boşluğu seviyelere içlerinden kesme, kaburga doğru çapraz her iki taraf için zarar iç organlara olmadan alt karın orta hat noktasında kesi, ve ilerleme başlayın.
- yaklaşık dakika içinde, (~ 250 g hayvan 6 mi) mümkün olduğu kadar kan toplamak bir şırınga içine sağ ventrikül.
- perfüzat toplanmasını sağlamak için, kalp mümkün olduğunca yakın bir hemostatla kaudal vena kava kelepçe.
- portal ven ortaya çıkarmak için, deneycinin sağa hayvan dışında bağırsak ve yeri çekin.
- mümkün olduğunca kaudal olarak, portal ven içine peristaltik pompaya bağlı 25 G IV kateter, insert,ancak dalak ven rostralinde.
- Hemostata kaudal vena kava inferior içine 5 ml şırınga bağlı 25 G kelebek iğne,, yerleştirin.
- yaklaşık olarak 3 ml / dakika bir hızda peristaltik pompa açın ve yavaşça şırıngaya kan ile kirlenmiş olan perfüzat ilk ml toplar. perfüzat renk dönüşler (yaklaşık 3-5 ml) soluk kırmızı olana kadar devam edin. Karaciğer rengi açık kahverengi doğru değişiyor dikkat edin.
- peristaltik pompa durmadan 20 mi hasat şırınga ile 5 mi hasat şırınga yerine ve perfüzyon daha yüksek bir hızda (kadar 4 mL / dak) kullanılarak karaciğer perfüzat en az 20 ml toplar. Sürekli toplama şırıngaya perfüzyon akışını izlemek, ve (vena kava duvarları çöken yoluyla iğne tıkayabilir olan) çok güçlü vakum kaçının.
- Karaciğer rengi açık kahverengi döndüğünde perfüzyon sonlandırın.
- lökositler Ekstraksiyon
- süpernatantı aspire
- 10 dakika boyunca 400 x g'de 10 ml PBS, santrifüj ekleyin ve süpernatant aspire. Çalışma hedeflerinize dayalı olarak, olduğu gibi hazırlık kullanın veya ek saflaştırma (örneğin, yoğunluk-gradyan ayırma) yürütmek.
- Spesifik olarak, tabaka, 50 cc'lik bir polipropilen santrifüj tüpüne yoğunluk gradyanlı ayrıştırma kütlesinin 4 ml üzerinde perfüzat 4 mi. Devre dışı ile 30 dakika boyunca, 754 x g'de oda sıcaklığında tüpler dönerler.
- Manuel pipetleme yoğunluk-gradyan ayırma-süpernatant arayüzünde tek çekirdekli katmanları elde PBS içinde yıkayın ve 5 ml'lik bir tüp içine yerleştirin.
2. Fare Protokolü
- hazırlıklar
- Fosfat ml'si başına koruyucu serbest heparinin 30 adet ekleyerek, oda sıcaklığında (RT) kullanılmak üzere, heparinize PBS (30 birim / ml) çözeltisi hazırlayın tuz (PBS) 1 x eriyik tamponlun. hayvan başına 20 ml hesaplayın.
- Hava kabarcıklarını yok etmek için peristaltik pompa hatları ve kelebek iğne yoluyla heparinize PBS geçirin.
- (Yerçekimi (kuru) ayarında en az 30 dakika süreyle 121 ° C'de otoklav) makas 2 çift, körelmiş kenarlı forseps, 2 hemostat ve diş doku forseps - cerrahi aletler sterilize edin.
- MH-lökosit Karaciğer ve Toplama perfüzyon
- % 8 izofluran aşırı dozda ile hayvan Euthanize. Önlem olarak, onun göğüs boşluğunu açarak kadar fare başının etrafında bir izofluran batırılmış pedi içeren 15 ml tüp yerleştirin.
- Bir yatağa fare uzuvlarını sabitleyin.
- bozulmamış diyaframın alt yönü tutarak, karaciğer ve solunum kesilmesi üzerine hemen kardiyopulmoner kompleksi ortaya çıkarmak için periton ve göğüs boşlukları açın (bir boşaltma göğüs boşluğu havuzu oluşturmak için). Bu süreçte kanama kaçının.
- Özellikle, düşük kesi başlatmakÜst göğüs boşluğu seviyelere içlerinden kesme çapraz kaburga doğru her iki taraf için karın orta hat zarar iç organları olmadan nokta, ve ilerleme.
- portal ven ortaya çıkarmak için, deneycinin sağa hayvan dışında bağırsak ve yeri çekilme.
- dalak damara portal ven rostral bir peristaltik pompaya bağlı bir 30 g iğne, yerleştirin.
- göğüs boşluğundan perfüzat drenaj ve toplama izin diyafram yukarıda inferior vena kava kesti.
- yaklaşık olarak 3 ml / dakika bir hızda peristaltik pompa açın ve yavaşça göğüs boşluğu havuzundan kan ile kirlenmiş olan perfüzat ilk 3 ml toplar.
- Bu perfüzat atın. Gerekirse tuz kullanılarak, yine böyle bir yıkama tekrarlayın ve ancak ondan sonra karaciğer perfüzyon toplamaya başlar.
- Yeniden başlatma kadar ml / dakika ila 4 arasında bir hızla perfüzyon ve kullanılarak göğüs boşluğundan perfüzat 10 ml toplarbir şırıngaya bağlanmış bir kelebek.
- Karaciğer rengi açık kahverengi döndüğünde perfüzyon sonlandırın.
- lökositler Ekstraksiyon
- Santrifüj 400 x g'de 10 dakika boyunca perfüze.
- süpernatant aspire.
- 10 dakika boyunca 400 x g'de 10 ml PBS, santrifüj ekleyin ve çalışma hedefleri dayanarak süpernatant aspire, olduğu gibi hazırlık kullanın veya ek saflaştırma (örneğin, yoğunluk-gradyan ayırma) yürütmek.
- Spesifik olarak, tabaka, 50 cc'lik bir polipropilen santrifüj tüpüne yoğunluk gradyanlı ayrıştırma kütlesinin 4 ml üzerinde perfüzat her 4 mi. Devre dışı ile 30 dakika boyunca, 754 x g'de oda sıcaklığında tüpler dönerler.
- Manuel pipetleme yoğunluk-gradyan ayırma-süpernatant arayüzünde tek çekirdekli katmanları elde PBS içinde yıkayın ve 5 ml'lik bir tüp içine yerleştirin.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
F344 sıçanlarda karaciğer dokusunun mekanik taşlama aşağıdaki tüm karaciğer hücre popülasyonunun sitotoksisite (zorla karaciğer perfüzyon ile karaciğer sinüsoidlerinden toplanan) MH-NK hücrelerinin sitotoksisitesini karşılaştırıldı ve lökosit dolaşan sitotoksisite. Tüm hücre preparatları imünolojik deneylerde rutin olarak, en az 3 kez yıkandı ve hedef hücre çizgileri gibi allojenik YAC-1 veya singeneik MADB106 hedef hücre çizgileri kullanılır. Şekil 1'de gösterildiği gibi - 4 MH-NK hücreleri, bütün karaciğer hücre popülasyonu (Şekil 1) ve hem de MADB106 ve YAC-1 hedef hücre hatlarına karşı (~% 80 ve% 100, kadar) derin bir sitotoksisite arzetmiştir dolaşımdaki lökositler, (Şekil 2 ve 3) son derece düşük sitotoksisite düzeyleri ve genetik olarak özdeş MADB106 hedef hücre çizgisine karşı hemen hemen hiç öldürme gösterilir. aynı relatiMekanik olarak işlenen karaciğerler çamaşır ve yoğunluk dereceli ayırma (Şekil 4), literatürde tipik seviyeleri uygulanan zaman sitotoksisite düşük seviyelerde belirgindi ettik. Bu nedenle, MH-NK hücreleri F344 sıçanlarda sitotoksisite benzersiz yüksek seviyelerine sahip olurlar. FACS analizi yapılmış ve şu hücre alt bileşiminde belirgin farklılıklar ortaya çıktı: monositler (CD161dim), NK hücreleri (CD161 parlak), T hücreleri (CD3), B hücreleri (CD45) ve NKT (CD161 ve CD3) hücreleri. Olgunlaşma profili (CD11b / CD27) önemli farklılıklar da (Şekil 5) farklı bölmeleri arasında belirgindi.
Şekil 1:. MH-bölmesinden throu hasat Bütün Karaciğer Hücre Nüfus sitotoksisite (YAC-1 Hedef Hücre Hattı) MH-NK hücreleri (MH-NK Hücrelerinin Sitotoksitenin Karşılaştırılması,karaciğer mekanik işleme yoluyla hasat tüm karaciğer hücre popülasyonu, minimum seviyelerde (p <0.05) sergilemiştir, YAC-1 hedef hücre çizgisine karşı derin sitotoksik aktivite göstermiştir), burada tarif edilen bir yaklaşım gh. X ekseni efektör-hedef hücre oranı temsil eder. Veri ortalama ± SEM olarak sunulmaktadır. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Şekil 2: lökositler (YAC-1 Hedef Hücre Hattı) Döner sitotoksisi MH-NK Hücrelerinin Sitotoksitenin Karşılaştırılması. Dolaşımdaki lökositler, sitotoksisite minimal seviyelerde sergilemiştir (burada tarif edilen yaklaşımla MH-bölmesinden hasat) MH-NK hücreleri, YAC-1 hedef hücre çizgisine karşı derin sitotoksisite sergiledi(P <0.05). X ekseni efektör-hedef hücre oranı temsil eder. Veri ortalama ± SEM olarak sunulmaktadır. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Şekil 3:. (Burada açıklanan yaklaşımla MH-bölmesinden hasat) lökositler (MADB106 Hedef Hücre Hattı) MH-NK hücrelerini Döner sitotoksisi MH-NK hücrelerinin Sitotoksitenin Karşılaştırılması, singeneik MADB106 karşı derin sitotoksisite sergiledi dolaşımdaki lökositler, sitotoksisite (p <0.05) en az düzeyde sergilemiştir, hücre hattı hedefler. X ekseni efektör-hedef hücre oranı temsil eder. Veri ortalama ± SEM olarak sunulmaktadır. Tıklayınız to bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntüleyin.
Şekil 4:. MH hasat yoğunluk-radyan Ayırma (YAC-1 hedef hücre çizgisi) MH-NK hücreleri (tamamen yıkanır ve zenginleştirilmiş Bütün Karaciğer Lenfositler sitotoksisitesi MH-NK hücrelerin sitotoksisitesinin bir karşılaştırması, yıkanmış ve) yoğunluk-gradyan ayrılması yoluyla zenginleştirilmiş mekanik işleme, aşağıdaki tüm karaciğer lenfositler (kadar (sitotoksisite önemli ölçüde daha düşük düzeylerde görüntülenen ise burada açıklanan yaklaşımla bölme), YAC-1 hedef hücre çizgisine karşı derin sitotoksisite sergiledi % 30) (p <0.05), literatürde genel olarak geçerli olduğunu. X ekseni efektör-hedef hücre oranı temsil eder. Veri ortalama ± SEM olarak sunulmaktadır. LütfenBu rakamın büyük halini görmek için buraya tıklayın.
Şekil 5:. Monositler (CD161dim), NK hücrelerini: Sirkülasyon Sığır kanından mononükleer MH-mono- nükleer ve Tüm Karaciğer mononükleer hücrelerden mononükleer hücre alt ve NK hücre alt Karşılaştırılması FACS analizi aşağıdaki hücre alt kompozisyonunda belirgin farklılıklar gösterir (CD161 parlak), T hücreleri (CD3), B hücreleri (CD45) ve NKT (CD161 ve CD3) hücreleri yanı sıra farklı bölmeleri arasındaki olgunlaşma profili (CD11b / CD27) farklılıklar. büyük halini görmek için tıklayınız bu rakamın.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Burada sunulan karaciğer perfüzyon yöntemi seçici bir hasat sağlar ve hepatik lökosit marginating benzersiz nüfusun incelenmesi. Ayrıca çukur hücreleri 3 olarak adlandırılan Karaciğer NK hücreleri, hepatik sinüzoitlerde ikamet farklı bir NK hücre popülasyonunu oluşturmaktadır. Bunlar, sıçanlar, fareler 17 ve insanlarda 18,19 bulunmaktadır. Izole edilmiş periferal NK hücreleri ile karşılaştırıldığında, çukur hücreleri küçük sitoplazmik granüllerin 20 daha yüksek bir sayı ve bu LFA-1 12 gibi yüzey antijenleri, daha yüksek bir ekspresyonu olduğu gösterilmiştir YAC-1 ve CC531s hedef hücre çizgileri 20 karşı daha yüksek bir sitotoksisite göstermiştir . Ayrıca, izole kan NK hücreleri aksine, çukur hücreleri, NK dayanıklı P815 hücreleri lize olabilir. Fareye benzer bir çukur hücreleri, insan karaciğer NK hücreleri, NK hücreleri 18,19 dolaşımdaki göre NK duyarlı K562 hedef hücrelere karşı yüksek bir sitotoksisite sahiptir ve lize NK dayanıklı hedef hücreleri 18 gösterilmiştir. KapsamlıKaraciğer özellikle ve benzersiz çeşitli hastalıklarda dahil olduğu l, bağışıklık, bu organın içindeki incelenmesi gereken ve MH bölmenin hücreleri parankimal, Kupffer ve stellat hücrelerin ayırt edilmelidir.
Giriş bölümünde ayrıntılı bir şekilde anlatılan, bizim perfüzyon yaklaşım seçici hasat MH lökositler ortak mekanik öğütme / biyolojik bozulma prosedürleri üzerinde avantajlıdır, ve daha iyi bütünlük, aktivite ve MH lökositlerin fizyolojik ortam koruyarak. Nitekim, NK sitotoksisite değerlendirilmesi, bizim yaklaşım ile hasat MH lökositler NK hücrelerinin benzer sayısına rağmen, mekanik öğütme prosedürü yoluyla hasat lökositler daha belirgin bir şekilde yüksek NK sitotoksisite sergiledi.
Karaciğer perfüzyon tekniği hayvan çalışmalarında sadece çalıştırılabilir. biyolojik soru olabilir bağışıklık bölmeleri arasındaki Ancak, bu yaklaşımın elde edilen özel anlayışlar işaretli konusunda sahip farklarEl ve sadece lökosit dolaşan dayalı gözlemlerin klinik önemi. Farklı bağışıklık bölümlerinde bağışıklık endeksleri ölçmek Hayvan çalışmaları dolaşımda her immünolojik endeksi yansıtan veya MH bölmesinde kendi seviyeleri ile korelasyon olduğu derecesini önerebilir. İlginç bir gözlem perfüze MH NK hücreleri, sadece bir hayvan 21 bir a priori bağışıklık uyarımını takiben hedef hücrelere karşı önemli bir sitotoksik aktivite gösterecek farelerde Bu tekniği kullanılarak ifade eder.
tekniğin birkaç kritik yönleri belirtilmelidir. Her iki sıçan ve farelerde, göğüs boşluğu solunumun tam kesilmesini takiben yaygın hemen açıldı ve minimal kanama ile yapılmalıdır. Sıçanlarda, kardiyak kan maksimum miktarda perfüzyon önce geri önerilir. Bu portal ven kan basıncını azaltır ve farelerde, bu kalp çekilen kan önerilmezbu işleme devam aracılığıyla zor iğneyi yapar. bir iğne istikrarlı bir konumda olmak için karaciğere portal ven girişinde yerleştirilmesi mesafe yeterli olduğundan emin olmak isteyen ve tüm sağlayan bu iğne ekleme, dalak ven bitişik ama rostral yapılmalıdır lobları perfüze almak için. yüzeyine paralel, yani damar duvarı yırtılma riski en aza düşürülürken iğne portal ven içine sokulmalıdır. perfüzat toplanması için kaudal vena kava bir iğne takarken sıçanlarda, perfüzat potansiyel sızıntısını önlemek için mümkün olduğunca dar giriş noktasını korumak için çok önemlidir. Farelerde, gereksiz kan kirlenmesini önlemek amacıyla, diğer kan damarlarını veya akciğerleri çatlatılmadan göğüs boşluğunun içine vena kava kesti precociously önemlidir. peristaltik bir pompa kullanılarak en büyük avantajı olan arasında, perfüzyon oranı üzerinden sabit bir kontrolüHayvanlar. Portal ven kopma önlemek amacıyla tüm prosedür sırasında düşük bir akış oranının muhafaza etmek önemlidir. Karaciğer perfüzat ilk mililitre kan ile kontamine olarak gösterildiği gibi, bu atılmalıdır. hayvanlar arasındaki standardizasyonu sağlamak için, MH, perfüzyon toplamaya başlamak için kriter açık kahverengi (ziyade, belirli bir hacim toplanması) koyu kahverengi renk geçişi dayanmaktadır.
prosedürü iletken boyunca, çeşitli arızalar meydana gelebilir, ancak çoğu geri dönüşümlüdür. PBS karaciğer içine transfüzyon hangi aracılığıyla iğne dışarı kayıyor ise, biraz daha rostral pozisyonda iğne tekrar takın, (daha iyi görünürlük elde etmek için), peristaltik pompa durdurmak bağırsak çevredeki emmek için tavsiye edilir, ve pompayı yeniden başlatın.
Burada tarif edilen karaciğer perfüzyon tekniği oldukça basit bir süreç içinde MH lökosit nüfusun seçici hasat sağlar. verilmişBu nüfus ayırt edici özellikleri diğer bağışıklık bölmelere lökositlerin karşılaştırıldığında, ve organizma için biyolojik ve klinik öneme sahip olabilir görüntüler diğer bölmelere gelen lökositler MH nüfusun profilini yansıtmıyor olabilir zaman mümkün, biz bu yöntemin kullanılmasını tavsiye ederiz. Bu tekniğin insanlarda yapılabilir değil Buna ek olarak, biz daha fazla özellikle karaciğer ile ilgili süreçleri ve hastalıkları okuyan MH özellikleri ile ilişkili spesifik dolaşan biyomarkerları netleştirmek için hayvanlarda da istihdam öneririz.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Autoclud Peristaltic pump | |||
| Butterfly needle | OMG | 26 G | |
| Butterfly needle | OMG | 21 G*3/4" | |
| Syringe | Pic solution | 1 ml | |
| Syringe | Pic solution | 2.5 ml | |
| Syringe | Pic solution | 5 ml | |
| Syringe | Pic solution | 10 ml | |
| Syringe | Pic solution | 25 ml | |
| Blunted-edged forceps | |||
| Scissors | |||
| hemostat | |||
| Tissue forceps | |||
| 22 W Fluorescent Daylight Magnifier Lamp |
References
- Melamed, R., et al. The marginating-pulmonary immune compartment in rats: characteristics of continuous inflammation and activated NK cells. J Immunother. 33, 16-29 (2010).
- Benish, M., Melamed, R., Rosenne, E., Neeman, E., Sorski, L., Levi, B., Shaashua, L., Matzner, M., Ben-Eliyahu, S. The marginating-pulmonary immune compartment in mice exhibits increased NK cytotoxicity and unique cellular characteristics. Immunologic Research. 58, 28-39 (2014).
- Wisse, E., van't Noordende, J. M., van der Meulen, J., Daems, W. T. The pit cell: description of a new type of cell occurring in rat liver sinusoids and peripheral blood. Cell Tissue Res. 173, 423-435 (1976).
- Vermijlen, D., et al. Hepatic natural killer cells exclusively kill splenic/blood natural killer-resistant tumor cells by the perforin/granzyme pathway. J Leukoc Biol. 72, 668-676 (2002).
- Gao, B., Radaeva, S., Park, O. Liver natural killer and natural killer T cells: immunobiology and emerging roles in liver diseases. J Leukoc Biol. 86, 513-528 (2009).
- Kaneda, K. Liver-associated large granular lymphocytes: morphological and functional aspects. Arch Histol Cytol. 52, 447-459 (1989).
- Podack, E. R., Hengartner, H., Lichtenheld, M. G.
- Kamada, M. M., et al. Identification of carboxypeptidase and tryptic esterase activities that are complexed to proteoglycans in the secretory granules of human cloned natural killer cells. J Immunol. 142, 609-615 (1989).
- Wisse, E., et al. On the function of pit cells, the liver-specific natural killer cells. Semin Liver Dis. 17, 265-286 (1997).
- Bouwens, L., Remels, L., Baekeland, M., Van Bossuyt, H., Wisse, E. Large granular lymphocytes or "pit cells" from rat liver: isolation, ultrastructural characterization and natural killer activity. Eur J Immunol. 17, 37-42 (1987).
- Vanderkerken, K., et al. Origin and differentiation of hepatic natural killer cells (pit cells). Hepatology. 18, 919-925 (1993).
- Luo, D., et al. The role of adhesion molecules in the recruitment of hepatic natural killer cells (pit cells) in rat liver. Hepatology. 24, 1475-1480 (1996).
- Shresta, S., MacIvor, D. M., Heusel, J. W., Russell, J. H., Ley, T. J. Natural killer and lymphokine-activated killer cells require granzyme B for the rapid induction of apoptosis in susceptible target cells. Proc Natl Acad Sci U S A. 92, 5679-5683 (1995).
- Luo, D., et al. Involvement of LFA-1 in hepatic NK cell (pit cell)-mediated cytolysis and apoptosis of colon carcinoma cells. J Hepatol. 31, 110-116 (1999).
- Wiltrout, R. H., et al. Augmentation of mouse liver-associated natural killer activity by biologic response modifiers occurs largely via rapid recruitment of large granular lymphocytes from the bone marrow. J Immunol. 143, 372-378 (1989).
- Schluter, K., et al. Organ-specific metastatic tumor cell adhesion and extravasation of colon carcinoma cells with different metastatic potential. Am J Pathol. 169, 1064-1073 (2006).
- Wiltrout, R. H., et al. Augmentation of organ-associated natural killer activity by biological response modifiers. Isolation and characterization of large granular lymphocytes from the liver. J Exp Med. 160, 1431-1449 (1984).
- Winnock, M., et al. Functional characterization of liver-associated lymphocytes in patients with liver metastasis. Gastroenterology. 105, 1152-1158 (1993).
- Hata, K., et al. Isolation, phenotyping, and functional analysis of lymphocytes from human liver. Clin Immunol Immunopathol. 56, 401-419 (1990).
- Vanderkerken, K., Bouwens, L., Wisse, E. Characterization of a phenotypically and functionally distinct subset of large granular lymphocytes (pit cells) in rat liver sinusoids. Hepatology. 12, 70-75 (1990).
- Sorski, L., Melamed, R., Lavon, H., Matzner, P., Rosenne, E., Ben-Eliyahu, S. PNIRS Annual Scientific meeting, Seattle, , (2015).
