Introduction
Corsa emorragia ha dimostrato di verificarsi in oltre l'8% dei pazienti che soffrono di dolore neuropatico, di cui il dolore post-ictus come centrale (CPSP). 1-3 CPSP può derivare da una disfunzione somatosensoriale, inducendo in tal modo ipersensibilità e allodinia. 4 Tuttavia , i meccanismi fisiopatologici della disfunzione somatosensoriale in CPSP rimangono incerte. Per esempio, la perdita delle sensazioni somatiche risulta da deafferentazione neuronale nella zona emorragica cerebrale. Iperalgesia può essere causato dal ipereccitabilità dei neuroni centrali nocicettivi o disinibizione centrale, 5, 6, ma i substrati neurali che sono coinvolti nei sintomi cpsp rimangono sconosciute. Alcuni studi hanno suggerito che la corteccia dorsolaterale prefrontale (dPFC), rostrale della corteccia cingolata anteriore (ACC), amigdala, ippocampo, grigio periacqueduttale (PAG), midollo rostrale ventromediale, e le loro connessioni con l'altro mediano di elaborazione nocicettivo. 7 Ulterioricircuiti -amygdala Ly, corteccia prefrontale mediale (mPFC) hanno dimostrato di essere coinvolto nella percezione del dolore legati. 8 I dati sui meccanismi fisiopatologici della CPSP sono diverse, e l'attivazione di substrati neurali in CPSP ha bisogno di un ulteriore esame.
[14 C] -Iodoantipyrine (IAP) si usa un assorbimento di osservare indirettamente regionale del flusso ematico cerebrale (rCBF), ipotizzando una relazione tra attività cerebrale e CBF. Anche se [14C] -IAP non può valutare l'attività cerebrale in tempo reale, come ad esempio con la risonanza magnetica funzionale (fMRI), che ha diversi vantaggi. Ad esempio, [14C] -IAP è adatto per misurare spontaneamente si verificano eventi cerebrali durante gli stati patologici. 9, inoltre, [14C] -IAP assorbimento è misurata senza anestesia. Costa anche meno di altri metodi di imaging, tra cui fMRI e la tomografia ad emissione di positroni (PET). Il metodo [14 C] -IAP è stato suggerito in modo appropriato per measuring dolore spontaneo (ad esempio, CPSP) che è indotta da lesioni del nucleo basale ventrale (VB) del talamo. 9
Il presente Protocollo descrive come eseguire il -IAP metodo di [14C] per valutare il coinvolgimento dei substrati neurali di CPSP che è indotta da lesioni della VB del talamo in un modello animale. La tecnica offre un modo di determinare i meccanismi fisiopatologici che sono alla base dei sintomi cpsp a livello comportamentali e neuronali.
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Protocol
Il protocollo in questo studio ha ricevuto l'approvazione dalla Sinica Istituzionali Animal Care Academia e del Comitato utilizzo a Taiwan.
1. preparati per animali
- Ottenere ratti maschi Sprague-Dawley (circa 300 - 400 g). Mantenere i ratti in una stanza con aria condizionata (21 - 22 ° C, 50% di umidità) sotto un / ciclo di 12 ore 12 ore di luce / buio (luce accesa alle 8:00 AM) con libero accesso a cibo e acqua.
2. Procedura sperimentale
- Consentire a tutti i ratti per adattarsi all'ambiente nelle loro gabbie a casa per 1 settimana prima degli esperimenti. Durante l'adattamento, eseguire la von Frey e prove di plantari per stabilire linee di base.
- von Frey test
- Posizionare il ratto in una custodia acrilica (30 cm x 30 cm x 80 cm) per 30 min per abitazione.
- Ottenere filamenti von Frey (filamento no 11 -. 20) che hanno la stessa lunghezza ma variando diametri di fornire una gammadelle forze di 2 - 100 g.
- Per valutare la soglia paw recesso hindpaw del ratto, utilizzare filamenti von Frey per stimolare centro delle hindpaws tramite una porta a rete sulla piastra acrilica ad intervalli tra le prove 5 min. Per registrare la massima pressione applicata, utilizzare i filamenti in ordine crescente, dal basso verso l'alto, fino a quando viene registrata la massima pressione applicata. 10
- Quando i topi mostrano una risposta zampa di ritiro alla stimolazione, registrare il numero filamento. Determinare la risposta recesso in questo processo secondo stimolo più basso.
- Ripetere la stessa procedura immediatamente, per un totale di tre volte consecutive sullo stesso ratto. Convertire il numero filamento nel corrispondente forza (in grammi) e la media dei valori.
- plantare test
- Posizionare il topo in una scatola di plexiglas trasparente (diviso in quattro fotogrammi, 80 centimetri × 30 cm x 15 cm) per 30 minuti per l'abitazione.
- Utilizzare un inffascio NOMINALE per stimolare il centro della hindpaw attraverso una lastra di vetro. Regolare l'intensità della luce infrarossa per ottenere una latenza media di risposta zampa il ritiro di circa 10 sec. Effettuare una prova premendo un tasto che accende la sorgente di luce infrarossa e avvia un timer a stato solido digitale. Manipolare la durata del fascio di luce infrarossa.
- Registrare la durata della luce infrarossa quando i topi mostrano una risposta paw recesso. La più lunga durata non deve superare i 20 secondi in ogni prova al fine di evitare danni ai tessuti. Utilizzare un intervallo tra le prove di almeno 5 minuti per evitare la stimolazione successiva.
- Ripetere il test con tre prove per le hindpaws destra e sinistra, e calcolare la media per ogni hindpaw per ogni ratto.
- Chirurgia Collagenasi Lesione
- Anestetizzare il topo con il 4% isoflurano fino alla perdita della risposta toe-pinch e le risposte somatiche a verificarsi stimoli chirurgici. Mantenere l'anestesia con 1,5-2% isoflurane per la durata dell'intervento.
- Posizionare il topo in un dispositivo stereotassico con una semplice piastra elettrica per mantenere la temperatura corporea a 36,5-37,5 ° C. Applicare crema per gli occhi sugli occhi per prevenire la secchezza mentre sotto anestesia.
- Accorciare il pelo con un rasoio elettrico sterilizzati, e fare una incisione liscio (circa 2-2,5 cm) con un bisturi lungo la linea mediana del cuoio capelluto. Pulire la pelle e il cranio con alternanza di provvidenza iodio e soluzione alcolica al 75% per la disinfezione. Durante la fase chirurgica, utilizzare il 75% di alcool per sterilizzare tutti i dispositivi, strumenti, e il banco di lavoro per mantenere condizioni di sterilità. Prima di allora, tutti i materiali chirurgici devono essere sterilizzati in autoclave a vapore.
- Utilizzare i guanti e strumenti sterili, e praticare un piccolo foro (3 mm di diametro) nel cranio con un trapano elettrico su VB (compresi ventrale nucleo postero-talamo [VPM] e ventrale postero nucleo talamo [VPL]) del talamo (3.0 -3.5 mm posteriormente, 3,0-3,5 mm lateralial bregma, e 5,5-5,8 mm di profondità dalla superficie del cranio).
- Microinject 0,5 ml di soluzione fisiologica o 0,125 U di tipo 4 soluzione di collagenasi nel controllo e gruppi sperimentali, rispettivamente.
- Mantenere l'ago di iniezione in posizione per altri 5 minuti per consentire la diffusione del farmaco.
- Utilizzare cemento dentale per riempire il buco nel cranio, e suturare l'incisione. Dopo l'incisione di sutura, applicare le anestetici locali (lidocaina analgesici unguento) per la ferita, e restituirli alla loro gabbie casa.
- Dopo l'intervento chirurgico, singolarmente ospitare i ratti in gabbie di plastica fino a quando mantengono decubito sternale, e mantiene caldo fino recuperato da anestesia.
- Test comportamentali dopo il recupero chirurgico
- Dopo 7 giorni di recupero da un intervento chirurgico, ripetere le procedure di cui ai punti 2.2 e 2.3 per la fase di test. Eseguire i test comportamentali per 4 settimane durante il monitoraggio della salute e lo stato di sviluppo degli animali.
- Anestetizzare ratto con isoflurano 4%, e mantenere la temperatura corporea 36,5 - 37,5 ° C con una semplice piastra elettrica.
- Con un bisturi, tagliare due fori (cm diametro 2 ciascuno) sulla linea mediana della parte dorsale arti anteriori e intersezione della parte ventrale della spalla sinistra e la cavità toracica, rispettivamente.
- Dissociare la pelle e il muscolo con un paio di forbici tra i due fori.
- Collegare un'estremità del PE 50 tubi (20 cm di lunghezza) alla vena giugulare esterna attraverso il foro ventrale. Collegare l'estremità terminale dello stesso PE 50 tubi al foro dorsale, e apporre alla pelle.
- Utilizzare una siringa per iniettare soluzione fisiologica nella vena giugulare per verificare che il tubo PE 50non sia ostruito.
- Suturare l'incisione, e iniettare i topi con 6 mg / kg di gentamicina (per via intraperitoneale).
- Lavare il tubo a giorni dopo l'intervento con 0,3 ml di soluzione salina allo 0,9%, seguiti da 0,1 ml di soluzione salina con 20 U / ml di eparina.
- Una settimana dopo il punto 2.6, ripetere i passaggi 2,2-2,3 per confermare che il comportamento è stabile rispetto al punto 2.5 dopo il recupero chirurgico.
- Posizionare il ratto in una gabbia di riposo per 5 - 10 min di adattamento.
- Utilizzando uno splitter, il collegamento PE 50 tubi a due 1 ml siringhe. Riempire una siringa con soluzione fisiologica e riempire l'altra con [14 C] -IAP soluzione (125 pCi / kg in un volume di 0,3 - 0,5 ml).
- Iniettare il radiofarmaco nella vena giugulare esterna, e sostituire la siringa con un'altra siringa piena di cloruro di 3 M di potassio.
- Dieci secondi dopo la inj radiofarmacoessione, iniettare cloruro di 3 M di potassio sotto una dose eccessiva di isoflurano, e sacrificare gli animali secondo metodi eutanasia standard (ad esempio, isoflurano da un vaporizzatore per 50 min) sulla base delle linee guida del Sinica Istituzionale Animal Care mondo accademico e Comitato utilizzo in Taiwan.
- Dopo 1 minuto, esporre il cranio, e tagliare il muscolo restante. Utilizzando rongeurs, staccarsi la superficie dorsale del cranio dal cervello. Tagliare via i lati del cranio con Rongeurs. Successivamente, utilizzando una spatola, tagliare i bulbi olfattivi e connessioni nervose lungo la superficie ventrale del cervello, e rimuovere il cervello.
- Utilizzare mescola ottimale temperatura di taglio (OCT) per congelare il cervello in ghiaccio secco e metilbutano (circa -55 ° C). Conservare il tessuto cerebrale in un congelatore. 11, 12
- Orientare il tessuto in un microtomo, con hindbrain rivolto verso il basso. Utilizzare un criostato per tagliare il cervello a 20 &# 181; m sezioni di spessore.
- Mettere le fette di cervello su vetrini da microscopio in un criostato a -20 ° C, con un intervallo di 240 micron tra ogni fetta.
- Porre i vetrini da microscopio e cinque carte da filtro standard con radioattività classificato in cassette di esposizione per 3 giorni a -20 ° C. Secondo la sequenza delle sezioni di cervello, disporre i vetrini per microscopio da cima a fondo. Infine, posizionare le carte da filtro nel fondo delle cassette. 12
- Rimuovere lo schermo di fosfori dalle cassette di esposizione, e utilizzare un imager-mode variabile per leggere lo schermo fosforo e generare immagini per mostrare [14 C] -IAP assorbimento per le fette di cervello.
Analisi 3. Dati
- Dopo il punto 2.9.4, regolare le immagini utilizzando Statistical Parametric Mapping (SPM) e il software ImageJ. Ricostruire tutte le immagini utilizzando sezioni coronali di serie. Liscio e normalizzare le immagini secondo un modello di cervello di ratto di riferimento.12, 13
- Per valutazioni quantitative, misurare la regione-di-interesse (ROI) delle immagini del cervello utilizzando il software ImageJ per determinare l'intensità del segnale dei pixel, e utilizzare il software statistico per l'analisi. 12, 13
- Per indagare le connessioni tra i diversi nuclei cerebrali, usare MATLAB software di analisi di correlazione per visualizzare il rapporto radioattività in una matrice di correlazione interregionale, e visualizzare le matrici come mappe di colore. Infine, utilizzare il software Pajek per l'analisi di rete. 12, 13
- Utilizzare 2 × 5 bidirezionale analisi mista della varianza (ANOVA), con il gruppo e settimane come fattori di confrontare la durata della tolleranza al calore nella prova plantare e forza meccanica nel test von Frey nei gruppi sham e cpsp al basale e settimane 1 - 5. Utilizzare un 2 × 31 ANOVA a due vie per misurare il rapporto di radioattività in base al gruppo e la zona del cervello. Se del caso, condurre una differenza significative di Tukey (HSD) test post hoc. Calla correlazione di Pearson colare coefficienti per valutare le correlazioni tra tutte le aree cerebrali selezionate nella farsa e gruppi cpsp.
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Representative Results
La figura 1A illustra la timeline sperimentale. I ratti sono stati assegnati alla farsa e gruppi cpsp per i test comportamentali (ad esempio, von Frey prova e plantare test). Il primo giorno dell'esperimento servito come base di riferimento, e le prove sono state ripetute alle settimane 1 - 5. PE-50 cateterizzazione è stata eseguita nella vena giugulare esterna alla settimana 4. L'eparina (20 U / ml, 0,1 ml / giorno) è stato iniettato durante settimane 4 e 5. Cinque minuti dopo l'iniezione di eparina, [14C] -IAP è stato iniettato, seguita 10 secondi più tardi da una dose eccessiva di anestetico per il sacrificio. Un minuto più tardi, i ratti sono stati decapitati, e fettine di cervello OCT-embedded sono state fatte. Figura 1B illustra i ratti in un dispositivo chirurgico stereotassico, siti cannula di impianto, e la mappa istologica delle fette di cervello sulla base di un ratto atlante del cervello. Figura 1c mostra foro destro della vena giugulare esterna in rosso, la posizione del tubo PE 50, eapparato sperimentale finale.
La figura 2A mostra sezioni di cervello che sono stati esposti nei cassetti. Lo schermo al fosforo è stato analizzato utilizzando un imager-mode variabile. Campioni e dati standard per le fette di cervello sono stati poi analizzati. Figura 2B mostra le curve autoradiografici standard. Il pannello di sinistra mostra la relazione tra l'intensità dell'immagine (pixel / mm 2) e conta di radioattività per minuto (CPM), ottenendo così la seguente equazione lineare previsto: Y = 44.542X + 196,24. Il pannello di destra mostra che la risoluzione (pixel / mm 2) è stato migliorato come il tempo di esposizione maggiore (in giorni). La risoluzione ottimale è stata osservata il giorno 4.
La Figura 3A mostra la configurazione sperimentale per la prova plantare, che valuta dolore termico. Il gruppo CPSP mostrato una significativa diminuzione della soglia di ritiro zampa
La figura 4A mostra i ROI in un atlante anatomico. L'analisi ROI dimostrato che l'attivazione della corteccia infralimbica (IL), corteccia prelimbic (PRL), e cingolo zona corticale 1 (Cg1) era significativamente maggiore nel gruppo CPSP nell'emisfero destro, con l'eccezione del VB (Figura 4B) .
Sono state osservate differenze in correlazioni interregionali di rCBF tra i gruppi cpsp e sham nell'emisfero destro (Figura 4C). La matrice (di Fisher Z-statistics) di tutte le regioni è stato analizzato utilizzando la correlazione di Pearson. La figura 4C mostra le differenze di correlazioni interregionali del coinvolgimento di substrati neurali nel gruppo CPSP. substrati neurali collegata al dolore sono stati determinati analizzando le differenze di correlazioni interregionali di rCBF. Le linee rosse nella figura 4D indicano significative correlazioni positive, e le linee blu indicano significative correlazioni negative.
Figura 1. sperimentale Timeline della lesione del ventrale basale Nucleo (VB) del talamo per indurre centrale post-ictus Pain (CPSP) e Iniettare -IAP [14 C]. (A) ventrali lesioni nuclei della base per indurre CPSP per le valutazioni comportamentali e iniezioni di [14C] -IAP per misurare l'attivazione di substrati neurali che sono coinvolti nella CPSP. (B) Posizione di VB. (C) [14 C] -IAP iniezioni. Barra di scala = 1 mm. Clicca qui per vedere una versione più grande di questa figura.
Figura 2. Le curve standard autoradiografici. (A) del campione e le curve standard sono state ottenute per i diversi tempi di esposizione e le risoluzioni di immagine. (B) Curva standard di intensità dell'immagine e CPM e curva standard del tempo di esposizione e di risoluzione. Si prega di cliccare qui per visualizzare un più grande versione di questa figura.
Fifigura 3. Il test plantare (Thermal Pain) e von Frey test (dolore meccanico) sono state condotte nel Sham e cpsp gruppi al basale e settimane 1 - 5. (A) ratti cpsp esibito una soglia più bassa di ritiro zampa nel test plantare ( vale a dire, meno tolleranza al calore) rispetto ai ratti sham, che indica una maggiore dolore termico. (ratti B) cpsp esibito una soglia di ritiro zampa più bassi nel test di von Frey rispetto ai ratti sham, indicando una maggiore dolore meccanico. SEM, errore standard della media. Asterischi verdi (*) indicano una differenza significativa rispetto al gruppo sham. Cliccate qui per vedere una versione più grande di questa figura.
Figura 4. analisi del ROI e il rapporto tra Inter-RCorrelazioni REGIONALI Tra neurali Substrati coinvolti in CPSP. (A) le aree del cervello sono stati determinati e analizzati dalla formulazione rapporto. (B) Il ROI in IL, PrL, Cg1, e VB sono risultati significativamente differenti nell'emisfero destro. (C) Analisi di rCBF nelle aree cerebrali selezionate. (D) correlazioni inter-regionali tra le aree del cervello. Fai clic qui per vedere una versione più grande di questa figura.
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Discussion
Nei test comportamentali, il gruppo CPSP esibito una riduzione della soglia di ritiro zampa nella prova dolore termico e forza meccanica nella prova di von Frey al basale e le settimane 1 -. 5. I risultati erano coerenti con uno studio precedente 14
Il [14 C] metodo -IAP basa sull'intensità del pixel di immagini del cervello per l'analisi quantitativa di diverse sezioni di cervello. Per valutare i dati nelle immagini cerebrali, l'intensità del segnale del pixel è stato definito. Nel presente studio, il segnale di fondo ambientale è stato definito come 25,811-46,979 CPM. Il segnale di [14 C] -IAP 0,001 carta pCi filtro è stato definito come 42 CPM. L'intensità del segnale di pixel era <0.001 pCi, servendo l'intensità sfondo. L'intensità dei pixel di cinque carte da filtro è stata determinata per 0,001, 0,01, 0,1, e 10 pCi, che serve come la scala dei grigi pixel per ciascuna delle immagini cerebrali. [14 C] radioattività -IAP mostrato apcorrelazione ositive con intensità di pixel e la radioattività contare su una scala logaritmica. Pertanto, la procedura sopra descritta può essere seguito per la taratura di [14 C] -IAP radioattività PIXEL intensità.
Quando si esegue la [14 C] -IAP protocollo sperimentale, alcuni punti devono essere considerati. Ad esempio, la vena giugulare esterna si intasi, e sperimentatori necessario per assicurare la pervietà del PE 50 tubi con eparina ogni giorno. Inoltre, la posizione dei siti di lesione a volte può essere fuori luogo, con conseguente sintomi cpsp non significativi. Prima le iniezioni, la precisione dei siti di iniezione e le posizioni relative al bregma deve essere confermato. L'angolo e il volume di ciascuna iniezione devono essere determinate con precisione.
Limitazioni di immagini del cervello anche bisogno di essere prese in considerazione. Le distorsioni delle immagini cerebrali possono verificarsi dopo l'esposizione fettine di cervello nei cassetti di uno schermo al fosforo. Il cervello imaGES devono essere normalizzati a un atlante del cervello standard utilizzando un programma di analisi di immagine al fine di evitare potenziali distorsioni nelle immagini cerebrali. Inoltre, diversi isotopi possono portare a risultati diversi a causa dei loro diversi meccanismi e azioni. Ad esempio, il metabolita e meccanismo d'azione di [18 F] -fludeoxyglucose (FDG) sono simili al glucosio. Pertanto, la [18 F] immagini -FDG hanno dimostrato di essere simile al percorso del metabolismo del glucosio. Inoltre, l'emivita di [18 F] -FDG è breve; Pertanto, deve essere combinato con PET per generare le immagini. [201 tl] è adatto per la valutazione della perfusione miocardica flusso di sangue con emissione di singolo fotone tomografia computerizzata. Pertanto, la scelta di un isotopo adatto per valutare immagini del cervello è importante.
L'applicazione del metodo di -IAP [14 C] per valutare l'attivazione del cervello in CPSP è meno costoso rispetto ad altre tecniche di mappatura del cervello (ad esempio, PET e fMRI). Tegli [14 C] metodo -IAP è adatto per eventi verificatisi spontaneamente, ma non può essere utilizzata per la mappatura del cervello in tempo reale. Il metodo è diverso da altre tecniche di mappatura del cervello, come la PET e fMRI. Inoltre, l'attuale protocollo -IAP [14 C] può misurare sottili cambiamenti nel rCBF in qualsiasi condizione patologica.
Il -IAP metodo di [14C] può essere utilizzato per testare vie del dolore convenzionali, come il tratto spinotalamico (STT), talamo mediale (MT) -ACC, e circuiti neurali mPFC-amigdala. L'attivazione di ciascuna di queste vie impatti degli altri. L'attivazione di queste vie in CPSP è stato dettagliato nel nostro precedente articolo. 12
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Disclosures
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Acknowledgments
Il presente studio è stato sostenuto da sovvenzioni del Consiglio Nazionale della Scienza al Dott Bai-Chuang Shyu (NSC 99-2320-B-001-016-MY3, NSC 100-2311-B-001-003-MY3, e NSC 102-2320- B-001-026-MY3). Questo lavoro è stato condotto presso l'Istituto di Scienze Biomediche, che ha ricevuto finanziamenti da Academia Sinica.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Anesthetic: | |||
| Isoflurane | Halocarbon Products Corporation | NDC 12164-002-25 | 4% |
| Surgery | |||
| homeothermic blanket system | Harvard Apparatus | Model 50–7079 | body temperature were maintained at 36.5 - 37.5 °C. |
| 10 µl micro syringe | Hamilton | 80008, Model 1701SN | injected with collagenase |
| polyethylene-50 tubing | Becton, Dickinson and Company | 427411 | catheterized into external jugular vein |
| 1 c.c syringe | Terumo Medical Products | SS-01T | injected with 14C-IAP and saline. |
| saline (Sodium Chloride 0.9 gm) | Taiwan Biotech Co., LTD. | 100-130-0201 | To flush the tube |
| Drugs | |||
| type 4 collagenase | Sigma | C5138-500MG | 0.125 U |
| Gentamicin | Sigma | G1264-250MG | 6 mg/kg |
| Heparin | Sigma | H9399 | 20 U/ml; 0.1 ml/day |
| 14C-iodoantipyrine (IAP) | PerkinElmer | NEC712 | 125 mCi/kg in 300 ml of 0.9% saline |
| Potassium chloride | Merck | 1.04936.1000 | 3 M |
| Behavior system: | |||
| von Frey esthesiometer | Fabrication Enterprises, Inc. | Baseline Tactile Monofilaments 12-1666 | mechanical hyperalgesia was assessed by measuring the withdrawal response to a mechanical stimulus |
| plantar test apparatus | IITC Life Science | IITC 390G Plantar Test | Thermal hyperalgesia was assessed by measuring the hind paw withdrawal latency in response to radiant heat. |
| Brain slice: | |||
| Optimal Cutting Temperature compound | Sakura Fintek Inc | 4583 | embedded the brain |
| dry ice | frozen in dry ice/methylbutane (approximately −55 °C) | ||
| methylbutane | Sigma | M32631-1L | frozen in dry ice/methylbutane (approximately −55 °C) |
| Cryostat | Leica Biosystems Nussloch GmbH, Germany | Leica CM1850 | Coronal brain slice were sectioned on this machine. |
| Data analyze | |||
| exposure cassettes with a phosphor screen | Amersham Biosciences | 20 cm x 25 cm | The slices were dried on glass slides and placed alongside five standard filter papers with graded radioactivity. All of the slides were exposed to the cassettes at −20 °C. |
| γ-counter | Beckman Coulter | Beckman LS 6500 Liquid Scintillation Counter | To measure the radioactivity count of the filter papers. |
| Typhoon 9410 Variable Mode Imager | GMI, Inc. | WS-S9410 | To read phosphor screen which was exposed by brain slice |
| Statistical Parametric Mapping (SPM) | Wellcome Centre for Neuroimaging | version 8 | all of the brains were averaged to create the final brain template. To determine significant differences between the images in these two groups, the images were derived by subtracting the sham group from the CPSP group. |
| ImageJ | http://imagej.nih.gov/ij | version 1.46 | Adjacent sections were aligned both manually and using Stack- Reg, an automated pixel-based registration algorithm in ImageJ software. All of the original three-dimensionally reconstructed brains were smoothed and normalized to the reference rat brain model. |
| Matlab | MathWorks | version 2009b | used Pearson correlation coefficients to examine the relationships between the CPSP and sham groups. An inter-regional correlation matrix was calculated across animals from each group. |
| Pajek | http://Pajek.imfm.si/ | version 3.06 | Graphical theoretical analysis was performed on networks defined by the above correlation matrices using Pajek software. |
References
- Finnerup, N. B. A review of central neuropathic pain states. Curr Opin Anaesthesiol. 21 (5), 586-589 (2008).
- Andersen, G., Vestergaard, K., Ingeman-Nielsen, M., Jensen, T. S. Incidence of central post-stroke pain. Pain. 61 (2), 187-193 (1995).
- Chen, B., Stitik, T. P., Foye, P. M., Nadler, S. F., DeLisa, J. A. Central post-stroke pain syndrome: yet another use for gabapentin? Am J Phys Med Rehabil. 81 (9), 718-720 (2002).
- Greenspan, J. D., Ohara, S., Sarlani, E., Lenz, F. A. Allodynia in patients with post-stroke central pain (CPSP) studied by statistical quantitative sensory testing within individuals. Pain. 109 (3), 357-366 (2004).
- Klit, H., Finnerup, N. B., Jensen, T. S. Central post-stroke pain: clinical characteristics, pathophysiology, and management. Lancet Neurol. 8 (9), 857-868 (2009).
- Kumar, G., Soni, C. R. Central post-stroke pain: current evidence. J Neurol Sci. 284 (1-2), 10-17 (2009).
- Denk, F., McMahon, S. B., Tracey, I. Pain vulnerability: a neurobiological perspective. Nat Neurosci. 17 (2), 192-200 (2014).
- Ji, G., et al. Cognitive impairment in pain through amygdala-driven prefrontal cortical deactivation. J Neurosci. 30 (15), 5451-5464 (2010).
- Jungehulsing, G. J., et al. Levetiracetam in patients with central neuropathic post-stroke pain: a randomized, double-blind, placebo-controlled trial. Eur J Neurol. 20 (2), 331-337 (2013).
- Chaplan, S. R., Bach, F. W., Pogrel, J. W., Chung, J. M., Yaksh, T. L. Quantitative assessment of tactile allodynia in the rat paw. J Neurosci Methods. 53, 55-63 (1994).
- Jay, T. M., Luciqnani, G., Crane, A. M., Jehle, J., Sokoloff, L. Measurement of local cerebral blood flow with [14C]iodoantipyrine in the mouse. J Cereb Blood Flow Metab. 8 (1), 121-129 (1988).
- Lu, H. C., Chang, W. J., Kuan, Y. H., Huang, A. C., Shyu, B. C. A [14C]iodoantipyrine study of inter-regional correlations of neural substrates following central post-stroke pain in rats. Mol Pain. 11 (1), (2015).
- Wang, Z., et al. Functional brain activation during retrieval of visceral pain-conditioned passive avoidance in the rat. Pain. 152, 2746-2756 (2011).
- Wasserman, J. K., Koeberle, P. D. Development and characterization of a hemorrhagic rat model of central post-stroke pain. Neuroscience. 161 (1), 173-183 (2009).
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