血液処理のための迅速な方法は、ヒト血液中の血漿ペプチドレベルの収量を増やすには
Summary
RAPID血液処理方法は、ヒトで使用され、より高いペプチド濃度をもたらすだけでなく、適切な分子形態の評価を可能にすることができます。したがって、この方法は、ペプチド研究の貴重なツールとなるでしょう。
Abstract
食物摂取規制の分野での研究が重要性を増しています。これは、多くの場合、食物摂取を調節するペプチドの測定を含みます。ペプチドの濃度の正確な決意のためには、血液処理中に安定であるべきです。しかし、これはすぐに、内因性のペプチダーゼによって分解されるいくつかのペプチドには当てはまりません。最近、我々はR析出温度、cidificationを用いた血液処理方法を開発し、Pは 私は外因性のコントロールおよびラットでの使用のためのD ilution（RAPID）をsotopic、阻害をrotease。ここでは、ヒトで使用するためにこの技術を確立し、回復、分子形態および食物摂取規制ホルモンの循環濃度を調査しました。迅速な方法が大幅に125 I標識ソマトスタチン28（+ 39％）、グルカゴン様ペプチド-1（+ 35％）の回復、アシルグレリン及びグルカゴン（+ 32％）、インスリンおよびキスペプチン（+ 29％向上しました）、のNesfatin-1（+ 28％）、レプチン（+ 21％）と標準的な処理（氷上でEDTA血液、P <0.001）と比較して、ペプチドYY 3-36（+ 19％）。標準的な処理の後にアシルグレリンの62％がそうdesacylグレリンを表す以前のピークが得られ分解された一方で、高速液体クロマトグラフィーは、迅速な処理後の予想位置での内因性アシルグレリンの溶出を示しました。標準処理た（p = 0.03）以下の1時23分に比べて3：RAPID処理した後、正常体重の被験者の血液中のアシル/ desacylグレリン比は1でした。また、内因性キスペプチンレベルは、標準的な処理に比べRAPID後に高かった（+ 99％、P = 0.02）。 RAPID血液処理方法は、ヒトで使用することができ、より高いペプチド濃度が得られ、正確な分子形態の評価を可能にします。
Introduction
肥満1,2の世界的な増加罹患率の光では、食物摂取規制の分野での研究は重要性を増しています。唯一のペプチドが知られているこれまでのところそれが末梢 生成され、中央に食物摂取を刺激するように作用するが、すなわちグレリン3は 、過去数十年以内に、ペプチドの広い範囲は、例えば 、食物摂取を減少させることが確認されています。レプチン、ペプチドYY（PYY）、また、グルカゴン様ペプチド-1（GLP-1）およびインシュリン4は 、そのため、空腹および満腹ペプチドレベルの調節機構を調査する研究において頻繁に評価され、同時に、それが想定され研究ペプチドが安定してプラズマ形成中に高収量で回収されます。 例えばのために前に示したようにしかし、非常に多くの場合、これは、急速な内因性の故障にそうではありません。グレリン5を desacylするアシルから分解されるグレリン。したがって、我々は最近、血液プロセスへのための迅速な方法を説明しましたR析出温度、cidificationを採用したラットで歌う、Pは 私は外因性コントロールとDの ilution 6を sotopic、阻害をrotease。この方法は、標準的な血液処理（氷上でEDTA血液）6と比較して、正しい循環分子形態の決意について試験し、許可された11 12のペプチドの回復を改善しました。この方法は、コルチコトロピン放出因子13と同様に、グレリンの循環の検出のためにいくつかのその後の研究7-12で使用されています。したがって、この方法は、げっ歯類のペプチド研究のために有用であることがわかりました。げっ歯類の研究は常に別の種に翻訳可能ではないので、この方法は、同様に、ヒトの血液中での使用のために確立されるべきです。
本研究の目的は、広く14と頻繁にuの推奨される標準的な血液処理、氷上でEDTA血液、と比較して、ヒトでの血液処理のための迅速な方法を試験することでした臨床だけでなく、研究の場でのsed。 （食物摂取に対する効果を表1に示した）処理の後、我々は、確立されたペプチドを含む食物摂取の調節に関与する125 I標識化ペプチドの選択の回復をテストならびに新しい候補は、最近、摂食調節における役割を果たすことが示唆しました両方の方法で。ホルモンは、異なる長さおよび電荷（ 表2）のペプチドを表すために選択しました。また、グレリンのために我々は、標準およびRAPID方法以下の分子形態（複数可）を調べました。最後に、我々は、ペプチドはまた、最近RAPIDまたは標準処理以下の食物摂取15,16の調節に役割を果たしていることが示唆、内因性グレリン（アシルおよびdesacylグレリン）、ならびにキスペプチンレベルを評価しました。さらに、我々はまた、possibを研究するために（10.2から67.6 kg /日m 2の範囲）ボディマス指数の広い範囲で被験体の集団において、これらのペプチドのレベルを調査しました慢性的に改変された体重に関連するル違い。
診断、評価、およびプラン：
試験参加者
すべての試験参加者は、新たにシャリテ-Universitätsmedizinベルリンで心身医学の部門の（封入病院に入院の2日以内であった）の患者を入院し、書面によるインフォームドコンセントを与えました。性別の影響を回避するために唯一の女性患者が含まれていました。 42科目の合計は、この研究に参加し、3群に分けた：正常体重（BMI 18.5〜25キロ/ m 2であり、N = 12）、神経性無食欲症（BMI <17.5キロ/ m 2であり、N = 15）と肥満（BMI、> 30 kg /日m 2であり、n = 15）。拒食症と肥満患者ました疾患-10の国際分類に従って診断し、それぞれ体重増加（拒食症）や体重減少（肥満）、入院。すべての正常体重の患者は、関連する身体的障害なしに起因する身体表現の症状だけに入院しました。胃腸の身体表現の症状や消化管手術の既往歴のある患者は除外しました。除外基準はまた、年齢<18歳、現在妊娠中や未処理の精神病疾患を包含しました。採血は、それぞれ、体重を増加または減少させるために食事療法を受ける前に、2日目または入院後3で実施しました。人体計測パラメータは、同じ日に評価しました。
Protocol
Representative Results
Discussion
我々は、血液処理のための迅速な方法は、ラット6で標準的な血液処理に比較して11月12日のペプチドの回復を改善することの前に報告しました。本研究では、この方法は、ヒトにおける使用に適していることを示しています。迅速な処理に続いて、テストした9 125 9のI標識ペプチドの回復は、標準的な血液処理（氷上でEDTA血液）に比べて改善されました。観察された改善は、?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この作品は、教育研究03IPT614A（CG）のためのドイツの研究財団STE 1765 / 3-1（AS）とドイツ省によってサポートされていました。私たちは、その優れた技術サポートだけでなく、身体測定値の組織と実行のヘルプのためのカリン・ヨハンソンとクリスティーナHentzschelためのラインハルト・ロンメルとペトラブッセに感謝します
Materials
| diprotin A | Peptides International, Louisville, KY, USA | IDP-4132 | |
| E-64-d | Peptides International, Louisville, KY, USA | IED-4321-v | |
| antipain | Peptides International, Louisville, KY, USA | IAP-4062 | |
| leupeptin | Peptides International, Louisville, KY, USA | ILP-4041 | |
| chymostatin | Peptides International, Louisville, KY, USA | ICY-4063 | |
| Sep-Pak C18 cartridges | Waters Corporation, Milford, MA, USA | WAT051910 | 360 mg, 55-105 µm |
| acyl-ghrelin | Millipore, Billerica, MA, USA | 9088-HK | Radioactive |
| GLP-1 | Millipore, Billerica, MA, USA | 9035-HK | Radioactive |
| glucagon | Millipore, Billerica, MA, USA | 9030 | Radioactive |
| insulin | Millipore, Billerica, MA, USA | 9011S | Radioactive |
| leptin | Millipore, Billerica, MA, USA | 9081-HK | Radioactive |
| kisspeptin-10 | Phoenix Pharmaceuticals, Burlingame, CA, USA | T-048-56 | Radioactive |
| nesfatin-1 | Phoenix Pharmaceuticals, Burlingame, CA, USA | T-003-26 | Radioactive |
| PYY3-36 | Phoenix Pharmaceuticals, Burlingame, CA, USA | T-059-02 | Radioactive |
| somatostatin-28 | Phoenix Pharmaceuticals, Burlingame, CA, USA | T-060-16 | Radioactive |
| ZORBAX Rapid Resolution HT SB-C18 column | Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA | 822700-902 | 2.1 x 50 mm, 1.8 µm |
| Agilent 1200 LC | Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA | HPLC, several components, therefore no single catalog number | |
| Kisspeptin RIA | Phoenix Pharmaceuticals, Burlingame, CA, USA | # RK-048-56 | Radioactive |
| Total ghrelin RIA | Millipore, Billerica, MA, USA | # GHRT-89HK | Radioactive |
| Active ghrelin RIA | Millipore, Billerica, MA, USA | # GHRA-88HK | Radioactive |
| SigmaStat 3.1 | Systat Software, San Jose, CA, USA | online download |
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