급성 및 아 급성 쥐 뒷다리 국소 빈혈하는 방법

요약

마우스에서 뒷다리 허혈의 외과적 유도는 혈관 신생을 검사하는 데 유용하지만, 현저한 허혈 유발 조직 괴사를 나타내는 특정 근친 마우스 균주에서는 손상됩니다. 점진적인 동맥 폐색의 유도를 통해 이 문제를 회피하기 위해 아메로이드 수축기를 사용하여 아급성 사지 허혈을 유도하는 방법이 설명되어 있습니다.

초록

말초 동맥 질환 (PAD)는 신뢰성이 질병에 대한 새로운 치료 개발에 필요한 인간 질병을 재현 심혈관 질병률과 사망률 선진국 및 동물 모델의 주요 원인이다. 마우스 뒷다리 허혈 모델은 광범위 이러한 목적을 위해 사용 되었으나, 대퇴 동맥 결찰에 의해 급성 사지 허혈을 유도하는 표준 방법은 허혈, 혈관 및 골격 근육 조직 반응을 연구하는 연구자의 능력을 손상 실질적인 조직 괴사 될 수 . 대퇴부 동맥 결찰 다른 방법은 아메 로이드 constrictors의 사용을 통해 점진적 대퇴 동맥 폐쇄의 유도이다. 완만, 급성 허혈 결과, 3 일 - 대퇴 동맥 결찰의 위치와 동일하거나 상이한 위치에서 대퇴 동맥 주위에 배치 될 경우,이 장치는 하나 이상 동맥 폐색. 이 w는, 이하 실질적인 골격근 조직 괴사를 초래HICH 더 밀접하게, 인간에서 본 PAD 응답을 모방 할 수있다. 유전 적 배경에 영향 모두 급성 및 아 급성 허혈 모델에서 성과 때문에 마우스 균주 고려 최상의 모델을 선택하는 중요한 연구되고있다. 이 논문은 마우스에서 아 급성 또는 급성 사지 허혈을 유도하는 적절한 절차와 마우스 대퇴 동맥에 합자 또는 아메 로이드 constrictors의 해부학 적 위치를 설명합니다.

서론

주변 동맥 질환 (PAD)은 ​​선진국 ⁽¹⁾ 심혈 관계 이환율과 사망률의 주요 원인이다. 결과 운동시 또는 휴식 고통과 때때로 사지 절단을 필요로 궤양과 괴저 비 치료와 사지 허혈에 이르게 주변 동맥의 동맥 경화 방해에서 PAD 결과. 기본적으로 효과적인 의료 치료 ⁴ 존재하지 않기 때문에 PAD를 대상으로 치료는 주로 ^혈관이 또는 외과 적 재관류 ^3으로 연결됩니다.

바이 패스 이식 일부 집단 (예를 들어, 흡연자, 여성, 비 복재 정맥 이식편) ^6,7에 더 나쁘다 ⁵ (5 년 이내 50 %까지) 높은 실패율이 불행하게도, 재관류 술은 종종 제한된 혜택입니다. 이러한 혈관 성형술 및 스텐트 삽입술과 같은 혈관 접근 방법은,도 (1 년 이내 50 % 초과) 높은 재 협착 비율에 의해 손상되어, 내가 서 특히약물 방출 풍선과 스텐트의 사용이 다소 ^9-11 성과를 개선했지만, N, 질병 ⁸ 대퇴 슬와. PAD 새로운 치료제를 개발하기 위해서는 확실하게 인간의 질병을 재현 동물 모델을 개발하는 것이 필수적이다.

현재까지, ....

프로토콜

모든 동물 실험은 공작 기관 동물 관리 및 사용위원회에 의해 승인 된 프로토콜에 따라 수행 하였다. 성별에 사용할 수 있지만, 본 연구의 과학적 목적 바와 같이 수컷 마우스가 본 연구에 사용 하였다.

1. 머리 제거

1. 37 ° C로 설정 덮여 가열 패드 및 이소 플루 란의 연속적인 흐름으로 연결된 노즈콘 포트 이루어진 수술 전 준비 영역을 설정 마취 유도에 앞서.
2. 마취 유도 챔버에서 마우스를 놓습니다. 3 % - 1 1 L / 분, 이소 플루 란에 O ₂ 유량계를 설정합니다.
   주 : 마취 보통 2 % 이소 플루 란과 함께 25g 마우스에서 유도된다.
3. 부드럽게 챔버 락과 복원력 반사의 부족을 관찰하여 마우스의 자극 반응을 확인합니다.
4. 개방 이전의 이소 플루 란을 취소 O ₂ 챔버를 플래시합니다. 빠르게 가열 (P)에 마우스를 움직광고 및 원추형 두부를 통해 이소 플루 란에 연결합니다.
5. 1.5 %로 이소 플루 란을 조정합니다. 페달 반사 (발가락 핀치)에 의한 자극 반응을 확인합니다.
6. 수술 중 건조를 방지하기 위해 두 눈에 자유롭게 안과 윤활제를 적용합니다....

결과

마우스 뒷다리 혈관의 정확한 식별은 여기에 설명 된 바와 같이, 급성 및 급성 사지 허혈 모두를 유도하는 기술의 재현성을 보장하는 데 중요하다. 동물 연구에서 본래의 변동뿐만 아니라, 다른 요인은 마취 유형, 동물의 위치 (앙와위 대 경향), 체온 (도 3 참조)을 포함하여, 레이저 도플러 관류 영상 (LDPI)에 변화를 도입 할 수있다. 또한, 아 급성 사지 허혈 모델은 주어진 배치 내에 광범위하게 변할 수 아메 로이드 constrictors의 품질에 의존한다 (도 4 참조). 이러한 문제는 각각 LDPI 측정 유량의 정량화에 상당한 영향을 미칠 수 있으며, 이하에서보다 상세히 논의된다.

아 급성 사지 허혈 모델 또는 결찰에 아메 로이드 constrictors의 위치에 따라동물이 정.......

토론

아마도이 과정에서 가장 어려운 단계는 대퇴 정맥의 대퇴 동맥의 분리이다. 큰 직경 및 동맥와 비교 대퇴 정맥의 얇은 벽은 천공의 감수성을 증가시키고 수술 조작시 찢어. 정맥을 방해의 가능성은 PBS에 적신 멸균 면봉을 사용하여 습윤 상처를 유지함으로써 감소 될 수있다. 모든 집게가, 날카롭게 정렬 및 혈관과 주변 조직의 정확한 조작을 허용하기 위해 휴식을 무료로되어 있는지 확인하는 것도 중요합니다. 출혈이 멈출 때까지 발생합니까 출혈 경우, 멸균 거즈와 지역에 압력을 적용합니다. 장기에서 실수로 더 심한 허혈 손상을 나타낼 수있는 '작은'출혈 이벤트로 인식 될 수 무엇으로 자세한 수술 노트, 각 동물에 대한 유지되어야한다. 데이터 일관성을 위해, 수술은 정맥 또는 담보 동맥 출혈을 포함하지보내고 이벤트는 매우 중요하다.

이 기술의 한계는 심각성 및 / 또는합니다 (아 급성 아메 로이드의 뱀 모델) 허혈 증상은 여러 가지 요인에 따라 광범위하게 변할 수 있다는 것.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Dumont #5/45 포셉스	파인 사이언스 도구	11251-35	Dumoxel
Dumont 스타일 5 미니 펜치	파인 사이언스 도구	11200-14	Inox
엑스트라 파인 본 가위	파인 사이언스 도구	14084-08
7 - 0 실크 봉합	샤퍼 포인트	DA-2527N
5 - 0 코팅 Vicryl 봉합	사 Ethicon	J463G
Graefe 집게	파인 사이언스 도구	11053-10
Vannas 스프링 가위	파인 사이언스 도구	15000-03
인공 눈물 연고	럭비 연구소	0536-6550-91
수술 테이프	3M	1530-0
파인 코튼 면봉	Contec	SC-4
온도 컨트롤러	Physitemp	TCAT-2DF
아메로이드 수축기	연구 기기 SW	MMC-0.25 x 1.00-SS
핫 비드 살균기
Deltaphase 등온 패드	Braintree Scientific	39DP
바늘 드라이버	파인 사이언스 도구
인산염 완충 식염수	Gibco	10010-023
Moor LDPI	무어 악기	moorLDI2
moorLDI 측정 소프트웨어	Moor Instruments	v. 6.0
제모 크림	Nair

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