Summary
Человеческой сердечной ткани укрывает мультипотентных популяции клеток-предшественников периваскулярные, которые могут быть пригодны для регенерации миокарда. Техника , описанная здесь , позволяет одновременно выделения и очистки двух мультипотентных клеточных популяций стромы , связанных с носителями кровеносных сосудов, т.е. CD146 + CD34 - перицитов и CD34 + CD146 - адвентициальных клетки, из миокарда человека.
Introduction
Сердце уже давно считается постмитотическими орган. Однако недавние исследования показали наличие ограниченного оборота кардиомиоцитов у взрослых человеческих сердец 1. Родные стволовые клетки / клетки - предшественники с кардиомиоцитов дифференцировке также были определены в миокарде у взрослых грызунов и человеческие сердца, в том числе Sca-1 +, C-Kit +, cardiosphere-формирующей, и совсем недавно, периваскулярные клетки - предшественники 2,3. Эти клетки представляют привлекательными кандидатами для терапии , направленных на повышение сердечного восстановления / регенерации через трансплантации клеток или стимуляции пролиферации на месте.
Мезенхимальных стволовых / стромальных клеток (МСК) были выделены из почти каждой ткани человека 4,5 Клинические испытания терапевтических применений MSC были проведены для нескольких патологических состояний , таких как сердечно - сосудистые ремонта 6, трансплантат против хозяина заболевания 7 8. Благоприятные эффекты были приписаны способности к MSCs: дома к местам воспаления 9; дифференцироваться в различные типы клеток 10; секретируют про-репаративных молекул 11; и модулировать иммунные реакции хозяев 12. Изоляция MSCs традиционно полагались на их преимущественной соблюдения пластиковых подложках. Тем не менее, в результате популяция клеток , как правило , заметно гетерогенным 13. При использовании флуоресцентного активированной сортировки клеток (FACS) с комбинацией ключевых маркеров периваскулярных клеток, мы смогли выделить и очистить мультипотентных MSC-как население предшественника (CD146 + / CD31 - / CD34 - / CD45 - / CD56 -) от несколько человеческих тканей , включая взрослых скелетных мышц и белого жира 14.
Периваскулярные клеточные популяции в различных несердечных тканей было показано, что имеют свойства стволовых / прогениторных кювета системые исследуются для клинического применения в сердечно-сосудистой обстановке. Перициты, один из самых известных околососудистых подмножеств клеток, являются гетерогенной популяции , которые играют несколько ролей патофизиологические в том числе в разработке новых судов 15, регулирование кровяного давления 16, и поддержание целостности сосудов 17,18. Как было показано во многих тканях, специфические подмножества перицитами изначально выразить MSC антигены и поддерживать их MSC-подобные фенотипы в первичной культуре после FACS очистки 14. Кроме того, эти клетки стабильно сохраняют свои долгосрочные фенотипов внутри культуры и демонстрируют несколько клонов дифференциации потенциал, похожий на MSCs 19,20. Эти результаты свидетельствуют о том, что перицитов являются одним из истоков неуловимого MSC 14. Терапевтический потенциал перицитов было продемонстрировано с сокращением миокарда рубцевания и расширение функции сердца после трансплантации в ишемией ранениясердца 21. В последнее время мы успешно очищают перицитов из миокарда человека и продемонстрировали свои МСЦ-как фенотипы и мультипотентность (липогенез, хондрогенезе и остеогенез) при отсутствии скелетной миогенезе 3. Кроме того, инфаркты перицитов выставлены дифференциальные cardiomyogenic потенциал и развитие кровеносных сосудов потенциала по сравнению с аналогами, очищенных из других органов.
Вторая популяция мультипотентных периваскулярных стволовых клеток / клеток - предшественников, в адвентиции клетки, был выделен из подкожных вен человека на основе выражения 22 положительным CD34. Венозные адвентициальные клетки , как было показано , чтобы иметь потенциал, клоногенных мезодермального способность дифференциации и проангиогенные потенциал в пробирке. Трансплантация этих клеток в ишемией сердца травмированных мышей привело к уменьшению интерстициального фиброза, увеличение ангиогенеза и кровотока миокарда, снижение желудочковой разбавленнойвания, а также увеличение сердечного выброса фракция 23. Интересно отметить , что жировая адвентициальные клетки было показано , что теряют экспрессию CD34 и CD146 выражение апрегулируются в культуре в ответ на лечение Ангиопоэтинподобный II, что предполагает принятие перицитов фенотипа при стимуляции 24. В сердце, тем не менее, адвентиции популяция клеток еще не перспективно очищают FACS и / или хорошо охарактеризованы. Используя процедуры выделения клеток, описанных в следующих разделах, мы в настоящее время характеризующие инфаркты адвентициальных клетки и исследовать их потенциал для регенеративной приложений.
Здесь мы опишем способ выделения и очистки двух субпопуляций периваскулярными стволовых клеток / клеток-предшественников из эмбриона человека или взрослого миокарда. Этот метод выделения проспективное клеток позволит исследователям получить изогенных периваскулярные подмножества стволовых / прогениторных клеток из биопсий сердца человека для проведения сравнительных исследований и furtheR исследовать их терапевтический потенциал в различных сердечных патологических состояниях.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Обработка человеческого кардиохирургии образца
- Убедитесь, что все жидкости, контейнеры, инструменты, а также специализированный оперативной области являются стерильными.
- Поместите образец ткани сердца (закупленные банка тканей или хирургической бригады) в запоминающей среде, состоящей из модифицированной среды охлажденной Дульбекко Eagle (DMEM), содержащей 20% эмбриональной бычьей сыворотки (FBS) и 1% пенициллина-стрептомицина (P / S) на льду для перевозки 3.
- Удалить сердечный образец из запоминающей среды и промывают промывной среды, состоящей из фосфатно-солевым буферным раствором (PBS) с добавлением 2% FBS и 1% P / S. При обработке образца, используйте точная наклоненная пинцетом захватить крупные сосуды или перикард и свести к минимуму дробление миокарда.
- Погрузите образец в моющей среде в чашке Петри и удалить перикарда, эндокарда и крупные кровеносные сосуды с стерилизованных ириса ножницами и остроконечного пинцета , как описано 3.
- Отрежьте оставшиеся myocardium на мелкие кусочки примерно 1 мм 3 с помощью одной стороне лезвия бритвы или пару острых ножниц радужной оболочки глаза. Примечание: Наиболее высокие выходы ячеек будут получены, если образцы обрабатываются немедленно. Если задержка неизбежна, хранение обработанной ткани сердца в свежей среде для хранения (> 5 мл на 1 см 3 ткани) при 4 ° С в течение 72 ч , возможно, однако , предположительно с соответствующим снижением выхода клеток.
2. Расщепление ткани и выделение клеток
- Свежеиспеченный составляют переваривания раствор, содержащий 1,5 мл каждого из коллагеназы I, коллагеназы II и коллагеназы IV (все по 0,5 мг / мл в DMEM) и нагревают до 37 ° С в водяной бане.
Примечание: Объем и концентрация коллагеназы пригодны для образцов приблизительно 1 см 3. - Фильтр приостановленные кусочки ткани через сито 100 мкм и дважды промывают PBS. Передача части ткани в стерильный 30 мл контейнера сплотно закрытой крышкой.
Примечание: Короткие широкие горшки, а не высокие узкие трубки дают лучшие результаты. В качестве альтернативы, положить кусочки ткани в стерильный 50 мл пробирку и помещают горизонтально, если 30 мл баллона под недоступен. - Добавьте все пищеварением растворы (4,5 мл всего) и поместите контейнер в герметичном полиэтиленовом пакете в ванне 37 ° C встряхивании воды, установленного до 120 оборотов в минуту. В качестве альтернативы, запечатать контейнер с парафиновой пленкой и поместить в нагретую орбитальном шейкере до 120 оборотов в минуту.
- Через 15 минут снимите и переверните горшок три раза, прежде чем заменить в течение еще 15 мин. Удалить и гасят коллагеназы с 5 мл DMEM, дополненной 20% FBS и 1% P / S.
- Растирают дайджеста осторожно пипеткой от десяти до двадцати раз с 10 мл серологической пипеткой, чтобы разбить комки любые ткани. Суспензию фильтруют последовательно через 100 мкм, 70 мкм и, наконец, 40 мкм клеточных сетчатые для удаления непереваренных материалов и получения суспензии отдельных клеток.
Заметка:Не смывать между клеточными стяжек, чтобы избежать клетки debrisgenerated в процессе пищеварения фермента. - Центрифуга клеточной суспензии при 200g в течение 4 мин, осторожно декантируют супернатант и повторно приостанавливать осадок в 1 мл эритроцитов лизирующего буфера в течение 2 мин при комнатной температуре перед разбавлением 4 мл промывочной среды.
- Повторите центрифугирования и повторно приостанавливать осадок в 1 мл промывочного раствора. Хорошо перемешать и принимать по 10 мкл клеточной суспензии для подсчета клеток.
- Смешать 10 мкл клеточной суспензии с 10 мкл трипанового синего красителя и помещают по 10 мкл смеси на стандартном гемоцитометра для подсчета клеток. Подсчитайте количество ярких, круглых клеток, присутствующих в четырех угловых квадратов (каждый разделен на шестнадцать маленьких квадратов) и разделить на 4, чтобы получить среднее значение за угла квадрата. Умножьте среднее значение на 2 для учета коэффициента разбавления пятно , а затем 10 4 , чтобы получить общее количество клеток на 1 мл образца.
- Добавляют 50 мкл мышиной сыворотки к суспензии клеток и инкубировали при 4 ° С в течение 20 мин, чтобы блокировать связывание неспецифическое антитело.
- Центрифуга клеточной суспензии с мышиной сывороткой при 200g в течение 4 мин, удаления надосадочной жидкости, и повторно приостанавливать в моющей среде при концентрации 1 × 10 6 клеток на 100 мкл.
- Аликвоты по 50 мкл каждой клеточной суспензии для изотипа и неокрашенных контролей в два полистирола с круглым дном проточной цитометрии трубки затем поместить оставшийся объем в третью пробирку для многоцветной окраски.
- Добавить CD34-PE, CD45-APC-Cy7, CD56-PE-Cy7, CD144-PerCP-Cy5.5 и CD146-AF647 антитела (всего 1: 100) в одной клеточной суспензии для многоцветного окрашивания. Для контроля изотипа, добавьте эквивалентные объемы, APC PE-Cy7--, PE-Cy7-, PerCP-Cy5.5- и AF647-сопряженными изотипных антител. Аккуратно пипетку, чтобы смешать антитела с клетками и инкубировать все пробирки при температуре 4 ° С в течение 20мин в темноте.
- Готовят управления корректировкой бусинки, добавив одну каплю положительных бусинок к 100 мкл промывочного раствора в пяти полистирола с круглым дном и проточной цитометрии трубок. Добавить CD34-PE, CD45-APC-Cy7, CD56-PE-Cy7, CD144-PerCP-Cy5.5 и CD146-AF647 антитела (всего 1: 100) по отдельности к каждому из 5 трубок. Инкубируйте все пробирки при температуре 4 ° С в течение 20 мин в темноте.
- Во время инкубации, готовят сбора клеток пробирки, каждая с 500 мкл роста эндотелия сосудов среднего-2 (EGM-2) культуральной среды и место при 4 ° С.
- После инкубации антитела, добавляют 5 мл промывочной среды, чтобы промыть клетки и бусы с целью удаления несвязанного антитела. Центрифуга все пробирки при 200 мкг в течение 4 мин. Повторите для стирки и центрифугирования шаг. Осторожно сливают супернатант и пипетку осторожно при ресуспендирования клеток.
- Ресуспендируйте в моющей среде в концентрации приблизительно 1 × 10 6 клеток на 250 мкл. Повторное приостановить бисером в 100 мкл промывочного мedium.
- Транспорт все клеточные и Шарик суспензии клеток к сортировщика на льду в темноте. Добавьте 1 каплю отрицательных бус положительных трубок контроля компенсации шарик и использовать их, чтобы установить компенсацию флуоресценции.
- Запуск неокрашенные клетки управления в соответствии с инструкциями изготовителя по созданию фоновой флуоресценции и установить напряжение к следующему: FSC 150V; SSC 290V; V450 / 50 350V; V710 / 50 620V; B530 / 30 400В; B710 / 50 530V; YG780 / 60 460; R670 / 30 480В; R780 / 60 460В. Запуск изотипы управления в соответствии с инструкциями изготовителя, чтобы установить фон флуоресценции пороги, связанные с неспецифическое связывание. Запуск многоцветной окрашенного образца и собирать перицитов и популяции адвентициальных клеток в приборке (рисунок 1).
Примечание: Оптимальные выходы жизнеспособных клеток являются приблизительно 3% от общей диссоциации живых клеток для перицитов и 4% для адвентициальных клеток.
4. Культура клеток
- Выберите подходящий размер культуры пластины в соответствии с итогами сортировкой FACS. Добавляют 100 мкл стерильного 0,2% раствора желатина на см 2 площади роста и перемешивать вручную , чтобы покрыть всю скважины. Инкубируйте пластины при температуре 4 ° С в течение 10 мин и полностью удалить раствор желатина. Держите собранные клетки на льду во время приготовления культуры пластин.
Примечание: отсортированный перицитов и адвентициальные клетки растут хорошо , когда высевали при плотности от 30000 до 40000 клеток / см 2 на желатин покрытием поверхности культуры. - Центрифуга свежесобранных клеток при 200g в течение 4 мин и осторожно повторно приостанавливать осадок клеток в соответствующем количестве EGM-2.Seed клеток на покрытых желатином пластин.
Примечание: Фактическое количество ячеек, которые будут посеяны на лунку, и количество EGM-2, которые будут добавлены в зависимости от выбора пластины. Например, 0,5 мл и 1 мл EGM-2 необходимы на лунку в течение 48- и 24-луночные планшеты, соответственно. - Обмен EGM-2 для средних периваскулярная роста клеток (DMEM, дополненной 20% FBS и 1% P / S) для обоих перицитов и адвентициальных клеток, как только клетки осели и приклеена к пластине (после того, как по меньшей мере 72 ч). Изменение средств массовой информации каждые 72 ч с тех пор. Проведение первоначального и всех последующих инкубацию в 5% СО 2 и при 37 ° С.
- Диссоциируют клеток с использованием 0,05% трипсина ЭДТА при перицитов и адвентициальные клетки достигают от 80 до 90% слияния. Гасили 20% FBS в PBS, центрифугируют при 200g в течение 4 мин, повторно приостанавливать в околососудистой среде для роста клеток, а затем прохождение клеток при соотношении 1: 3 на непокрытых полистирол культуральных планшетах. От Пассаж 2 года и далее, прохождение клетки в соотношении 1: 5 (или приблизительно 7000 клеток / см 2) без покрытия пластин полистирола культуры или колб.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Отдельные клетки отличались от мусора и дублетов на основе распределений вперед и бокового рассеяния. Живые клетки были идентифицированы по их непринятие до красителя DAPI. Стратегия стробирования была выбрана на основе управления изотипическим маркировки этого живого, всего-сердечной диссоциации клеток (рисунок 1). Из живых клеток, CD45 + клетки сначала закрытого типа из, а затем CD56 + клеток. CD144 + эндотелиальные клетки затем удаляют из CD56 - фракции. Из этой конечной популяции, CD146 + / CD34 - перицитов и CD146 - / CD34 + адвентициальные клетки были отобраны и затем собирали (рисунок 2). Сразу же после сбора клеток, небольшой образец каждой субпопуляции (500-1000 клеток) повторно запустить через сортировщик, чтобы подтвердить, что распределение клеток было, как записано в первоначальном рода. FACS-очищенными Перич миокарда ytes и адвентициальные клетки оба демонстрируют шпиндель звездчатых морфологии клеток в культуре (рисунок 3).
Рисунок 1: FACS. Gating Стратегия Представительные точек графики контроля изотипа меченых диссоциированных клетки сердца человека иллюстрируют позиционирование сортировки ворот .. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Рисунок 2: FACS Очистка Инфаркт Периваскулярный клеток Представитель сортировкой двух субпопуляций сердечных клеток - предшественников околососудистых из одного образца миокарда человека..эс / ftp_upload / 54252 / 54252fig2large.jpg "целевых =" _blank "> Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Рис . 3: Периваскулярный Морфология клеток в культуре Два сердца популяции периваскулярные клеток - предшественников, перицитов (левая панель) и адвентициальные клетки (справа) были отсортированы до гомогенного состояния путем очистки FACS и дальнейшее расширение в культуре (при прохождении 3, масштаб бар = 50 мкм ). Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Растущие доказательства поддерживает ограниченную регенеративную способность взрослого сердца человека после травмы. Идентификация и характеристика нативных клеток-предшественников, ответственных за такие регенеративных реакций в травмированных сердцах имеют решающее значение как для понимания связанных с ними механизмов и путей передачи сигналов и разработка подходов для использования этих клеток в терапевтических целях.
Предыдущие протоколы описали выделение околососудистых подмножеств клеток - предшественников из скелетных мышц человека 25. Однако непосредственное применение этих методов к сердечной ткани часто приводит к очень плохой выход клеток. Таким образом, мы внесли серьезные коррективы в протокол, чтобы обогатить два дискретных субпопуляций периваскулярных клеток-предшественников, а именно перицитов и адвентициальных клеток, от инфарктов биопсий человека и облегчить одновременное очищение обоих подмножеств. Выделение двух клеточных популяций из s-Ame образец не только оптимизирует использование драгоценных биопсий сердечной ткани, но и позволяет прямое сравнение различных околососудистых подмножеств клеток.
Для того чтобы получить максимальный выход клеток, свежесть образца ткани имеет решающее значение. Максимальные жизнеспособные выходы сотой для перицитов и адвентициальных клеток примерно 3% и 4% от общей клеточной диссоциации живого соответственно. Урожайность может значительно варьироваться от примерно 30000 до 400000 клеток на подмножестве и в значительной степени зависят от целого ряда факторов, в том числе от количества и качества исходной ткани и длительности консервации. Периваскулярные клетки относительно тонкий; Образцы, показывающие свидетельства аутолитической изменения неизменно дают низкие числа клеток после FACS. Точно так же, периваскулярные клетки чувствительны к суровым методам пищеварения, и чрезмерное пищеварения также приведет к уменьшению жизнеспособного выхода клеток. Настроенные корректировки времени пищеварения и скорости перемешивания может быть необходимым индивидамил лаборатории. И, наконец, возраст донора и размер выборки также будет иметь значительное влияние на урожайность клеток.
Мы широко охарактеризованы сердечные перицитов , полученные таким образом 3. Эти клетки продемонстрировали гомогенности в культуре, без загрязнения эндотелиальных клеток. Население времена около 60 часов между проходами 3 и 12 удваивая с последовательным экспрессии обоих общих маркеров перицитов были отмечены (щелочной фосфатазы, NG2 и α-SMA) и классические маркеры MSC (CD44, CD73, CD90 и CD105) в течение этого периода. Интересно, что было обнаружено, что после того, как деметилирование, фракция сердечных перицитах выразили cardiomyogenic факторы транскрипции Nkx2.5 и GATA4. При культивировании совместно с неонатальных кардиомиоцитов крысы, фракция деметилируется сердца перицитами выразил саркомерного белковые маркеры альфа-актинин и сердечного тропонина-Т с небольшой группой дополнительно выставляется спонтанные цитоплазматические потоки кальция. Взятые вместе, эти находки suggeго, что субпопуляции сердца перицитами обладает cardiomyogenic потенциалом и, следовательно, может играть определенную роль в собственном инфарктом процессе ремонта. По сравнению с перицитами, сердечные адвентициальные клетки остаются в значительной степени неохарактеризованных. Наши неопубликованные предварительные данные свидетельствуют о том, что сердечные адвентициальные клетки экспрессируют некоторые маркеры перицитов, такие как PDGFR-бета и NG2, хотя и на более низких уровнях, чем сердечных перицитами, в то время как потери CD34 в культуре. Эти клетки также выражают классические маркеры MSC и показать остеогенной и Adipogenic дифференциации потенциал. Дальнейшие исследования сердца адвентициальных клеток, включая развитие кровеносных сосудов и про-кардиогенных свойств продолжаются.
Протокол, описанный здесь, позволяет одновременно, предполагаемую очистку сердечных перицитов и адвентициальных клеток из одного образца сердечной ткани человека. Эти клетки представляют собой новые популяции клеток сердца предшественника с потенциальными cardiomyogenic свойствами, которые могут оказаться подходящими кандидатэс для будущих методов лечения клеток.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| AbC Anti-mouse Bead Kit | Molecular Probes | A-10344 | |
| Collagenase I | Gibco | 17100-017 | Reconstitute powder as required and filter sterilise |
| Collagenase II | Gibco | 17101-015 | |
| Collagenase IV | Gibco | 17104-019 | |
| anti-human CD34-PE | BD Pharmingen | 555822 | Keep sterile |
| anti-human CD45-APC-Cy7 | BD Pharmingen | 557833 | Keep sterile |
| anti-human CD56-PE-Cy7 | BD Pharmingen | 557747 | Keep sterile |
| anti-human CD144-PerCP-Cy5.5 | BD Pharmingen | 561566 | Keep sterile |
| anti-human CD146-AF647 | AbD Serotec | MCA2141A647 | Keep sterile |
| EGM2-BulletKit | Lonza | CC-3162 | For collection of cells and culture until adhered |
| DMEM, high glucose, GlutaMAX without sodium pyruvate | ThermoFischer Scientific | 10566-016 | |
| Fetal Bovine Serum | ThermoFischer Scientific | 10500-064 | Freeze in aliquots and keep sterile |
| Gelatin | Sigma Aldrich | G1393 | Dilute with sterile water |
| IgG1k-PE | BD Pharmingen | 559320 | Keep sterile |
| IgG1k-APC-Cy7 | BD Pharmingen | 557873 | Keep sterile |
| IgG1k-PE-Cy7 | BD Pharmingen | 557872 | Keep sterile |
| IgG1k-PerCP-Cy5.5 | BD Pharmingen | 561566 | Keep sterile |
| IgG1k-647 | AbD Serotec | MCA1209A647 | Keep sterile |
| Mouse serum | Sigma Aldrich | M5905 | Keep sterile |
| Paraffin Film - Parafilm M | Sigma Aldrich | P7793 | |
| Penicillin-Streptomycin | Gibco | 15979-063 | Freeze in aliquots and keep sterile |
| Phosphate buffered saline pH 7.4 | ThermoFischer Scientific | 10010-023 | Keep sterile |
| Red Blood Cell Lysing Buffer Hybri-Max | Sigma Aldrich | R7757 | Keep sterile |
| Trypan Blue Solution | Sigma Aldrich | T8154 | |
| Trypsin-EDTA 0.5%(10x) | Invitrogen | 15400-054 | |
| FACSARIA FUSION | BD Pharmingen | Fluorescence Activated Cell Sorter |
References
- Bergmann, O., et al. Evidence for cardiomyocyte renewal in humans. Science (New York, N.Y.). 324 (5923), 98-102 (2009).
- Laflamme, A., Murry, C. E. Heart regeneration. Nature. 473 (7347), 326-335 (2011).
- Chen, W. C. W., et al. Human myocardial pericytes: multipotent mesodermal precursors exhibiting cardiac specificity. Stem cells (Dayton, Ohio). 33 (2), 557-573 (2015).
- Campagnoli, C., Roberts, I. A., Kumar, S., Bennett, P. R., Bellantuono, I., Fisk, N. M. Identification of mesenchymal stem/progenitor cells in human first-trimester fetal. Blood. 98 (8), 2396-2402 (2001).
- Zuk, P. A., et al. Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells. Molecular biology of the cell. 13 (12), 4279-4295 (2002).
- Chen, S., et al. Effect on left ventricular function of intracoronary transplantation of autologous bone marrow mesenchymal stem cell in patients with acute myocardial infarction. The American journal of cardiology. 94 (1), 92-95 (2004).
- Ringdén, O., et al. Mesenchymal stem cells for treatment of therapy-resistant graft-versus-host disease. Transplantation. 81 (10), 1390-1397 (2006).
- Kharaziha, P., et al. Improvement of liver function in liver cirrhosis patients after autologous mesenchymal stem cell injection: a phase I-II clinical trial. European journal of gastroenterology & hepatology. 21 (10), 1199-1205 (2009).
- Spaeth, E., Klopp, A., Dembinski, J., Andreeff, M., Marini, F. Inflammation and tumor microenvironments: defining the migratory itinerary of mesenchymal stem cells. Gene therapy. 15 (10), 730-738 (2008).
- Yan, X., et al. Injured microenvironment directly guides the differentiation of engrafted Flk-1(+) mesenchymal stem cell in lung. Experimental hematology. 35 (9), 1466-1475 (2007).
- Van Poll, D., et al. Mesenchymal stem cell-derived molecules directly modulate hepatocellular death and regeneration in vitro and in vivo. Hepatology (Baltimore, Md.). 47 (5), 1634-1643 (2008).
- Popp, F. C., et al. Mesenchymal stem cells can induce long-term acceptance of solid organ allografts in synergy with low-dose mycophenolate. Transplant immunology. 20 (1-2), 55-60 (2008).
- Li, Z., Zhang, C., Weiner, L. P., Zhang, Y., Zhong, J. F. Molecular characterization of heterogeneous mesenchymal stem cells with single-cell transcriptomes. Biotechnology advances. 31 (2), 312-317 (2013).
- Crisan, M., et al. A perivascular origin for mesenchymal stem cells in multiple human organs. Cell stem cell. 3 (3), 301-313 (2008).
- Ozerdem, U., Stallcup, W. B. Early contribution of pericytes to angiogenic sprouting and tube formation. Angiogenesis. 6 (3), 241-249 (2003).
- Rucker, H. K., Wynder, H. J., Thomas, W. E. Cellular mechanisms of CNS pericytes. Brain research bulletin. 51 (5), 363-369 (2000).
- Betsholtz, C. Insight into the physiological functions of PDGF through genetic studies in mice. Cytokine & Growth Factor Reviews. 15 (4), 215-228 (2004).
- Gerhardt, H., Betsholtz, C. Endothelial-pericyte interactions in angiogenesis. Cell and tissue research. 314 (1), 15-23 (2003).
- Crisan, M., Chen, C. W., Corselli, M., Andriolo, G., Lazzari, L., Péault, B. Perivascular multipotent progenitor cells in human organs. Annals of the New York Academy of Sciences. 1176, 118-123 (2009).
- Kang, S. G., et al. Isolation and perivascular localization of mesenchymal stem cells from mouse brain. Neurosurgery. 67 (3), 711-720 (2010).
- Chen, C. W., et al. Human pericytes for ischemic heart repair. Stem cells (Dayton, Ohio). 31 (2), 305-316 (2013).
- Campagnolo, P., et al. Human adult vena saphena contains perivascular progenitor cells endowed with clonogenic and proangiogenic potential. Circulation. 121 (15), 1735-1745 (2010).
- Katare, R., et al. Transplantation of human pericyte progenitor cells improves the repair of infarcted heart through activation of an angiogenic program involving micro-RNA-132. Circulation research. 109 (8), 894-906 (2011).
- Corselli, M., Chen, C. W., Sun, B., Yap, S., Rubin, J. P., Péault, B. The Tunica Adventitia of Human Arteries and Veins As a Source of Mesenchymal Stem Cells. Stem Cells and Development. 21 (8), 1299-1308 (2012).
- Crisan, M., et al. Purification and long-term culture of multipotent progenitor cells affiliated with the walls of human blood vessels: myoendothelial cells and pericytes. Methods in cell biology. 86, 295-309 (2008).
