Summary
नमूना सुखाने की प्रक्रिया के दौरान सब्सट्रेट तापमान विनियमन द्वारा MALDI मास स्पेक्ट्रोमेट्री में आयन संकेतों के स्थानिक विषमताओं को कम करने के लिए एक प्रोटोकॉल प्रदर्शन किया है।
Protocol
नोट: इस प्रोटोकॉल maltotriose और bradykinin टुकड़ा (1-7) सूखे-छोटी बूंद विधि के साथ तैयार की स्थानिक विविधता को कम करने के लिए विकसित की है। प्रोटोकॉल तीन मुख्य कदम, तैयारी और शर्त, नमूना बयान और सुखाने, और मास स्पेक्ट्रोमेट्री डेटा विश्लेषण सहित के होते हैं। प्रक्रियाओं को रेखांकित किया और नीचे और अधिक विस्तार में वर्णित हैं:
1. तैयारी और शर्त
- नमूना थाली सफाई
- nitrile दस्ताने पहनें और डिटर्जेंट और आसुत-विआयनीकृत पानी (DDW) के साथ धीरे नमूना थाली हाथ धो लें।
- मेथनॉल (MeOH) और DDW के साथ नमूना प्लेट कुल्ला।
- एक 600 मिलीलीटर बीकर में नमूना थाली डालें और DDW के साथ भरें।
- एक अल्ट्रासोनिक स्नान (200 डब्ल्यू, 40 kHz) में 15 मिनट के लिए DDW में नमूना प्लेट Sonicate।
- बीकर से DDW निकालें और MeOH साथ बीकर भरें।
- अल्ट्रासोनिक स्नान (200 डब्ल्यू, 40 kHz) में 15 मिनट के लिए MeOH में नमूना थाली Sonicate।
- नाइट्रोजन गैस के साथ थाली पर विलायक बूंदों से उड़ा और नमूना बयान से पहले सूखा नमूना थाली रखने के लिए।
- विनियमन सुखाने कक्ष तापमान
नोट:। सुखाने कक्ष एक 35 x 20 x 45 सेमी 3 (डब्ल्यू एक्स डी एक्स एच) एक्रिलिक चैम्बर चित्रा 1 इस सुखाने प्रणाली की तस्वीर दिखाता है। चैम्बर एक कम सापेक्ष आर्द्रता हालत सुखाने कक्ष के अंदर स्थापित एक calibrated आर्द्रतामापी द्वारा निगरानी बनाए रखने के लिए एक निरंतर प्रवाह की दर पर एक गैस प्रवाहमापी के माध्यम से कमरे के तापमान नाइट्रोजन गैस के साथ पर्ज है। सुखाने के एक प्रोग्राम लगातार तापमान पानी फैलानेवाला के साथ सुसज्जित कक्ष में एक तांबे के आधार ब्लॉक स्टेनलेस स्टील नमूना प्लेटों को समायोजित करने के लिए प्रयोग किया जाता है। तांबे के आधार ब्लॉक 25 डिग्री सेल्सियस के लिए 5 से नमूना थाली के तापमान को नियंत्रित करने में सक्षम है। हवा, तांबे के आधार ब्लॉक, और नमूना थाली के तापमान कश्मीर प्रकार thermocouples के द्वारा निगरानी कर रहे हैं।- दरवाजा खुला और तेजी से तांबे पर नमूना थाली रख दियाआधार ब्लॉक तो दरवाजा बंद करो।
- मैन्युअल प्रति घंटे 10 मानक घन फीट (SCFH) के लिए नाइट्रोजन प्रवाह की दर निर्धारित करने के लिए गैस प्रवाहमापी समायोजित करें।
- आर्द्रतामापी और ठीक धुन गैस प्रवाहमापी द्वारा सुखाने कक्ष में सापेक्ष आर्द्रता मॉनिटर सुनिश्चित करने के लिए सापेक्ष आर्द्रता हमेशा 25% नीचे है।
- कश्मीर प्रकार thermocouples द्वारा नमूना थाली के तापमान पर नजर रखने और मैन्युअल तक नमूना प्लेट प्रयोग या कमरे के तापमान (25 डिग्री सेल्सियस) पर नियंत्रण के लिए के लिए 5 डिग्री सेल्सियस तक पहुँच जाता है पानी फैलानेवाला तापमान को समायोजित।
नोट: आदेश में एक डिजाइन के तापमान पर नमूना प्लेट को स्थिर करने के लिए, पानी फैलानेवाला तापमान आम तौर पर 0 5 डिग्री सेल्सियस के लिए बनाया गया नमूना से कम करने के लिए निर्धारित है। उदाहरण के लिए, नमूना थाली में 5 डिग्री सेल्सियस बनाए रखने के लिए, पानी फैलानेवाला के तापमान की स्थापना 2 डिग्री सेल्सियस के लिए 0 की रेंज में है; 25 डिग्री सेल्सियस पर नमूना थाली बनाए रखने के लिए, पानी फैलानेवाला के तापमान की स्थापना 23 को 25 डिग्री सेल्सियस की रेंज में है। - सुनिश्चित आवश्यक तापमान और सापेक्ष आर्द्रता नमूना बयान से पहले (तालिका 1) पहुँच रहे हैं।
नोट: अलग नमूना प्लेट तापमान के साथ सुखाने की प्रक्रिया के लिए सभी मापदंडों के साथ ही उनके सेटिंग मूल्यों तालिका 1 में दिखाया जाता है।
नोट: एक कम नमूना प्लेट तापमान पर, यदि कक्ष के दरवाजे एक लंबे समय के लिए खुला है नमूना थाली पर पानी संक्षेपण हो सकता है। पानी संक्षेपण होता है, तो दरवाजा बंद है और उस पर किसी भी नमूने जमा नहीं करते जब तक पानी संक्षेपण बाहर सूख रहा है।
- मैट्रिक्स और analyte समाधान की तैयारी
- मैट्रिक्स समाधान की तैयारी
- 50% DDW जलीय समाधान: 50% acetonitrile (ACN) के साथ 0.1 एम Thap समाधान तैयार है।
- analytes की तैयारी
- 10 -4 DDW के साथ एम maltotriose समाधान तैयार है।
- 10 -5 एम ब्रैडीकाइनिन टुकड़ा तैयार (1-7) 50% acetonitrile में समाधान(ACN): 50% DDW जलीय समाधान।
- मैट्रिक्स समाधान की तैयारी
2. नमूना बयान और सुखाने
- Premix 0.1 एम Thap समाधान के 0.25 μl और 10 -4 एम maltotriose या 10 -5 एम ब्रैडीकाइनिन टुकड़ा (1-7) एक microcentrifuge ट्यूब में समाधान के 0.25 μl।
- 3 सेकंड के लिए मिश्रित समाधान भंवर।
- अपकेंद्रित्र ट्यूब के तल पर समाधान इकट्ठा करने के लिए 2 सेकंड (2,000 XG) के लिए मिश्रित समाधान अपकेंद्रित्र।
- सुखाने कक्ष का दरवाजा खोलो, ध्यान से पिपेट के साथ नमूना थाली पर समाधान के 0.1 μl जमा और दरवाजे तुरंत बंद कर दें।
- नमूना छोटी बूंद बाहर सुखाने के लिए के लिए प्रतीक्षा करें।
। नोट: अलग नमूना प्लेट तापमान के साथ आम तौर पर मनाया सूखने बार 1 टेबल में सूचीबद्ध हैं 5 डिग्री सेल्सियस के तापमान नमूना प्लेट के लिए, औसत सुखाने समय 800 से 1,000 सेकंड है; 25 डिग्री सेल्सियस के तापमान नमूना प्लेट के लिए औसत सुखाने समय 100 से 150 s हैचुनाव आयोग। - सूखने के बाद, सुखाने कक्ष का दरवाजा खुला।
- कमरे के तापमान (25 डिग्री सेल्सियस) के लिए पानी फैलानेवाला तापमान सेट करें।
नोट: इस चरण को छोड़ें अगर नमूना प्लेट सुखाने की प्रक्रिया के दौरान कमरे के तापमान (25 डिग्री सेल्सियस) पर लगातार रखा है। - कमरे के तापमान (25 डिग्री सेल्सियस) के लिए नमूना थाली तापमान रिटर्न के बाद, सुखाने कक्ष से नमूना प्लेट हटा दें।
- एक 5X stereomicroscope के तहत नमूना आकृति विज्ञान की जांच करने और एक स्नैपशॉट उज्ज्वल क्षेत्र छवि ले।
नोट: क्रिस्टल morphologies के रूप में की उम्मीद नहीं कर रहे हैं, यह एक ही प्रक्रिया के साथ एक नया नमूना तैयार करने के लिए आवश्यक है। ठेठ क्रिस्टल morphologies चित्रा 2 के ऊपरी पैनल में दिखाए जाते हैं।
नोट: इस तरह के 5 डिग्री सेल्सियस के रूप में कम नमूना प्लेट तापमान, के साथ मामलों में, यह नमूना प्लेट इसे सुखाने कक्ष से बाहर लेने से पहले कमरे के तापमान को गर्म करने के लिए महत्वपूर्ण है। जब नमूने जमा, नहीं premixed समाधान रहते होn 10 सेकंड से अधिक पिपेट की नोक में। premixed समाधान फिर से नमूने जमा करने के बाद का प्रयोग नहीं करते। चित्रा 2 के ऊपरी पैनलों अलग नमूना प्लेट तापमान के साथ तैयार नमूनों के उज्ज्वल क्षेत्र छवियों को दिखाने के।
3. मास स्पेक्ट्रोमेट्री डेटा विश्लेषण
- मास स्पेक्ट्रोमेट्री डाटा अधिग्रहण
नोट: तैयारी के बाद, नमूना इमेजिंग मास स्पेक्ट्रोमेट्री का उपयोग विश्लेषण किया जा सकता है। वर्तमान अध्ययन में, इमेजिंग एमएस प्रयोगों एक प्रयोगशाला का निर्माण सिंक्रनाइज़ दोहरे polarity TOF का उपयोग किया जाता (डी पी-TOF) इमेजिंग मास स्पेक्ट्रोमीटर। 15 इमेजिंग क्षमता के साथ वाणिज्यिक MALDI-TOF मास स्पेक्ट्रोमीटर भी इस तरह के प्रयोगों के लिए उपयुक्त हैं। मास स्पेक्ट्रोमीटर रेखीय निकासी और अनुकूलित निकासी देरी के साथ सकारात्मक आयन मोड में संचालित है। आयनों की गतिज ऊर्जा 20 केवी है। लेजर बीम आकार नमूना की सतह पर व्यास में 35 माइक्रोन है, और हर जगह के स्पेक्ट्रम एवेन्यू है5 लेजर दृश्यों का जुनून।- MALDI मास स्पेक्ट्रोमीटर में नमूना थाली डालें।
- इमेजिंग कदम 2.1-2.9 में तैयार करने के लिए नमूना मास स्पेक्ट्रोमेट्री विश्लेषण करते हैं।
- बड़े पैमाने पर सूची परिणाम विंडो में दिखाए से एक विशेषता बड़े पैमाने पर चोटी का चयन करें और "2 डी" पर क्लिक करें एक दो आयामी आयन छवि की साजिश करने के लिए।
नोट: Thap साथ maltotriose मिश्रित के लिए, विशेषता चोटियों maltotriose, protonated Thap sodiated, और Thap sodiated रहे हैं। ब्रैडीकाइनिन टुकड़ा (1-7) Thap के साथ मिश्रित के लिए, विशेषता चोटियों ब्रैडीकाइनिन टुकड़ा (1-7), protonated Thap protonated, और Thap sodiated शामिल हैं। - संकेत तीव्रता के ऊपरी और निचले सीमा निर्धारित करने के लिए पॉप अप विंडो में समायोजन बटन पर क्लिक करें और "एक तस्वीर बचाने के लिए" पर क्लिक करें। यह सेटिंग आयन छवियों के विपरीत परिभाषित करता है।
नोट: डेटा के हर व्यक्ति सेट में, फटा क्षेत्रों और अशक्त कम चमक दिखा धब्बे समाप्त हो जाते हैं। - ध्यान से देखें और आयन की तुलनाउज्ज्वल क्षेत्र छवि है कि 2.9 कदम पर लिया गया था के साथ छवि।
नोट: मास स्पेक्ट्रोमेट्री और विशेष रूप से आयनों की छवियों का निर्माण इमेजिंग वाणिज्यिक उपकरणों के साथ प्राप्त किया जा सकता है। डाटा अधिग्रहण और विश्लेषण सॉफ्टवेयर की विविधता के कारण, उन साधन विक्रेता द्वारा प्रदान की उच्च गुणवत्ता के चित्र प्राप्त करने के लिए सॉफ्टवेयर निर्देशों का पालन करना चाहिए।
- डेटा विश्लेषण
नोट: नमूनों की विविधता मात्रात्मक विश्लेषण किया है। इस प्रदर्शन में, हर नमूना घर में विकसित आयनों के स्थानिक वितरण का विश्लेषण करने के लिए सॉफ्टवेयर द्वारा कई गाढ़ा क्षेत्रों में बांटा गया है। विश्लेषण भी खड़े अकेले डेटा विश्लेषण सॉफ्टवेयर का उपयोग किया जा सकता है।- महत्वहीन क्षेत्रों दूर करने के लिए अशक्त धब्बे और परिणाम विंडो में दिखाया गया आयन छवि में फटा क्षेत्रों पर क्लिक करें।
नोट: यह प्रक्रिया आयन छवि के आवश्यक क्षेत्र को परिभाषित करता है। - आयन छवि के outmost परत लगाने के लिए बटन "बढ़त मिल" पर क्लिक करें।
- एक डेटाबेस में outmost परत के आयन बहुतायत जानकारी को बचाने के लिए और साथ ही आयन छवि से इस परत को हटाने के लिए "घटा" पर क्लिक करें। एक चेक बॉक्स इस outmost परत का प्रतिनिधित्व परिणाम विंडो के "उत्पादन डेटा" सूची में दिखाई देगा।
- दोहराएँ 3.2.2 और 3.2.3 कदम तक आयन छवि के केंद्र परिभाषित किया गया है।
- क्लिक करें और "उत्पादन डेटा" सूची में सभी चेक बॉक्स का चयन और "निर्यात" पर क्लिक करें डेटा निर्यात करने के लिए।
- स्प्रेडशीट सॉफ्टवेयर का उपयोग कर हर परत की औसत आयन बहुतायत की गणना करने के आयनों के स्थानिक वितरण में जानकारी प्राप्त करने के लिए निर्यात डेटा खोलें।
- महत्वहीन क्षेत्रों दूर करने के लिए अशक्त धब्बे और परिणाम विंडो में दिखाया गया आयन छवि में फटा क्षेत्रों पर क्लिक करें।
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Representative Results
उज्ज्वल क्षेत्र छवियों के रूप में अच्छी तरह से maltotriose और bradykinin टुकड़ा (1-7) 5 नमूना थाली तापमान और 25 डिग्री सेल्सियस के साथ तैयार की छवियों एमएस चित्र 1 में दिखाया गया है। Sodiated maltotriose, आयन संकेत मुख्य रूप से भरता है के मामले में नमूना क्षेत्र की परिधि में जब यह 25 डिग्री सेल्सियस के एक नमूना थाली तापमान के साथ तैयार है। 5 डिग्री सेल्सियस के लिए नमूना थाली तापमान कम करके, संकेत ही ढंग पूरे नमूना क्षेत्र में भरता है। केवल नकारात्मक पक्ष यह ध्यान देने योग्य है जब 5 डिग्री सेल्सियस के नीचे नमूने की तैयारी 25 डिग्री सेल्सियस के तहत तैयार नमूनों की तुलना में अधिक दरारें देखते हैं कि है। protonated ब्रैडीकाइनिन टुकड़ा (1-7) के आयन की छवि sodiated maltotriose के उन लोगों के रूप में एक इसी तरह की प्रवृत्ति से पता चलता है। इमेजिंग एमएस के परिणाम बताते हैं कि एक कम नमूना प्लेट तापमान के तहत नमूने की तैयारी काफी अणुओं फिर से विभाजित और विविधता को कम कर सकते हैं।
चित्रा 3 maltotriose और bradykinin टुकड़ा (1-7) 5 और 25 डिग्री सेल्सियस के तापमान नमूना थाली के तहत तैयार के लिए सांख्यिकीय विश्लेषण के परिणामों से पता चलता है। प्रत्येक नमूना के लिए, औसत तीव्रता सामान्यीकृत है। 25 डिग्री सेल्सियस का एक नमूना प्लेट तापमान के साथ sodiated maltotriose के मामले में, केन्द्रों पर संकेत तीव्रता 5 डिग्री सेल्सियस के तापमान नमूना थाली के साथ उन लोगों की तुलना में काफी कम हैं। जब 5 डिग्री सेल्सियस के लिए 25 से नमूना थाली तापमान कम हो protonated ब्रैडीकाइनिन टुकड़ा (1-7) का परिणाम भी कम भिन्नता से पता चलता है।
चित्रा 1: नमूना सुखाने प्रणाली का चित्र।सुखाने कक्ष एक्रिलिक से बना है। चैम्बर एक कम सापेक्ष आर्द्रता की स्थिति बनाए रखने के लिए कमरे के तापमान नाइट्रोजन गैस के साथ पर्ज है। एक तांबे के आधार एक प्रोग्राम लगातार तापमान पानी फैलानेवाला से लैस ब्लॉक स्टेनलेस स्टील नमूना प्लेटों के तापमान को विनियमित करने के लिए प्रयोग किया जाता है। थर्मामीटर हवा, तांबे के आधार ब्लॉक की निगरानी, और नमूना थाली। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्रा 2:। कम नमूना बेहतर संकेत एकरूपता में थाली तापमान परिणाम उज्ज्वल क्षेत्र छवियों (ऊपरी चित्र) के साथ-साथ maltotriose (क) और bradykinin टुकड़ा (1-7) के MALDI छवियों (कम छवियों) (ख) Thap के साथ तैयार अलग नमूना प्लेट तापमान के तहत। MALDI क्रमश: कुल स्पेक्ट्रम से: और protonated ब्रैडीकाइनिन टुकड़ा (1-7) (757 मी / z): छवियों sodiated maltotriose (527 मी / z) निकालने के द्वारा प्राप्त किया गया। आयन छवियों के पिक्सेल आकार 35 माइक्रोन है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्रा 3: सिग्नल भिन्नता नमूना प्लेट तापमान के रूप में कम कर देता प्रक्रिया सुखाने के दौरान कम हो जाती है MALDI छवियों maltotriose (क) और bradykinin टुकड़ा (1-7) (ख) अलग नमूना प्लेट तापमान के तहत Thap के साथ तैयार के साथ प्राप्त कर रहे हैं।। लाल और नीले रंग के डेटा नमूना 25 और 5 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर नमूना प्लेट तैयार संकेत मिलता है, क्रमशः।जी "लक्ष्य =" _blank "> यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
| नमूना थाली तापमान (डिग्री सेल्सियस) | नमूना | वायु तापमान (डिग्री सेल्सियस) | सापेक्ष आर्द्रता (आरएच%) | सुखाने समय (सेकंड) |
| 5 | Thap साथ maltotriose | 20 ± 3 | <25 | 800 - 1000 |
| ब्रैडीकाइनिन टुकड़ा (1-7) Thap के साथ | ||||
| 25 | Thap साथ maltotriose | 25 ± 3 | 100 - के लिए 150 | |
| ब्रैडीकाइनिन टुकड़ा (1-7) Thap के साथ |
तालिका 1: प्रयोगात्मक मानकों और अलग नमूना प्लेट तापमान के तहत सूखने की स्थिति।
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Discussion
पिछले सैद्धांतिक भविष्यवाणियों के आधार पर, बूँदों के भीतर तापमान प्रेरित hydrodynamic प्रवाह जावक विलायक वाष्पीकरण से प्रेरित केशिका प्रवाह दूर कर सकते हैं। अणुओं के इस तरह के आंतरिक recirculation की दक्षता को बढ़ाया है जब तापमान एक छोटी बूंद वृद्धि भीतर gradients है। परिणाम की भविष्यवाणी के अनुसार, जब 5 डिग्री सेल्सियस के तहत नमूना थाली तापमान रखते हुए परिवेश के तापमान पर उसके आसपास बनाए रखने, छोटी बूंद के भीतर recirculation प्रवाह की औसत वेग के बारे में 4 बार जावक केशिका प्रवाह की तुलना में तेजी है। नमूना थाली तापमान आसपास के रूप में ही है, तो recirculation प्रवाह की औसत वेग 1,800 बार जावक केशिका प्रवाह की तुलना में धीमी है। इस गणना के परिणामों से संकेत मिलता है कि नमूना तैयार करने के दौरान नमूना थाली के तापमान को कम फायदेमंद है। प्रयोगात्मक टिप्पणियों इस भविष्यवाणी के साथ सहमत हैं।
नमूना प्लेट गुस्साature ठीक अलग नमूना प्लेट तापमान के तहत नमूने के 0.1 μl के साथ नमूना तैयार करने की प्रक्रिया। तालिका 1 में नियंत्रित किया जाना चाहिए पता चलता ठेठ छोटी बूंद सुखाने का समय है। थाली पर नमूना समाधान जमा करने से पहले, यह सुनिश्चित करने के लिए कि नमूना थाली की सतह सूखी है महत्वपूर्ण है। अगर पानी संक्षेपण तब होता है जब कम तापमान के तहत नमूने की तैयारी, नमूना समाधान के बयान की सिफारिश नहीं है क्योंकि सघन पानी का नमूना क्षेत्रों मायनों में इजाफा होगा और समाधान dilutes है। इस प्रकार, यह 25% से नीचे सुखाने कक्ष के सापेक्ष आर्द्रता रखने के लिए महत्वपूर्ण है। इसके अलावा, जब कम तापमान के तहत नमूने की तैयारी, नमूना प्लेट कमरे के तापमान को गर्म इसे सुखाने कक्ष से बाहर लेने से पहले होना चाहिए। हालांकि नमूना क्रिस्टलीकरण के पूरा होने के बाद नाबालिग पानी संक्षेपण नमूना आबादी को बदल नहीं है, महत्वपूर्ण संक्षेपण बचा जाना चाहिए।
हौसले से premixed समाधान के उपयोग सिफारिश हैसुधार। एक बार जब premixed समाधान हवा के संपर्क में हैं, नमूना समाधान के पूर्व crystallizations पाए जाते हैं और अंतिम क्रिस्टल आकार और आकृति विज्ञान बदल सकता है। इसलिए, pipetting प्रक्रिया उचित दक्षता के साथ, आम तौर पर 10 सेकंड के भीतर, पिपेट टिप के भीतर पूर्व क्रिस्टलीकरण से नमूना छोटी बूंद को रोकने के लिए किया जाना चाहिए। यह एक खुर्दबीन के नीचे नमूना morphologies निरीक्षण करने के लिए सुनिश्चित करने के लिए उपयुक्त क्रिस्टल morphologies मास स्पेक्ट्रोमेट्री विश्लेषण के समक्ष पेश किया जाता है की सिफारिश की है। उम्मीद के रूप में क्रिस्टल morphologies के रूप में अच्छा नहीं कर रहे हैं, तो बयान प्रक्रिया को दोहराने के रूप में आवश्यक।
हमारे सैद्धांतिक और प्रायोगिक अध्ययन के अनुसार, एक कम तापमान नमूना प्लेट परिवेश की स्थिति के तहत स्थापित के साथ नमूने की तैयारी बहुत डेटा reproducibility और MALDI-एमएस में गुणवत्ता में सुधार। बाद के प्रयोगों को भी इस नमूना तैयार विधि के साथ संकेत तीव्रता का महत्वपूर्ण वृद्धि दिखा। टी द्वारा प्राप्त की प्रयोगात्मक डेटाउसकी विधि काफी मात्रात्मक विश्लेषण के लिए MALDI जन स्पेक्ट्रा की विश्वसनीयता में सुधार होगा। समाधान रचना या सतह गुण परिवर्तन से जुड़े अन्य तरीकों के साथ तुलना में, 8,16-18 बदलते सुखाने हालत सरल और पारंपरिक नमूने लिए और अधिक आम तौर पर लागू है। इस प्रकार, सबसे मास स्पेक्ट्रोमेट्री उपयोगकर्ताओं को नियमित रूप अनुप्रयोगों में इसे से लाभ उठा सकते हैं।
नमूना थाली तापमान घटने के साथ MALDI संकेत एकरूपता में सुधार भी कुछ अन्य लोकप्रिय matrices के लिए प्रभावी है। उदाहरण के लिए, α-cyclodextrin सुधार (α-सीडी) Thap और α-cyano-4-hydroxycinnamic एसिड (CHCA) कम तापमान नमूना सुखाने की शर्तों के तहत मैट्रिक्स के रूप में साथ संकेत एकरूपता के लिए हाल ही में सूचना दी गई है। 14 बदलते नमूना थाली के साथ नुकसान तापमान कि विधि कम तापमान की स्थिति में लंबे नमूना सुखाने समय के कारण वर्तमान में उच्च throughput विश्लेषण के लिए अनुपयुक्त है।
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Reagent | |||
| Detergent powder | Alconox | 242985 | |
| Methanol | Merck | 106009 | |
| Acetonitrile | Merck | 100003 | |
| 2,4,6-trihydroxyacetophenone (THAP) | Sigma-Aldrich | T64602 | |
| Bradykinin fragment (1-7) | Sigma-Aldrich | B1651 | |
| Maltotriose | Sigma-Aldrich | 47884 | |
| Pipette tips | Mettler Toledo | 17005091 | |
| Microcentrifuge tube | Axygen | MCT-150-C | |
| Equipment | |||
| Milli-Q water purification system | Millipore | ZMQS6VFT1 | |
| Powder-free nitrile gloves | Microflex | SU-690 | |
| 600 ml beaker | Duran | 2110648 | |
| Ultrasonic cleaner | Delta | DC300H | |
| Hygrometer | Wisewind | 5330 | |
| Nitrogen gas flowmeter | Dwyer | RMA-6-SSV | |
| K-type thermocouples | Digitron | 311-1670 | |
| Centrifuge | Select BioProducts | Force Mini | |
| Pipette | Rainin | pipet-lite XLS | |
| Stereomicroscope | Olympus | SZX16 | |
| Temperature controllable drying chamber | this lab | ||
| Synchronized dual-polarity time-of-flight imaging mass spectrometer (DP-TOF IMS) | this lab | ||
| MALDI-TOF stainless steel sample target | this lab |
References
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