Introduction
Ashkin报道在1970年1他的小说成就的加速和辐射压力微粒捕集促进了光学捕获技术的发展为物理和生物物理学基础研究的主要工具。 2，3，4，5迄今为止，光学捕获的应用已主要集中在液体环境中，并且被用于研究非常广泛的系统中，从胶体到单个生物分子的力学性能的行为。 6，7，光学捕获的气态介质8中的应用，但是，需要解决几个新的技术问题。
最近，在空气/真空光学捕获已被越来越多地在基础研究应用。由于光学列维塔季翁潜在提供了一种系统的几乎完全的隔离从周围的环境中，光学悬浮粒子成为在小物体研究量子接地状态，4个测量高频引力波，9和搜索分数电荷的理想的实验室。 10此外，空气/真空的低粘度允许人们使用惯性测量布朗粒子11的瞬时速度和在很宽的范围之外的线性弹簧状制度运动的创建弹道运动。 12因此，详细的技术信息，并在气体介质光学陷阱的做法已成为更广泛的研究团体更有价值。
新的实验技术是必需的纳米/微粒装入在气体介质的光学陷阱。压电换能器（PZT），即转换ELECTR设备集成电路能量转换成机械性的声能，已用于小颗粒递送到空气/真空5,12光学陷阱由于光悬浮的第一示范。 1此后，几个加载技术已经被提出来加载使用由商业喷雾器13或声波发生器产生的挥发性气溶胶更小的颗粒。 14固体夹杂物（颗粒）浮动气溶胶随机经过靠近的重点和偶然被困住。一旦该气溶胶被捕获，溶剂蒸发出来和颗粒残留在光阱。然而，这些方法不能很好适合于从样品中识别所需的颗粒，装载所选粒子，如果从阱释放来跟踪其变化。该协议的目的是提供对在空气中选择性光阱装载，包括实验细节新从业人设置，与颗粒运动的同时在频域和时域分析相关联的PZT保持架和样品的外壳，陷阱装载，和数据采集的制造。对于在液体培养基中捕获的协议也已出版。 15,16
整个实验装置在商业倒置光学显微镜的发展。 图1示出了用于证明选择性光阱装载的步骤设置的示意图：释放休息微粒，用聚焦束提起选择粒子，测量其运动，并再次将其放置到衬底上。首先，平移阶段（横向和纵向）被用来使选定的微粒在基片上，以由物镜聚焦的捕集激光（波长1064纳米）的焦点（近红外校正长工作距离物镜：NA 0.4，放大倍数20X，工作ðistance20毫米）通过透明衬底。然后，压电发射器（一个机械预加载环型PZT）产生超声波振动，打破微粒和基材之间的粘合。因此，任何释放颗粒可以通过单束梯度激光陷阱聚焦在选定的粒子上抬起。一旦粒子被捕获，它被转换到包含用于静电激励两个平行的导电板样品外壳的中心。最后，一个数据采集系统（DAQ）同时记录了粒子的运动，由一个象限小区光检测器（QPD）捕获，并且所施加的电场。在结束测量之后，粒子被可控放置到衬底，以便它可以再次以可逆的方式被捕获。这整个过程可以重复数百次，而不颗粒损失来衡量的变化，如接触带电发生在几个俘获循环。请参考我们近期的F条或细节。 12
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Protocol
注意：请咨询实验前所有相关的安全程序。在本协议中描述的所有实验程序符合NIST的激光安全程序以及其他适用的规定执行。请一定要选择穿合适的个人防护装备（PPE），如激光防护眼镜专为特定的波长和功率。干燥处理纳米/微粒可能需要额外的呼吸保护。
1.设计与PZT持有人的制作和样品柜
- 设计一个PZT架和样品柜
注：特殊设计值取决于PZT的选择而变化。- 打开电脑辅助设计（CAD）软件。绘制一个夹持器的两维（2D）草图对于一个给定的PZT尺寸。开发2D草图使用拉伸/拉伸切割的组合体积的特点。
- 点击素描，绘制一个矩形，将其挤出，使一个矩形立方体。
- 绘制立方体的顶部表面上的盘以限定圆凹功能覆盖并保持在环型的PZT。
- 限定中心孔具有用于既实时成像和俘获的光接入。
- 限定沿所述中心孔的周缘的圆形导向以插入一个扁平的金属（铜）环集中朝向中心区域中的超声波功率， 如图2。
- 创建用于对PZT保持器M6螺丝安装两个钻孔与底板（购，4mm厚的底部铝板与在中心的孔）进行组装， 如图2c和2d。
- 以类似的方式，设计样品外壳的矩形框架。点击草图，并绘制一个矩形，拉伸矩形，使其一个矩形框。
- 绘制矩形，顶部表面上的较小矩形R型箱体和挤压切矩形，使其作为一个矩形管。
- 借鉴管挤出切的侧壁上的小矩形将其改造成样品密封盒的框架。
- 转换这些三维（3D）模型到立体光刻（STL）文件格式用于3D打印处理（ 图2b）。
- 设计对象的3D打印
- 打开从3D打印机的操作软件设计文件（“-.STL”）。莱平的对象0 /。而中心的目标（0，0，0）通过单击对象来选择它，并使用对齐功能：“移动”，“关于平台”和“中心”。定向PZT持有人朝上眉清目秀。凹陷表面将朝上。
- 在菜单进入“设置”和“质”选项卡。设置在印刷值以下，腾空：100％，贝壳数：2和层高度：0.2毫米。
- 预览对象检查总打印时间，并确保根据需要分层的对象将被打印出来。导出3D打印文件在“.x3g”的格式并保存在3D打印机使用。
- 开启3D打印机，直到挤压喷嘴的温度达到工作温度变暖，230°C。从存储卡或网络驱动器加载的设计文件。
- 在热身，将构建平台，蓝色画家的磁带，以帮助对象坚持安全。作为用于打印作业的热塑性材料，可使用两个对象的聚乳酸（PLA）长丝。
- 打印设计的对象。一旦打印作业完成后，冷却下来后，关闭打印机。
- 从分离用凿子平台打印的对象。清理整顿印刷对象。如果该方向是适当地选择，PZT的保持器，可以直接使用无需进一步后处理。
- 佛R中的样本外壳，准备一对氧化铟锡（ITO）涂层盖玻片和三个盖玻片的覆盖框架。使用金刚石切割器对盖玻片装配到外壳。
- 线材采用快干银粉漆两个平行导电板跨两个板的电源电压。这些胶五个窗口上使用即时粘接胶样品外壳。
注意：一对ITO镀膜盖玻片安装在平行样品外壳（彼此面对的），以提供均匀的电场并产生沿电场的自然带电粒子的弹道运动。这三个传统的盖玻片的样品外壳表面（顶部，另外两侧），其余为保护被困粒子从空气外流
为选定的微粒2.光阱加载
- 样品制备
- 存储在一个微粒抽空干燥器以减少实验前与水分接触在空气中。
- 倾出微粒的一小部分到载玻片并立即把制造的瓶放回干燥器。
- 拿起一些用玻璃毛细管的微粒。通过在毛细管轻轻拍打而保持在盖玻片毛细管分散在基板上的颗粒。
- 验证使用暗视野显微镜在基板上的数量，并存放颗粒的分布。
注意：在样品制备步骤中，颗粒只是分散在盖玻片并与PZT和PZT保持器之间的光学显微镜将它们插入之前验证整体结构（有散微粒的盖玻片）成像。由于表面粘附足够强以保持在基片上个别微粒，附着粒子被牢固地固定，除非被施加显著外力。 - 压电发射器组件
- 获得压电发射器的所有的组成部分：平底板，绝缘膜，PZT的，玻璃盖玻片，铜环，PZT的夹持器，两个M6螺栓，和样品的外壳。
- 在底板应用的薄膜（或带），以绝缘的PZT。玻璃盖玻片隔离堆栈的顶部。
- 通过围绕平板现在绝缘用胶带的顶部PZT，随后盖玻片，铜环和PZT保持器组装叠层。螺杆堆栈一起保持PZT的定心以避免短路的PZT在支架如果保持器在图2c和2d进行如图所示。铜圈提供了堆栈塑料PZT持有人在一个均匀分布的机械预紧力。
- 最后，胶水样品外壳压入堆栈，并在显微镜安装在一个XYZ平移阶段装配。
- PZT的发射器配置
注：驾驶PZT具有高电压信号都有潜在的触电危险。请与实验前安全人员咨询。所有的电连接应实验前被固定。关闭放大器并断开PZT导致只要有可能。- 连接PZT导致电压放大器和函数发生器连接到电压放大器的输入端口。
- 打开函数发生器和配置它来生成连续方波1 V的输出电压不产生电压信号，直到所有的连接进行验证和保护。
- 开启电压放大器和通过使输出产生的方波输出电压为1V的。
- 放大器的监视输出端口（输出电压200伏）连接到示波器。配置放大器转动到具有200 V / V的增益获得前面板旋钮。验证由示波器测量的监测输出电压具有的1伏的幅度。
- 一旦函数发生器和所述放大器配置，通过扫描驱动信号的调制频率，而实时视频显微镜图像附着粒子找到PZT发射器的共振频率。重复扫描直到微粒运动是一个最大值。使用这个频率（64千赫这里）释放的颗粒。
注：调制频率是手动改变（扫描）从零到150千赫找到谐振频率。 - 配置函数发生器，以产生一个方波，在突发模式的周期的指定数目。按下面板上的“突发”按钮，然后选择“N循环脉冲串”。
- 按“＃循环”软键选择脉冲数和数量设置为10或20。
- 配置方波产生与电压信号600伏的幅度在已经从以前的步骤中发现64千赫的共振频率（用于连续激励的电压的三倍）。验证脉冲信号释放，确保颗粒，每个脉冲之后移动以重复的方式目标粒子。
- 选择性光阱装载
注：PZT发射器组件被安装在一个手动线性平移的xy阶段。颗粒可以相对于所述固定波束焦点通过移动平移阶段被翻译。- 去掉激光线滤波器通过旋转显微镜转台（ 图3a），以确定该俘获光束的焦点。垂直移动机动聚焦块来回周围的可见图像的最佳聚焦，以优化聚焦。
- 一旦焦点位置被验证时，将过滤器回得到澄清的实时视频而不脱离俘获光束干涉。
- 翻译的样品为p在捕集激光的聚焦位置花边选定粒子。集中在粒子图像的选定颗粒，其中约一半半径则以低于粒子中心标称捕获位置，同时使粒子上方的悬浮位置的中心。
- 调整连接到所述电光调制器（EOM）驱动程序来设置光阱功率电源。最佳功率取决于颗粒尺寸和材料。光功率通过反复试验发现，以确定足以悬浮颗粒，而不从梁弹出它的力量。这里，使用140毫瓦的光功率在物镜套住20微米直径的聚苯乙烯（PS）粒子的后焦平面。
- 所选颗粒中心对准后，致动与多个脉冲压电启动器。从静态聚焦图像到运动模糊图像的颗粒图像的变化指示成功加载到利itation位置。
- 竖直平移悬浮颗粒对由移动物镜，以防止可能的表面相互作用的基片上方一毫米。然后降低光功率转变的悬浮颗粒（ 图3b）成标称捕获位置（ 图3c），这是更稳定。
注：捕集激光的光功率可以通过电光调制器（EOM）进行调制。该EOM调节输出功率，通过数字电源提供的偏置电压。人们可以观察到通过CCD捕获位置而缓慢地降低了光功率从悬浮的过渡。 - 用于位置测量，如在图3c到3D所描述的，仔细地移动至PZT保持器的中心光轴，然后移动至物镜上（垂直地）到粒子转化为样品的外壳的中间（9毫米的位置的SUBSTR吃），其中边缘电场最小化。
- 执行如下所述在测量后，通过移动物镜向下直到颗粒接触基板放置在基板上的颗粒。由于大部分的颗粒被邻近的角施加时，捕获微粒可以容易地识别和重新捕获时，它被放置在中心区域。这使得可逆陷阱负荷以测量诸如颗粒和基板的接触相互作用发生超出单个俘获事件的变化。
3.数据采集
- 对准聚光和聚焦透镜以最大化QPD“SUM”信号随着陷阱的颗粒。
- 对准的聚焦透镜以在名义上归零QPD的X和Y通道， 如图4c中 。
- 重复该冷凝器的调整和聚焦透镜，直到经傅立叶变换的位置信号（或功率谱密度在X的（PSD）地块）和Y通道叠加显示平衡的敏感性。正确对准QPD信号（X和Y）显示几乎相同的行为， 如图4b所示 。
- 一旦QPD对准验证，连接电压放大器的两个ITO板。放大器的电压监视输出信号连接到数据采集系统以记录步骤激励信号和感应颗粒轨道同步。
- 提供一个连续的方波的400伏到产生电场（ 图4d），该由约500nm（ 图4e）横向移动粒子的光轴。测量使用QPD被困颗粒的步骤的响应。
- 平均多个周期作为必要减少布朗运动的影响。诱导运动可以用于在更宽范围比热波动的运动来测量光力。 12，EF“> 17 图4D和4E表示平均外加电压和过一步激发的50次迭代引起的颗粒运动轨迹的信号。
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Representative Results
PZT的发射是使用CAD软件程序包设计的。在这里，我们使用一个简单的夹层结构的预压（的PZT夹紧与两个板），如示于图2的压电陶瓷保持架和样品的外壳可以从各种材料和方法来制造。对于一个快速演示，我们选择如图所示的二维与三维热塑性塑料印刷。根据所制造的组件，光学阱装载示于图3。用于选择性加载，反射捕集激光实验由安装在显微镜转台而可见光通过用于反射成像的过滤器，以保护CCD摄象机的过滤器中堵塞， 如图1所示的校准CCD照相机还便于定量通过使粒径和附加位置检测的测量的测量。靶的直径粒子可用于计算其产生从固有频率陷刚度，如下面所讨论的质量。使用CCD相机测定的轨迹也被用于校准QPD电压信号用于测量位移。 12
一旦粒子被捕获，从红色激光器亮散射允许捕获粒子到用肉眼识别，如在图1（插图照片）示出。而且，基板的实时图像可以确定粒子已困，因为它是在从附着在基板（ 图3）的其他微粒的不同高度（聚焦）。微粒可以被困在两个位置：一个诱捕位置和悬浮位置。在捕捉位置，光学力稳定在所有方向上的粒子。与此相反，在悬浮位置的粒子仅稳定转向架横向光学势力伊利。在垂直从辐射压力的向上的力是由重力平衡。随着我们的加载方法，所选择的颗粒一般传递到悬浮位置。在悬浮位置，悬浮颗粒的垂直位置是更敏感的光功率大于在靠近焦点的捕获位置的变化。 18一种可垂直通过改变光功率重复地移动至粒子这两个稳定位置之间移动。悬浮位置，也有外部势力比标称俘获位置，因为当光从传播的焦点远离陷阱僵硬变得柔软更高的灵敏度。因此，悬浮位置也可用于更敏感的测量时位移噪声不被布朗运动占主导地位。当位置噪声被热限制，只要它是在这里，减小刚度增加灵敏度和噪声，所以没有获得F-或精密测量。
被困粒子的运动是由一个QPD监测和DAQ板卡记录。所述QPD信号被记录在时间域（ 图4c）和傅立叶变换（ 图4a和4b）。整体对准可以通过比较两个径向通道（X和Y）的功率谱被方便检查。如果它们不重叠（ 图4a）中，光学对准具有直到叠加出现待校正（ 见图4B）。
粒子轨迹同时显示布朗和弹道运动， 如图4。时间和频率域分析可以用来解释这些测量。我们已经介绍了两种方法来测力允许的光学陷阱更全面的理解比较布朗运动由静电力引起的弹道运动。为布朗运动下没有静电场粒子轨迹转换为可随后由满Langevin方程的非线性最小二乘拟合溶液进行分析的功率谱密度。 19 PSD的这种分析产生的共振频率附近的陷阱中心阻尼。共振频率使用已知的质量的公式中转化为陷阱刚度
。测量位移然后给出了使用公式弹簧F = -kx光力。
通过在静电场的阶跃变化引起的弹道运动也可产生陷阱的谐振频率和介质的衰减。 12正如我们从捕获粒子除去的静电场，该颗粒将被释放于r回至在图4d和4e所示的自由场攻丝position.as。排量为时间的函数可以适合于阻尼谐振子的通用解决方案给谐振频率，阻尼和稳态位移。这两种方法假定在陷阱颗粒作为一个线性弹簧。这些测量可以扩展到使用参数力法一般（非线性）的力。 12 PSD分析和参数力分析的细节未在此协议中的焦点，但它们可以从文献中找到。 12，19
图1： 用于空气选择性光阱加载的实验装置的示意图。单光束梯度力光学T说唱是在一个倒置的光学显微镜的发展。在原理图所用的缩写列出如下：EOM，电光调制器; HAL，卤素照明灯; MFS，电动聚焦阶段; NIR-LWD目标，红外矫正长工作距离物镜;的TS，平移台（X-Y）; PZT，压电换能器; ESM，静电场调制器; ND，中性密度滤镜; QPD，象限光电探测器细胞; DM，电镜;的ITO，氧化铟锡涂覆的盖玻片; CCD，电荷耦合器件摄像头;氦氖，氦氖激光（633纳米）;的Nd：YVO 4，1064 nm激光诱捕。 12 请点击此处查看该图的放大版本。
图 2： 压电发射设备与供应的制备布莱。 （a）以一个“-.SLDPRT”格式和（b）“-.STL”格式为三维打印使用CAD软件程序包的PZT支架的渲染图像。压电发射器的最终组装（ 三 ）渲染的图像：样品外壳（具有ITO镀膜盖玻片），PZT座，隔圈，环型PZT，铝板，盖玻片。最终装配（ 四 ）的图片。 请点击此处查看该图的放大版本。
图3： 由20微米的颗粒PS的选择性光阱装载的步骤演示步骤。 （ 一 ）定位所述俘获光束（b）的漂浮以上焦点的粒子的焦点，（该部分ICLE图像是暗淡模糊，因为在悬浮位置是远高于标称显微镜聚焦），（ 三 ）过渡到捕获位置（标称聚焦），然后（d）该捕集粒子移动到用于数据采集的中心区域。而样品阶段与图3d为黄色箭头（比例尺= 100微米）指示动议的颗粒被截留在光束焦点的一个固定的位置。 请点击此处查看该图的放大版本。
图4：QPD 捕获的粒子轨迹无论是在频域和时域。 （ 一 ）一个对准不佳实验装置显示了在特定的频率，而（B低频噪声，噪声峰值）x和y轴的良好匹配的PSD表示正确的光学对准。 （c）一个QPD记录在时域中的捕获颗粒的布朗运动。 （ 五 ）在整个被困在粒子施加电场的阶跃变化是同步记录的诱导（D）弹道通过数据采集（DAQ）系统的运动。 请点击此处查看该图的放大版本。
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Discussion
压电发射器被设计为优化选择PZT的动态性能。 PZT材料和超声波振动管理的正确选择是关键步骤，以产生一个成功的实验。 PZTs具有取决于换能器的类型（散装或层叠）不同的特性和成分的材料（硬或软）。由硬质的压电材料的一个大容量类型的PZT被选择的原因如下。首先，硬的压电材料具有较低的介电损耗，比软质材料更高的机械品质因数。其次，大容量型的PZT代表低级电负载和更容易以驱动在高频率比叠层型换能器。在动态操作，高振幅振荡可以对导致机械故障无负载的PZT陶瓷引起的拉力。一个机械的预加载结构用于提供恒定的负载，以减少间隙和增强的PZT动态性能。一见面allic环间隔件插在PZT保持器和环型PZT之间。这个金属环垫片集中超声功率和周围环均匀地分配它（任何地方（不平整）的压力可以轻松打破盖玻片）。用一个精心设计的PZT发射器，所述颗粒在轴向和径向方向捕获光束的正确对准确定陷阱装载的效率。如果颗粒没有成功脉冲后悬浮，重复衬底对准和移动焦点少许的粒子下面找到光学装载位置。对于近红外校正物镜，捕获光束的焦点被设置为被聚焦到CCD上的样品平面下方几微米。需要捕获微粒的最佳俘获功率的目标微粒的大小变化而变化。 13最佳捕获功率可以通过试验和错误经验发现。这里所需要的功率（140 MW）是相对高的由于低NA和用于长工作距离。
在这里，我们展示了一个20微米的颗粒PS可逆陷阱加载。然而，我们的方法可以扩展到更小的颗粒。对于较小的微粒，我们目前的PZT发射可能不能够提供足够的超声功率分离的颗粒。更快的PZT驱动电路的使用已经显示出释放更小的颗粒。 20此外，低粘附表面可以是一种替代方法。 21减少微粒和基材之间的密合性会降低分离由此我们当前的PZT发射也可以被用来分离更小的颗粒的粒子所需的最小超声功率。
最常规的加载技术是其中用固体夹杂物大量气溶胶小滴，直到它们中的一个偶然靠近阱岑捕集连续产生的随机过程之三。因此，这个传统技术可能不适合用于捕集样品具有有限数量或维持均匀的采样。在协议中，我们展示了可逆的光阱装载包括陷阱装载和着陆的反复循环。这使独特的实验，例如在颗粒上的电荷累积的研究。 22上的捕获粒子的电荷可以通过拟合瞬态响应（ 图4d）至谐振子的以非线性最小二乘方式提供了理想的解决方案来测量。感应位移乘以陷阱刚度，使该静电力，它允许从已知电场强度（由所施加的电压的两个平行的ITO涂覆的板之间的距离除以给出）电荷的计算。 12这种简单的电荷测量可以扩展以研究粒子表面相互作用时与可逆阱装载TECHNI组合阙展示在这里。 22
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| ScotchBlue Painter's Tape Original | 3M | 3M2090 | |
| Scotch 810 Magic Tape | 3M | 3M810 | |
| Function/Arbitrary Waveform generator | Agilent | HP33250A | |
| Power supply/Digital voltage supplier | Agilent | E3634A | |
| Ring-type piezoelectric transducer | American Piezo Company | item91 | |
| Electro-optic modulator | Con-Optics | 350−80-LA | |
| Amplifier for Electro-optic modulator | Con-Optics | 302RM | |
| Mitutoyo NIR infinity Corrected Objective | Edmund optics | 46-404 | Manufactured by Mitutoyo and Distributed by Edmund optics |
| LOCTITE SUPER GLUE LONGNECK BOTTLE | Loctite | 230992 | |
| 3D printer | MakerBot | Replicator 2 | |
| Polylactic acid (PLA) filament | MakerBot | True Red PLA Small Spool | |
| Data Acquisition system | National Instruments | 780114-01 | |
| Quadrant-cell photodetector | Newport | 2031 | |
| Translational stage | Newport | 562-XYZ | |
| Inverted optical microscope | Nikon Instruments | EclipsTE2000 | |
| Fluorescence filter (green) | Nikon Instruments | G-2B | |
| Flea3/CCD camera | Point Grey | FL3-U3-13S2M-CS | Trapping laser |
| Diode pumped neodymium yttrium vanadate(Nd:YVO4) | Spectra Physics | J20I-8S-12K/ BL-106C | |
| Indium tin oxide (ITO) Coated coverslips | SPI supplies | 06463B-AB | Polystyrene microparticles |
| Fast Drying Silver Paint | Tedpella | 16040-30 | |
| Dri-Cal size standards | Thermo Scientific | DC-20 | |
| Optical Fiber | Thorlabs | P1−1064PM-FC-5 | bottom plate |
| Aluminium plate | Thorlabs | CP4S | |
| High voltage power amplifier | TREK | PZD700A M/S |
References
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