Abstract
באיברי הרבייה הנקביים (FRT) הרירית מערכת החיסון משמש כקו ההגנה הראשון. להכיר טוב יותר את רירית איברי המין ולכן הוא חיוני להבנת פתוגניות של פתוגנים שונים כולל איידס. דלתא גמא (GD) ותאי T הם האבטיפוס של "בלתי שגרתיים" תאי T והם מייצגים קבוצה קטנה יחסית של תאי T מוגדר על ידי הביטוי שלהם של קולטני תאי T heterodimeric (TCRs) מורכב שרשראות גמא דלתא. זה שמבדיל אותם מתאי הקלסיים הרבה יותר טוב ידוע CD4 + T מסייע תאי CD8 + T ציטוטוקסיים המוגדרים על-ידי TCRs בטא-אלפא. תאי GD T לעתים קרובות להראות לוקליזציה רקמות ספציפיות ומועשרים ב האפיתל. תאי GD T לתזמר תגובה חיסונית דלקת, מעקב גידול, מחלות זיהומיות, אוטואימוניות.
כאן, אנו מציגים שיטה לבודד reproducibly ולנתח לימפוציטים GD T האנדוצרוויקאלית האדם intraepithelial. אנו חהve דגימות cytobrush האנדוצרוויקאלית בשימוש מנשים שהשתתפו במחקר זיהום נשים בין-HIV (WIHS). יש ידע על אינטראקציות תאי GD T במהלך תנאים שבם יש עלבון הרירי בנרתיק יכול להיות מיושם על כל ניסוי קליני נוסף בו פגיעות ריריות הופנה, כולל הפיתוח בנוסף microbicides.In נרתיק, ידע על תגובות תא הרירי GD T פוטנציאל היישום של טיפול החיסוני מבוסס תאי GD T בטיפול במחלות זיהומיות.
Introduction
פיתחנו מתודולוגיה של שימוש בדגימות מברשת האנדוצרוויקאלית להעריך תאים GD T intraepithelial. התעלה האנדוצרוויקאלית מצופה בשכבה אחת של אפיתל עמודי. לימפוציטים intraepithelial מייצגים לימפוציטים חזית המתגוררים בתוך שכבת האפיתל שיכול ליזום תגובה חיסונית במהירות כשנתקלה 7 חיידקים פתוגניים, 8. הבנת האירועים אימונולוגיים של תא האנדוצרוויקאלית intraepithelial חשוב בעיצוב של אסטרטגיות אפקטיביות כדי למנוע זיהומים, כולל איידס.
השיטה שלנו יכול להיות מיושם על דגימות האנדוצרוויקאלית אדם טרי שנאספו כמו גם תאים אנדוצרוויקאלי קפוא כדי להמשיך לחקור את התפקיד של תאי T GD intraepithelial בנשים עם זיהום HIV או בסיכון הידבקות ב- HIV. המטרה העיקרית של פרוטוקול זה היא לגלות אירועים אימונולוגיים רומן תא intraepithelial האנדוצרוויקאלית וכדי evaluatדואר GD תגובות תא T כסמן של פגיעות ריריות בנשים עם זיהום HIV.
הפערים המשמעותיים בידע סביב חסינות FGT נובעים בחלקם הקושי לאסוף בהצלחה ועיבוד דגימות ריריות. יתר על כן, ההטרוגניות המורכבות של תאים חיסוניים ריריים, ואת הקשרים הפנימיים שלהם אחד עם השני, הם אתגרים מרכזיים לזיהוי מדידות רלוונטיות קליני המשקפים המדינה ואת היכולת של המערכת החיסונית. פתחנו שיטה להשיג תאים מטוהרים intraepithelial מאוד GD T שיכול להיות עוד יותר לנתח באמצעות טכנולוגיות מרובבות ביותר, תא בודד שעשויה להיות קריטי לזיהוי המנגנונים של חסינות FRT.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
פעילויות המחקר התקיים באוניברסיטת יחידת המחקר מיאמי HIV בשיתוף עם לחקר בין-HIV נשים מיאמי (WIHS) והמרכז מיאמי לאיידס מחקר (וכפר) המועצה לביקורת .Institutional (אוניברסיטת מיאמי מילר מבית הספר לרפואה) התקבל אישור מראש לגיוס וכל נהלים בנושא הערכה או מחקר.
1. אוסף דוגמאות האנדוצרוויקאלית מברשת
הערה: משתתפים עברו בדיקת גינקולוגית מבוצעת על ידי MD המאומן או גינקולוג וגבייה לימפוציטים intraepithelial בוצעו תחת בחינת ספקולום ידי החדרת cytobrush.
- מאפיינים משתתפים
- לגייס משתתפי נשים בגילי 18 עד 45 שנים של גיל, פעילים מינית, לא בהריון ולא על תרופות מניעות או עם התקן תוך רחמים.
- לפני בדיקת גינקולוגית, המשתתפים צריכים לעבור לקיחת דם 10 מ"ל בירוק vacutainers הפרין העליון עבור תא דם היקפיים mononuclear (PBMC) בידוד. כדי לשמש כביקורת לניתוח 9 intraepithelial האנדוצרוויקאלית.
- אוסף של דגימות האנדוצרוויקאלית
- הכנס ספקולום סטרילי בגודל המתאים לנרתיק ללא שימון. השתמש במים חמים כדי להקל על הכניסה של ספקולום גזה סטרילי כדי לנקות את הריר. עמדת ספקולום מאפשרת להדמיה מלאה של מערכת ההפעלה ectocervix.
- הכנס מברשת האנדוצרוויקאלית לתוך תעלת האנדוצרוויקאלית עד שרק הזיפים קרובים מצד גלויים. סובב עם כיוון השעון מברשת 360 °. מעבירים את המברשת לתוך צינור 15 מ"ל המכיל 5 מ"ל של מדיום IMDM.
- מיד לאחר איסוף, במקום צינור המכיל cytobrush על הקרח. כדי להשיג כדאיות גבוהה של תאים intraepithelial שנאספו, לספק את cytobrush למעבדה תהליך בתוך 1 שעות.
"Jove_title"> 2. האנדוצרוויקאלית עיבוד מדגם Cytobrush
- צינור וורטקס המכיל cytobrush האנדוצרוויקאלית החלת 4 משייכות קצרות (10 שניות).
- צנטריפוגה הצינור, המכיל cytobrush, במשך 10 דקות ב 250 x גרם.
- מוציאים בזהירות את cytobrush מהצינור (לא להפריע את הכדור בחלק התחתון של הצינור) ולהוסיף 1 מ"ל של התקשורת IMDM ולמקם את הצינור על הקרח.
- מניחים את cytobrush על מסננת תא 100 מ"מ על החלק העליון של הצינור 50 מ"ל.
- שטפו את cytobrush עם IMDM 20 מ"ל.
- צינור צנטריפוגה במשך 10 דקות ב g 250 x.
- למזוג supernatant ותאי pelleted resuspend ב 1 מ"ל IMDM ולשלב עם גלולה מחדש תלויה כבר המתואר 2.3.
- ספירת התאים באמצעות דלפק תא אוטומטי 10 או לספור את התאים באמצעות hemocytometer על ידי שילוב 10 μL של השעית התא עם 10 μL של צבע כחול trypan. בעדינות pipet למעלה ולמטה עשר פעמים כדי לערבב את התאים לצבוע. טען 10 μLשל התערובת לתוך הפתח של אחד משני תאי hemocytometer. לספור את כל התאים בחמשת תחומי הרשת. שמור ספירה נפרדת של תאי קיימא ושאינו קיימא. לקבוע את כדאיות התא באמצעות הנוסחא הבאה: תאי חי% = ללא קיימא תאים x 100 / תאים מספר תאים כוללים.
קבע את ריכוז התא עוקב לכל מיליליטר (ואת המספר הכולל של תאים) באמצעות החישובים הבאים. תאים סה"כ לכל מ"ל = תאים הכולל x נספר (גורם לדילול / מספר מרובע נספר) x 10,000 תאים / מ"ל. - להקפיא תאים האנדוצרוויקאלית מבודדים באמצעות מדיום הקפאה המכיל 10% DMSO ו -90% FBS.
3. Cytometry זרימה
- Re- להשעות 1-3 x 10 5 תאים אנדוצרוויקאלי ב 100 חיץ μL FACS (PBS המכיל אלבומין בסרום שור 1%
- הוסף 1 μL / 10 6 חי / מת ניתן לתקן ערכת כתם Cell מלח צהובה ונוגדנים עבור סמני משטח בריכוזים המתוארים בטבלת 1.
- דגירת התאים למשך 30 דקות ב +4 ° C, מוגן מפני אור.
- הוסף 1 מ"ל חיץ FACS והתאים וצינורות צנטריפוגות במשך 5 דקות ב 350 XG
- Re- להשעות תא גלולה ב 300 paraformaldehyde 1% μL.
- כן שולט פיצוי באמצעות חרוזים ונוגדנים המשמשים מכתים ידי הוספת 100 μL של חיץ FACS וטיפה אחת של חרוזי הריכוז הזהה של הנוגדנים המשמשים מכתים מדגם.
- רוכשת חרוזים ודוגמאות מוכתם על cytometer זרימה, מצויד 405 ננומטר, 488 ננומטר, ו 635 nm לייזרים.
4. בידוד תא האנדוצרוויקאלית גמא דלתא T
- בידוד חרוז מגנטי
- Re- להשעות תא גלול אנדוצרוויקאלי (≤10 7 תאים בסך הכל), מתואר 2.6, ב 40 μL של החיץ הכלול בערכת microbead דלתא גמא TCR בהפניה של טבלת החומרים ריאגנטים.
- פעל בהתאם להוראות ערכה עבור פרוטוקול מכתים שני שלבים: הראשון, שנינותדלתא גמא אנטי TCR h hapten-נוגדן והשני, עם אנטי hapten microbeads-FITC
- לאחר דגירה של 15 דקות ב 4-8 מעלות צלזיוס, לשטוף את התאים על ידי הוספת 1 מ"ל של חיץ צנטריפוגות ב XG 300 במשך 10 דקות. למזוג supernatant על ידי היפוך הצינור, והקש יבש בעזרת פיסת נייר.
- Re- להשעות את התא הגלול ב 500 μL של חיץ הניתן ולהכין בעמודה המגנטית על ידי צבת אותו מפריד מגנטי מתאים על פי הפרוטוקול של הספק.
- החל ההשעיה התא על עמודה ולאסוף תאים ללא תווית שעוברים ולשטוף טור 3x עם הכמות המתאימה של חיץ (500 μL). בצע שלבי כביסה ידי הוספת חיץ שלוש פעמים, בכל פעם פעם מאגר הטור ריק. אסוף בשפכים הכולל. זהו שבריר התא ללא תווית, שלילי
- הסר את העמודה מהווים את מפריד מגנטי פיפטה 1 מ"ל של חיץ על הטור ומיד לשטוף את השבר עם התווית מגנטיתאד תאים על ידי החלת הבוכנה מסופקת עם הטור בתקיפות.
הערה: תאי T דלתא גמא מבודד כבר מגואלות fluorescently לניתוח זרימה cytometric מאז microbeads מתויג מגנטית אנטי hapten הם מצומדות עם FITC צבע פלואורסצנטי.
- מיון תא
- עבור מיון תא, תאי האנדוצרוויקאלית תווית עם למות כדאיות ולוח נוגדן כמתואר בסעיף 3.
- הגדרת שערים אלקטרוניים על חי, CD45 + CD3 + ו דלתא גמא תאים חיוביים ולבצע מיון התא.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
לאחרונה, ניתחנו תאים GD T intraepithelial האנדוצרוויקאלית והיינו הראשון לדווח על הפסד של תאי T דלתא גמא אנדוצרוויקאלי בנשים הנגועים באיידס 9, 11. כאן אנו מתארים פרוטוקול לבודד ולנתח את המשנה של תאי T דלתא גמא האנדוצרוויקאלית. כפי שניתן לראות בתרשים 1, תאי GD T ניתן לאתר בקלות את דגימות תאי האנדוצרוויקאלית אדם.
אוכלוסייה ייחודית של תאי V1 דלתא גמא אנדוצרוויקאלי (GD1) T תוארה באמצעות multiparametar cytometry זרימה המבוסס immunophenotyping (איור 1). אסטרטגית gating נציג המדגם האנדוצרוויקאלית נגוע ב- HIV מוצגת באיור 1. הניתוח בוצע על תאי האנדוצרוויקאלית הכולל על ידי קביעת שער אלקטרוני על פיזור קדימה / Side (איור 1 א) ואחריו tהוא הדרת כפילויות תא (איור 1B). תאי חיים הוגדרו על ידי הרחקה של תאים מתים באמצעות Live / Dead ניתן לתקן צהוב אמין כתם תאים מת (איור 1 ג). ניתוח של ביטוי CD45 בוצע על תאים מגודרים חיים (איור 1D), ואחריו הניתוח של ביטוי CD3 (האיור 1E). דלתא 1 גמא (GD1) או גמא דלתא 2 (GD2) תאים חיוביים הוגדרו subpopulation של CD3 + תאים המבטאים GD TCR (דלתא גמא TCR V1 או דלתא גמא TCR V2). יתר על כן, הוא אישר כי רק תאים CD3 + T לבטא דלתא גמא TCR מאז CD3 מגודרת - תאי T מחווים V1 דלתא גמא TCR או V2 דלתא. ניתוח פנוטיפי של מגודרת CD3 + GD1 + תאי גילה (איור 1G), כי רוב תאי GD1 (~ 74%) הם CD4 - CD8 -.
במחקר הנוכחי, היתכנות של ניצול endoceדגימות מברשת rvical לתאי intraepithelial GD T מטוהרים באמצעות ברירה מגנטית חיובית הודגמו (איור 2).
איור 1: דלתא גמא (GD) תת-אוכלוסייה של תאי T ב רירית האנדוצרוויקאלית ונותחו על ידי cytometry הזרימה. בעקבות אסטרטגית gating שמשה אוכלוסיות תאי T האנדוצרוויקאלית מזוהות: (א) תאי cytobrush האנדוצרוויקאלית היו מגודרים בהתאם לגודל הגרעיניות (FSC, פיזור צד קדימה לעומת SSC, פיזור צד). (ב) כפילויות Cell נפסלו על ידי קביעת השערים האלקטרוניים-A FSC (אזור) לעומת SSC-W (רוחב). (ג) תאי חיים הם מגודרים על אוכלוסיית צבען שלילי הכדאיות. (ד) שער אלקטרוני נקבע על חי, תאים חיוביים CD45. (ה) שער אלקטרוני עבור תאים חיוביים CD45 נקבעה על תאים חיוביים CD3(F) TCRVD1 (GD1) ו TCRVD2 (GD2) ביטוי נותח על תאי CD3 +. (G) CD4 ו CD8 ביטוי נותח על תאים + GD1. (H) TCRVD1 וביטוי TCRVD2 נותח על תאים שלילי מגודרת CD3. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.
איור 2: בידוד של תאי T דלתא גמא אנדוצרוויקאלי (GD) על ידי פרדה מגנטית חיובית. תדירות של תאי האנדוצרוויקאלית GD T אושרה לפני ואחרי פרדה מגנטית חיובית. תאים האנדוצרוויקאלית תויגו הראשון עם הנוגדן דלתא גמא אנטי TCR ולאחר מכן עם fluorescently מוכתם אנטי hapten microbeads-FITC. אחוז תאים + T TCR GD נמסר לפני ואחרי מטרהפרדת agnetic. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
הערכת הפגיעות ריריות בדרכי נשית תחתונות איברי מין היא מרכיב חיוני של מחקרים קליניים פונים סיכון רכישת HIV ושידור. בדרך כלל פגיעות FGT מפני הדבקה ב- HIV מוערכות על ידי מדידת מאפננים חיסוניים מסיסים הפרשות איברי מין (ציטוקינים, chemokines ופפטידים מיקרוביאלית) 12, 13. עם זאת, סמנים אלה מצביעים רק של דלקת בנרתיק, הם מושפעים מאירועים פיזיולוגיים ופתולוגיים, ואינם מייצגים תמיד נזק הרירית ישיר. על מנת לשפר את הבנתנו כיצד גורמים ריריים להגביר את הסיכון של רכישת העברת HIV, סמנים תאיים של ניזק רירית צריכים להיות מפותחים. תאי GD intraepithelial T נמצאים FGT, intercalate בין תאי אפיתל, והם חשבו לתרום הומאוסטזיס וכן קו הגנה ראשון נגד אתגרים סביבתיים. יש תאי T אלוקים poten TiAl להוות סמן ביולוגי נוסף כדי להעריך את פגיעות ריריות של FGT.
בפרוטוקול זה, הוא הראה כיצד להכין לימפוציטים intraepithelial ממדגם cytobrush האדם האנדוצרוויקאלית והוא שולט בקלות. הנקודה הקריטית ביותר של תהליך זה היא לשמור על כדאיות התא על ידי עיבוד מהיר של המדגם וכן על ידי שמירה על התאים על הקרח במהלך ההליך כולו. תשואת התא תהיה תלויה טכניקת אוסף cytobrush, טיפול מיומנות, כמו גם את מצב זיהומיות (ההידבקות ב- HIV או זיהומים נגיפיים אחרים, חיידקים או זיהומים פטרייתיים). הקבוצה שלנו ואחרים פרסמו מחקרים שונים המתארים אוכלוסיות לימפוציטים שונות בדרכי אדם גניטלי 9, 14, 15. בידיים שלנו, מדגם cytobrush אנדוצרוויקאלי אחד יכול לספק 0.5-5 x 10 6 תאים עם הכדאיות 80-90%. לשם השוואה עם שיטת הבידוד הנפוצהclass = "Xref"> 14, 15, בשיטה שלנו התשואה הכדאית ותא הוא גדל.
שיטה זו מספקת חזק כלי יעיל ללמוד דלתא גמא האנדוצרוויקאלית intraepithelial לימפוציטים מסוג T ו- יכול לספק תובנות לגבי תאי חיסון אחרים הנודדים אל תא זה במהלך זיהום ו / או דלקת. תפקידיו של מוסד vivo הרכב הסלולר של רקמות ריריות הוא לעתים קרובות קשה לחקור באופן מקיף וכמותיים. טכניקות כגון אימונוהיסטוכימיה ותזרים cytometry מוגבלות על ידי הזמינות של נוגדנים חד שבטיים אנטיגן ספציפיים ועל ידי המספר הקטן של מדידות מקבילות שניתן לבצע על כל תא יחיד. מבחני תפוקה גבוהה מסורתיים, כגון מערכי ביטוי גנים, כאשר היא מבוצעת על רקמות כולו, לספק מידע על רמת ביטוי גנים ממוצעת, והוא יכול להיות מתואם בעקיפין רק שינויים כמותיים בתת אוכלוסיות הסלולר.מגבלות אלה הופכים במיוחד קשות להתגבר כאשר לומדים אוכלוסיות מיעוט, או אוכלוסיית התאים חסרות סמנים בלעדיים. על ידי שילוב של "קרינה מופעלת מיון תא" (FACS) ו "בניתוח גנטי ביטוי תא בודד PCR" אחד יכול לבצע ניתוח תעתיק תפוקה גבוהה של תאי T GD intraepithelial ב endocervix. שיטה זו מנצלת את היכולת של cytometers זרימה מודרני למיין תאים בודדים בודדים בקפדנות ובדייקנות, יחד עם שימוש בטכנולוגיות microfluidic כדי preform רגישות גבוהה PCR מרובב מן כמויות זעירות של mRNA, ובכך לאפשר ניתוח מקביל של הביטוי של עד 96 גנים עבור כל תא יחיד 16.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
מחברים אין עמותה מסחרית או אחרת שעלולים להציב ניגוד העניינים (למשל, בעלות על מניות תרופות, ייעוץ, חברות בועדה מייעצות, פטנטים רלוונטיים, או למימון מחקר).
Acknowledgments
אנו מודים משתתפי המחקר מיאמי WIHS על נכונותם להשתתף בעבודה זו. נתונים בכתב היד הזה היו שנאספו במסגרת פרויקט HIV Interagency של מיאמי נשים (WIHS). התכנים של פרסום זה הם באחריות בלעדית של הכותבים ואינם מייצגים את הדעות הרשמיות של המכון הלאומי לבריאות בארה"ב (NIH). עבודה זו נתמכה על ידי המכון הלאומי לאלרגיה ומחלות זיהומיות ולימוד זיהום HIV Interagency לנשים (WIHS) [AI103397 U01 מספר מענק], המכון הלאומי לאלרגיה ומחלות זיהומיות, המכון הלאומי לבריאות [מספר מענק P30AI073961], המרכז הלאומי לקידום מדעי translational לבין המכון הלאומי לבריאות המיעוט ופערים הבריאות, המכון הלאומי לבריאות [מספר מענק UL1TR000460 ו 1KL2TR000461], המכון הלאומי לבריאות הילד והתפתחות האדם, המכון הלאומי לבריאות [K23HD074489 מספר מענק].
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Cytobrush Plus GT | (CareFusion, San Diego, CA, USA | ||
| IMDM,Iscove's Modified Dulbecco's Medium | ThermoFisher Scientific | 12440061 | |
| Beckman Coulter automated cell counter (The Vi-CELL Series Cell Viability Analyzer | Beckman Coulter | 496178 | |
| DMSO, Dimethyl sulfoxide | Sigma Aldrich | D2650 | |
| FBS, Fetal Bovine Serum | Invitrogen, Gibco | 26140-079 | |
| PBS | Invitrogen, Gibco | 10010023 | |
| BSA | Sigma Aldrich | A-9647 | |
| LIVE/DEAD Fixable Yellow Dead Cell Stain kit | Life Technologies, | L349S9 | |
| 1% paraformaldehyde | Sigma Aldrich | D6148 | |
| Fortessa flow cytometer | Becton Dickinson | ||
| UltraComp eBeads | eBioscience | 01-2222-42 | |
| ArC Amine Reactive Compensation Beads (Life Technologies, Grand Island, NY, USA) | Life Technologies | A10346 | |
| anti-TCR gamma/delta MicroBead Kit | Milteny Miltenyi Biotec Inc. | 130-050-701 | |
| MS column | 103-042-201 | ||
| MACS separator | 4124 |
References
- Kaul, R., et al. The genital tract immune milieu: an important determinant of HIV susceptibility and secondary transmission. J Reprod Immunol. 77, 32-40 (2008).
- Haase, A. T. Targeting early infection to prevent HIV-1 mucosal transmission. Nature. 464, 217-223 (2010).
- Hayday, A. C. gamma][delta] cells: a right time and a right place for a conserved third way of protection. Ann Rev Immunol. 18, 975-1026 (2000).
- Nakasone, C., et al. Accumulation of gamma/delta T cells in the lungs and their roles in neutrophil-mediated host defense against pneumococcal infection. Microbes and infection / Institut Pasteur. 9, 251-258 (2007).
- Autran, B., et al. T cell receptor gamma/delta+ lymphocyte subsets during HIV infection. Clin Exp Immunol. 75, 206-210 (1989).
- Pauza, C. D., Poonia, B., Li, H., Cairo, C., Chaudhry, S. gammadelta T Cells in HIV Disease: Past, Present, and Future. Front Immunol. 5, 687 (2014).
- Hayday, A. C., Spencer, J. Barrier immunity. Sem Immunol. 21, 99-100 (2009).
- Cheroutre, H., Lambolez, F., Mucida, D. The light and dark sides of intestinal intraepithelial lymphocytes. Nature Rev Immunol. 11, 445-456 (2011).
- Strbo, N., et al. Loss of Intra-Epithelial Endocervical Gamma Delta (GD) 1 T Cells in HIV-Infected Women. AJRI. 75, 134-145 (2016).
- Szabo, S. E., Monroe, S. L., Fiorino, S., Bitzan, J., Loper, K. Evaluation of an automated instrument for viability and concentration measurements of cryopreserved hematopoietic cells. Lab Hematol. 10, 109-111 (2004).
- Alcaide, M. L., et al. Bacterial Vaginosis Is Associated with Loss of Gamma Delta T Cells in the Female Reproductive Tract in Women in the Miami Women Interagency HIV Study (WIHS): A Cross Sectional Study. PloS one. 11, e0153045 (2016).
- Masson, L., et al. Defining genital tract cytokine signatures of sexually transmitted infections and bacterial vaginosis in women at high risk of HIV infection: a cross-sectional study. Sex Transm Dis. 90, 580-587 (2014).
- Fichorova, R. N., et al. Interleukin (IL)-1, IL-6, and IL-8 predict mucosal toxicity of vaginal microbicidal contraceptives. Biol Reprod. 71, 761-769 (2004).
- Juno, J. A., Boily-Larouche, G., Lajoie, J., Fowke, K. R. Collection, isolation, and flow cytometric analysis of human endocervical samples. JoVE. , (2014).
- McKinnon, L. R., et al. Optimizing viable leukocyte sampling from the female genital tract for clinical trials: an international multi-site study. PloS one. 9, e85675 (2014).
- Dominguez, M. H., et al. Highly multiplexed quantitation of gene expression on single cells. J Immunol Methods. 391, 133-145 (2013).
