Abstract
Klinisk forskning har utnyttjat en mängd olika paradigm för att bedöma kognitiv försämring, vanligen inriktning rumsliga inlärning och minnesförmåga. Men intresset för kognitiva processer nonmodel arter, vanligtvis inom ett ekologiskt sammanhang har också blivit ett växande ämnesområde. I synnerhet, är intresset för de kognitiva processerna i reptiler växer även experimentella studier på reptil kognition är gles. De få reptil studier som experimentellt har testat för rumslig inlärning och minne har använt gnagare paradigm modifierats för användning i reptiler. Men ekologiskt viktiga aspekter av fysiologi och beteende av denna taxonomiska grupp måste beaktas vid prövning av volymbaserade kognition. Här beskriver vi modifieringar av det torra Barnes labyrint och tillhörande testprotokoll som kan förbättra prestanda vid sondering för rumslig inlärning och minne förmåga i små squamate reptiler. Den beskrivna paradigm och proförfaranden har framgångsrikt använts med manliga sido fläckig ödlor (Uta stansburiana), som visar att spatial inlärning och minne kan bedömas i denna taxonomiska grupp med en ekologiskt relevant apparat och protokoll.
Introduction
Många neurodegenerativa sjukdomar såsom Alzheimers närvarande med en gradvis nedgång i kognitiv förmåga, vanligtvis samtidigt med nedbrytning av hjärnan 1-4. För att testa påverkan av hjärnskada och nedbrytning på kognitiva processer, har klinisk forskning leveraged fördelarna med modell gnagare och standardisering av testapparaten och protokoll. I synnerhet har rumsliga inlärning och minnesprocesser bedömts via flera standard paradigm som Morris vattenlabyrinten, Barnes labyrint, och radiell arm labyrint (för en omfattande genomgång av dessa och andra paradigm, se 5,6). Den rika historia av dessa rumsliga inlärning och minne paradigm har visat ganska framgångsrik, vilket gör att forskarna att förstå många av de aspekter och nyanser av förhållandet mellan mänskliga minnet, hjärnans funktion och sjukdomar.
Även bedömning av kognitiva processer har undersökts i klinisk forskning för att slutae lite tid, är forskning inriktad mot kognitiva förmågor nonmodel arter relativt nytt. Forskare som studerar kognition i nonmodel arter är typiskt intresserade av ekologiska och evolutionära betydelsen av kognitiva processer, i synnerhet i samband med överlevnad och reproduktion. Vissa studier i reptiler har föreslagit att avancerade kognitiva förmågor, framför allt fysisk minne, kan ligga bakom vissa beteenden, i synnerhet de som rör navigering och orientering. Men medan många studier har visat att reptiler kan omorientera efter förskjutning 7,8, den kognitiva mekanismer underliggande omorientering beteende ännu inte har retad isär. På grund av detta, har vissa studier försökt experimentellt bedöma betydelsen av spatial inlärning och minne under navigering 9-17. Metodiken i dessa studier är främst modellerad efter gnagare paradigm och protokoll, ibland modifierats för användning i reptiler, men dessa studierhar haft varierande framgång vid bedömningen rumsminne. Vissa studier har visat spatial inlärning och minne hos vissa arter 11-17 medan andra studier inte funnit några bevis för en sådan 9,10. Således är fortfarande oklart vilken roll eller förekomsten av spatial inlärning och minne under navigering i reptiler.
En fråga som kan vara problematiskt när experimentellt utvärdera spatial inlärning och minne hos reptiler är den ekologiska betydelsen av uppgiften. Reptiler är en speciell taxonomisk grupp ganska distinkt från gnagare, vilket visar stor variation i ekologi, beteende och fysiologi. Skillnader i beteende över reptilarter skulle kunna påverka bedömningen av rumsliga kognitiva förmågor, i synnerhet om paradigm används inte utnyttja ett naturligt beteende. Till exempel, i en art som normalt söker sin tillflykt till små sprickor, spatiala förmågor kan lätt utvärderas med hjälp av en Barnes labyrint Denna labyrint är kanske inte det idealiska paradigm valeti en art som normalt förblir orörlig. På samma sätt, de flesta squamate reptiler är inte vatten- och därmed Morris vattenlabyrinten kan inte vara ett lämpligt val för att testa spatial inlärning och minne (men se 15); dock kan denna labyrint vara ett idealiskt val för att testa spatiala förmågor i sköldpaddor 16. Slutligen måste fysiologi denna grupp redovisas som reptiler är växelvarma och korrekt underhåll temperatur, i synnerhet på substratet, måste beaktas under testproceduren.
Protokollet och paradigm presenteras här användes för att sondera för rumslig inlärning och minne hos vuxna sido fläckig ödlor (Uta stansburiana) 13, en liten ödla som vanligtvis flyr från rovdjur i små sprickor i berg 18. Att veta denna aspekt av naturhistoria och beteende av arten, använde vi en modifiering av den traditionella Barnes labyrinten för att testa spatial inlärning och minne. Barnes labyrint isa torr land labyrint och vanligtvis används för att testa spatial kognition i gnagarmodeller. Vi ändrade vår labyrint på flera sätt från gnagare labyrint, i både design och protokoll (se nedan). Vår labyrinten utgjordes av en cirkulär plattform med 10 hål på samma avstånd från varandra längs omkretsen av plattformen (figur 1). Protokollet som beskrivs här involverar ett ämne som deltar i träningsförsök att lära placeringen av ett mål hål, sedan, när ämnet lär platsen för målet hål, en sond prov används för att förvissa sig spatialt minne användning under navigering till målet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alla förfaranden har godkänts av Penn State University Institutional Animal Care och användning kommittén (IACUC - Protokoll ID: 43242) och anslöt sig till alla lokala, statliga och federala regler.
1. Beredning
- Köp eller konstruera Barnes labyrint, säkerställa att mål hål lämplig storlek för de arter av intresse. För detta protokoll använder sju vuxna sido fläckig ödlor (Uta stansburiana). Bestämma lämplig provstorleken för studier med andra arter.
- Om konstruera Barnes labyrint, köpa någon standard, icke-poröst rundabords (106 cm i diameter), förhöjda 76,2 cm från golvet.
- Med hjälp av ett måttband, markera 10 ekvidistanta punkter fördelade 26 cm från varandra runt omkretsen av tabellen och 6,35 cm från kanten av bordet. Använd 10 hål medan gnagare labyrinter har oftast fler hål. Om du gör det möjliggör en minskning av antalet utrymningsmöjligheter.
- Med användning av en hålsåg bit (2,54cm i diameter), borra ut alla 10 mål hål och sand vassa kanter.
- Montera fyra hylla stödpinnar under varje hål med skruvar, med hjälp av ett hem inneslutning som en guide för dimensioner.
- Placera labyrint i ett tyst rum med ljus storbildsprojektor och ledljud tillgängliga för navigering (dörrar, skåp, etc.).
- Montera en autofokus, vidvinkelobjektiv webbkamera (11,3 cm x 3,99 cm) eller annan lämplig kameran direkt ovanför labyrinten. Var säker på att synfältet från videoflödet omfattar hela labyrinten.
- Placera datorn och observatörs stol minst en meter från labyrinten.
- Markera benen på labyrinten på golvet med en märkpenna eller tejp. Detta gör det möjligt för korrigering av varje minut rörelse labyrinten under loppet av försöken.
- Slumpmässigt tilldela ett av hålen som "1" och antal andra hål i följd genom "10". Med en permanent markör, skriva siffror längs sidan av utsidanav labyrinten för enkelhetens skull. Se till att siffrorna inte är synliga för ett djur i labyrinten.
- Slumpmässigt tilldela mål hål till de ämnen som med hjälp av en slumptalsgenerator.
2. träningsförsök
OBS: Reptiler har en föredragen kroppstemperatur som kan erhållas från litteraturen. Om djur blir trög över flera träningsförsök kan labyrinten vara för kallt och detta kan påverka beteendet. Ett litet värmeelement eller värmetejp på undersidan av labyrinten kan adekvat sätt öka labyrint yttemperatur, den bästa termiska indikering av kroppstemperatur, för att bibehålla optimal kroppstemperatur och beteende prestanda.
- Om ämnen inrymt utanför provningsrummet, sätta djur i deras hem bilagor in i rummet minst 30 minuter före testning. Var noga med att ge värme i hemmet höljen (t.ex. värmelampor, värme band) för att upprätthålla kroppstemperaturen före provning.
- Öppen mjukvara och webcam ansökan om videoflödet. Den anpassade mjukvara skriven för Matlab och bildbehandling verktygslåda; andra spårningsprogram är kommersiellt tillgänglig.
- Utvärdera synfältet från videomatningen. Om labyrinten inte är i synfältet, kontrollera att labyrinten är inom markeringarna på golvet.
- Öppna kalkylbladet som innehåller information om datum, start / sluttid för träningsförsök, förutsatt ID, tilldelas mål hål, antal träningsförsök kör, anteckningar och betraktarens initialer.
- Slumpmässig ordning i vilka ämnen kommer att testas. Försökspersoner på ett systematiskt sätt.
- Ta bort den första frågan från sitt hem bur och försiktigt placera motivet i mitten av labyrinten. Placera en plastbalja över djurets; gör det förhindrar omedveten orientering fördomar av forskaren. Låt 30 s för att acklimatisera sig.
- Montera djurets hem bur under labyrinten, direkt under såtecknat mål hål, genom att skjuta upp i inneslutningen in i tappfästen. Vara säker på att sola berget i hemmet buren är direkt under hålet, som kommer att fungera som en abborre när djuret ned i hålet. Vid denna punkt, är irrelevant användningen av termiska eller kemiska signaler i hemmet hölje för användning i navigering.
- Gnagare labyrinter använda en ren hölje som en flykt för ämnet. Men uppmuntra inträde i hålet under träningen försök genom att montera djurets hem hölje under labyrinten.
- Försiktigt bort plastbalja från toppen av labyrinten.
- Starta inspelningen av utbildningen prov med webbkamera ansökan.
- Tillåta ämnet att utforska labyrinten under 10 minuter. Om något atypisk inträffar, notera detta i kalkylbladet.
- Om motivet faller eller rinner av bordet, försiktigt tillbaka föremål till mitten av labyrinten. Fortsätt timing och registrering om djuret är ut ur labyrinten i 30 s eller mindre.Om motivet är ut ur labyrinten för mer än 30 sekunder, avbryta försöket. Registrera denna information i den del av arbetsboken anteckningar.
- Om motivet ned in i mål hålet utan hjälp, anser rättegången som över vid den tidpunkten.
- Om motivet inte sjunka in i mål hålet, anser rättegången som över efter 10 minuter har gått.
- Om motivet inte sjunka in i mål hålet efter 10 minuter för hand försiktigt styra djuret, huvudet först, i lämpligt mål- hålet.
- Stoppa video och mjukvara. Spara videofilmer.
- Tillåta föremål att vila i minst två minuter i sin ursprungs kapsling medan inneslutningen fortfarande monterad under labyrinten.
- Med användning av en sprayflaska och pappershanddukar, rengör toppen av labyrinten med en utspädd tvålblandning av 01:10 tvål till vatten. Om du gör det utesluter användningen av kemiska signaler när du navigerar labyrinten. Vissa arter, särskilt de som gör tung användning av chemosensory informationen, nödvänsitate ytterligare sköljning av labyrinten med varmt vatten för att eliminera alla doft ledtrådar.
- Ta bort höljet från under labyrinten och antingen upprepa utbildning prov med samma individ eller en ny individ. Varje ämne kan köras i upp till 5 träningsförsök per dag, med 30 minuters intervall mellan en individs försök.
- Upprepa denna procedur tills ett ämne ned till sitt mål hål utan hjälp, i 3 olika träningsförsök, vilket tyder på att inlärning av målet platsen har inträffat. De tre träningsförsök behöver inte vara i följd. Om ett ämne når detta kriterium motivet flyttar till sonden studie för att bedöma rumsliga minne.
3. Sond Trials
OBS: När ett ämne når kriterium har ämnet lärt sig hur man navigerar till målet. Men vid denna punkt, är det fortfarande oklart om motivet navigerar med hjälp av en rumslig strategi eller någon annan navigations strategi. sondförsökss test för detta och bör utföras dagen efter motivet når kriteriet i träningsförsök.
- Rotera labyrinten 180 °, vilket säkerställer att benen av labyrinten är inom de märken på golvet. Rotation av labyrinten möjliggör lokala signaler som direkt identifierar målet att vara i direkt konflikt med de mer stabila ledljud.
- Upprepa steg 2,1 - 2.5.2, utelämna steg 2,3 monterings patientens hem hölje under labyrinten. Om du gör det utesluter användningen av lukt eller andra signaler som härrör från hemmet inneslutningen under labyrint prospektering.
- Under sond prövningar ämnen är fri att utforska en labyrint för hela 10 minuter för att bedöma undersökande beteende. Efter 10 minuter, stoppa video och mjukvara.
- Ta bort föremål från labyrinten och returnera den till sin hem bur.
- Rengör toppen av labyrinten med det utspädda tvålblandningen.
4. beteendemätningar
OBS: För utbildning trials, inkluderar beteende åtgärder såsom latens att komma fram till målet hål, antal fel som görs (undersökning av en nongoal hål, djurets nos måste vara inom 1 cm från hål), och andelen tid som tillbringas i rätt kvadrant labyrint.
- För träningsförsök, bestämma en sökstrategi. En direkt strategi definieras som fallande in i mål hålet med färre än 3 fel. En serie strategi är undersökning av 3 eller fler labyrint hål i rad längs omkretsen av labyrinten. Ett slumpmässigt strategi är icke-seriell undersökning av labyrint hål med 3 eller flera fel.
OBS: För prob studier beteende åtgärder omfattar latens att komma fram till rums rätt hål, antal fel som gjorts före undersöka spatialt rätt hål, och andelen tid som tillbringas i spatialt korrekt kvadranten av labyrinten. - För en mer stringent bedömning av icke-slumpmässigt val av spatialt korrekt mål hål, anställa provtagning utan ersättning vid beräkningchans hastighet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Detta protokoll möjliggör experimentell bedömning av volymbaserade navigering i små ödlor. En tidigare studie använts med framgång detta protokoll för att sondera för rumslig navigering i manliga sido fläckig ödlor 13. I just den studien, män utbildades för att navigera till ett mål hål och när kriteriet nåddes, utvecklats till en sond studie för att undersöka ledtrådar prioriterade när du navigerar till ett mål hål.
De representativa resultat från denna studie, som presenteras här, visar att medan ödlor lärde platsen för målet, var antalet utbildnings försök som behövs för att nå kriteriet för varje individ ganska varierande och sträckte sig från 17 - 81 träningsförsök (genomsnitt: 48,29 ). På grund av det varierande antal träningsförsök att nå kriterium mellan individer, var försök uppdelade i kvartiler och i genomsnitt. Över flera träningsförsök Individuals tog mindre tid att hitta målet hål, särskilt mellan den första och fjärde kvartilen av träningsförsök, vilket tyder på att försökspersoner lära placeringen av målet hålet (p = 0,012, Figur 2). Under sond prövningar labyrinten roteras således motstridiga lokala och ledljud. Individer gick till spatialt korrekt mål hål med en hastighet väl bättre än slumpen (p <0,001, Figur 3) och tillbringade större delen av tiden i spatialt korrekt kvadranten av labyrinten (p <0,001), vilket indikerar att ledljud var prioriteras under navigering.
Figur 1. Barnes Maze Design för små ödlor. A Barnes labyrint (diameter på 106 cm), förhöjda 76,2 cm från golvet. Tio ekvidistanta mål hål ligger längs omkretsen och placerade 26 cm från varandra. Goal hål är 2,54 cm i diameter för att tillåta sma ll ödlor att stiga ned i hemmaburen monterad under bordet. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 2. träningsförsök. Latens (s) ± SEM för att hitta målet hålet under träningsförsök (n = 7 personer per kvartilen). På grund av det varierande antal träningsförsök att nå kriterium mellan individer, var försök uppdelade i kvartil inlärningsblock och genomsnitt. Individer visade en minskning av latens för att hitta målet hål, mest märkbart mellan den första och fjärde kvartilen av träningsförsök (p = 0,012), vilket tyder på att individer lära sig platsen för mål hålet. Data från Ladage et al. 2012.ig2large.jpg "target =" _ blank "> Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 3. Probe prövningar. Antalet fel innan du väljer spatialt korrekt mål hål + SEM (n = 7). Individer nonrandomly valde spatialt korrekt mål hål under sondförsök (p <0,001), vilket indikerar en rumslig strategi användes under navigering. Den streckade linjen representerar chans prestanda. Data från Ladage et al. 2012. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
När experimentellt testa för rumslig inlärning och minne, finns det flera viktiga konceptuella frågor som tas upp i några av de viktigaste stegen i protokollet. Först måste ämnen visa att de lär placeringen av mål hålet under loppet av träningsförsök. Att uppnå den förinställda kriteriet visar att inlärning av målet hålet platsen har inträffat. Om patienter inte lär platsen för målet hål, det finns ingen framkomlig väg för att sedan bestämma en navigations strategi. Om djuren når kriterium är viktigt för att avgöra vilken ledtrådar prioriteras under navigering på labyrinten sonden rättegången. Under sonden rättegången lokala och ledljud är i konflikt som tvingar en individ att prioritera användning av endast en av kö för navigering. Således är det viktigt för bedömningen av vilken typ av kö återkallas och prioriteras under labyrint navigering sonden rättegången. På grund av fokus på rumsliga kontra lokala signaler,Det är viktigt att eliminera andra möjliga ledtrådar som kan användas för navigering, dessa signaler skulle kunna bli en potentiell FÖRVÄXLA i studien. I squamate reptiler i synnerhet lukt signaler spelar en viktig roll i partnerval, underprissättning undvikande, och plats för livsmedel 19. Därför är det viktigt att eliminera lukt ledtrådar mellan försök att förhindra följande av luktsignaler medan i labyrinten.
Även om detta protokoll fungerade bra med vuxna manliga sido fläckig ödlor 13, ändringar av labyrinten och protokoll sannolikt att behöva inträffa när man testar spatial inlärning och minne hos yngre ödlor eller i olika arter (Ladage, opublicerade data). Till exempel unga ödlor (dvs. yngre än 9 månader för sido fläckig ödlor), arter som hoppar, eller trädarter kan tendera att fly från labyrinten, med liten hänsyn till nedstigningen in i mål hålen. I vissa fall kan en vägg runt labyrinten eller en sluten labyrint lätta circumventing denna fråga, så länge ledljud är fortfarande synliga från ytan av labyrinten. Dessutom måste den ekologiska betydelsen av uppgiften skall beaktas vid modifiering av någon typ av labyrint. Sido fläckig ödlor, som flyr in i sprickor i berg och i små hål i marken, prestera bra på en Barnes labyrint. Men arter som tenderar att förbli orörlig kan inte prestera bra på Barnes labyrint uppgift om de utsätts för en drivkraft (t.ex. simulerad predation försök) för att inducera labyrint prospektering. På liknande sätt kan andra modifieringar göras för att förbättra prestanda på uppgiften, inbegripet orientering labyrinten vertikalt för trädlevande arter, vilket ökar diametern på hålen för större arter, och med hjälp av hudar i stället för hål för arter som inte sjunka i hål. Tidigare studier har visat att en ändring labyrint attribut kan skapa variation i prestanda 20-24; alltså, när du gör ändringar i Barnes labyrint, skillnader i naturlig hanstory och beteende av de arter av intresse måste beaktas.
Även om detta protokoll fungerade tillräckligt bra för att sondera spatial inlärning och minne i sido fläckig ödlor, fanns det vissa begränsningar och svårigheter som utför protokollet. I första hand sido fläckig ödlor krävt ett stort antal träningsförsök att nå kriterium, sannolikt eftersom det inte fanns någon drivkraft infördes som skulle uppmuntra utforskning och fly från labyrinten. På grund av detta, det protokoll som skrivs är ganska tidskrävande, i synnerhet i jämförelse med prestandan hos gnagare under träningsförsök. Presentation aversiva stimuli för att öka motivationen att fly labyrinten kan kringgå detta problem och minska antalet träningsförsök som krävs för att nå kriterium. Dessutom, på grund av bristen på studier experimentellt testa för rumslig minne och inlärning i reptiler, detta protokoll och labyrint modifiering kan inte vara lämpligt eller förhållningsregler som tillämpasle för alla arter. Modifieringar såsom de som föreslås ovan kan hjälpa till vid utformningen ett lämpligt labyrint och protokoll för de arter av intresse.
Protokollet som beskrivs här möjliggör experimentell testning av spatial inlärning och minne i en liten ödla. Medan reptil orientering och navigering har visats på fältet 7,8,25, lite är känt om vilka signaler används och prioriteras under navigering. De få studier experimentellt testa för cue prioritering under navigering i reptiler har använt olika paradigm och arter som tenderar att hindra generaliserbarhet om spatial inlärning och minne över denna taxonomiska grupp. Men standardisera testapparaten och protokoll, åtminstone inom en art och mellan studier, kommer att hjälpa till att sondera för generaliseringar i spatial inlärning och minne. När denna grund har fastställts, skulle andra, mer detaljerade tillämpningar av protokollet vara lämplig. för instance, införa uppenbara lokala signaler eller minska tillförlitligheten ledljud under träning kan inducera ett större beroende på att utnyttja lokala signaler för navigering i labyrinten. Dessutom kan könen prioritera ledtrådar på olika sätt, på så sätt att bedöma kvinnor på denna uppgift kan även belysa intressanta intersexuella skillnader i kö prioritering. Ändringar som dessa kan avslöja hur prominens och stabilitet både rumsliga och lokala signaler kan modulera cue prioritering i minnet och efterföljande återkallande och användningen av dessa signaler under navigering.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Barnes maze | TSE Systems | 302050-BM/M | Available from other vendors. Alternatively, a Barnes maze can be constructed from a standard, non-porous round table. |
| Heat tape | Big Apple Pet Supply | May also use a small space heater situated on the floor under the maze. | |
| Pet keeper for small animals | Petco | 1230204 | Housing enclosure that can be mounted under the maze. |
| Nickel plated shelf support pegs | Newegg | 241941 | Pegs attached to underside of maze. Secures enclosure to maze during trials. |
| LifeCam Studio webcam | Microsoft | Q2F-00013 | Available from other vendors. Other brands of webcams may also be used. |
| Tracking software | Code custom written for Matlab and the Image Toolbox |
Video tracking software. Other tracking software such as VideoMot 2 from TSE Systems can be used. |
References
- Adriano, F., Caltagirone, C., Spalletta, G. Hippocampal volume reduction in first-episode and chronic schizophrenia: A review and meta-analysis. Neuroscientist. 18, 180-200 (2012).
- Karl, A., Schaefer, M., Malta, L. S., Dorfel, D., Rohleder, N., Werner, A. A meta-analysis of structural brain abnormalities in PTSD. Neurosci. Biobehav. Rev. 30, 1004-1031 (2006).
- Shi, F., Liu, B., Zhou, Y., Yu, C., Jiang, T. Hippocampal volume and asymmetry in mild cognitive impairment and Alzheimer's disease: Meta-analyses of MRI studies. Hippocampus. 19, 1055-1064 (2009).
- Videbech, P., Ravnkilde, B. Hippocampal volume and depression: A meta-analysis of MRI studies. Am. J. Psychiatry. 161, 1957-1966 (2004).
- Sharma, S., Rakoczy, S., Brown-Borg, H. Assessment of spatial memory in mice. Life Sci. 87, 521-536 (2010).
- Vorhees, C. V., Williams, M. T. Assessing spatial learning and memory in rodents. ILAR J. 55, 310-332 (2014).
- Jenssen, T. A. Spatial awareness by the lizard Anolis Cristatellus: Why should a non-ranging species demonstrate homing behavior. Herpetologica. 58, 364-371 (2002).
- Pittman, S. E., Hart, K. M., Cherkiss, M. S., Snow, R. W., Fujisaki, I., Smith, B. J., Mazzotti, F. J., Dorcas, M. E. Homing of invasive Burmese pythons in South Florida: evidence for map and compass senses in snakes. Biol. Lett. 10, (2014).
- Day, L. B., Crews, C., Wilczynski, W. Spatial and reversal learning in congeneric lizards with different foraging strategies. Anim. Behav. 57, 393-407 (1999).
- Day, L. B., Crews, C., Wilczynski, W. Effects of medial and dorsal cortex lesions on spatial memory in lizards. Behav. Brain Res. 118, 27-42 (2001).
- Holtzman, D. A. From Slither to Hither: Orientation and Spatial Learning in Snakes. Integr. Biol. 1, 81-89 (1998).
- Holtzman, D. A., Harris, T. W., Aranguren, G., Bostock, E. Spatial learning of an escape task by young corn snakes, Elaphe guttata guttata. Anim. Behav. 57, 51-60 (1999).
- LaDage, L. D., Roth, T. C., Cerjanic, A. M., Sinervo, B., Pravosudov, V. V. Spatial memory: are lizards really deficient. Biol. Lett. 8, 939-941 (2012).
- Nobel, D. W. A., Carazo, P., Whiting, M. J. Learning outdoors: male lizards show flexible spatial learning under semi-natural conditions. Biol. Lett. 8, 946-948 (2012).
- Foà, A., Basaglia, F., Beltrami, G., Carnacina, M., Moretto, E., Bertolucci, C. Orientation of lizards in a Morris water-maze: roles of the sun compass and the parietal eye. J. Exp. Biol. 212, 2918-2924 (2009).
- López, J. C., Vargas, J. P., Gómez, Y., Salas, C. Spatial and non-spatial learning in turtles: the role of medial cortex. Behav. Brain Res. 143, 109-120 (2003).
- Petrillo, M., Ritter, C. A., Powers, A. S. A role for acetylcholine in spatial memory in turtles. Physiol. Behav. 56, 135-141 (1994).
- Zani, P. A., Jones, T. D., Neuhaus, R. A., Milgrom, J. E. Effect of refuge distance on escape behavior of side-blotched lizards (Uta stansburiana). Can. J. Zool. 87, 407-414 (2009).
- Mason, R. T. Reptilian Pheromone. Hormones, Brain, and Behavior: Biology of the Reptilia. Gans, C., Crews, D. , University of Chicago Press. 114-228 (1992).
- Crawley, J. N., et al. Behavioral phenotypes of inbred mouse strains: implications and recommendations for molecular studies. Psychopharmacology. 132, 107-124 (1997).
- Schellinck, H. M., Cyr, D. P., Brown, R. E. How Many Ways Can Mouse Behavioral Experiments Go Wrong? Confounding Variables in Mouse Models of Neurodegenerative Diseases and How to Control Them. Adv. Stud. Behav. 41, 255-366 (2010).
- O'Leary, T. P., Brown, R. E. The effects of apparatus design and test procedure on learning and memory performance of C57BL/6J mice on the Barnes maze. J. Neurosci. Methods. 203, 315-324 (2012).
- O'Leary, T. P., Brown, R. E. Optimization of apparatus design and behavioral measures for the assessment of visuo-spatial learning and memory of mice on the Barnes maze. Learn. Mem. 20, 85-96 (2013).
- Patil, S. S., Sunyer, B., Höger, H., Lubec, G. Evaluation of spatial memory of C57BL/6J and CD1 mice in the Barnes maze, the Multiple T-maze and in the Morris water maze. Behav. Brain. Res. 198, 58-68 (2009).
- Roth, T. C., Krochmal, A. R. The role of age-specific learning and experience for turtles navigating a changing landscape. Curr. Biol. 25, 333-337 (2015).
