Um de uma etapa simples protocolo de dissecação para Whole mount-Preparação do Adulto<em&gt; Drosophila</em&gt; Brains

Antonio J. Tito; Shebna Cheema; Mian Jiang; Sheng Zhang

doi:10.3791/55128

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Artigo de método

Um de uma etapa simples protocolo de dissecação para Whole mount-Preparação do Adulto

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DOI:

10.3791/55128

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1 de dezembro de 2016

Antonio J. Tito¹ , Shebna Cheema² , Mian Jiang² , Sheng Zhang¹^,³

¹Center for Metabolic and Degenerative Diseases, The Brown Foundation Institute of Molecular Medicine, Programs in Human and Molecular Genetics and Neuroscience, The Graduate School of Biomedical Sciences at Houston, The University of Texas Health Science Center at Houston, ²Department of Natural Sciences, University of Houston - Downtown, ³Department of Neurobiology and Anatomy, McGovern Medical School, The University of Texas Health Science Center at Houston

Neste artigo

Resumo

O adulto de Drosophila cérebro é um sistema valioso para estudar circuitos neuronais, funções cerebrais superiores, e doenças complexas. Um método eficiente para dissecar tecido do cérebro inteiro do cabeça pequena mosca facilitará estudos baseados em cerebrais. Aqui nós descrevemos um de uma etapa simples protocolo, dissecação de cérebros adultos com morfologia bem preservada.

Resumo

Há um interesse crescente na utilização de Drosophila para modelar doenças degenerativas do cérebro humano, mapa circuitos neuronais em cérebros adultos, e estudar a base molecular e celular de funções cerebrais superiores. A preparação de toda a montagem dos cérebros adultos com morfologia bem preservado é fundamental para tais estudos baseadas no cérebro inteiro, mas pode ser tecnicamente desafiadora e demorada. Este protocolo descreve uma abordagem dissecção um passo fácil de aprender, de uma cabeça de mosca adulta em menos de 10 s, ao mesmo tempo manter o cérebro intacto ligado ao resto do corpo para facilitar os passos de processamento subsequentes. O procedimento ajuda a remover a maior parte dos tecidos do olho e da traqueia, normalmente associadas com o cérebro que pode interferir com a imagiologia passo posterior, e também reduz a procura da qualidade do fórceps de dissecação. Além disso, descreve-se um método simples que permite a inversão conveniente das amostras de cérebro montados sobre uma lamela, o que é importante para imagiologia de ambos os lados da bchuvas com intensidade de sinal semelhante e qualidade. Como um exemplo do protocolo, apresentamos uma análise de neurônios dopaminérgicos (DA) em cérebros adultos de WT (w ¹¹¹⁸⁾ voa. A elevada eficácia do método de dissecação torna-o particularmente útil para estudos baseados no cérebro adulto em larga escala em Drosophila.

Introdução

O organismo modelo Drosophila, vulgarmente conhecida como a mosca da fruta, tem sido valorizado por suas ferramentas genéticas elegantes, tempos reprodutivos curtos e altamente conservadas vias moleculares e celulares. A mosca da fruta tem sido empregue com sucesso para dissecar as vias de sinalização de base, os mecanismos de padronização de organismos multicelulares, bem como os mecanismos subjacentes ao desenvolvimento neuronal, funções e doenças ^1,2. Com os recentes avanços em tecnologias de rotulagem de células e de imagem, o cérebro da mosca de fruta tornou-se especialmente poderosa in fine mapeamento dos circuitos neuronais e em dissecar a ....