Mammalian Cell Encapsulation in Alginate Beads Using a Simple Stirred Vessel

Corinne A. Hoesli; Roger L. J. Kiang; Kamini Raghuram; Ren&#233; G. Pedroza; Karen E. Markwick; Antonio M. R. Colantuoni; James M. Piret

doi:10.3791/55280

JoVE Journal > Bioengineering

Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.

Bioengineering

Mammalcellsinkapsling i alginatpärlor med hjälp av ett enkelt omrörat fartyg

Published: June 29, 2017

doi:

10.3791/55280

Corinne A. Hoesli, Roger L. J. Kiang, Kamini Raghuram, René G. Pedroza, Karen E. Markwick, Antonio M. R. Colantuoni, James M. Piret

¹Department of Chemical Engineering,McGill University, ²Michael Smith Laboratories & Department of Chemical and Biological Engineering,University of British Columbia, ³Michael Smith Laboratories & Department of Pharmaceutical Sciences,University of British Columbia

Summary

Denna video och manuskript beskriver en emulsionsbaserad metod för inkapsling av däggdjursceller i 0,5% till 10% alginatpärlor som kan framställas i stora satser med användning av en enkel omrörd kärl. De inkapslade cellerna kan odlas in vitro eller transplanteras för cellterapiapplikationer.

Abstract

Cellinkapsling i alginatpärlor har använts för immobiliserad cellodling in vitro såväl som för immunoisolering in vivo . Inkapsling av bukspottskörtel har studerats i stor utsträckning som ett medel för att öka överlevnad av öl i allogena eller xenogena transplantationer. Alginatinkapsling uppnås vanligen genom munstycksexstrudering och yttre gelning. Med hjälp av denna metod faller cellhaltiga alginatdroppar bildade vid munstyckets spets i en lösning innehållande divalenta katjoner som orsakar jonotrop alginatgelering när de diffunderar i dropparna. Kravet på droppbildning vid munstyckspetsen begränsar den volymetriska genomströmningen och alginatkoncentrationen som kan uppnås. Denna video beskriver en skalbar emulgeringsmetod för inkapsling av däggdjursceller i 0,5% till 10% alginat med 70% till 90% cellöverlevnad. Genom denna alternativa metod emulgeras alginatdroppar innehållande celler och kalciumkarbonat i mineralolja, folSänkt av en minskning av pH vilket leder till inre kalciumfrigöring och jonotrop alginat gelering. Den nuvarande metoden möjliggör framställning av alginatpärlor inom 20 min emulgering. Den utrustning som krävs för inkapslingssteget består av enkla rörda kärl som är tillgängliga för de flesta laboratorier.

Introduction

Däggdjurscellinkapsling har studerats i stor utsträckning som ett medel för att skydda transplanterade celler från immunavstötning ¹ eller för att tillhandahålla ett tredimensionellt stöd för immobiliserad cellodling ² ^, ³ ^, ⁴ . Pankreasöppning i alginatpärlor har använts för att reversera diabetes i allogena ⁵ ^, ⁶ eller xenogena ⁷ ^, ⁸ ^, ⁹ ^, ¹⁰ ^, ¹¹ ^, ¹² gnagare. Prækliniska och kliniska prövningar av inkapslad öltransplantation i pankreatisk öre för att behandla typ 1-diabetes är pågående ¹³ ^, ¹⁴ ^, ¹⁵ . För transplantationsapplikationer eller större skalE- in vitro- immobiliserad cellproduktion används i allmänhet munstycksbaserade pärlgeneratorer. Typiskt pumpas en blandning av alginat och celler genom ett munstycke för att bilda droppar som faller i en omrörd lösning innehållande divalenta katjoner, vilket resulterar i dropparnas yttre gelning. Koaxialgasflödet ¹⁶ ^, ¹⁷ , munstycksvibration ¹⁸ , elektrostatisk avstängning ¹⁹ eller roterande ledningar ²⁰ underlättar droppbildning vid munstyckspetsen.

De huvudsakliga nackdelarna med konventionella pärlgeneratorer är deras begränsade genomströmning och det begränsade intervallet av lösningsviskositeter som kommer att resultera i tillräcklig pärlbildning ²¹ . Vid höga flödeshastigheter bryter vätskan från munstycket upp i droppar som är mindre än munstyckets diameter, minskande storlekskontroll. Multi-nozzle pearl generatorer kan användas för att öka genomströmningen, menDen enhetliga fördelningen av flödet mellan munstyckena och användningen av lösningar> 0.2 Pas är problematisk ²² . Slutligen förväntas alla munstycksbaserade anordningar ge viss skada på holmar, eftersom diametern hos de använda munstyckena är mellan 100 | im och 500 | im, medan ~ 15% av mänskliga holmar kan vara större än 200 | im ²³ .

I denna video beskriver vi en alternativ metod för inkapsling av däggdjursceller genom att bilda droppar i ett enda emulgeringssteg istället för droppe. Eftersom pärlproduktionen utförs i ett enkelt rört kärl, är metoden lämplig för små (~ 1 ml) till storskalig (10 ³ L-serie) pärlproduktion med låga utrustningskostnader ²⁴ . Denna metod möjliggör produktion av pärlor med hög sfäricitet med användning av ett brett spektrum av alginatviskositeter med korta ( t.ex. 20 min) pärlgenereringstider. Denna metod har ursprungligen utvecklats av Poncelet et al. ²⁵ ^, ²⁶ och användes för att immobilisera DNA ²⁷ , proteiner ²⁸ innefattande insulin ²⁹ och bakterier ³⁰ . Vi har nyligen anpassat dessa metoder till inkapslingen av däggdjursceller med användning av pankreatiska beta-cellinjer ³¹ ^, ³² och primär pankreatisk vävnad ³² .

Metoden är att generera en vatten-i-oljemulsion bestående av alginatdroppar i mineralolja, följt av intern gelering av alginatdropparna ( Figur 1 ). Först dispergeras inkapslingsmedlet (t ex celler) i en alginatlösning innehållande ett finkornigt kalciumsalt med låg löslighet vid det ursprungliga process-pH. Alginatblandningen tillsättes därefter till en omrörd organisk fas för att skapa en emulsion, vanligen i närvaro av atensid. I fallet med däggdjurscellinkapsling kan komponenter närvarande i serum fungera som ytaktiva ämnen. Därefter reduceras pH för att solubilisera kalciumsaltet genom att tillsätta en oljelöslig syra som skiljer sig in i vattenfasen. Ättiksyra, med en partikelkoefficient av mineralolja / vatten <0,005 ³³ , bör förupplösas i olja, sedan tillsättas till emulsionen, där den blandas i oljefasen och skiljer sig snabbt i vattenfasen ³⁴ . Figur 2 illustrerar de kemiska reaktionerna och diffusionen som äger rum under försurningen och det inre geleringssteget. Slutligen utvinns de inkapslade cellerna genom fasinversion, fasseparation accelererad genom centrifugering, upprepade tvättsteg och filtrering. Dessa steg kan sedan följas av pärl- och cellprovtagning för kvalitetskontrollanalyser, in vitro- cellodling och / eller transplantation av de inkapslade cellerna.

Figur 1: Schematisk av emulgeringsbaserad process för inkapsling av däggdjursceller. Pärlor framställs först genom att emulgera en alginat-, cell- och CaCO3-blandning i mineralolja (steg 1 och 2 i schematisk), vilket utlöser intern gelning genom tillsats av ättiksyra (steg 3). De gelerade pärlorna separeras sedan från oljan genom tillsats av en vattenhaltig buffert för att trigga fasinversion (steg 4), följt av centrifugering och oljepåvirkning (steg 5) och därefter filtrering (steg 6). Slutligen överförs de pärlor som samlas på filtret till cellodlingsmedium för in vitro- odling eller för transplantation. Vänligen klicka här för att se en större version av denna figur.

<imgAlt = "Figur 2" class = "xfigimg" src = "/ files / ftp_upload / 55280 / 55280fig2.jpg" />
Figur 2: Reaktioner och diffusionssteg som uppstår under intern gelning. (1) ättiksyra sätts till den organiska fasen och transporteras till alginatdropparna genom konvektion. (2) ättiksyra skiljer sig in i vattenfasen. (3) I närvaro av vatten dissocierar och diffunderar syran för att nå CaCO _3- kornen som avbildas i mörkblå. (4) H ⁺ -jonerna utbyts med Ca2 ⁺ joner i CaCO3, vilket frigör Ca2 ⁺ joner. (5) Kalciumjonerna diffunderar tills de möter oreagerat alginat, vilket leder till jonotropa tvärbindningen av alginatkedjorna. Vänligen klicka här för att se en större version av denna figur.

I motsats till konventionella munstycksbaserade cellinkapslare är en bred pärlstorleksfördelning expeCted från denna process på grund av mekanismen för droppbildning i omrörd emulgering. För en delmängd av program kan den här pärlstorleksfördelningen vara problematisk. Till exempel kan en större fraktion av celler exponeras vid vulstytan i mindre pärlor. Om begränsningar av näringsämnen ( t.ex. syre) är ett problem kan dessa begränsningar förvärras i större pärlor. En fördel med det omrörda emulgeringsförfarandet är att medelstrålstorleken lätt kan justeras genom att ändra omröringshastigheten under emulgeringssteget. Den breda pärlstorleksfördelningen kan också utnyttjas för att studera effekten av pärlstorleken på inkapslad cellprestanda.

Däggdjurscellinkapsling genom emulgering och inre gelering är ett intressant alternativ för laboratorier som inte är utrustade med en pärlagenerator. Vidare ger denna metod användarna möjlighet att minska behandlingstiden eller generera pärlor vid mycket låg eller mycket hög alginatkoncentrations.

Protokollet som beskrivs nedan beskriver hur man kapslar celler i 10,5 ml 5% alginatlösning framställd i 10 mM 4- (2-hydroxietyl) -1-piperazinetansulfonsyra (HEPES) buffert. Alginatet består av en 50:50 blandning av LVM (låg viskositet med hög viskositetshalt) och MGG (medelviskositet med hög guluronsyrahalt) alginat. Kalciumkarbonat vid en slutlig koncentration av 24 mM användes som det fysikaliska tvärbindningsmedlet. Lätt mineralolja utgör den organiska fasen, medan ättiksyra används för att surgöra emulsionen och utlösa inre gelering. Emellertid beror alginatypen och -kompositionen, liksom den utvalda processbufferten, på den önskade applikationen ³² . En mängd olika alginattyper (se tabell över material) har använts för att framställa pärlor med detta protokoll.

Protocol

1. Förbered Alginatlösningen, CaCO3-suspensionen och den sura oljan Förbered processen buffert och medium. Förbered den typiska processbufferten som användes för att generera alginatpärlor med hög koncentration med användning av 10 mM HEPES, 170 mM NaCl. Justera pH till 7,4. Förbered det typiska odlingsmediet med användning av Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) innehållande 10% fetalt bovint serum (FBS), 6 mM glutamin, 100 U / ml penicillin och 100 mg /…

Representative Results

Vid slutet av emulgerings-och inre geleringsprocessen bör en kulvolym som liknar den initiala alginat- och cellblandningsvolymen utvinnas. Pärlorna ska vara mycket sfäriska med få defekter ( Figur 3 ). Pärlorna ska vara tillräckligt starka för att motstå pipettering genom storborrpipetter. Vid höga alginatkoncentrationer kan inkapslad olja eller luftdroppar observeras i pärlorna. Detta uppstår troligen på grund av att olja sitter i alginatd…

Discussion

Olika steg (avbildat i figur 2 ) under den inre geleringsreaktionen kan begränsa den totala kinetiken. För kalciumkarbonatkorn större än ~ 2,5 μm har upplösningshastigheten för karbonat visat sig vara begränsningsbegränsande ²⁶ ^, ⁴⁴ . Syrringssteget som leder till inre kalciumfrisättning har också visat sig vara den kritiska processvariabel som påverkar cellöverlevnad ³² . De förhållanden som leder till inr…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Vi tackar Jill Osborne för sitt grundläggningsarbete på emulgeringsprocessen och Lauren Wilkinson för teknisk support. Vi tackar Dr. Igor Laçik, Dr. Timothy J. Kieffer och Dr. James D. Johnson för deras inmatning och samarbete. Vi tackar Diabète Québec, JDRF, ThéCell, Centre québécois sur les matériaux fonctionnels (CQMF), Forskningsrådet för naturvetenskap och teknik (NSERC), Centret för mänsklig isetransplantation och beta-cellregenerering, det kanadensiska stamcellsnätverket, Michael Smith Foundation för hälsoforskning, le Fonds québécois de la recherche sur la nature et les technologies och COST 865 för ekonomiskt stöd.

Materials

Reagents and consumables
LVM alginate (transplantation-grade)	Novamatrix	Non-applicable	Referred to as "alginate #1" in the results.
MVG alginate (transplantation-grade)	Novamatrix	Non-applicable	Referred to as "alginate #2" in the results.
Alginate (cell culture-grade)	Sigma	A0682 (low viscosity) or A2033 (medium viscosity)	A2033 is referred to as "alginate #3" in the results.
DMEM	Life Technologies	11995-065
Fetal bovine serum, characterized, Canadian origin	Thermo Fisher Scientific	SH3039603
Glutamine	Life Technologies	25030
Penicillin and streptomycin	Sigma	P4333-100ML
HEPES, cell culture tested	Sigma	H4034-100G
NaCl	Thermo Fisher Scientific	S271-1
Fine-grain CaCO₃	Avantor Materials	1301-01	After preparing the CaCO₃ suspension, sonicate and use within one month.
Light mineral oil	Thermo Fisher Scientific	O121-4	Sterile filter through a 0.22 μm pore size membrane prior to use.
Glacial acetic acid	Thermo Fisher Scientific	A38-500	Handle with caution: refer to MSDS.
Sterile spatulas	Sigma	CLS3004-100EA
Sterile nylon cell strainers, 40 µm	Thermo Fisher Scientific	08-771-1
Serological pipettes (2 mL, 5 mL, 10 mL, 25 mL)	Sarstedt	86.1252.001, 86.1253.001, 86.1254.001 and 86.1685.001
Pasteur pipettes	VWR	14673-043
Toluidine Blue-O	Sigma	T3260
Equipment
100 mL microcarrier spinner flasks	Bellco	1965-00100	The impeller configuration with recent models may not be suitable for adequate emulsification. A blade able to sweep the oil down to 0.5 cm from the bottom of the flask can be custom-made from a Teflon sheet.
Magnetic stir plate with adjustable speed	Bellco	7760-06005	The rotation speed should be calibrated (e.g. using a tachometer) prior to use.
Cell counter	Innovatis	Cedex AS20	This system is now sold by Roche. This automated cell counter can also be replaced by manual cell enumeration after Trypan blue staining using a hemocytometer.
LED light box	Artograph	LightPad® PRO	This item can be replaced by other types of illuminators.
Handheld camera	Canon	PowerShot A590 IS	A variety of handheld cameras can be used to capture toluidine blue-o stained bead images. A ruler should be placed next to the Petri dish containing the beads prior to acquiring images.
Fluorescence microscope with phase contrast and adequate fluorescence filters	Olympus	IX81	Several microscopy systems were used to image the beads. The results shown here were obtained with an IX81 microscope equipped with GFP and TRITC fluorescence filters. To capture entire beads, 4X to 20X objectives were used depending on the agitation rate. Live/dead staining images were typically captured with 20X to 40X objectives.
Image aquisition software	Molecular Devices	Metamorph	A variety of image acquisition software can be used to acquire phase contrast and fluorescence images.
Image analysis freeware	CellProfiler	Non-applicable	A variety of image analysis software can be used to identify beads as objects and analyze bead size (e.g. ImageJ).

References

Scharp, D. W., Marchetti, P. Encapsulated islets for diabetes therapy: history, current progress, and critical issues requiring solution. Adv Drug Deliv Rev. 67-68, 35-73 (2014).
Chayosumrit, M., Tuch, B., Sidhu, K. Alginate microcapsule for propagation and directed differentiation of hESCs to definitive endoderm. Biomaterials. 31 (3), 505-514 (2010).
Sidhu, K., Kim, J., Chayosumrit, M., Dean, S., Sachdev, P. Alginate microcapsule as a 3D platform for propagation and differentiation of human embryonic stem cells (hESC) to different lineages. J Vis Exp. (61), (2012).
Tostoes, R. M., et al. Perfusion of 3D encapsulated hepatocytes–a synergistic effect enhancing long-term functionality in bioreactors. Biotechnol Bioeng. 108 (1), 41-49 (2011).
Duvivier-Kali, V. F., Omer, A., Parent, R. J., O’Neil, J. J., Weir, G. C. Complete protection of islets against allorejection and autoimmunity by a simple barium-alginate membrane. Diabetes. 50 (8), 1698-1705 (2001).
Omer, A., et al. Long-term normoglycemia in rats receiving transplants with encapsulated islets. Transplantation. 79 (1), 52-58 (2005).
Rayat, G. R., Rajotte, R. V., Ao, Z., Korbutt, G. S. Microencapsulation of neonatal porcine islets: protection from human antibody/complement-mediated cytolysis in vitro and long-term reversal of diabetes in nude mice. Transplantation. 69 (6), 1084-1090 (2000).
Korbutt, G. S., Mallett, A. G., Ao, Z., Flashner, M., Rajotte, R. V. Improved survival of microencapsulated islets during in vitro culture and enhanced metabolic function following transplantation. Diabetologia. 47 (10), 1810-1818 (2004).
Luca, G., et al. Improved function of rat islets upon co-microencapsulation with Sertoli’s cells in alginate/poly-L-ornithine. AAPS PharmSciTech. 2 (3), E15 (2001).
Omer, A., et al. Survival and maturation of microencapsulated porcine neonatal pancreatic cell clusters transplanted into immunocompetent diabetic mice. Diabetes. 52 (1), 69-75 (2003).
Schneider, S., et al. Long-term graft function of adult rat and human islets encapsulated in novel alginate-based microcapsules after transplantation in immunocompetent diabetic mice. Diabetes. 54 (3), 687-693 (2005).
Cui, H., et al. Long-term metabolic control of autoimmune diabetes in spontaneously diabetic nonobese diabetic mice by nonvascularized microencapsulated adult porcine islets. Transplantation. 88 (2), 160-169 (2009).
Krishnan, R., Alexander, M., Robles, L., Foster, C. E., Lakey, J. R. Islet and stem cell encapsulation for clinical transplantation. Rev Diabet Stud. 11 (1), 84-101 (2014).
Robles, L., Storrs, R., Lamb, M., Alexander, M., Lakey, J. R. Current status of islet encapsulation. Cell Transplant. 23 (11), 1321-1348 (2014).
Desai, T., Shea, L. D. Advances in islet encapsulation technologies. Nat Rev Drug Discov. , (2016).
Anilkumar, A. V., Lacik, I., Wang, T. G. A novel reactor for making uniform capsules. Biotechnol Bioeng. 75 (5), 581-589 (2001).
Wolters, G. H., Fritschy, W. M., Gerrits, D., van Schilfgaarde, R. A versatile alginate droplet generator applicable for microencapsulation of pancreatic islets. J Appl Biomater. 3 (4), 281-286 (1991).
Heinzen, C., Marison, I., Berger, A., von Stockar, U. Use of vibration technology for jet break-up for encapsulation of cells, microbes and liquids in monodisperse microcapsules. Practical Aspects of Encapsulation Technologies. , 19-25 (2002).
Poncelet, D., et al. A Parallel plate electrostatic droplet generator: Parameters affecting microbead size. Applied Microbiology and Biotechnology. 42 (2-3), 251-255 (1994).
Prüße, U., Dalluhn, J., Breford, J., Vorlop, K. D. Production of Spherical Beads by JetCutting. Chemical Engineering & Technology. 23 (12), 1105-1110 (2000).
Hoesli, C. A. . Bioprocess development for the cell-based treatment of diabetes (PhD thesis). , (2010).
Brandenberger, H., Widmer, F. A new multinozzle encapsulation/immobilisation system to produce uniform beads of alginate. J Biotechnol. 63 (1), 73-80 (1998).
Merani, S., Toso, C., Emamaullee, J., Shapiro, A. M. Optimal implantation site for pancreatic islet transplantation. Br J Surg. 95 (12), 1449-1461 (2008).
Reis, C. P., Neufeld, R. J., Vilela, S., Ribeiro, A. J., Veiga, F. Review and current status of emulsion/dispersion technology using an internal gelation process for the design of alginate particles. J Microencapsul. 23 (3), 245-257 (2006).
Poncelet, D., et al. Production of alginate beads by emulsification/internal gelation. I. Methodology. Appl Microbiol Biotechnol. 38 (1), 39-45 (1992).
Poncelet, D., et al. Production of alginate beads by emulsification/internal gelation. II. Physicochemistry. Applied Microbiology and Biotechnology. 43 (4), 644-650 (1995).
Alexakis, T., et al. Microencapsulation of DNA within alginate microspheres and crosslinked chitosan membranes for in vivo application. Appl Biochem Biotechnol. 50 (1), 93-106 (1995).
Vandenberg, G. W., De La Noue, J. Evaluation of protein release from chitosan-alginate microcapsules produced using external or internal gelation. J Microencapsul. 18 (4), 433-441 (2001).
Silva, C. M., Ribeiro, A. J., Figueiredo, I. V., Goncalves, A. R., Veiga, F. Alginate microspheres prepared by internal gelation: development and effect on insulin stability. Int J Pharm. 311 (1-2), 1-10 (2006).
Larisch, B. C., Poncelet, D., Champagne, C. P., Neufeld, R. J. Microencapsulation of Lactococcus lactis subsp. cremoris. J Microencapsul. 11 (2), 189-195 (1994).
Hoesli, C. A., et al. Reversal of diabetes by betaTC3 cells encapsulated in alginate beads generated by emulsion and internal gelation. J Biomed Mater Res B Appl Biomater. 100 (4), 1017-1028 (2012).
Hoesli, C. A., et al. Pancreatic cell immobilization in alginate beads produced by emulsion and internal gelation. Biotechnol Bioeng. 108 (2), 424-434 (2011).
Reinsel, M. A., Borkowski, J. J., Sears, J. T. Partition Coefficients for Acetic, Propionic, and Butyric Acids in a Crude Oil/Water System. Journal of Chemical & Engineering Data. 39 (3), 513-516 (1994).
Xiu-Dong, L., Wei-Ting, Y., Jun-Zhang, L., Xiao-Jun, M., Quan, Y. Diffusion of acetic acid across oil/water interface in emulsification-internal gelation process for preparation of alginate gel beads. Chemical Research in Chinese Universities. 23 (5), 579-584 (2007).
Fernandez, S. A., et al. Emulsion-based islet encapsulation: predicting and overcoming islet hypoxia. Bioencapsulation Innovations. (220), 14-15 (2014).
Carpenter, A. E., et al. CellProfiler: image analysis software for identifying and quantifying cell phenotypes. Genome Biol. 7 (10), R100 (2006).
Hinze, J. O. Fundamentals of the hydrodynamic mechanism of splitting in dispersion processes. AIChE Journal. 1 (3), 289-295 (1955).
Kolmogorov, A. N. On the breakage of drops in a turbulent flow (translated from Russian). Doklady Akademii Nauk. 66, 825-828 (1949).
Davies, J. T. Drop Sizes of Emulsions Related to Turbulent Energy-Dissipation Rates. Chemical Engineering Science. 40 (5), 839-842 (1985).
Pacek, A. W., Chamsart, S., Nienow, A. W., Bakker, A. The influence of impeller type on mean drop size and drop size distribution in an agitated vessel. Chemical Engineering Science. 54 (19), 4211-4222 (1999).
Steiner, H., et al. Numerical simulation and experimental study of emulsification in a narrow-gap homogenizer. Chemical Engineering Science. 61 (17), 5841-5855 (2006).
Tcholakova, S., Denkov, N. D., Lips, A. Comparison of solid particles, globular proteins and surfactants as emulsifiers. Phys Chem Chem Phys. 10 (12), 1608-1627 (2008).
Lagisetty, J. S., Das, P. K., Kumar, R., Gandhi, K. S. Breakage of viscous and non-Newtonian drops in stirred dispersions. Chemical Engineering Science. 41 (1), 65-72 (1986).
Draget, K. I., Ostgaard, K., Smidsrod, O. Homogeneous Alginate Gels – a Technical Approach. Carbohydrate Polymers. 14 (2), 159-178 (1990).
Poncelet, D., Dulieu, C., Jacquot, M., Wijffels, R. H. . Immobilized Cells. , 15-30 (2001).
Islam, A. W., Zavvadi, A., Kabadi, V. N. Analysis of Partition Coefficients of Ternary Liquid-Liquid Equilibrium Systems and Finding Consistency Using Uniquac Model. Chemical and Process Engineering-Inzynieria Chemiczna I Procesowa. 33 (2), 243-253 (2012).
Quong, D., Neufeld, R. J., Skjak-Braek, G., Poncelet, D. External versus internal source of calcium during the gelation of alginate beads for DNA encapsulation. Biotechnol Bioeng. 57 (4), 438-446 (1998).
De Vos, P., De Haan, B. J., Van Schilfgaarde, R. Upscaling the production of microencapsulated pancreatic islets. Biomaterials. 18 (16), 1085-1090 (1997).
Gross, J. D., Constantinidis, I., Sambanis, A. Modeling of encapsulated cell systems. J Theor Biol. 244 (3), 500-510 (2007).

Play Video

PDF

DOI

DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite This Article

Hoesli, C. A., Kiang, R. L. J., Raghuram, K., Pedroza, R. G., Markwick, K. E., Colantuoni, A. M. R., Piret, J. M. Mammalian Cell Encapsulation in Alginate Beads Using a Simple Stirred Vessel. J. Vis. Exp. (124), e55280, doi:10.3791/55280 (2017).