Summary
कृन्तकों में आंशिक मूत्राशय निकास रुकावट के पारंपरिक मॉडलिंग पशु मृत्यु दर से भरा है। समीपस्थ मूत्रमार्ग और मूत्राशय गर्दन के चारों ओर विच्छेदन से एक वितंत्रीभवन चोट प्रमुख चिंता का विषय भी है। हम विकसित किया है और एक सुरक्षित और विश्वसनीय मध्य मूत्रमार्ग बाधा मॉडल का मूल्यांकन किया, पारंपरिक मॉडल की कमियों से परहेज।
Abstract
आंशिक मूत्राशय निकास रुकावट (pBOO) एक उच्च व्याप्ति है, महत्वपूर्ण रोगी बोझ, और विशाल स्वास्थ्य देखभाल की लागत का कारण बनता है। pBOO में मूत्राशय remodeling जांच करने के लिए सबसे आम पशु मॉडल महिला समीपस्थ मूत्रमार्ग में आंशिक रुकावट के दौर से गुजर मूषक है। रुकावट और पशु मृत्यु दर की डिग्री में परिवर्तनशीलता समीपस्थ रुकावट के साथ प्रमुख चिंताएं हैं। इसके अलावा, समीपस्थ मूत्रमार्ग और मूत्राशय गर्दन के चारों ओर चीर-फाड़ मूत्राशय इन्नेर्वतिओन को जोखिम में डाल।
हम pBOO के लिए एक तंत्रिका बख्शते मध्य मूत्रमार्ग बाधा (निमो) मॉडल पारंपरिक मॉडल का नुकसान से बचने का विकास किया। हम मूत्रमार्ग सिर्फ जघन सहवर्धन, जो laparotomy के लिए और साथ ही इस क्षेत्र में विच्छेदन के लिए की जरूरत नहीं रही करने के लिए अवर संपर्क किया; भी, धारीदार मूत्रमार्ग दबानेवाला यंत्र अछूता बना रहा। हम महिला Sprague-Dawley चूहों में निमो प्रदर्शन (12 अवरोधों, 6 नकली जानवरों) और साथ ही में महिला C57 / BL6 चूहों (20 रुकावटरों, 18 दिखावा जानवरों)। दो सप्ताह के बाद, हम मूत्राशय समारोह, मूत्राशय बड़े पैमाने पर, और शरीर द्रव्यमान का मूल्यांकन किया।
हम obstructed- या दिखावा संचालित मादा चूहों के बीच में कोई मौत नहीं हुई; के रूप में पारंपरिक समीपस्थ pBOO-विधि के लिए वर्णित है, हम समीपस्थ मूत्रमार्ग के आसपास टांका बंधे और एक अस्थायी रूप से 0.9 मिमी धातु की छड़ रखा। निमो दो सप्ताह के बाद मूत्राशय मास में एक 85% वृद्धि प्रेरित, औसत अवशिष्ट मूत्र की मात्रा, जबकि केवल 0.03 एमएल दिखावा पशुओं में आंशिक रूप से बाधित चूहों में 0.4 एमएल था। चूहों में, हम cannulas कि हम मूत्रमार्ग के साथ रखा जब टांका बांधने के 3 आकारों का परीक्षण किया। हमने पाया है कि एक 27 गेज प्रवेशनी का उपयोग कर 50% पशु मृत्यु दर अधिक हुई; 25 गेज प्रवेशनी रखने में वृद्धि मूत्राशय मास में वांछित प्रतिक्रिया उपज नहीं था; एक 26 गेज प्रवेशनी का उपयोग कम से कम पशु मृत्यु दर (1/8) अभी तक मूत्राशय जन में एक महत्वपूर्ण 2 गुना वृद्धि के साथ अनुकूल परिणाम सामने आए।
Introduction
आंशिक मूत्राशय निकास रुकावट (pBOO) एक उच्च व्याप्ति है और गंभीर मूत्राशय रोग 1 में परिणाम कर सकते हैं; स्पेक्ट्रम ऐसी पीछे मूत्रमार्ग वाल्व या अधोमूत्रमार्गता के रूप में जन्मजात विरूपताओं, सुसाध्य प्रोस्टेटिक हाइपरप्लासिया को प्राप्त कर लिया मूत्रमार्ग बाध्यताओं से अधिक से पर्वतमाला। बाद पुरुषों साठ साल के 30% से अधिक और पुराने 2 को प्रभावित करने वाले। ग्रेट रोगी बोझ और विशाल स्वास्थ्य देखभाल pBOO के साथ जुड़े लागत काफी अनुसंधान प्रयास वृद्धि हुई बहिर्वाह प्रतिरोध 3 के जवाब में अध्ययन कर मूत्राशय remodeling में डाल दिया वारंट। 2006 से 2015 तक, 220 से अधिक PubMed अनुक्रमित लेख मूत्राशय पर pBOO के प्रभाव के विषय में प्रकाशित किए गए थे।
PBOO के लिए पशु मॉडल इस तरह के चूहे 5, खरगोश 6, सुअर 7, और समझौता ज्ञापनों के रूप में कई प्रजातियों 4, में तैयार किया गया है हालांकिई 8, 9, यकीनन सबसे अधिक इस्तेमाल किया पशु मॉडल हालांकि महिला समीपस्थ मूत्रमार्ग के आंशिक रुकावट के दौर से गुजर चूहों कर रहे हैं; मूत्राशय गर्दन के चारों ओर पशुओं के पेट के लिए उपयोग, मूत्राशय के exteriorizing, और विच्छेदन इस पारंपरिक समीपस्थ मूत्रमार्ग बाधा तकनीक के साथ अपरिहार्य हैं। रुकावट और पशु मृत्यु दर की डिग्री में परिवर्तनशीलता हैं केवल इस प्रक्रिया 10, 11 के साथ जुड़े चिंताओं में से कुछ; हम पता चला है कि नकली संचालित पशुओं में, समीपस्थ मूत्रमार्ग के आसपास विच्छेदन शारीरिक परिवर्तन है कि मूत्राशय गर्दन 12 में तंत्रिका तंतुओं के नुकसान के साथ संबंध स्थापित करने के लिए ले जाता है। यह निष्कर्ष इंगित करता है, कि सबसे अधिक इस्तेमाल किया pBOO पशु मॉडल है, जो महिला कृन्तकों में समीपस्थ मूत्रमार्ग तक पहुँचने शामिल है,, मूत्राशय के संबद्ध संरचनात्मक और कार्यात्मक परिवर्तनों के साथ एक वितंत्रीभवन चोट की ओर जाता है को प्रभावित करने वालेदिखावा और बाधित जानवरों। इसलिए, एक वैकल्पिक दृष्टिकोण से परहेज वितंत्रीभवन चोट की जरूरत थी। हमारी प्रयोगशाला विकसित और, एक तंत्रिका-बख्शते मध्य मूत्रमार्ग बाधा (निमो) दृष्टिकोण का मूल्यांकन किया, इस तरह के अंग बड़े पैमाने पर और अवशिष्ट मूत्र में वृद्धि के रूप में मूत्राशय में होने की उम्मीद बाधा जुड़े परिवर्तन उत्प्रेरण में प्रभावी जबकि दिखावा संचालित जानवरों unoperated नियंत्रण जानवरों से पृथक थे । इसके अलावा, धारीदार मूत्रमार्ग दबानेवाला यंत्र अछूता बने रहे के रूप में यह विच्छेदन के स्तर तक समीपस्थ निहित है। इसके अलावा, मूत्राशय मास में रुकावट प्रेरित वृद्धि में परिवर्तनशीलता पारंपरिक समीपस्थ मूत्रमार्ग बाधा में तुलना में कम थी और पशु मृत्यु दर शून्य था।
हम भी सफलतापूर्वक निमो महिला चूहों में बाधित पशुओं में एक 10% से कम मृत्यु दर के साथ, लागू किया, जबकि तारीख को वर्णित चूहों के लिए सभी pBOO मॉडल 50% के आसपास एक मृत्यु दर के साथ जुड़े थे। चूहों में pBOO के संदर्भ में मूत्राशय remodeling अध्ययन applicabil से लाभ होगाट्रांसजेनिक संशोधनों के पूरे स्पेक्ट्रम के ity।
महिला कृन्तकों में मध्य मूत्रमार्ग के आसपास चीर-फाड़ पारंपरिक समीपस्थ बाधा मॉडल में मनाया मूत्राशय में अवांछनीय और तर्क गुमराह संरचनात्मक या कार्यात्मक परिवर्तनों उत्पन्न नहीं करता है। फिर भी, मध्य मूत्रमार्ग स्तर पर एक आंशिक रुकावट उत्प्रेरण अभी भी मूत्राशय अतिवृद्धि को प्रेरित करता है और अवशिष्ट मूत्र वृद्धि हुई है, pBOO के लिए एक पशु मॉडल से अपेक्षा के अनुरूप। महत्वपूर्ण रूप से, चूहों में निमो प्रदर्शन ट्रांसजेनिक विधियों, जो बड़े कृन्तकों में लगभग करने के लिए उपलब्ध नहीं हैं pBOO में मूत्राशय remodeling की जांच खोलता है।
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Protocol
निम्नलिखित प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल संस्था के पशु देखभाल समिति द्वारा अनुमोदित किया गया था।
1. मादा चूहों में निमो
- तैयारी
- एक महिला Sprague-Dawley चूहे चारों ओर 200 ग्राम 3 के तहत% isoflurane संज्ञाहरण वजन रखें, पशु वजन, और दाढ़ी और एक आयोडीन शल्य साफ़ का उपयोग कर prepubic क्षेत्र कीटाणुरहित 3 बार।
- एक हीटिंग पैड, टेप हिंद अंग और पूंछ नीचे पर और एक 20 गेज angiocatheter है, जो भी धीरे नीचे टेप है रपट को रोकने के लिए साथ मूत्राशय कैथीटेराइज़।
- विच्छेदन
- मूत्रमार्ग कुहर की ओर स्पष्ट जघन सहवर्धन से एक 8 मिमी अनुदैर्ध्य त्वचा चीरा प्रदर्शन करने के लिए एक छुरी का प्रयोग करें। दोनों तरफ त्वचा बंद लिफ्ट बाद में घाव बंद की सुविधा के लिए।
- साफ काटना अनुदैर्ध्य ठीक कैंची के साथ फैलाकर stented मूत्रमार्ग की पहचान। ठीक स्वयं को बनाए रखना त्वचा हुक जगह जोखिम को बढ़ाने के लिएमूत्रमार्ग के।
- प्रदर्शन कुछ कोमल अनुदैर्ध्य का उपयोग कर घुमावदार कैंची मूत्रमार्ग के पृष्ठीय मूत्रमार्ग और योनि के बीच विमान विकसित करने के लिए फैल गया। फिर, साफ मूत्रमार्ग के पीछे 4-0 रेशम टांका गुजरती हैं और सर्जन के गाँठ के दोहरे फेंक तैयार करते हैं।
- आंशिक मूत्रमार्ग बाधा
- angiocatheter निकालें, मूत्रमार्ग के लिए एक 0.9 मिमी धातु की छड़ समानांतर रखें और फिर मूत्रमार्ग और धातु की छड़ के आसपास गाँठ कस, ताकि बाद अभी भी आसानी से उसके बाद बाहर स्लाइड।
- 3 और रॉड निकालने से पहले कोमल तनाव का उपयोग कर थ्रो के साथ गाँठ को सुरक्षित करें। कट टांका लंबे बारे में 3 मिमी, या 4 मिमी अगर रुकावट के बाद रिहाई प्रयोग का हिस्सा है समाप्त होता है।
- घाव बंद
- अवशोषित चोटी टांका 4-0 की एक दफन एक सिलाई का उपयोग कर paraurethral ग्रंथियों का अनुमान लगा।
- एक ही अवशोषित Sut का उपयोग कर एक दफन क्षैतिज गद्दा सिलाई के साथ त्वचा को बंद करेंure। नोट: यह एक त्वचा मर्मज्ञ सिलाई के लिए एक से अवशोषित टांका उपयोग करने के लिए अपरंपरागत लगता है, हम इस तरह के घाव में संक्रमण के रूप में जटिलताओं सामना नहीं किया था, और कहा कि टांका हटाने से बचा जा सकता है।
- देखभाल के बाद
- buprenorphine इंजेक्षन 0.1 मिलीग्राम / किग्रा subcutaneously एक वसूली पिंजरे में चूहे रखने से पहले।
- एकल रखे चूहा करने के लिए पहले 24 घंटे के लिए कुछ नरम वसूली आहार प्रदान करते हैं। इस अवधि के बाद, प्रक्रिया पहले की तरह ही जोड़ों में घर जानवरों फिर बशर्ते कि वे अच्छी तरह से कर रहे हैं और एक ही इलाज समूह के हैं।
- मूत्राशय आकार और सामान्य भलाई के लिए दैनिक चूहों की जाँच करें; कम से कम साप्ताहिक अपने वजन रिकॉर्ड है।
2. महिला चूहों में निमो
- तैयारी
- एक महिला C57BL 6 / माउस लगभग 18 ग्राम वजन रखें और कदम 1.1.1 में के रूप में विस्तृत आगे बढ़ें।
- कदम 1.1.2 में के रूप में विस्तृत आगे बढ़ें, एक 24 गेज आंग का उपयोग को छोड़करiocatheter।
- विच्छेदन
- मूत्रमार्ग कुहर की ओर स्पष्ट जघन सहवर्धन से एक 6 मिमी अनुदैर्ध्य त्वचा चीरा प्रदर्शन करने के लिए एक छुरी का प्रयोग करें।
- साफ काटना अनुदैर्ध्य ठीक कैंची के साथ फैलाकर stented मूत्रमार्ग की पहचान। न्यूरो संवहनी बंडल अनुरूप कुंद विच्छेदन से मूत्रमार्ग पर पेट चल बंद लिफ्ट।
- प्रदर्शन कुछ कोमल अनुदैर्ध्य का उपयोग कर घुमावदार कैंची मूत्रमार्ग के पृष्ठीय मूत्रमार्ग और योनि के बीच विमान विकसित करने के लिए फैल गया। फिर, साफ मूत्रमार्ग के पीछे 5-0 गैर अवशोषित चोटी टांका गुजरती हैं और सर्जन के गाँठ के दोहरे फेंक तैयार करते हैं।
- आंशिक मूत्रमार्ग बाधा
- एक 1 एमएल सिरिंज के साथ angiocatheter कनेक्ट और मूत्राशय में सामान्य नमक की 0.1 एमएल इंजेक्षन।
- मूत्रमार्ग के लिए एक 26 गेज प्रवेशनी समानांतर रखें। धीरे मूत्रमार्ग और प्रवेशनी चारों ओर गाँठ कस समय पहले angioca खींचवें।
- 3 और प्रवेशनी हटाने से पहले कोमल तनाव का उपयोग कर थ्रो के साथ गाँठ को सुरक्षित करें।
- जानवर के मूत्राशय पर कोमल दबाव पर कुहर में प्रदर्शित होने के मूत्र के लिए टेस्ट; टाई ढीला अगर मूत्र को व्यक्त करने में असमर्थ है। अन्यथा, काट टांका बारे में 3 म लोंग समाप्त होता है।
- घाव बंद
- 5-0 चोटी अवशोषित टांका का उपयोग कर एक दफन क्षैतिज गद्दा सिलाई के साथ त्वचा को बंद करें।
- देखभाल के बाद
- एक वसूली पिंजरे में माउस रखने से पहले 0.1 मिलीग्राम / किग्रा buprenorphine subcutaneously इंजेक्षन।
- एकल रखे माउस करने के लिए पहले 48 घंटे के लिए कुछ नरम वसूली आहार प्रदान करते हैं। इस अवधि के बाद, प्रक्रिया पहले की तरह ही समूहों में घर जानवरों फिर बशर्ते कि वे अच्छी तरह से कर रहे हैं और एक ही इलाज समूह के हैं।
नोट: प्रक्रिया के बाद एक स्पष्ट distended मूत्राशय 24 घंटे है कि जब संभाला ओवर-द बाधित कर रहे हैं शून्य नहीं है और n के भीतर मर जाएगा के साथ चूहेext 1 - 2 दिन जब तक निरोधक संयुक्ताक्षर को हटाने के लिए संज्ञाहरण के तहत वापस ले लिया। - मूत्राशय आकार और सामान्य भलाई के लिए दैनिक चूहों की जाँच करें; कम से कम साप्ताहिक अपने वजन रिकॉर्ड है।
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Representative Results
तंत्रिका-बख्शते मध्य मूत्रमार्ग मादा चूहों में बाधा (निमो)
मृत्यु-दर
हम अब तक 40 से अधिक मादा चूहों पर एक मध्य मूत्रमार्ग बाधा प्रदर्शन किया और कोई मौत नहीं हुई।
मूत्राशय बड़े पैमाने पर
औसत सापेक्ष मूत्राशय द्रव्यमान (मूत्राशय में शरीर-बड़े पैमाने पर अनुपात) दिखावा संचालित जानवरों में, 0.33% दो सप्ताह प्रक्रिया के बाद था, जबकि बाधित चूहों जो एक 85% वृद्धि (पी = 0.004 में तब्दील 0.60% का मतलब है एक रिश्तेदार मूत्राशय बड़े पैमाने पर किया था ; चित्रा 1)।
अवशिष्ट मूत्र
शाम संचालित चूहों वास्तव में कोई अवशिष्ट मूत्र कि हम aspirate सकता थाअंग फसल के समय में प्रत्यक्ष मूत्राशय पंचर द्वारा मध्य मूत्रमार्ग विपरीत बाधा जानवरों 0.42 एमएल (; चित्रा 2 पी = 0.01) का अवशिष्ट मूत्र की एक विशिष्ट मतलब राशि थी।
तंत्रिका-बख्शते मध्य मूत्रमार्ग महिला चूहों में बाधा (निमो)
मृत्यु-दर
कुल मिलाकर, 18 महिला चूहों एक दिखावा निमो प्रक्रिया से गुजरना पड़ा था, और उनमें से एक की मृत्यु हो गई। आदेश रुकावट के लिए आवश्यक डिग्री जांच करने के लिए हमें cannulas (25 गेज, 26 गेज, और 27 गेज) मूत्रमार्ग के साथ रखा जब टांका बांधने के 3 अलग अलग व्यास का मूल्यांकन किया। 5 चूहों में से कोई भी मृत्यु हो गई जब हम मूत्रमार्ग के साथ एक प्लेसहोल्डर के रूप में एक 25 गेज प्रवेशनी (चित्रा 3) का इस्तेमाल किया। दूसरी ओर, मृत्यु दर काफी छोटे आकार प्लेसहोल्डर के साथ वृद्धि हुई है। 1/8 या 5/8 चूहों मृत्यु हो गई जब एक 26 गेज या 27 का उपयोग करते हुए-gauge प्रवेशनी क्रमश: (पी = 0.039, फिशर सटीक परीक्षण)।
मूत्राशय बड़े पैमाने पर
एक 25 गेज प्रवेशनी का उपयोग कर प्रभावी ढंग से शरीर द्रव्यमान अनुपात को मूत्राशय में वृद्धि नहीं था महिला चूहों में निमो (चित्रा 4)। एक 26 गेज प्रवेशनी के उपयोग के सापेक्ष मूत्राशय द्रव्यमान (पी = 0.04) में एक से अधिक 2 गुना वृद्धि हुई। रिश्तेदार मूत्राशय मास में एक 60% से अधिक वृद्धि हुई है हम एक 27 गेज प्लेसहोल्डर लागू किए जाने पर 2 सप्ताह (पी = 0.004) के बाद हुई।
अवशिष्ट मूत्र
चूहों की तरह, महिला चूहों संज्ञाहरण के शामिल होने पर शून्य होते हैं। जब मूत्राशय कटाई, हम संदंश के साथ मूत्राशय गर्दन occluded और मूत्र के साथ और मूत्र draining के बाद मूत्राशय तौला, इस पर अवशिष्ट मूत्र की सटीक गणना के लिए अनुमति दी मूत्राशय फसल। PBOO एक 25 गेज या मूत्रमार्ग के साथ एक 26 गेज प्रवेशनी 2 सप्ताह (चित्रा 5) के भीतर अवशिष्ट मूत्र में बदलाव में परिणाम नहीं था रखने। विशेष रूप से, केवल बहुत कम जानवरों संज्ञाहरण की प्रेरण, जो चूहों कि जब प्रेरित लगभग सभी शून्य के विपरीत है के दौरान अमान्य कर। एक 27 गेज प्रवेशनी का उपयोग कर निमो जीवित 3 चूहों में मतलब अवशिष्ट मूत्र की मात्रा संबंधित शेमस की तुलना में 3 गुना की वृद्धि की गयी। हालांकि, अंतर सांख्यिकीय महत्व, कम n के कारण हुई प्राप्त नहीं किया है।
चित्र 1 निमो प्रभावी ढंग से 2 सप्ताह के बाद मूत्राशय मास में वृद्धि लाती है। निमो 2 सप्ताह (; § पी = 0.004) के भीतर मूत्राशय में शरीर-बड़े पैमाने पर अनुपात में एक 85% वृद्धि हुई है।
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चित्र 2 सप्ताह निमो के बाद अवशिष्ट मूत्र में 2. उल्लेखनीय वृद्धि। जबकि दिखावा संचालित चूहों वास्तव में कोई अवशिष्ट मूत्र कि सुई aspirated मूत्राशय फसल के समय में हो सकता था, मध्य मूत्रमार्ग बाधा जानवरों पर औसत अवशिष्ट मूत्र की लगभग 0.4 एमएल था (पी = 0.013; §)।
चित्रा 3. आंशिक रुकावट की डिग्री के साथ मृत्यु दर वृद्धि। 18 चूहों में से एक दिखावा निमो प्रक्रिया के बाद निधन हो गया। मूत्रमार्ग के साथ एक प्लेसहोल्डर के रूप में एक 25 गेज प्रवेशनी का उपयोग करते समय सभी 5 संचालित चूहों, बच गया जब एक 26 गेज या 27 गेज प्रवेशनी (पी = 0.039, फिशर सटीक का उपयोग कर, क्रमशः, जबकि 1/8 या 5/8 चूहों की मृत्यु हो गई परीक्षण)।
<strong> चित्रा 4. 2 सप्ताह के बाद सापेक्ष मूत्राशय मास में प्रभावी वृद्धि में निमो परिणाम के दौरान 26 गेज और 27 गेज प्लेसहोल्डर। एक 25 गेज प्रवेशनी का उपयोग कर महिला चूहों में निमो रिश्तेदार मूत्राशय द्रव्यमान (§) में एक उल्लेखनीय वृद्धि में परिणाम नहीं था; जब एक 26 गेज प्रवेशनी इस्तेमाल किया गया था, रिश्तेदार मूत्राशय मास में एक से अधिक 2 गुना वृद्धि हुई (पी = 0.04; †); एक 27 गेज प्लेस होल्डर से अवरोधों रिश्तेदार मूत्राशय मास में एक 60% से अधिक वृद्धि हुई (पी = 0.004; ‡)।
चित्रा 5. निमो के बाद 2 सप्ताह को खाली करने से मूत्राशय अनुरक्षित। एक 25 गेज या निमो प्रक्रिया के दौरान मूत्रमार्ग के साथ एक 26 गेज प्रवेशनी का उपयोग करते हुए 2 सप्ताह (§) के बाद अवशिष्ट मूत्र में बदलाव में परिणाम नहीं था। मतलब अवशिष्ट उर में 3 गुना वृद्धिशेमस सांख्यिकीय महत्व पर नही पंहुचे की तुलना में 27 गेज समूह में ऑफ़लाइन मात्रा (बाधित n = 3; †)।
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Discussion
पशु मृत्यु दर कई रिपोर्ट 10, 11, 13 में समीपस्थ मूत्रमार्ग में pBOO के पारंपरिक मॉडल की प्रमुख चिंताओं, 15% या उससे अधिक में से एक है। निमो जब मादा चूहों में लागू न्यूनतम मृत्यु दर अधिक है प्रतीत होता है। चूहों में समीपस्थ मूत्रमार्ग बाधा तकनीकी रूप से और अधिक चुनौतीपूर्ण चूहों में से है और इस तरह और भी अधिक जटिलताओं का खतरा है। हमारे मध्य मूत्रमार्ग दृष्टिकोण के लिए एक प्लेसहोल्डर के रूप में एक 26 गेज प्रवेशनी का उपयोग करना, हम केवल न्यूनतम पशु मृत्यु दर थी। चल रहे एक अध्ययन जहां हम एक 26 गेज प्रवेशनी केवल 18 में से 2 चूहों के ऊपर-बाधित कर रहे थे का उपयोग कर महिला चूहों में निमो लागू किया में (डेटा नहीं दिखाया गया है)। इस तरह बाधित चूहों के आधे से अधिक एक 27 गेज प्रवेशनी के रूप में एक छोटे प्लेसहोल्डर का उपयोग मूत्र प्रतिधारण या मूत्राशय टूटना साथ अति-अवरोध के कारण निधन हो गया। इसलिए, हम पर विचार एक 26 गेज प्लेसहोल्डर के बारे में 18 ग्राम की महिला चूहों के लिए एक उचित क्षमता होने के लिए।
मूत्राशय जन में वृद्धि मानव रोग में pBOO की पहचान में से एक है। निमो हम पहचान प्रभावी रूप से चूहों में और साथ ही चूहों में केवल 2 सप्ताह के बाद मूत्राशय जन में एक उल्लेखनीय वृद्धि प्रेरित करती थीं। समीपस्थ मूत्रमार्ग में pBOO के बाद मूत्राशय मास में औसत वृद्धि से अधिक 2 सप्ताह है और इसलिए हम निमो 12 के बाद क्या मनाया तुलना में बहुत अधिक के बाद 2.5 गुना है। इस तरह के अंग मास में एक अत्यधिक वृद्धि तथापि infravesical प्रतिरोधी uropathies जो शोधकर्ताओं जब pBOO लागू करने मॉडल करने के लिए उद्देश्य के बहुमत को प्रतिबिंबित नहीं करता; इस संबंध में, निमो एक और अधिक उदार remodeling-प्रतिक्रिया है कि ज्यादा परंपरागत समीपस्थ pBOO की तुलना में मानव विकृति के करीब है के साथ एक कम आक्रामक और अच्छी तरह सहन pBOO मॉडल प्रदान करता है। समीपस्थ pBOO में मूत्राशय मास में और अधिक स्पष्ट वृद्धि सबसे अधिक संभावना एक वितंत्रीभवन चोट मूत्राशय गर्दन के चारों ओर विच्छेदन से उत्पन्न से संबंधित है; वितंत्रीभवन तो ख़तरे में डालना सकता है निस्सारिका-दबानेवाला यंत्र crosstalk एकnd दिखावा संचालित जानवरों 12 में भी एक कार्यात्मक निकास रुकावट का कारण है।
अवशिष्ट मूत्र भी काफी केवल 2 सप्ताह के बाद निमो के दौर से गुजर मादा चूहों में वृद्धि की गई थी। दूसरी ओर चूहों में केवल 27 गेज प्रवेशनी का उपयोग कर के रूप में एक प्लेसहोल्डर चूहों में अवशिष्ट मूत्र की मात्रा में वृद्धि करने के लिए जाती थी। हालांकि, चूहों लगभग सभी शून्य, जबकि जब गैसीय संज्ञाहरण के तहत रखा गया है, हम इस चूहों जहां केवल बहुत कम voided जब प्रेरित में निरीक्षण नहीं किया। चूहों के इस गैर voiding व्यवहार शायद अवशिष्ट मूत्र की सच्ची राशि मास्क और भविष्य के अध्ययनों में बारंबार पेशाब करने की इच्छा उत्पन्न करने के लिए एक और प्रोत्साहन आवश्यकता होती है।
मादा चूहों में मूत्रमार्ग के साथ एक 0.9 मिमी रॉड का उपयोग कर बाधा की डिग्री उपयुक्त होने के लिए,, मूत्राशय बड़े पैमाने पर और अवशिष्ट मूत्र में एक स्पष्ट वृद्धि के साथ कम से कम पशु मृत्यु दर के संयोजन महिला चूहों में निमो के लिए बाधा की डिग्री को कैलिब्रेट करना लगता है और अधिक हैचुनौतीपूर्ण। एक तरफ, एक 25 गेज प्रवेशनी का उपयोग कर मूत्राशय मास में एक detectable वृद्धि हो नहीं था, दूसरे हाथ पर 27 गेज प्रवेशनी का उपयोग कर चूहों pBOO के दौर से गुजर के आधे से अधिक से अधिक मौजूद बाधा के परिणामस्वरूप। केवल 26 गेज प्रवेशनी एक कम पशु मृत्यु दर के साथ-साथ अंग विकास के मामले में एक उचित प्रतिक्रिया थी।
चूंकि pBOO महिलाओं की तुलना में पुरुषों में स्पष्ट रूप से अधिक प्रचलित है, पुरुष पशुओं का उपयोग बेहतर है जब मानव pBOO मॉडलिंग होगा। हमारे तंत्रिका मध्य मूत्रमार्ग बाधा (निमो) तकनीक बख्शते स्पष्ट रूप से पशुओं के हार्मोन सूजन की प्रतिक्रिया है कि ऊतक remodeling शुरू की को प्रभावित स्थिति को स्वीकार करने की इस कमी को संबोधित नहीं करता। कम परिवर्तनशीलता और चूहों में निमो की कम पशु मृत्यु दर, हालांकि, मूत्राशय की जांच ट्रांसजेनिक विधियों, जो बहुत बड़ा कृन्तकों में सीमित हैं के पूरे स्पेक्ट्रम के लिए उत्तरदायी remodeling कर देगा।
सारांश में, मादा चूहों और महिला चूहों के लिए निमो हैऐसा करने के लिए आसान है, एक कम पशु मृत्यु दर है, और मूत्राशय मूत्राशय गर्दन के चारों ओर विच्छेदन से उत्पन्न करने के लिए वितंत्रीभवन चोट से बचा जाता है।
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Materials
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Female rat | Charles-River Canada | Sprague Dawley Rat (Crl:SD); Strain Code: 400 | about 200 g |
Isoflorane vaporizer | Benson medical industries inc. | TEC III Isoflurane; product code: 53-T3ISO | |
Isoflorane | Fresenius Kabi Animal Health | Isoflorane; product code CP0406V2 | 250 mL bottle |
Disposable scalpel | Ted Pella, Inc. | #15 Sterile, Stainless Steel Scalpels; catalogue number 549-9-15S | |
Microscopy forceps | Ted Pella, Inc. | Aesculap Microscopy Forceps, Finepoint, 115mm; product number 5443 | |
Adson forceps | Ted Pella, Inc. | Aesculap Adson Dissection Forceps, Curved, 120mm; product number 5002-9 | |
Curved surgical scissors | Ted Pella, Inc. | Surgical Scissors, Curved, S/S, 105mm; catalogue number 1376 | |
0.9 mm inox metal rod | goodfellow.com | Stainless Steel - AISI 316L Wire Diameter:0.9mm; order code 911-684-65 | |
Skin hooks - self made from inox steel | goodfellow.com | Stainless Steel - AISI 316L Wire Diameter:0.9mm; order code 911-684-65 | |
4-0 Silk suture | esutures.com | 4-0 Sofsilk black 98" strand; product number LS640 | |
5-0 Vicry suture | esutures.com | 5-0 Vicryl undyed 27" RB-1 taper; product number J213H | |
Needle holder | Medsupplier.com | Integra Miltex Carb-N-Sert Baumgartner Needle Holder - 5 1/2"; product code SKU NEE4484-8-40TC SKU NEE4484-8-40TC SKU NEE4484-8-40TC |
|
Temgesic (Buprenorphine) | first veterinary supply | Buprenex 0.3MG/ml inj amps; item #075701 | |
1 mL syringe with 27 G needle | Fisher Scientific | BD Tuberculin Syringe, BD 309623 | |
20 G Angiocath | Fisher Scientific | Andwin Scientific ANGIOCATH 20 GA; Catalog No. NC9561906 | |
Recovery diet | clearh2o | DietGel 31M; 72-08-5022 | |
C57Bl/6 female mice | Charles-River Canada | C57BL/6 Mouse (C57BL/6NCrI); Strain Code: 027 | about 18 g |
24 G angiocath | Fisher Scientific | Hanna Pharmaceutical Supply Co., Inc. IV CATH ANGIOCATH 24GX3/4IN; Catalog No. NC9814340 | |
5-0 Ethibond | esutures.com | 5-0 Ethibond green 30" RB-1 taper; product number X550H | |
26 G syringe needle | Sigma-Aldrich | BD Precisionglide syringe needle, Gauge 26; z192392 | |
Normal Saline | Baxter | 0.9% Sodium Chloride Injection, USP, 100 mL MINI-BAG; product code 2B0043 |
References
- Andersson, K. E. Storage and voiding symptoms: pathophysiologic aspects. Urology. 62 (5), 3-10 (2003).
- Boyle, P., et al. The prevalence of lower urinary tract symptoms in men and women in four centres. The UrEpik study. BJU Int. 92 (4), 409-414 (2003).
- Coyne, K. S., Wein, A., Nicholson, S., Kvasz, M., Chen, C. I., Milsom, I. Economic burden of urgency urinary incontinence in the United States: a systematic review. J Manag Care Pharm. 20 (2), 130-140 (2014).
- Buttyan, R., Chen, M. W., Levin, R. M. Animal models of bladder outlet obstruction and molecular insights into the basis for the development of bladder dysfunction. Eur. Urol. 32 (Suppl 1), 32-39 (1997).
- Mattiasson, A., Uvelius, B. Changes in contractile properties in hypertrophic rat urinary bladder. J Urol. 128 (6), 1340-1342 (1982).
- Chang, S., et al. Alteration of the PKC-mediated signaling pathway for smooth muscle contraction in obstruction-induced hypertrophy of the urinary bladder. Lab Invest. 89 (7), 823-832 (2009).
- Moore, J. A., Brading, A. F. A porcine model of bladder outlet obstruction incorporating radio-telemetered cystometry. BJU Int. 100 (5), 1192-1193 (2007).
- Beamon, C. R., Mazar, C., Salkini, M. W., Phull, H. S., Comiter, C. V. The effect of sildenafil citrate on bladder outlet obstruction: a mouse model. BJU Inte. 104 (2), 252-256 (2009).
- Pandita, R. K., Fujiwara, M., Alm, P., Andersson, K. E. Cystometric evaluation of bladder function in non-anesthetized mice with and without bladder outlet obstruction. J Urol. 164 (4), 1385-1389 (2000).
- Kang, Y. J., et al. Early Sequential Changes in Bladder Function after Partial Bladder Outlet Obstruction in Awake Sprague-Dawley Rats: Focus on the Decompensated Bladder. Korean J Urol. 52 (12), 835-837 (2011).
- Schroeder, A., et al. Protective effect of an oral endothelin converting enzyme inhibitor on rat detrusor function after outlet obstruction. J Urol. 172 (3), 1171-1174 (2004).
- Sidler, M., Aitken, K., Jiang, J., Bijos, D., Bägli, D. "sometimes a sham is just a sham" - why the rodent model of partial bladder outlet obstruction needs adjustment. J Urol. 195 (4), e379 (2016).
- Jin, L. H., et al. Persistent detrusor overactivity in rats after relief of partial urethral obstruction. Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 301 (4), R896-R904 (2011).