Summary
مينيملي انقباض الشريان الأورطي عرضية (MTAC) تحافظ على أساسيات انقباض الشريان الأورطي عرضية منتظم (TAC) في حين القضاء على استخدام جهاز التنفس الصناعي مع التنبيب الرغامي. وهذا يثبت أن هناك طريقة مرغوب فيه للغاية للدراسات الإنتاجية العالية على اليسار الزائد البطين، ولا سيما في دراسات الترجمة.
Abstract
مينيملي انقباض الشريان الأورطي عرضية (MTAC) هو أسلوب أكثر من المرغوب فيه للانقباض الشريان الأورطي عرضية في الفئران من المعايير الصدر مفتوحة انقباض الشريان الأورطي عرضية (TAC). على الرغم من انقباض الشريان الأورطي عرضية هي طريقة وظيفية للغاية للتحريض ارتفاع الضغط في البطين الأيسر، وهو إجراء أكثر صعوبة وطويلة بسبب استخدامه التنفس الصناعي مع التنبيب الرغامي. معاهدة الصداقة والتعاون في كثير من الأحيان أيضا أقل النجاة منه، كما أن طريقة أحدث وMTAC، لا يتطلب قطع الأضلاع والعضلات بين الضلوع ولا التنبيب الرغامي مع إعداد التهوية. في MTAC، في مقابل بضع الصدر للوصول إلى تجويف الصدر، يتم الوصول إلى قوس الأبهر من خلال شق خط الوسط في الرقبة الأمامية. يتم سحبها الغدة الدرقية يعود للكشف عن الشق القصية. يتم قطع القص بعد ذلك وصولا الى مستوى الضلع الثاني، ويتم الوصول إلى قوس الأبهر ببساطة عن طريق فصل الأنسجة الضامة والغدة الصعترية. من عندهناك، يمكن أن تكون ملفوفة خياطة حول القوس، وتعادل مع فاصل، ثم قطع القصية والجلد يمكن أن تكون مغلقة. MTAC هو أسرع بكثير وأقل الغازية طريقة للحث الأيسر ارتفاع ضغط الدم في البطين ويتيح إمكانية للدراسات الإنتاجية العالية. نجاح انقباض يمكن التحقق باستخدام عالية التردد تخطيط صدى القلب عبر الصدر، وخاصة دوبلر لون وموجة نابض دوبلر، لتحديد سرعات تدفق قوس الأبهر واليسار والشرايين السباتية الحق، والبعد من الأوعية الدموية، و وظيفة البطين الأيسر والتشكل. وهناك انقباض ناجحة تؤدي أيضا التغيرات التشريحية المرضية الهامة، مثل القلب وتضخم الخلايا العضلية يعانون من التليف الخلالي وماحول الأوعية. هنا، يتم وصف هذا الإجراء من MTAC، مما يدل على مدى التغييرات تدفق مما أدى إلى الشرايين السباتية يمكن دراستها مع تخطيط صدى القلب، مورفولوجيا الإجمالي، والتغيرات التشريحية المرضية في القلب.
Introduction
الهدف العام من هذه المقالة هو لشرح كيفية عرضية انقباض الشريان الأبهر (TAC) في الفئران يمكن تعديلها لإنتاج جراحة أبسط وأكثر سرعة. وقدم TAC لأول مرة في عام 1991 (1) وتمكين علماء الأحياء الجزيئية لدراسة مسارات الخلوية والجزيئية التي تؤدي إلى تضخم في البطين الأيسر وفشل القلب، ولا سيما في الحيوانات الصغيرة مع الجينوم التلاعب 2، 3، 4، 5، 6. وعلى الرغم من فعاليته في إنتاج الزائد الضغط المطلوب، وتقنية محدودة في نهاية المطاف من قبل صعوبة في تنفيذ الإجراء ومعدل البقاء على قيد الحياة المنخفض. وقال جراح إجراء TAC يجب أن تكون قادرة على أداء التنبيب الرغامي، بضع الصدر، واستخدام التهوية الاصطناعية من أجل منع انهيار الرئة 1.
محتوى "> كثير من الأحيان، هو المطلوب طريقة بسيطة وأقل الغازية. ونتيجة لذلك، استنبط مينيملي انقباض الشريان الأورطي عرضية (MTAC) 3. على الرغم من أن نتائج (على وجه التحديد، البطين الأيسر تضخم) هو نفسه، الإجراء ينطوي أقل بكثير الأجهزة وأقل ضررا للحيوان. يثبت MTAC لتكون وسيلة من المرغوب فيه أن يبلغ معدل البقاء على قيد الحياة أكبر، أكثر من 90٪، ولديه وقت تشغيل فقط 15 إلى 25 دقيقة، وهي حالات نادرة من الموت بعد جراحة ناجحة يمكن أن يعزى إلى غاية انقباض -tight من قوس الأبهر، مما أدى إلى هائلا الزائد البطين الأيسر والحد قاتلة من تدفق الدم إلى الأعضاء الحيوية مثل الكلى.بعد الانتهاء من إجراءات، وضربات القلب يمكن استخدامها لتقييم مدى نجاح النطاقات والتشكل القلب وظيفة. ويمكن استخدام نظام الموجات فوق الصوتية عالية التردد لقياس قطر وتدفق التغييرات في اليسار واليمينالسباتي الشرايين، لتصور انقباض قوس الأبهر لقياس سرعة تدفق الذروة، وتحديد الأيسر سمك البطين الجدار والمعلمات الوظيفية 7 و 8. بعد القتل الرحيم، يمكن للأجهزة أيضا أن يتم جمعها لدراسة الأنسجة مع الهيماتوكسيلين وتلطيخ يوزين وPicrosirius الكولاجين تلطيخ، وهذا الأخير هو مفيدة بشكل خاص لمراقبة التليف.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
يتبع بروتوكول للمبادئ التوجيهية للجنة بشأن استخدام الحيوانات الحية في التدريس والبحث (CULATR) في جامعة هونغ كونغ.
1. عملية إعداد الموقع
- تطهير موقع العملية مع 75٪ ايزوبروبيل. ضبط درجة الحرارة سادة التدفئة إلى 37 درجة مئوية لتفادي تغيرات في القلب ومعدلات التنفس الحيوان الموضوع.
- استخدام الأدوات الجراحية المعقمة في معقم خطورة التشرد في درجة حرارة 121 مئوية لمدة 30 دقيقة أو عن طريق وسائل أخرى مناسبة.
- خذ 2-4 إبر عيار 30 ومنحنى لهم مع حامل إبرة، كما رأينا في الشكل 1، لجعل أداة للربط والنسيج العازل ولاستخدامها بوصفها ضام. جبل الإبرة الآن منحني على قضيب من القطن لاستخدامها في الجراحة.
- كليلة إبرة 27 عيار ومنحنى ذلك 90º مع حامل الإبرة. تمهيد طرف عن طريق فرك سطح صلب لجعل فاصل 0.4 ملم في خطوة ربط.
الحمار = "jove_title"> 2. تحضير الحيوانات
- تخدير العمر 2-أشهر، ذكر، 22-25 ز C57BL / 6N الماوس مع الكيتامين المناسب وخليط زيلازين فيما يتعلق وزن الجسم: 100 ملغ / كغ + 10 ملغ / كغ الملكية الفكرية تأكيد التخدير مع قرصة رد الفعل السلبي الذيل .
- إزالة الشعر على الرقبة الأمامية والصدر مع الطلب 2- 3 دقائق من كريم مزيل الشعر. إزالة كريم مع الماء الدافئ وقضيب من القطن.
- تطبيق مرهم أو هلام للعيون الحيوان لمنع جفاف القرنية.
- وضع الحيوان على وسادة التدفئة في موقف ضعيف، وإجراء الرصد داخل المنطوق، ويجري التأكد من الحفاظ على الوثائق المناسبة في كل فترة 15 دقيقة.
- استخدام ورقة الشريط الجراحية لتأمين أطرافه إلى لوحة التدفئة من اجل الحفاظ على الحيوان في الموضع الصحيح أثناء الجراحة.
- تطهير الجلد بالتناوب مع الكحول وبوفيدون اليود حل ثلاث مرات.
- استخدام معقم الدكتورقرد مع حقل العملية معرضة لمنع التلوث. استخدام قفازات معقمة جديدة لكل الماوس وعند الضرورة.
3. إجراء من ربط
- فتح الجلد من الفأرة في موقف خط الوسط في الرقبة والصدر مع مشرط.
- سحب الغدة الدرقية نحو الرأس عن طريق فصل بلطف الأنسجة الضامة مع مقص حادة.
- فصل طبقة العضلات على القصبة الهوائية في خط الوسط نحو كلا الجانبين مع الإبر المنحنية.
- باستخدام مقص حادة، وقطع القص إلى الضلع الثاني (حوالي 5 ملم). فتح قطع مع ضام أو ملقط منحنية.
- فصل فصوص الغدة الصعترية عن بعضها البعض وانخفاض جدار الصدر عن طريق فصل النسيج الضام مع إبرة منحنية. سوف قوس الأبهر عرضية واثنين من الشرايين السباتية تكون مرئية بشكل واضح في هذه النقطة.
- وضع إبرة منحنية تحت القوس وخرم بين جدار الوعاء الدموي والنسيج الضام على الجانب الآخر من صديدهينج رئيس المنحني خارج.
- باستخدام إبرة مقوسة، وسحب الخيط 6-0 حيدة تحت قوس الأبهر.
- وضع فاصل في حلقة وإصلاح خياطة في مكان مع مزدوجة عقدة. إزالة هل بلطف.
- تأكيد انقباض ناجحا مع الموقف عقدة وقطع طرفي الخيط.
- إغلاق جدار الصدر باستخدام 6/0 خياطة الحرير مع نمط خياطة توقف بسيط. إغلاق الجلد مع خياطة 6/0 حيدة في نمط خياطة المستمر.
العناية 4. بعد العملية
- تطبيق حل بوفيدون اليود إلى الموقع خياطة ووضع الحيوانات في قفص قبل تحسنت لاسترداد ومراقبة ما بعد الجراحة.
- حقن البوبرينورفين (0،05 حتي 0،1 ملغ / كغ الشوري كل ساعة 12) بعد هذا الحيوان قد استعاد وعيه لتخفيف الألم وتوفير الفأر مع المواد الغذائية لينة المناسب.
- عودة الحيوان إلى ضوء 12 ساعة / غرفة دورة الظلام بعد الشفاء التام.
5.تخطيط صدى القلب: تأكيد عملية ربط الناجح والمقاييس
- بعد أسبوع واحد، تخدير الماوس النطاقات سابقا مع 3-5٪ الأيزوفلورين، لتحريض، و1-1،5٪، لصيانة، مع / دقيقة معدل تدفق الأوكسجين 1 لتر.
- إزالة شعر الصدر باستخدام كريم مزيل الشعر. تماما إزالة كريم مع الماء الدافئ وقضيب من القطن.
- تأمين الماوس في موقف ضعيف إلى منصة التعامل مع الحيوان، حافظت على 37 درجة مئوية. تطبيق هلام الكهربائي إلى الكفوف والشريط لهم إلى لوحة مع الأقطاب الكهربائية.
- تطبيق هلام الموجات فوق الصوتية في الصدر الماوس. مع تحقيق 40 ميغاهرتز MS550D ونظام الموجات فوق الصوتية عالية التردد، وأداء دوبلر لون وموجة نابض دوبلر المسح على اليسار والشرايين السباتية الصحيحة، فضلا عن قوس الأبهر.
- باستخدام B-الوضع، حدد موقع البطين الأيسر. باستخدام M-الوضع، وضغط الدم الانقباضي والانبساطي سمك الجدار يمكن قياسها. استخدام سينمائية مخزن والإطار مخزن لحفظ البيانات والصور على النحو المطلوب.
- Uالغناء B-الوضع، حدد موقع الأيسر الشريان السباتي المشترك قبل نقطة التفرع. استخدام نابض الموجة ودوبلر لون لتقييم التدفق. كرر مع الحق في الشريان السباتي عند نقطة مماثلة. حفظ الصور في السينما مخزن والإطار تخزين وسائط للتحليل في وقت لاحق.
- إمالة منصة التعامل مع الحيوان إلى اليسار حتى الآن على أن الفأر هو في موقف استلقاء الأيسر. وضع مسبار على الماوس، 30 ° تعويض من موقف مواز في الرأس في موضع القص، والتلاعب X و Y للعثور على قوس الأبهر.
- تحديد موقع انقباض. استخدام وضع دوبلر اللون لجعل الموقع من انقباض أكثر وضوحا، والدم سوف تتدفق من خلال قناة ضيقة بين نقطة حيث اثنين من الشرايين السباتية تتفرع من قوس الأبهر.
- استخدام نابض الموجة ودوبلر لون لقياس سرعة تدفق الذروة. استخدام سينمائية مخزن والإطار مخزن لحفظ البيانات والصور على النحو المطلوب.
- السماح للحيوان للتعافي على وسادة التدفئة في وضعية الانبطاح.عودة الحيوان إلى القفص الأصلي في 12 ساعة ضوء / غرفة دورة الظلام بعد أن تعافى تماما من التخدير.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
MTAC تمكن تحريض ارتفاع ضغط الدم كبير في البطين الأيسر في الوقت المناسب.
كما رأينا في الشكل 1، وإعداد الأدوات الأساسية لهذا الإجراء هو بسيط وضئيل، لا تتطلب سوى 2-4 إبر عيار 30 إلى أن تكون عازمة والذي عقد في مكان مع أنبوب البولي يوريثين. العملية الجراحية في حد ذاته هو أيضا أقل تعقيدا، بالمقارنة مع معاهدة الصداقة والتعاون، ويمكن القيام بها بسهولة. وبمجرد تراجع الغدة الدرقية، وقطع القص ويتم نقل الغدة الصعترية لتوضيح الرؤية. قوس الأبهر هو تحديد مواقعها بسهولة لعملية ربط (الشكل 2).
MTAC تنتج موثوق البطين الأيسر الزائد الضغط في الفئران ligated. يوضح الشكل (3) هذا واضح، وذلك الشريان الأورطي عرضية ضيقة ويمكن ملاحظة بشكل واضح في الشكل 3C، كما ثخبرني عن زيادة سرعة تدفق الذروة من خلال الموقع انقباض في 3D. هذا ويمكن مقارنة مع الماوس الشام التي تديرها، وينظر في الشكل 3A و 3B، الذي يسلك أي انقباض مع عادية سرعة تدفق الذروة. ونتيجة لذلك من ربط رأينا في الشكل 4C، يتم زيادة سرعة تدفق كبير في حق الشريان السباتي، وضغط يمكن أن تتراكم الأبهر الصاعد وفي قلب لإنتاج تضخم البطين الأيسر. ومع ذلك، ونتيجة لانقباض المنبع، يتم تقليل سرعة تدفق كبير في الشريان السباتي الأيسر المشترك، كما في الشكل 4D. من ناحية أخرى، لوحظ السباتية تدفق الدم في الشريان شبه متطابقة في الماوس الشام التي تديرها، كما في الشكل 4A (الشريان السباتي الأيمن) و4B (يسار الشريان السباتي).
المعلمة مما أدى المتعلقة تضخملوحظ الصورة ومنحنى البقاء على قيد الحياة بسهولة في الشكل (5)، والذي قلب الفأرة ligated MTAC-يمكن ملاحظة أن يكبر بشكل كبير ومشوه. والا لزيادة رأيت هذا على المستوى الخلوي، كما هو موضح في الشكل 6A و 6B، الذي يسلك تضخم القلب من الفأرة تعمل MTAC-بالمقارنة مع الماوس الشام التي تديرها. ما يمكن أن يزيد من ملاحظتها هو زيادة حجم عضلة القلب وتليف الخلايا في الفئران MTAC (الشكل 6D، 6F، و6H) بالمقارنة مع الفئران غير ligated (الشكل 6C، 6E، و6G).
منذ يمكن التحقق MTAC من قبل نظام الموجات فوق الصوتية عالية التردد، وعدم انقباض بنجاح قوس الأبهر سيكشف عن عدم وجود انقباض المرئي من الشريان الأورطي عرضية في تخطيط صدى القلب ثنائي الأبعاد، كما في الشكل 3B 3D. ويمكن زيادة التحقق من ذلك مع نابض الموجة واللون وسائط دوبلر، ينبغي أن انقباض الناجح يبرهن على وجود سرعة تدفق العليا في الحق والشريان السباتي وانخفاض سرعة التدفق في الشريان السباتي الأيسر (الشكل 4C و 4D).
الشكل 1: عملية تشكيل إبرة خطاف المرغوب من قبل الانحناء ل-1 في، 30 عيار إبرة نصيحة. أ) الأصلي 1 في، 30 عيار إبرة. ب) فهم رأس إبرة مع حامل الإبرة والانحناء في منتصف المسافة تقريبا على طول طوله. ثني إبرة في حلقة، وذلك باستخدام حامل الإبرة واليدين، حسب الاقتضاء، لتشكل حلقة في الصورة في اليمين العلوي من هذا الرقم. C) تغطية الإبرة مع أنبوب البولي يوريثين من أجل عقد هذا الجزء عازمة في المكان. D) عن طريقحامل الإبرة، ينحني غيض من حلقة في الشكل المطلوب. في هذه الحالة، وهي غيض إبرة مع اثنين من 45 - وقد تبين من 60 درجة الانحناءات لأغراض التوضيح. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 2: عملية Ligating في مستعرض قوس الأبهر. أ) قوس الأبهر واضحة للعيان. ب) عن طريق إبرة هوك المذكورة آنفا، فصل قوس الأبهر من النسيج الضام المجاورة. C) باستخدام إبرة معقوفة، توجيه خياطة تحت قوس الأبهر، ومع استخدام فاصل، ربط انقباض في القطر المطلوب. د) ربط المنجزة. رر تخفيف انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الرقم 3: اللون ونابض موجة دوبلر التصوير بالموجات فوق الصوتية من قوس الأبهر من Ligated والفئران غير ligated. أ) التصوير دوبلر لون من قوس الأبهر على فأرة الحاسوب غير ligated. الشرايين السباتية هما واضحة للعيان، وكذلك عدم وجود انقباض بينهما. ب) سرعة تدفق الذروة الأبهري على فأرة الحاسوب غير ligated. C) لون دوبلر تصوير قوس الأبهر على الفأرة ligated. انقباض بين اثنين من الشرايين السباتية على قوس الأبهر مرئية (السهام صفراء). D) سرعة تدفق الذروة في موقع انقباض. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل (4): نابض موجة دوبلر التصوير من الشرايين اليسار واليمين السباتي من الفئران Ligated وغير ligated. أ) التصوير نابض موجة دوبلر الشريان السباتي الأيسر من الفأرة غير ligated. ب) دوبلر النبضي موجة من الصحيح الشريان السباتي على فأرة الحاسوب غير ligated. ومن الجدير بالذكر أن سرعة تدفق الدم مماثلة تقريبا لتلك التي من الشريان السباتي الأيسر. C) نابض موجة دوبلر الشريان السباتي الأيمن من الفأرة مع انقباض في اللدود الأبهر. يتم زيادة سرعة الدم بشكل ملحوظ ويرجع ذلك إلى انقباض المصب من الدخول إلى الشريان السباتي الأيسر. D) نابض موجة دوبلر الشريان السباتي الأيسر من الفأرة مع انقباض في اللدود الأبهر. يتم تقليل سرعة تدفق الدم بشكل ملحوظ ويرجع ذلك إلى انقباض المنبع إلى دخولالشريان السباتي الأيسر. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الرقم 5: القلب تضخم ومعلمات ذات مع منحنى البقاء على قيد الحياة من 3 أسابيع Ligated وغير ligated-الفئران. أ) القلب من الماوس عمره 3 أشهر من دون انقباض الشريان الأورطي عرضية. قلب سليم وذات شكل طبيعي، من دون أي أمراض واضحة على الفور. ب) قلب الماوس عمره 3 أشهر وخضع MTAC لمدة 3 أسابيع. لاحظ طبيعة ممسوخ بوضوح من القلب بسبب الأيسر توسيع جدار البطين. وربط على قوس الأبهر مرئيا أيضا. ج) والمقطع العرضي للقلب فأر غير ligated العمر 3 أشهر. D) والمقطع العرضي للقلب 3الماوس -month القديم الذي خضع لانقباض الشريان الأورطي عرضية لمدة 3 أسابيع. توسيع البطين الأيسر واضحة للعيان. يتم تكبير القلب بشكل عام أيضا بسبب الأيسر الزائد الضغط البطيني الناجم عن MTAC. E) ونسبة من القلب إلى الجسم وزيادة كبيرة في الفئران النطاقات لمدة 3 أسابيع. F) وتزداد نسبة الساق طول العظام القلب إلى اليسار بشكل ملحوظ في الفئران النطاقات لمدة 3 أسابيع (*، ف <0.05، **، ف <0.01، ***، ف <0.001). منحنى G) البقاء على قيد الحياة لتجربة 3 أسابيع طويلة (MTAC = 12 والشام = 12). الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 6: النسيجي الشرائح من قلب الفأر. أ) المقطع العرضي من شصباحا تديرها قلب فأر. ب) والمقطع العرضي للقلب MTAC ligated-لمدة 3 أسابيع، مع جدار البطين الأيسر سميكة وتليف جزئي. يتم زيادة حجم القلب بشكل عام أيضا. C) المقطع الطولي للألياف عضلة القلب من ماوس الشام التي تديرها. D) المقطع الطولي للألياف عضلة القلب من الماوس ligated MTAC. تتضخم الخلايا بشكل ملحوظ، كما يتضح من زيادة قطرها، في حين أن النواة ظلت بنفس الحجم. E) المقطع العرضي للألياف العضلات من ماوس الشام التي تديرها. F) المقطع العرضي للألياف عضلة القلب من الماوس ligated MTAC. يتم تكبير الخلايا بسبب الحمل الزائد الضغط نتيجة للMTAC. G) الشرايين التاجية من ماوس الشام التي تديرها ملطخة Picrosirius الأحمر لالكولاجين. H) الشرايين التاجية من الفأرة ligated MTAC. ويلاحظ وجود كمية كبيرة من نسيج الكولاجين آرواوند الأوعية الدموية المتوسعة، مما يدل على التليف ماحول الأوعية بسبب الحمل الزائد الضغط في الشرايين التاجية. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
ابتكر روكمان وزملاؤه الطريقة الأولى لربط الأبهر كوسيلة لدراسة الزائد الضغط في القلب. هذا البحث سكريبت لتبدأ لكشف عواقب الخلوية والجزيئية لارتفاع ضغط الدم وقصور القلب 1. افضل طريقة، مينيملي عرضية انقباض الشريان الأبهر (MTAC)، ويوفر وسيلة قابلة، تعتمد على الوقت للتحريض البطين الأيسر الضغط الزائد وقصور القلب، دون الآثار الجانبية لانقباض الشريان الأورطي عرضية التقليدية 9. الإجراء في حد ذاته لا يمكن أن يؤديها بشكل ملحوظ أكثر سهولة ومع زيادة معدلات البقاء على قيد الحياة بالمقارنة مع معاهدة الصداقة والتعاون. والميزة الرئيسية لهذا الأسلوب هو أنه تمكن من أداء التجربة انقباض الشريان الأبهر، ولكن مع أقل بكثير المعدات والمهارة الجراحية، ووقت العملية لنفسه أو نتائج أفضل.
طريقة الصدر المفتوح في إجراء TAC لا تمكين زوصول reater ورؤية أفضل من مجمل القلب والأوعية. ميزة المحتملة هو أنه يمكن أن تتم بسهولة في تركيبة مع إجراءات أخرى، مثل أداء انقباض الشريان الرئوي للالصحيح الزائد الضغط البطيني أو ربط الشريان التاجي للظروف نقص تروية في نفس الوقت الذي يتم قوس الأبهر النطاقات. على العكس من ذلك، فإن الطريقة الغازية الحد الأدنى ليست مناسبة للأي شيء آخر غير تصاعدي أو عرضية الأبهر انقباض القوس.
ومن الجدير بالذكر أن هذا الأسلوب قد تم تكييفها وتعديلها في مجموعة متنوعة من الطرق. في بعض الحالات، يعتبر استخدام لقطات التيتانيوم بدلا من خياطة لانقباض الشريان الأورطي أكثر ملاءمة، نظرا لأنه هو شرط التجريبية التي هي استنساخه بسهولة: العصابات لا يمكن خلع في وسعهم في إجراءات معاهدة الصداقة والتعاون وMTAC القياسية التي تنطوي الغرز 6. في حال، عند اختباره مع نظام الموجات فوق الصوتية عالية التردد،عدد كبير من الفئران لم يتم ligated بنجاح خلال التجربة، وتحتاج إلى مزيد من الممارسة. ولعل تطبيق لقطات التيتانيوم المذكورة أعلاه قد يحسن من معدل نجاح عملية جراحية 6.
عند إجراء التجربة، فمن الأهمية بمكان أن خياطة حول الأبهر ليست ضيقة جدا. قد تصيب الشريان الأورطي أو يتسبب في تراجع قاتلة من تدفق الدم إلى باقي الجسم، بما في ذلك أجهزة الحرجة، مثل الكليتين. الرعاية أيضا يجب اتخاذها ليكون لطيف عند استخدام الخطاف المنحني للفصل بين الشريان الأورطي من الأنسجة والأوعية الضامة المحيطة بها، لأنها يمكن أن تصيب الأوردة الرئوية وغيرها من السفن ويمكن أن يؤدي إلى فقدان الدم القاتلة. تجويف الصدر ديه السلبي والبيئة الخارجية لها ضغط إيجابي. في هذا الإجراء، على الرغم من تم قطع جدار الصدر مفتوحة من القص والنطاقات قوس الأبهر، كان تجويف الصدر والبيئة الضغط السلبي على حالها. إذا كان هناك accidentaتم تغيير ل الضرر والضغط السلبي في الداخل، فإن الرئتين قد انهارت، وسيكون هذا الحيوان قد مات على الفور، لأن لما كان هناك لا التهوية بالضغط الإيجابي. عادة، هذا الإجراء لا يمكن أن يؤديها بأمان في غضون 30 دقيقة، حتى مع بطء الأداء، إذا لم يكن هناك إصابة قاتلة. الرعاية اللاحقة للعمليات الجراحية أمر بالغ الأهمية أيضا، إذ أن الضغط يمكن تخفيض إذا كان الحيوان المجففة، أو يمكن أن الحيوان يموت جوعا بسبب الألم وصعوبة في الوصول إلى الغذاء. بسهولة متاح الطعام لينة، والمسكنات، والإماهة ضرورية للانتعاش، وكذلك لتحقيق نتيجة ناجحة.
استخدامه لاحقا لأنظمة الموجات فوق الصوتية، وخاصة وضع دوبلر اللون، يمكن التصور من قوس الأبهر عرضية، وانقباض ناجحا، وآثار MTAC. نظام الموجات فوق الصوتية يمكن قياس سرعة تدفق في الشرايين السباتية، من سمك جدران الشرايين، والتشكل من البطين الأيسر.والجدير بالذكر، يجب أن تكون نسبة معدلات التدفق في الفئران العادية أو الشام التي تديرها ما يقرب من 1 10. سرعة تدفق الذروة في الموقع انقباض يمكن استخدامها لحساب التدرج الضغط باستخدام المعادلة المعدلة برنولي (4 × V ماكس 2) للمعلمة موثوق بها نسبة السباتي. ومن الجدير بالذكر أنه خلال تخطيط صدى القلب، يجب أن تبقى أن درجة حرارة الجسم ومعدل ضربات القلب في أقرب وقت ممكن لمجموعة فيزيولوجية طبيعية ويجب أن تكون مماثلة بين الحيوانات لإنتاج نقطة بيانات قابلة للمقارنة 10.
مستويات متفاوتة من انقباض يمكن أن تستمد من مستويات الخبرة المختلفة من المشغلين ويمكن أن تؤثر بشكل كبير على التشكل التي تم الحصول عليها. للحصول على نتائج متسقة، والتحقق من انقباض ناجحا مع مستويات ضغط التدرج وفقط باستخدام الفئران ضمن حدود معينة، مثل التدرج الضغط بين 40-80 مم زئبق، هو المهم. كلما كان ذلك ممكنا، وارتفاع وتيرة الشروقocardiography ينبغي أن تستخدم لمعايير تأكيدا واختيار الحيوان لتحقيق الاتساق في نتائج الدراسة. ومع ذلك، وضربات القلب وليس من الضروري للأسلوب MTAC نفسها.
إذا عالية التردد ضربات القلب غير متوفر، وانقباض ناجحا يمكن التحقق مع وزن القلب ونسب النسبية ومع الدراسة النسيجية المرضية في نهاية التجربة. فإن انقباض ناجحا زيادة الهزيل وزن القلب ونسبة النسبية لوزن الجسم والساق الأيسر طول العظام. وبالمثل، القلب وتضخم الخلايا العضلية وكل من التليف الخلالي وماحول الأوعية ويمكن أيضا أن تراعى في الفئران ligated بنجاح. وتهدف هذه التجربة 3 أسابيع طويلة فقط للحث على تضخم القلب، ولكن ليس للتسبب في الفشل. تمدد القلب وفشل القلب عادة ما يتم تعيين في بعد 6-8 أسابيع أو في وقت لاحق.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
ونود أن نعترف مرفق أبحاث جامعة في علوم الحياة (ULS) من جامعة هونغ كونغ للفنون التطبيقية لتوفير VEVO 2100 نظام الموجات فوق الصوتية. شكر خاص للدكتور تشون يي ون من الفرقة متعددة التخصصات من الهندسة الطبية الحيوية، وهونغ كونغ جامعة البوليتكنيك، للتدريب والتيسير. وأيد هذا العمل من قبل الحكومة هونج كونج RGC غرانت GRF 17127215، 764812 وHKU6 / CRF / 11G لبيلي KC تشاو.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 1 inch 30 Gauge Needles | BD, Franklin Lakes, NJ 07417, USA. | 305128 | Curved as in the procedure and Figure 1 |
| 27 Gauge Needle | BD, Franklin Lakes, NJ 07417, USA. | 301629 | Make blunt and smooth for spacer |
| 6/0 Dafilon | B. Braun, 34212 Melsungen, Hessen, Germany. | C0933066 | |
| 6/0 Silkam | B. Braun, 34212 Melsungen, Hessen, Germany. | C0762067 | |
| Sterile gloves | A.R. Medicom, Inc (Asia), Hong Kong. | ||
| Cotton Applicator | Mannings, Quarry Bay, Hong Kong. | Local Shopping Center | |
| Depilatory Cream | Veet (Hong Kong), Kwun Tong, Kowloon, Hong Kong | Local Shopping Center | |
| Lexer-Baby Scissor | FST, British Columbia V7H 0A6, Canada. | 14078-10 | |
| Curved Iris Forcep | FST, British Columbia V7H 0A6, Canada. | 11065-07 | |
| Micro Olsen-Hegar Needle Holder | WPI, Sarasota, FL 34240, USA. | 501989 | |
| Stereo Micrioscope | WPI, Sarasota, FL 34240, USA. | PZMIII-BS | |
| GenTeal Eye Gel | Novartis, East Hanover, NJ 07936, USA. | Local Pharmacy | |
| Heating Pad | Kent Scientific Corporation, Torrington, CT 06790, USA. | DCT-20 | |
| Surgical tape | Laboratory Animal Unit | ||
| Ketamine and Xylazine | Laboratory Animal Unit | ||
| Betadine | Laboratory Animal Unit | ||
| Buprenorphine | Laboratory Animal Unit |
References
- Rockman, H. A., et al. Segregation of atrial-specific and inducible expression of an atrial natriuretic factor transgene in an in vivo murine model of cardiac hypertrophy. Proc Natl Acad Sci U S A. 88 (18), 8277-8281 (1991).
- de Almeida, A. C., van Oort, R. J., Wehrens, X. H. Transverse aortic constriction in mice. J Vis Exp. (38), (2010).
- Hu, P., et al. Minimally invasive aortic banding in mice: effects of altered cardiomyocyte insulin signaling during pressure overload. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 285 (3), H1261-H1269 (2003).
- Shimizu, I., et al. Excessive cardiac insulin signaling exacerbates systolic dysfunction induced by pressure overload in rodents. J Clin Invest. 120 (5), 1506-1514 (2010).
- Tarnavski, O. Mouse surgical models in cardiovascular research. Methods Mol Biol. 573, 115-137 (2009).
- Zhang, X., et al. A modified murine model for the study of reverse cardiac remodelling. Exp Clin Cardiol. 18 (2), e115-e117 (2013).
- Hartley, C. J., et al. Doppler estimation of reduced coronary flow reserve in mice with pressure overload cardiac hypertrophy. Ultrasound Med Biol. 34 (6), 892-901 (2008).
- Scherrer-Crosbie, M., Thibault, H. B. Echocardiography in translational research: of mice and men. J Am Soc Echocardiogr. 21 (10), 1083-1092 (2008).
- Faerber, G., et al. Induction of heart failure by minimally invasive aortic constriction in mice: reduced peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator levels and mitochondrial dysfunction. J Thorac Cardiovasc Surg. 141 (2), 492-500 (2011).
- Li, L., et al. Assessment of Cardiac Morphological and Functional Changes in Mouse Model of Transverse Aortic Constriction by Echocardiographic Imaging. J Vis Exp. (112), (2016).
