Dieses Protokoll beschreibt Blasenekstrophie Massage, eine nicht-invasive manuelle Technik zum Sammeln von Samen von Vögel und DNA-Extraktion aus Vogelgrippe Spermien mit einem kommerziellen Extraktion Kit mit Modifikationen.
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Methodenartikel
Vogelgrippe Samengewinnung von Blasenekstrophie Massage und Isolierung von DNA aus Spermien
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Sammlung des Samens möglicherweise nützlich für eine Vielzahl von Anwendungen, einschließlich Studien, die Qualität der Spermien, Sperma Telomere Dynamik und Epigenetik. Vögel sind weit verbreitete Themen in der biologischen Forschung und sind ideal für Studien mit wiederholter Spermaproben. Einige Ressourcen sind jedoch derzeit für diejenigen, die lernen, wie man sammeln und Vogelgrippe Samenzellen DNA extrahieren. Hier beschreiben wir Blasenekstrophie Massage, eine sanfte, nicht-invasive manuelle Technik zur Vogelgrippe Sperma zu sammeln. Obwohl diese Technik in der Literatur hergestellt ist, kann es schwierig, aus den verfügbaren Beschreibungen zu lernen sein. Wir bieten auch Informationen zur Extraktion von DNA aus Vogelgrippe Samen mit einem kommerziellen Extraktion Kit mit Modifikationen. Blasenekstrophie Massage kann leicht auf jede kleine bis mittlere männliche Vogel in reproduktive Zustand verwendet werden. Nach Sammlung kann das Sperma sofort für Motilität Assays verwendet oder eingefroren für DNA-Extraktion nach dem hier beschriebenen Protokoll. Diese Extraktion-Protokoll wurde für Vogelgrippe Sperma verfeinert und auf Proben von mehreren Sperlingsvögel (Passer Domesticus, Spizella Passerina Haemorhous Mexicanusund Turdus Migratorius erfolgreich eingesetzt ) und eine Columbid (Columba Livia).
Einleitung
Vögel sind ideale Motive für Studien mit Spermien-Qualität und Wettbewerb1, Sperma Telomere Dynamik2Epigenetik3und ähnliche Themen, wie sie weit in der biologischen Forschung verbreitet sind und Spermien leicht entnommen werden können, mit Blasenekstrophie Massage. Blasenekstrophie Massage ist eine sanfte, nichtinvasive manuelle Technik zum Sammeln von Samen von Vögel4,5,6. Wiederholte Proben können leicht erhalten werden und sind keine Spezialwerkzeuge erforderlich, so dass es einfach in das Feld oder La....
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Protokoll
Dieses Protokoll beinhaltet vertebrate Tiere Themen und durch die institutionelle Animal Care und Nutzung Committee (IACUC) an der North Dakota State University genehmigt wurde.
1. die Samengewinnung aus dem passerine Vogel mit Blasenekstrophie massage
Hinweis: Blasenekstrophie Massage ist eine wirksame Sperma Sammlung Technik auf nur reproduktiv aktive Vögel, aber außerhalb der Brutzeit im entsprechenden gefangen Situationen erfolgreich durchgeführt werden kann. Vermehrungstätigkeit sollte für Zielarten vor mit Blasenekstrophie Massage bestimmt werden. Diese Technik kann verwendet werden, auf Wildvögel bei der Erf....
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Ergebnisse
Blasenekstrophie Massage und DNA-Extraktion verwenden, die das beschriebene Protokoll für mehrere Sperlingsvögel Arten und eine Columbid (Tabelle 1) ausgeführt wurde. Das Vorhandensein von Samenzellen im Spermaproben von Blasenekstrophie Massage wurde bestätigt, indem Sie anzeigen eine kleine Menge der verdünnten Proben unter dem Mikroskop Verbindung bei 400 X Vergrößerung (Abbildung 3). Nach Extraktion von DNA aus Spermaproben von Haussperli.......
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Diskussion
Wir beschreiben eine einfache und zuverlässige Methode für das Sammeln von Samen von kleinen und mittleren Vögel in reproduktiv aktiven Zustand und Extrahieren von DNA aus Vogelgrippe Sperma.
Die beschriebenen Samen DNA Extraktion Protokoll ist aus einem Bausatz für Einfachheit geändert, aber wurde für den Einsatz auf Vogelgrippe Sperma veredelt. Spermien sind resistent gegen lyse von standard-Extraktion Chemikalien9,13, und Spermaprob.......
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Offenlegungen
Die Autoren erklären, dass sie keine finanziellen Interessenkonflikte.
Danksagungen
Wir danken Jose Noguera für frühe Hilfen mit Blasenekstrophie Massage und Jeffrey Kittilson für Labor zu unterstützen. Diese Arbeit wurde durch einen ND EPSCoR FAR0022429 Award, BJH unterstützt. Publikationskosten waren der NDSU Abteilung der biologischen Wissenschaften großzügig unterstützt.
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Mikrohämatokrit-Kapillarröhrchen | Fisherbrand | 22-362566 | Jeder Lieferant kann verwendet werden. Kleinere Röhrchen können effektiver sein, um kleine Samenproben zu entnehmen, z. B. von sehr kleinen Sperlingsvögeln wie Spatzen. |
| Mikrozentrifugenröhrchen | Beliebig | ||
| 1x PBS | Beliebig | Wird zur Lagerung von Samenproben vor der DNA-Extraktion verwendet. | |
| DL-Dithiothreitol | Sigma-Aldrich | D0632 | |
| Tris Base | Sigma-Aldrich | 10708976001 | Jeder Lieferant kann verwendet werden. |
| EDTA | Sigma-Aldrich | 1233508 | Jeder Lieferant kann verwendet werden. |
| NaCl | Sigma-Aldrich | 793566 | Jeder Lieferant kann verwendet werden. |
| SDS | Sigma-Aldrich | 1614363 | Jeder Lieferant kann verwendet werden. |
| QIAamp DNA-Mikrokit | Qiagen | 56304 | Qiagen QIAamp DNA-Mikrokit wird speziell empfohlen. Dieses DNA-Extraktionsprotokoll wurde mit anderen kommerziellen Kits versucht, jedoch mit wenig Erfolg. Die Gründe dafür sind uns nicht bekannt. |
Referenzen
- Briskie, J. V., Montgomerie, R. Sperm size and sperm competition in birds. Proc. R. Soc. B. 247, 89-95 (1992).
- Monaghan, P. Telomeres and life histories: the long and the short of it. Ann. N.Y. Acad. Sci. 1206, 130-142 (2010).
- Carrell, D. T.
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Nachdrucke und Genehmigungen
