Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Immunology and Infection

En IL-8 Transient Transgenized Mouse Model for doi: 10.3791/55499 Published: July 7, 2017
* These authors contributed equally

Summary

Metoden beskrevet her muliggjør visualisering av IL-8-promotoravhengig inflammasjonsaktivering i lungene av mus gjennom ikke-invasiv bioluminescensbilder (BLI). Det samme dyret kan bli utsatt for BLI flere ganger i opptil to måneder fra leveringstidspunktet til luciferase-reporterkonstruksjonen.

Abstract

Luftveisbetennelse er ofte forbundet med bakterielle infeksjoner og representerer en viktig determinant av lungesykdom. In vivo- bestemmelsen av de pro-inflammatoriske egenskapene til forskjellige faktorer er utfordrende og krever terminale prosedyrer, som for eksempel bronkoalveolær lavning og fjerning av lungene for in situ- analyse, utelukker langsgående visualisering i samme mus. Her blir lungebetennelse indusert ved intratracheal instillasjon av Pseudomonas aeruginosa kultursupernatant (SN) i transient transgeniserte mus som uttrykker luciferase reportergenet under kontroll av en heterolog IL-8 bovin promoter. Luciferaseuttrykk i lungen overvåkes ved in vivo bioluminescerende bilde (BLI) analyse over en 2,5- til 48-timers tidsramme etter instillasjonen. Prosedyren kan gjentas flere ganger innen 2 - 3 måneder, noe som gjør det mulig å evaluere den inflammatoriske responsen i de samme musene medUt behovet for å si opp dyrene. Denne tilnærmingen tillater overvåking av pro- og antiinflammatoriske faktorer som virker i lungen i sanntid og synes egnet for funksjonelle og farmakologiske studier.

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Kroniske lungesykdommer, som astma, kronisk obstruktiv lungesykdom (COPD), cystisk fibrose (CF) og bronkiektase, er preget av luftveisinflammasjon. Luftveisinflammasjon er preget av ødem, mobil infiltrering, T-lymfocytt og mastcelleaktivering, økte luftveis sekretjoner og overdreven kollagenavsetning. CF er en multisystemforstyrrelse, og dens viktigste årsak til dødelighet og sykelighet er lungebakterieinfeksjon med økende lungekremerasjon. Nedgangen i lungefunksjonen spår et betydelig dårligere resultat 1 , 2 , 3 , 4 .

Betennelsestilstanden i luftveiene oppdages vanligvis ved evaluering av immunologiske markører som rekrutteres under den inflammatoriske prosessen i materiale avledet fra nedre og øvre luftveier, slik som sputum, som gir variabel results. Bronkoskopier utføres også 5 . Murine-modeller er verdifulle verktøy for å undersøke patogenesen og utviklingen av sykdommer som er preget av luftveisinflammasjon, og for hvilke effektive behandlinger eller botemidler ennå ikke er identifisert. Dyremodeller av lungebetennelse og betennelse har blitt brukt til å studere astma og vertspatogen-interaksjoner, inkludert rollen som kjemikalier som simulerer menneskelige forhold ( f.eks. Eksponering av sigarettrøyk, LPS, elastase, ovalbumin, poly I: C, etc. , som Samt kombinasjoner av ovennevnte) 6 . Måling av betennelsesrelaterte parametre krever dyrene, da invasive tilnærminger kreves for å måle faktorer som bakteriell belastning, cytokiner i lungene og oppsamlet bronkoalveolær lavage (BAL) væske. Dessuten er det ofte kreves histologiske undersøkelser. Muligheten for å oppnå informasjon om inflammatorisk responskinetikk krever bruk av numØkende mus. Derfor er en teknikk som vil tillate å skaffe seg slik informasjon uten behov for å ofre dyrene verdifulle på tekniske, etiske, økonomiske og operative grunnlag.

IL-8 er en viktig spiller i betennelsesprosessen, og rekrutterer leukocytter til det betente vevet. Det representerer en molekylær avlesning for studiet av aktivering av inflammatorisk vei. MIP-2 og KC kan være funksjonelle homologer av human IL-8 hos mus. Mus uttrykker bare en potensiell IL-8-reseptor, en homolog av human CXCR2 7 , 8 , men de er i stand til å modulere en heterolog IL-8-genpromotor som driver et reportergen. En murinmodell med lungebetennelse har nylig blitt utviklet etter observasjonen at en bovine IL-8-promotor / luciferase-reporterkonstruksjon kan transaktiveres i mus. Denne funksjonen tillater bruk av bioluminescensbilder (BLI) for å overvåke den inflammatoriske responsen ved å leve aNimals 9 .

Denne modellen har blitt tilpasset for å studere betennelse utløst av bakterielle eksoprodukter ( f.eks. LPS eller produkter frigjort av bakteriestammer) eller TNFalpha 10 , 11 . Narkotikaforskningsprosessen er fokusert på utvikling og optimalisering av gamle og nye antiinflammatoriske molekyler som kan behandle lungesykdommer, som CF, astma og KOL. Disse nye kjemiske enhetene må raskt og bekvemt testes i dyremodeller som kan knyttes til spesifikke kliniske fenotyper for å lette utformingen av smarte kliniske forsøk.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Alle dyreforsøkene som ble beskrevet, ble godkjent av den intramurale dyrevelferdsutvalget for dyreforsøk av Interdepartmental Center for eksperimentell forskningstjeneste ved Universitetet i Verona og i samsvar med europeisk direktiv 2010/63 UE, italiensk D.Lgs 26/2014 og den reviderte "Guide for pleie og bruk av laboratoriedyr", Washington, DC: National Academy Press, 1996. Denne protokollen og eksperimenter ble godkjent av National Institutes of Health (n 273/15). Dyrene hadde fri adgang til standard gnagerek og mykt kranvann og ble akklimatisert i minst 5 dager til de lokale vivariumforholdene (romtemperatur: 20-24 ° C, relativ fuktighet: 40-70%, lys mørk syklus: 12 timer ) Før noen behandling.

1. In vivo genleveranse

  1. Bruk en laminær strømningshett for å fremstille in vivo- leveringsreagens / nukleinsyrekompleksene.
  2. Definer eksperimentell protokoll aNd parametere som følger produsentens in vivo instruksjoner.
    1. Bruk et totalt injeksjonsvolum på 200 ul komplekser per mus.
    2. Start med 40 μg DNA suspendert i endotoksinfritt vann; Optimeringsområdet kan nå 60 μg.
      MERK: Den endelige konsentrasjonen av nukleinsyre i injeksjonsvolumet må ikke overstige 0,5 μg / μL, i henhold til produsentens anvisninger.
    3. Bruk et N / P-forhold på 6 - 8 (0,12 - 0,16 μL leveringsreagens pr. Μg nukleinsyre). Beregn det tilsvarende volumet av leveringsreagens.
      MERK: Kompleksene skal være kationiske for effektiv celleoppføring. N / P-forholdet er definert som antall nitrogenrester (N) på in vivo- leveringsreagenset per nukleinsyrefosfat (P) og representerer måling av ionbalansen i kompleksene.
  3. Fortynn den beregnede mengden (se trinn 1.2.1) av nukleinsyre i 5% glukose (sluttkonsentrasjonRasjon) ved bruk av 10% glukose stamopløsning (følger med) og sterilt vann. Kontroller at fortynningsvolumet er halvparten av det endelige injeksjonsvolumet. Vortex forsiktig eller bland ved pipettering opp og ned.
  4. Fortynn den beregnede mengden (se trinn 1.2.3) av leveringsreagenset til halvparten av injeksjonsvolumet på 5% glukose (sluttkonsentrasjon) ved hjelp av 10% glukose stamopløsningen (følger med) og sterilt vann. Vortex forsiktig og roter ved 13.000 xg i 15 s.
  5. Tilsett de ovennevnte fortynnede leveringsreagensene til den fortynnede nukleinsyren på en gang. Bland dem med forsiktig vortexing og spinn ned ved 13.000 xg i 15 s.
  6. Inkubér blandingen fra trinn 1,5 i 15 min ved romtemperatur.
    MERK: Fra dette punktet er kompleksene stabile i 4 timer ved romtemperatur og i opptil 7 dager ved lagring ved 4 ° C.
  7. Utfør hale-aar-injeksjoner ved å bruke komplekser likeverdig ved romtemperatur. Plasser musen halen i varmt vann (50 - 53 ° C) i 30 s for å tillate blodutvidelse.
    1. Plasser musen inne i fastholdelsesanordningen. Sett inn en 27- til 30-gauge nål i halevenen i en 20-30 ° vinkel og injiser langsomt 200 μl. Etter ferdigstillelse, fjern nålen og legg press på injeksjonsstedet.
      MERK: En liten buk i halen under injeksjonen indikerer feil posisjonering. Hvis dette skjer, fjern nålen og gjenta prosessen nærmest til forrige side.
  8. Visualisere genuttrykk ved å utføre in vivo BLI (se trinn 2) ved 24 og 48 timer etter intravenøs injeksjon.

2. In vivo BLI

MERK: Først må du lagre en nylagringsløsning av 15 mg / ml D-luciferin i DPBS, filtrer sterilisere den med en 0,22 μm filtreringsenhet og lagre den ved -20 ° C.

  1. Plasser musene i et klart plexiglass anestesi kammer. Pass på at isoflurankammeret er fullt. Når du er klar til å bedøve dyrene, må du forsikre deg om at pumpen (lEft) og kammer (høyre) brytere er på. Vend isofluran uret til 2,5% for induksjon og 2% for vedlikehold. Dyr i IVIS-kammeret holdes under 2,5% isofluorananestesi under bildeoppkjøpet.
  2. Etter at musene er fullbedøvet, injiser 10 ml / kg kroppsvekt av D-luciferin-oppløsningen med en intraperitoneal rute 15 minutter før bildene.
    MERK: En kinetisk studie på D-luciferin bør utføres for å bestemme tidspunktet for signalstoppen etter administrering av D-luciferin.
  3. Åpne in vivo imaging-systemet og klargjør bildekammeret ved å lime det med et stykke svart kartong (kassere ved ferdigstillelse). Plasser nesekeglene etter behov for riktig bedøvelse (bruk en kjegle per mus).
    MERK: Røret som leverer anestesi til instrumentet, er delt slik at den samme anestesikonsentrasjonen blir plumbed til anestesi manifoldene plassert inne i bildesystemet.
  4. Overfør musene (opptil 5) fra bOkse til nesekeglene festet til manifolden i bildesystemet og lukk døren. Bildeoppkjøpet varer i 5 min.
  5. Oppkjøp en BLI ved hjelp av produsentens programvare, som følger.
    1. Initialiser programvaren. I innkjøps kontrollpanelet in vivo imaging system legger du merke til ved siden av Luminescent . Bekreft at innstillingen for eksitasjonsfilter er blokkert og innstillingsfilterinnstillingen er åpen.
    2. Klikk på pilene: Velg lyseksponeringstid for 5 min, Binning 8 og F / Stopp 1 for lysstyrken i lysbildet. For fotograferingsmodus, velg Binning 4 og F / stop 8.
    3. Fra rullegardinlisten Field of View velger du D, 19 cm og en Emnehøyde på 1,5 cm. Klikk på Oppkjøp når du er klar til å skaffe bildet.
  6. Når bildet oppkjøpet er fullført, plasser musene tilbake i burene sine.
  7. Kvantifiser fotoner som sendes fra bestemte regioner ved hjelp av produsentens programvare.
    1. Klikk ROI-verktøyet , velg Målingsavkastning fra rullegardinlisten Type.
    2. Klikk på kvadratikonet og tegne en kvadrert avkastning med de riktige dimensjonene for å dekke thoraxen til ett dyr. Kopier og lim inn avkastningen for hvert dyr for å oppnå avkastning med samme dimensjoner. I ROI-verktøypanelet klikker du på Mål avkastning for å oppnå målingene av totalintensiteten i avkastningene.
    3. Se på dataene for avkastningsmålinger for alle avkastningene som er opprettet i bildene eller sekvensene i løpet av en økt (ett avkastning per rad). Klikk Eksporter og velg mappen der filen skal lagres.

3. Musutfordring med pro-inflammatorisk stimuli

MERK: Forut for musens utfordring med pro-inflammatoriske stimuli, kontroller baseline-aktiveringen av jeg n vivo BLI (se trinn 2). Minst 7 dager må passere mellom in vivo genlevering og mousE utfordring for å la den milde og forbigående betennelsen forsvinne.

  1. Forbered utstyret for intratracheal instillasjon (se Figur 1 og Figur 2 ).
    1. Koble de 5 ml disponible sprøytene med fjæren (C, E), en 100 μL sprøyte (B) og en engasjert spor (D) til 3-veis stoppeklokke (A). Plasser systemet på støtten (H). Plasser systemet på støtten (H).
    2. Koble PE190 mikromedisinsk slange (F) til disponibel måle (D) og til pennens tall (G).
    3. Fyll 5 ml sprøyten med 800 μL luft og slå 3-veis stoppeklokke.
      MERK: Fyll røret med Pseudomonas aeruginosa kultursupernatant ved å aspirere 50 μl i 100 μl sprøyten.

Figur 1
Figur 1: Skjematisk represeNtasjon av en enkelt komponent av intratracheale enheten.
(A) 3-veis stikkontakt, (B) 100 μL Hamilton sprøyte, (C) engangssprøyte, 5 ml sprøyte, (D) engangsmåler, (E) engangs sprøyte med en fjær, (F) PE190 mikromedisinsk slange , (G) penn århundre, og (H) støtte. Vennligst klikk her for å se en større versjon av denne figuren.

Figur 2
Figur 2: Representasjon av den sammensatte intratracheale enheten.
Identifikasjonene er de samme som i figur 1 . Vennligst klikkHer for å se en større versjon av denne figuren.

  1. Bedøv musene med et isofluran-fordamperkammer satt til 2,5% isofluran blandet med oksygen.
  2. Overvåk dyret for å evaluere effekten av bedøvelsen etter 3 - 5 min.
    MERK: For å bekrefte at musen er fullstendig bedøvet, må du følge de følgende tegnene nøye: forsinket pustehastighet skal sakte, mangel på armstrekning når den tas opp i nakken, og mangel på respons når bakre lemmer stimuleres. Vent noen få minutter og sjekk igjen før du fortsetter til neste trinn hvis disse kriteriene ikke er oppfylt.
  3. Plasser den bedøvede musen på plexiglas-intubasjonsplattformen, heng den ved sine fremspring, som er plassert på ledningen.
  4. Slå på laryngoskopet med venstre hånd (for høyrehendte forskere) og ta et par stumpe svinger. Bruk spissen av laryngoskop og tangen for forsiktig å åpne munnen.
  5. Trekk ut tungen og hGammel den til siden ved hjelp av tangen. Styr laryngoskopbladet mot baksiden av munnen. Hold laryngoskopet trykket ned veldig forsiktig i 90 ° vinkel til åpningen av luftrøret er synlig. Hold laryngoskopet på plass.
  6. Bruk den andre hånden, ta tilførselsrøret tilkoblet til enden av PE-slangen og sett den inn i luftrøret. Vri treveisventilen for å levere inokulumet. Trekk røret ut av luftrøret så snart som mulig. Hold musen oppreist i noen sekunder for å tillate at inokulumet blir innåndet i lungene.
    MERK: Musene kveles og dør hvis luftrøret er blokkert for lenge.
  7. Fjern musen fra plattformen. Utvinningstiden kan variere basert på stammer; Følg musen flittig og sørg for at dyret er helt våken innen 30 minutter etter prosedyren.
  8. Intraperitoneally injiser 150 mg / kg D-luciferin og bilde lungene ved å bruke et in vivo imaging system 4, 24 og 48 timer etter intratrachealStimulering av stimuli. Kvantifiser fotoner som sendes fra bestemte regioner ved hjelp av produsentens programvare.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

BIL-8-Luc forbigående transgen musemodell ble brukt til in vivo overvåking av lungebetennelse hos mus utfordret med konsentrert bakteriell supernatant (30x) som inneholdt utskillede virulensfaktorer. Den induserte inflammatoriske responsen ble detekterbar ved in vivo avbildning som en økning i BLI-signalet. Pro-inflammatorisk aktivitet var tydelig detekterbar 2,5 timer etter instillasjon, selv om BLI-signalet nådde den høyeste toppen mellom 5 og 24 timer og var fortsatt påviselig ved 48 timer ( figur 3 ).

Figur 3
Figur 3: Representativ In vivo Imaging of Lung Inflammation Induced av P. Aeruginosa SN i IL-8 Transient Transgenic Mus.
Øvre panel: Representative bilder av mus (n = 2 per gruppe) intratrachealt insDyrket med bakteriell cellefri 30x SN fra en Pseudomonas aeruginosa- stamme (Pae) ​​etter transient transgenisering med bIL-8-Luc. Mus ble overvåket ved BLI ved 2,5, 5, 4, 24 og 48 timer etter stimulering, med en region av interesse trukket over brystet. Nedre panel: Kombinert data uttrykt som fotoner / s / cm 2 . Hver verdi representerer gjennomsnittet ± SEM. Vennligst klikk her for å se en større versjon av denne figuren.

Figur 4
Figur 4: Transient lungebetennelse etter transfeksjon.
Nedgang i brystet BLI fra den første vurderingen (dag 3) etter IV-inokuleringen av bIL-8-Luc. Data er uttrykt som fotoner / s / cm 2 ± SEM (n = 6).

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

I et tidligere arbeid 11 ble en kontrast mellom bIL-8-Luc-avhengige BLI og BAL markører vist. Den stod på differensialgraden av følsomhet innenfor musestammer 12 . Av denne grunn krever den første applikasjonen av bIL-8-Luc-modellen til en annen musestamme en første undersøkelse av den inflammatoriske responsen, både når det gjelder BLI og mer standardiserte inflammatoriske markører.

Mustransfeksjon forårsaker mild lungebetennelse og aktivering av bIL-8-Luc, som kan påvises ved BLI opptil 3 - 4 dager etter DNA-injeksjon ( Figur 4 ). Det forsvinner da helt etter 1 uke 1 . Ekspresjonen av bIL-8-Luc etter genleveranse bør alltid verifiseres av in vivo BLI, da dette er en nødvendig betingelse for suksessen til de følgende eksperimentelle trinn. Etter 7 dager og før musens utfordring, bør baseline aktivering bli registrert til confIrm forsvinningen av transfeksjon-indusert betennelse.

Denne tilnærmingen har blitt testet i den akutte fasen av betennelse, men anvendelsen til den kroniske fasen har ikke blitt testet. Det er ikke kjent hvordan utfordringen i levende mikroorganismer kan påvirke aktiviteten til promotoren som brukes i denne innstillingen. En økt forståelse av patogenesen av akutt og kronisk betennelse og den resulterende endringen i lungefunksjonen er avgjørende for utviklingen av effektive terapier for en rekke kroniske lungesykdommer 3 , 9 . Dyrmodeller fortsetter å være nødvendige for dette formålet, selv om begrensninger i nøyaktig reflekterende human sykdomspatofysiologi er tilstede.

In vivo- overvåking av inflammatoriske parametere hos små gnavere ved bruk av luciferase-reportergener avledet fra andre arter er av stor verdi. Denne tilnærmingen tillater studien av patofysioLogikk av inflammatoriske responser, samt evnen til å teste inngrep rettet mod deres modulering. Dette ble vellykket testet ved bruk av en tidligere godt karakterisert bovin IL-8 promotor / luciferase transient transgenisert (bovinisert) musemodell 1 . Videre viste en nylig undersøkelse 10 at modellen beskrevet her er hensiktsmessig for overvåking av lungeinflammatorisk respons indusert av bakterielle eksoprodukter og for å undersøke virkningsmekanismen av forbindelse (er) av interesse. BLI er en ikke-invasiv tilnærming som muliggjør longitudinell observasjon av lungebetennelsesprosessen etter intratracheal instillasjon med relevante stimuli, inkludert P. aeruginosa- kultursupernatant 9 , 10 , 11 . Dette er en åpenbar fordel ved å studere akutt lungebetennelse sammenlignet med klassiske metoder som krever at dyrene ofres til kolFortelle BAL-væske og lungene. Dens verdi for studiet av kronisk infeksjon / betennelse er ikke tatt opp.

Den nåværende modellen kan brukes til å utdype den tilgjengelige kunnskapen om patogenesen av lungebetennelsessykdommer, inkludert karakterisering av bakterielle / ikke-bakterielle faktorer med pro-inflammatorisk aktivitet. Videre kan det underlette evalueringen av mulige terapeutiske effekter av molekyler med kjente / formodede antiinflammatoriske virkninger.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Forfatterne har ingenting å avsløre.

Acknowledgments

Dette arbeidet ble støttet av det italienske Cystic Fibrosis Foundation Project FFC # 18/2013, FFC # 29/2015 og av den italienske Cystic Fibrosis League gjennom Veneto Branch-Associazione Veneta Lotta Contro Fibrosi Cistica Onlus.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
FMT 2500 Fluorescence Tomography System Perkin Elmer Inc. Experimental Builder
IVIS Lumina serie II Pre-clinical In Vivo; Imaging System Perkin Elmer Inc. Experimental Builder
MMPsense 750 FAST Perkin Elmer Inc. NEV10001EX Protect from light, store the probe at 4 °C
Female inbred BalbC Harlan Laboratories Italy Prior to use, animals were acclimatized for at least 5 days to the local vivarium conditions
bIL-8-Luc plasmid Department of Medical Veterinary Science, University of Parma, Italy Store the plasmid at -20 °C
pGL3basic vector Promega E1751 Store the vector at -20 °C
JetPEI DNA transfection reagent Polyplus transfection 201B-001G The DNA and JetPEI mix was formulated with a final N/P ratio of 7
D-luciferin potassium salt 1 g Perkin Elmer Inc. 122796 Protect from light, store at -20 °C
Living Image software Caliper Life Sciences, Experimental Builder
Isoflurane ESTEVE spa 571329.8 Do not inhale
Bio-Plex Cytokine Assay Kit Bio-Rad Laboratories M60-009RDPD Store the unopened kit at 4 °C
Automated cell counter Dasit XT 1800J Experimental Builder
Penn-century model DP-4M Dry power insufflator Penn-century DPM-EXT
Gas anesthesia system XGI-8 Perkin Elmer Inc. Experimental Builder
PE190 micro medical tubing 2biological instruments snc BB31695-PE/8
Syringe without needle 5 mL Terumo SS*05SE1 Cut the boards of the piston by a scissors
Hamilton 0,10 mL (model 1710) Gastight 81022
Discofix 3-way Stopcock Braun 4095111
Syringe with needle 1 mL Pic solution 3,071,260,300,320 Use without needle
Plastic feeding tubes 18ga x 50 mm 2biological instruments snc FTP-18-50 Cut obliquely the tip 

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Barnes, P. J. Therapeutic approaches to asthma-chronic obstructive pulmonary disease overlap syndromes. J Allergy Clin Immunol. 136, (3), 531-545 (2015).
  2. Cohen-Cymberknoh, M., Kerem, E., Ferkol, T., Elizur, A. Airway inflammation in cystic fibrosis: molecular mechanisms and clinical implications. Thorax. 68, (12), 1157-1162 (2013).
  3. Dhooghe, B., Noel, S., Huaux, F., Leal, T. Lung inflammation in cystic fibrosis: pathogenesis and novel therapies. Clin Biochem. 47, (7-8), 539-546 (2014).
  4. Durham, A. L., Caramori, G., Chung, K. F., Adcock, I. M. Targeted anti-inflammatory therapeutics in asthma and chronic obstructive lung disease. Transl Res. 167, (1), 192-203 (2015).
  5. Sagel, S. D. Noninvasive biomarkers of airway inflammation in cystic fibrosis. Curr Opin Pulm Med. 9, (6), 516-521 (2003).
  6. Starkey, M. R., et al. Murine models of infectious exacerbations of airway inflammation. Curr Opin Pharmacol. 13, (3), 337-344 (2013).
  7. Cacalano, G., et al. Neutrophil and B cell expansion in mice that lack the murine IL-8 receptor homolog. Science. 265, (5172), 682-684 (1994).
  8. Simonet, W. S., et al. Long-term impaired neutrophil migration in mice overexpressing human interleukin-8. J Clin Invest. 94, (3), 1310-1319 (1994).
  9. Stellari, F. F., et al. In vivo imaging of transiently transgenized mice with a bovine interleukin 8 (CXCL8) promoter/luciferase reporter construct. PLoS One. 7, (6), e39716 (2012).
  10. Stellari, F., et al. In vivo imaging of the lung inflammatory response to Pseudomonas aeruginosa and its modulation by azithromycin. J Transl Med. 13, 251 (2015).
  11. Stellari, F., et al. In vivo monitoring of lung inflammation in CFTR-deficient mice. J Transl Med. 14, (1), 226 (2016).
  12. De Simone, M., et al. Host genetic background influences the response to the opportunistic Pseudomonas aeruginosa infection altering cell-mediated immunity and bacterial replication. PLoS One. 9, (9), e106873 (2014).
En IL-8 Transient Transgenized Mouse Model for<em&gt; In vivo</em&gt; Langsiktig overvåking av inflammatoriske responser
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Bergamini, G., Stellari, F., Sandri, A., M. Lleo, M., Donofrio, G., Ruscitti, F., Boschi, F., Sbarbati, A., Villetti, G., Melotti, P., Sorio, C. An IL-8 Transiently Transgenized Mouse Model for the In Vivo Long-term Monitoring of Inflammatory Responses. J. Vis. Exp. (125), e55499, doi:10.3791/55499 (2017).More

Bergamini, G., Stellari, F., Sandri, A., M. Lleo, M., Donofrio, G., Ruscitti, F., Boschi, F., Sbarbati, A., Villetti, G., Melotti, P., Sorio, C. An IL-8 Transiently Transgenized Mouse Model for the In Vivo Long-term Monitoring of Inflammatory Responses. J. Vis. Exp. (125), e55499, doi:10.3791/55499 (2017).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter