Summary
تعمل اللدائن الدقيقة كناقلات للملوثات العضوية السامة المحتملة مع تأثيرات لا يمكن التنبؤ بها. يصف هذا البروتوكول منهجية بديلة لتقييم مستويات المبيدات العضوية الكلورية العضوية كثف على الكريات البلاستيكية وتحديد الهيكل الكيميائي البوليمر. التركيز على استخراج السوائل المضغوط و الموهن الكلي انعكاس تحويل فورييه مطياف الأشعة تحت الحمراء.
Abstract
حبيبات الراتنج البلاستيكية، المصنفة كلدائن بلاستيكية (قطرها 5 مم)، هي حبيبات صغيرة يمكن إطلاقها عن غير قصد على البيئة أثناء التصنيع والنقل. وبسبب استمرارها البيئي، فإنها توزع على نطاق واسع في المحيطات وعلى الشواطئ في جميع أنحاء العالم. ويمكن أن تكون بمثابة ناقل للمركبات العضوية السامة المحتملة ( مثل مركبات ثنائي الفينيل المتعددة الكلور) تؤثر سلبا على الكائنات البحرية. وآثارها المحتملة على طول السلسلة الغذائية ليست مفهومة جيدا بعد. من أجل تقييم المخاطر المرتبطة بحدوث الكريات البلاستيكية في البيئة البحرية، من الضروري وضع منهجيات تسمح بتحديد سريع لمستويات الملوثات العضوية المرتبطة بها. يصف هذا البروتوكول الخطوات المختلفة المطلوبة لأخذ عينات من الكريات الراتنجية، وتحليل مبيدات الآفات الكلورية العضوية الممتصة (أوكبس) وتحديد نوع البلاستيك. التركيز علىواستخراج أوكبس من الكريات البلاستيكية عن طريق مستخرج السوائل المضغوط (ب) وعلى التحليل الكيميائي البوليمر تطبيق التحليل الطيفي فورييه-إنفرارد (فت-إر). وتركز المنهجية المتقدمة على 11 من مركبات أوكب والمركبات ذات الصلة، بما في ذلك ثنائي كلوريد الفينيل ثنائي الفينيل (دت) واثنين من الأيضات الرئيسية والليندين واثنين من ايزومرات الإنتاج، فضلا عن إيزومرات نشطة بيولوجيا من الإندوسلفان التقني. هذا البروتوكول يشكل بديلا بسيط وسريع للمنهجية القائمة لتقييم تركيز الملوثات العضوية كثف على قطع من البلاستيك.
Introduction
يرتفع الإنتاج العالمي من اللدائن بشكل مستمر منذ عام 1950 ليصل إلى 311 مليون طن في عام 2014 مع استخدام حوالي 40٪ في التعبئة والتغليف 1 . وفي موازاة ذلك، تتراكم كميات متزايدة من هذه المواد في البيئة، مما قد يشكل تهديدا خطيرا للنظم الإيكولوجية 2 . وعلى الرغم من الإبلاغ عنها بالفعل في السبعينيات، فإن حدوث الحطام البلاستيكي في البيئة البحرية لم يحظ إلا بقدر أكبر من الاهتمام في العقد الماضي. خاصة اللدائن البلاستيكية، شظايا البلاستيك التي يبلغ قطرها ≤ 5 ملم، هي الآن معترف بها باعتبارها واحدة من القضايا الرئيسية نوعية المياه البحرية 3 .
حبيبات الراتنج البلاستيكية هي حبيبات صغيرة عموما في شكل اسطوانة أو قرص وقطرها بضعة ملم (على سبيل المثال، 2 إلى 5 ملم) 4 ، 5 . وهي تقع في فئة اللدائن الدقيقة. هذه حبيبات البلاستيك هيالمواد الخام الصناعية التي يتم تصنيعها من المنتجات البلاستيكية النهائية من خلال إعادة ذوبان وقولبة في درجة حرارة عالية 6 . ويمكن إطلاقها عن غير قصد في البيئة أثناء التصنيع والنقل. على سبيل المثال، يمكن إدخالها مباشرة إلى المحيط من خلال الانسكابات العرضية أثناء الشحن 4 ، 7 ، 8 . ويمكن نقلها من الأرض إلى المحيطات عن طريق الجريان السطحي، والجداول والأنهار. بسبب استمرارها البيئي، يتم توزيع الكريات البلاستيكية على نطاق واسع في المحيطات وجدت على الشواطئ في جميع أنحاء العالم 4 . ويمكن أن تؤثر سلبا على الكائنات البحرية، ويمكن أن تدخل السلسلة الغذائية، حيث تكون آثارها غير متوقعة 6 ، 7 . وعلاوة على ذلك، كشفت العديد من الدراسات وجود الملوثات البيئية كثف على الكريات البلاستيكية التي تم جمعها في كواستال، التي تعمل كموجة من هذه المواد الكيميائية السامة المحتملة 4 ، 9 ، 10 . في الواقع، هناك أدلة مختبرية تشير إلى أن هذه المواد الكيميائية يمكن أن تتراكم أحيائيا في أنسجة الكائنات الحية بعد إطلاقها من شظايا بلاستيكية مبتللة 11 ، 12 .
من أجل تقييم أفضل للأخطار المرتبطة بحدوث حبيبات بلاستيكية في البيئة البحرية، من الضروري وضع منهجيات يمكن أن تحدد الملوثات العضوية السائلة. وتتمثل إحدى الخطوات الهامة في استخراج المواد الكيميائية من المصفوفات البلاستيكية التي يمكن أن تقدم خصائص كيميائية فيزيائية غير متجانسة تبعا لنوع البوليمر ومرحلة التدهور والمعالجات المسبقة. معظم التحقيقات التي ذكرت في الأدب استخدام تقنيات التهدئة أو سوكسليت 4 ،5 ، 6 ، 9 ، 13 ، 14 ، 15 ، 16 ، 17 ، 18 ، والتي هي المذيبات و / أو تستغرق وقتا طويلا. وفيما يتعلق بالاهتمام المتزايد بهذه المسألة، ينبغي وضع بدائل من أجل إجراء تقييم أسرع للملوثات العضوية الممتزة على القطع البلاستيكية. وبالإضافة إلى ذلك، يوفر التحليل الكيميائي البلاستيك معلومات عن التركيب الكيميائي للاللدائن الدقيقة. ونتيجة لذلك، يمكن تقييم الأنواع السائدة من البوليمرات والبوليمرات المشتركة الموجودة في البيئة. على الرغم من أن شظايا البلاستيك عادة ما تكون مصنوعة من البولي إيثيلين والبولي بروبلين (ب) 5 ، يمكن لبعض مواقع أخذ العينات تقديم ملف تعريف معين حيث يتم تمثيل فئات أخرى بشكل كبير (على سبيل المثال، البوليمرات أسيتات الإيثيلين / فينيل أسيتاتوالبوليستيرين (بس)). فت-إر الطيفي هو تقنية موثوقة وسهلة الاستعمال لتحديد البوليمر تستخدم عادة لتحديد البلاستيك الدقيقة 19 ، 20 .
الهدف الرئيسي من هذا العمل هو تقديم خيار سريع وبسيط لاستخراج أوكبس والمركبات ذات الصلة من الكريات البلاستيكية عن طريق ب. ومع ذلك، فإن تصميم البروتوكول يتضمن جميع الخطوات التي تؤدي إلى تحديد أوكبس سوربيد، من أخذ العينات من الكريات الراتنج لتحليل المركبات. كما يتم وصف طريقة تحديد نوع من البلاستيك. وتركز المنهجية المتقدمة على 11 من مركبات أوكب والمركبات ذات الصلة: 1) دت (2،4'- و 4،4'-ثنائي كلورو ثنائي الفينيل ثلاثي كلور الإيثان) واثنين من الأيض الرئيسي ددي (2،4'- و 4،4'-ثنائي كلورودي فينيلديكلور إيثيلين) و دد (2،4'- و 4،4'-ثنائي كلورودي فينيلديكلور إيثان)؛ 2) سداسي كلورو حلقي الهكسان (أيسومر غاما - سداسي كلور حلقي الهكسان) باعتباره العنصر الرئيسي o(و) لدينان مبيدات الآفات والايزومرات α - هش وسداسي كلورو حلقي الهكسان - هش أثناء إنتاجه 15 ؛ 3) والايزومرات النشطة بيولوجيا إندوسلفان الأول (إندو الأول) والثاني (إندو إي) الموجودة في إندوسلفان التقنية. والمبيدات المدروسة هي مبيدات حشرية واسعة الطيف، مستقرة كيميائيا، مسعور، وتصنف على أنها ملوثات عضوية ثابتة (بوبس) بموجب اتفاقية استكهولم 21 .
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. البلاستيك بيليه أخذ العينات
- قبل الذهاب إلى الميدان، ثلاث مرات شطف جميع المواد اللازمة أخذ العينات (على سبيل المثال، ملاقط ورقائق الألومنيوم) مع الأسيتون أو الإيثانول (99٪). في حالة عدم قدرة المادة على شطف المذيبات، قم بتسخينها عند درجة حرارة 450 درجة مئوية في الفرن (على سبيل المثال، الأواني الزجاجية).
ملاحظة: في المناطق السياحية، الحصول على معلومات حول أنشطة تنظيف الشاطئ المحتملة التي من شأنها إزالة معظم القمامة البحرية بما في ذلك اللدائن الدقيقة. إذا كان ذلك ممكنا، قم بتخطيط العينات قبل هذه العملية. إذا أخذت العينات خلال موسم التنظيف، حدد تفاصيل هذا النشاط في نموذج الهوية (على سبيل المثال، التواريخ، طريقة التنظيف المستخدمة، وما إلى ذلك ) - ارتداء القفازات، وجمع الكريات البلاستيكية من الشاطئ مع المذيبات الشطف الفولاذ المقاوم للصدأ ملاقط.
- عينة 50 إلى 100 الكريات لكل موقع، وهو ما يتطابق مع 5 إلى 10 مكررات لكل موقع (10 الكريات لكل تكرار). إذا كان العدد المطلوب من الكريات لا يمكن أن يكون أوبتاإينيد، وجمع الكريات القصوى الممكنة وتحديده في شكل شاطئ الهوية.
- في نهاية أخذ العينات، التفاف الكريات التي تم جمعها في المذيبات-- شطف رقائق الألومنيوم. الزجاجات الزجاجية يمكن استخدامها كبديل أو حتى أكياس الورق.
- ملء نموذج هوية الشاطئ المحدد مع المعلومات المفقودة ( أي موقع الشاطئ، والظروف الجوية، وتفاصيل عن الكريات، وما إلى ذلك ).
- نقل العينات إلى المختبر في علبة الجليد إذا كانت درجة الحرارة المحيطة تتجاوز 25 درجة مئوية. يمكن تخطي هذه الخطوة في حالة الرحلات القصيرة (على سبيل المثال، <1 h).
- مرة واحدة في المختبر، يمسح بلطف قبالة الجسيمات القابلة للإزالة (على سبيل المثال، الرمل) من الكريات. تجفيف العينات إذا لزم الأمر في مجفف قبل التخزين (الظلام، T <25 درجة مئوية). تجنب الغرف التي قد تكون فيها مراكز الرعاية الصحية الخارجية قيد الاستخدام (على سبيل المثال، تخزين الحلول القياسية).
- تخزين الكريات في الثلاجة (4 درجة مئوية) لفترات قصيرة ( أي بضعة أيام) أوفي الفريزر (-18 درجة مئوية) لفترات أطول في رقائق الألومنيوم المغلفة بالمذيبات.
- تجنب تعرض العينات للضوء الاصطناعي أو أشعة الشمس. التعامل مع عينات أقل قدر ممكن قبل التحليل للحد من خطر التلوث.
2. استخراج أوكبس من الكريات البلاستيكية
- للحد من خطر التلوث، العمل في مختبر نظيفة باستخدام الأواني الزجاجية غسلها بعناية على النحو التالي: يشطف 2 مع الأسيتون التحليلية الصف، ثنائي كلورو ميثان و ن الهكسان. تجفيف الأواني الزجاجية تحت تدفق النيتروجين وحماية من الاتصال مع الهواء المحيط (على سبيل المثال، غطاء مع رقائق الألومنيوم تنظيفها). تطبيق هذا الإجراء التنظيف في خطوات أخرى من البروتوكول ( أي الأقسام 3 و 4).
- باستخدام ملاقط شطف المذيبات، فرز الكريات حسب اللون في الفئات التالية: أبيض / شفاف، أبيض / مصفر، أصفر / برتقالي، العنبر / البني، ومصطبغة (على سبيل المثال، الأحمر والأخضر والأزرق، وما إلى ذلك )
- جمع 10 بيليهق من لون مماثل عشوائيا ( أي نوع من البلاستيك لا يعتبر)، والتي سوف تشكل تكرار واحد.
- وزن العينة على التوازن التحليلي وتسجيل الكتلة. في هذه المرحلة، يمكن وضع العينات مرة أخرى في الثلاجة أو الفريزر.
- أن تأخذ في الاعتبار تلوث الخلفية، إجراء عينة فارغة مع كل مجموعة من مكررات (على سبيل المثال، 1 فارغة لمدة 5 مكررات). تحقيقا لهذه الغاية، وتطبيق نفس البروتوكول كما هو موضح أعلاه، ولكن لا تضيف الكريات البلاستيكية في الخلية استخراج. وهذه العينة فارغة تخضع لمزيد من الخطوات من البروتوكول ويتم تحليلها جنبا إلى جنب مع العينات.
- التبديل على ب. تحميل طريقة الاستخراج والاحماء الصك إلى 60 درجة مئوية. وفيما يلي تفاصيل هذه الطريقة:
- ضبط درجة الحرارة إلى 60 درجة مئوية والضغط إلى 100 بار.
- حدد دورة واحدة مع الحرارة حتى وقت 1 دقيقة، وقت الانتظار من 25 دقيقة، ووقت التفريغ من 2 دقيقة.
- تعيين المذيباتوالغاز (N 2 ) مرات تدفق إلى 3 دقائق لكل منهما.
- حدد n- الهكسان كمذيب استخراج.
- في حين أن الجهاز هو الاحماء، وإعداد خلية استخراج كما هو موضح أدناه. إذا لزم الأمر، وتكييف البروتوكول لتعليمات المورد من الصك الخاص بك:
- وضع مرشح أسفل وفريت في الخلية استخراج. إغلاقه وتحويله.
- ملء ما يقرب من نصف الخلية مع تنظيف الرمال الكوارتز باستخدام قمع.
- إضافة عينة وزنها ( أي واحد من تكرار 10 الكريات). وينبغي وضع الكريات البلاستيكية المجمدة في الثلاجة بين عشية وضحاها قبل الاستخراج.
- إضافة رمل الكوارتز تصل إلى 1 سم من الجزء العلوي من الخلية. توخى عناية خاصة لاستخدام رمل الكوارتز النظيف جدا (أو الخرز الزجاجي بدلا من ذلك) نظرا لأنه يتعرض لنفس ظروف الاستخراج مثل العينات. لتنظيف الرمل، على التوالي استخراجه في ب في ثنائي كلورو ميثان التحليلي و n- الهكسان، وتطبيق 2 أوالمزيد من الدورات لكل مذيب (على سبيل المثال، 30 دقيقة عند 100 درجة مئوية تحت 100 بار). بدلا من ذلك، استخدم حمام بالموجات فوق الصوتية و / أو المبخر الدورية. كرر إجراء التنظيف، إذا لزم الأمر.
- إدراج أعلى مرشح في الخلية ووضع الخلية في الصك.
- وضع السفن جمع في الصك وبدء طريقة استخراج (المدى الكلي من حوالي 35 دقيقة).
- عند اكتمال الطريقة، إفراغ خلية الاستخراج في وعاء زجاجي تنظيف (على سبيل المثال، كوب، طبق زجاجي ثقافة الخلية) واسترداد 10 الكريات في الرمال. تخزينها في وعاء حتى مزيد من التحليل لتحديد البلاستيك (على سبيل المثال، كيس البريدي أو قارورة زجاجية).
3. تركيز وتنظيف استخراج
- نقل استخراج الحصول عليها (حوالي 40 مل) من وعاء جمع إلى أنبوب زجاجي وتبخره إلى 1 مل في المكثف الدورية تعيين إلى 35 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة. ويمكن استخدام الطرق البديلة سوتش كما التبخر تحت تدفق النيتروجين أو المبخر الدورية. وينبغي تحسين درجة الحرارة والمدة وفقا لذلك.
- في هذه الأثناء، إعداد مستخرج المرحلة الصلبة (سب) عن طريق وضع أنبوب النفايات في الرف وخرطوشة مليئة المنشط سيليكات المغنيسيوم الماصة (1 غرام) على مشعب في موقف صمام وثيق. ويستند التنظيف على طريقة وكالة حماية البيئة 3620C 22 على النحو التالي:
- بدوره على الفراغ على المصدر وإضافة 4 مل من الهكسان في خرطوشة لتنشيط المواد الماصة.
- افتح الصمام واترك المذيب يمر عبر السرير الماص بالكامل. ثم، أغلق صمام والسماح للمادة الماصة لنقع في الهكسان لمدة 5 دقائق.
- افتح الصمام واترك المذيب يمر، ولكن أغلق الصمام قبل تجفيف الماصة.
- عندما تتركز العينة، نقله إلى خرطوشة مع ماصة باستور الزجاج. افتح الصمام بلطف واتركه يمر ببطء. 1-2 قطرات في الثانية الواحدةسرعة مناسبة.
- شطف أنبوب زجاجي يحتوي على استخراج مع 0.5 مل من الهكسان وإضافته إلى خرطوشة عندما مرت المستخلص من خلال.
- عندما يمر المذيب بأكمله، أغلق الصمام وأوقف الفراغ.
- استبدال أنبوب النفايات مع أنبوب جمع واستخدام نظيفة إبرة دليل المذيبات.
- إضافة 9 مل من الأسيتون / الهكسان (10/90، v / v) إلى خرطوشة وتشغيل الفراغ في المصدر. السماح للمادة الماصة لنقع في المذيب لمدة 1 دقيقة.
- فتح صمام وجمع كامل شطافة في أنبوب جمع.
- وضع أنبوب جمع في المكثف وتبخر المذيبات لمدة 9 دقائق في 35 درجة مئوية من أجل الوصول إلى 1 مل من الشطف.
- نقل شطافة المركزة في العنبر قارورة الاوتوماتيكى مع ماصة باستور الزجاج. في هذه المرحلة، يمكن تخزين العينات في الثلاجة قبل التحليل.
4. تحليل تنظيف و كونسنتراتيد استخراج
- تحميل الأسلوب التحليلي على برامج التحكم من أداة غ-ميكرد (كروماتوجراف الغاز مجهزة كاشف التقاط الإلكترون الجزئي). وفيما يلي تفاصيل هذه الطريقة:
- تعيين حاقن لوضع سبليتليس، درجة حرارته إلى 250 درجة مئوية، ووقت تطهير إلى 1 دقيقة.
- تعيين تدفق الغاز الناقل (هو) إلى 1.5 مل دقيقة -1 .
- برنامج الفرن العمود مع التدرج درجة الحرارة التالية: 60 درجة مئوية عقد لمدة 1 دقيقة، منحدر من 30 درجة مئوية دقيقة -1 إلى 200 درجة مئوية، منحدر من 5 درجات مئوية دقيقة -1 إلى 230 درجة مئوية، منحدر من 3 درجات مئوية دقيقة -1 لتصل إلى 250 درجة مئوية، وعقد هذه درجة الحرارة لمدة 5 دقائق.
- تعيين درجة الحرارة للكشف إلى 300 درجة مئوية وتدفق الغاز الاحتياطي (N 2 ) إلى 60 مل دقيقة -1 .
- وضع قارورة تحتوي على عينة (تنظيف وتركز) في رف الاوتوماتيكى وتشغيل الطريقة (وقت تشغيل 23.3 دقيقة). أنا نجكت 2 ميكرولتر من العينة.
- بعد التحليل، وتحديد المركبات المختلفة على اللوني من قبل أوقات الاحتفاظ بهم وتسجيل المناطق الذروة المقابلة.
- مع الأخذ في الاعتبار الاسترداد (R) ومناطق الذروة (A 1 )، وحساب تركيز (C 1 ) لكل أوكب في استخراج باستخدام معادلات منحنيات المعايرة على النحو التالي:
حيث b هو اعتراض في الأصل و هو منحدر معادلة المعايرة،
- مع الأخذ بعين الاعتبار كتلة (م) من تكرار ( أي 10 الكريات، انظر القسم 2.4) وحجم (V) من المستخلص النهائي ( أي 1 مل)، وحساب تركيز (C2) من كل أوكب كثف على الكريات البلاستيكية ( أي نانوغرام من أوكب لكل غرام من البلاستيك بيليه):
/ftp_upload/55531/55531eq3.jpg "/>
5. تحديد نوع البلاستيك
- نقل الكريات في طبق بيتري الزجاج ووضعه في كيس من البلاستيك.
- عقد بيليه واحد مع ملاقط وقطع شريحة من بيليه مع مشرط. كيس من البلاستيك يمنع فقدان الكريات أثناء عملية القطع.
- تنظيف الكريستال الانعكاس الكلي الموهوب (أتر) من أداة فت-إر مع الإيثانول.
- تسجيل طيف الخلفية.
- وضع جزء على الكريستال أتر والمسمار صاحب العينة. يجب أن يكون الجانب الداخلي من قطعة في اتصال مع الكريستال.
- مسح العينة وتسجيل الطيف.
- تحديد البوليمر التي تشكل بيليه البلاستيك بمقارنة الطيف التي تم الحصول عليها إلى مكتبة أطياف. على الرغم من أن أكثر استهلاكا للوقت، ويمكن أن يتم تفسير الأطياف التي تم الحصول عليها يدويا أيضا، ولكن على الأرجح دون الوصول إلى درجة الخصوصية التي تحققت مع بحر مكتبةRCH.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
يتم العثور على الكريات البلاستيكية عادة على طول خطوط المد والجزر العالية والمنخفضة من الشواطئ الرملية ( الشكل 1A ). ويمكنهم أيضا التمسك الأعشاب البحرية التي تقطعت بهم السبل على الشواطئ، بعد عاصفة على سبيل المثال. ويمكن العثور عليها في بعض الأحيان على حصاة والشواطئ الحجرية في مناطق تراكم المواد الذين تقطعت بهم السبل.
حبيبات البلاستيك وعادة ما يمكن التعرف عليها بسهولة من حيث الشكل والحجم واللون كما هو مبين في الشكل 1B (انظر العمودين الأوسط). ويمكن أن تكون مخطئة في حصى صغيرة (انظر العمودين 5 و 6)، أو شظايا بيولوجية صغيرة، أو جزيئات ذات أصول مختلفة (انظر العمودين 1 و 2). مرة واحدة في المختبر، يمكن التخلص منها البنود المشبوهة. في حالة الشك، فمن الممكن للتحقق من فلواتابيليتي من العينات في الماء المقطر المزدوج. الحصى سوف تغرق بينما الكريات البلاستيكية سوف تطفو في الغالب. عينة من الكريات البلاستيكيةالتي تم جمعها على الشاطئ هو مبين في الشكل 1C للتوضيح. ويرد مثال على شكل شاطئ الهوية المراد شغلها في الميدان الشكل 1D .
الشكل 1 : ( A ) الكريات الراتنج البلاستيكية الذين تقطعت بهم السبل على الشاطئ الرملي على خط المد والجزر. ( ب ) الكريات الراتنج البلاستيك مقابل الحصى وغيرها من المواد الذين تقطعت بهم السبل. يتم عرض شظايا من أصول مختلفة في 1 و 2 الأعمدة الثانية من اليسار. يتم محاذاة الجسيمات الحصى الصغيرة في الأعمدة 5 و 6. الكريات البلاستيكية هي في الأعمدة الوسطى. ( c ) عينة من البلاستيك الراتنج الكريات. ( د ) مثال على شكل شاطئ الهوية. يرجى كل إيك هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
وعادة ما تكون الكريات البيضاء والصفراء سائدة على الكريات الأخرى، وخاصة الكريات المصطبغة. ومع ذلك، تقدم بعض مواقع أخذ العينات ملفا شخصيا خاصا، ولذلك ينصح بتصنيف القطع البلاستيكية حسب اللون (التقييم البصري) قبل الاستخراج. يمكن إنشاء إشارة بصرية للمساعدة في فرز الكريات كما هو موضح في الشكل 2 (من اليسار إلى اليمين: أبيض / شفاف، أبيض / مصفر، أصفر / برتقالي، العنبر / البني، والمصطبغة).
الشكل 2 : تصنيف الكريات البلاستيكية حسب اللون، من اليسار إلى اليمين: أبيض / شفاف، أبيض / مصفر، أصفر / برتقالي، العنبر / البني والمصطبغ. فيليز / ftp_upload / 55531 / 55531fig2large.jpg "تارجيت =" _ بلانك "> الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
يمكن أن يحدث أن بعض الكريات تبدأ في الذوبان أثناء عملية الاستخراج. وهكذا، ستلتزم جزيئات الرمل الكوارتز على سطحها بعد الاستخراج. على سبيل المثال، في الشكل 3A ، بيليه معزولة على يسار طبق بتري له جزيئات الرمل التمسك على سطحه بسبب ذوبان. وغالبا ما يحدث ذلك مع البوليمرات الإيثيلين / فينيل أسيتات بسبب انخفاض درجة انصهارها مقارنة مع البوليمرات البلاستيكية الأخرى مثل بي و ب. بشكل استثنائي، يمكن أن تكون عملية ذوبان شديدة جدا وسوف تظهر مستخلص حليبي ( الشكل 3B ). في هذه الحالة، ينصح بتجاهل العينة مباشرة بعد الاستخراج. هذا المستخرج سوف تسد مادة ماصة من خرطوشة سب.
فيجيمج "سرك =" / فيليز / ftp_upload / 55531 / 55531fig3.jpg "/>
الشكل 3 : ( A ) بيليه معزولة على يسار طبق بتري له جزيئات الرمل التمسك على سطحه بسبب ذوبان. ( ب ) استخراج مع كسر البوليمر أسفل.عملية الذوبان يمكن أن تجعل استخراج لتظهر حليبي. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
كنهج أول، تم إعداد الكريات البكر ارتفعت من أجل تحسين الخطوة استخراج وتقييم التكرار لها. كما يمكن أن يرى من الشكل 4A ، تم استخراج جميع 11 أوكبس تطبيق بروتوكول وصفها. وبالإضافة إلى ذلك، يوضح الشكل 4B نتيجة تحليل أوكبس المستخرجة من الكريات عينات على الشاطئ في ساحل البحر الادرياتيكي. أنافي هذه الحالة، تم الكشف عن 8 من مراكز الرعاية الصحية الخارجية من أصل 11. ويستند تحديد ذروة الكروماتوغرافي على أوقات الاحتفاظ التي تم الحصول عليها من حقن أوكبس الحلول القياسية الفردية. ويقبل الانحراف عن وقت الاحتفاظ الذروة القياسي البالغ 0،1٪ كحد أقصى. ويستند حساب تركيزات أوكبس على تحليل الحلول القياسية. يجب تحديد معادلات المعايرة والاسترداد من سب وخطوات التركيز لكل مركب درس قبل تحليل العينة ( الجدول 1 ).
الشكل (4) : ( A ) اللوني من أوكب المستخرجة من حبيبات بي العذراء ارتفعت. ( ب ) اللوني من أوكب المستخرجة من الكريات عينات على الساحل الأدرياتيكي. الرجاء الضغط هنالعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
| مجمعات سكنية | تر (دقيقة) | معايرة منحنى المعايرة | R2 | التعافي (٪) |
| وHCH- | 9.25 | y = 1836x - 315 | 0.9992 | 99 |
| ز-HCH | 9.92 | Y = 2055x - 158 | 0.9996 | 96 |
| ب-HCH | 10.45 | Y = 772x + 58 | 0.9993 | 78 |
| 24-DDE | 13.90 | y = 2611x + 262 | 0.9999 | 76 |
| إندوسولفان الأول | 14.50 | y = 2015x + 280 | 0.9999 | 74 |
| 44-DDE | 15.16 | y = 3942x - 427 | 0.9988 | 82 |
| 24-DDD | 15.52 | y = 1822x + 157 | 0.9999 | 94 |
| 24-DDT | 16.64 | y = 962x - 93 | 0.9965 | 75 |
| 44-DDD | 17.11 | y = 2617x + 44 | 0.9992 | 86 |
| إندوسولفان إي | 17.30 | y = 2212x + 123 | 0.9995 | 102 |
| 44-DDT | 18.32 | y = 725x - 80 | 0.9955 | 96 |
الجدول 1: مثال على نتائج المعايرة والانتعاش التي تم الحصول عليها ل 11 أوكب مدروسة.
يتم تحديد تركيز ممثل لكل موقع أخذ العينات من خلال تحليل ما لا يقل عن 3 مكررات من 10 الكريات وأخذ القيمة المتوسطة. هذا الأخير هو المفضلإلى متوسط القيمة بسبب تشتت النتائج 4 . ويبين الشكل 5 مثالا على النتائج استنادا إلى 5 مكررات.
الشكل 5 : تركيز متوسط من أوكب المستخرجة من الكريات عينات على الساحل الأدرياتيكي. وتظهر البيانات مثالا على النتائج استنادا إلى 5 مكررات. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
ويتم التحليل الكيميائي للبلاستيك على مطياف أتر-فت-إر. يتم تنفيذ القياس على الجانب الداخلي من شريحة بيليه. وتغطي القطع البلاستيكية من قبل الأغشية الحيوية و / أو طبقة ملتصقة (ق)، والتي يمكن أن تتداخل في الأشعة تحت الحمراءأطياف العينة. وبالتالي، فإن قطع الكريات يسمح بتحديد أسهل للبوليمر من معالجة العناصر غير المغطاة، لأن الكريستال أتر في اتصال مع المواد الأقل تلوثا. وتظهر نتائج تحليل التركيب الكيميائي بيليه غير مصقول في الشكل 6A . تم تحديد هذا البند على أنه مطاط مع احتمال حوالي 66٪ في الأعلى. الشكل 6B يعرض النتائج التي تم الحصول عليها من شريحة من نفس بيليه، والتي تبين في نهاية المطاف أن تكون مصنوعة من بي مع احتمال 99٪. تم إجراء القياس الثاني على الجانب الداخلي للجزء.
الشكل 6 : ( أ ) طيف فت-إر من بيليه خياطة وأفضل النتائج ضرب من مكتبة الأطياف. ( B ) فت-إر سبيكتروم من شريحة بيليه وأفضل النتائج ضرب من مكتبة الأطياف. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
بي، كما هو محدد في الشكل 7A ، هو نوع البوليمر الأكثر شيوعا وجدت في الكريات البلاستيكية، تليها ب ( الشكل 7B ). الإيثيلين / فينيل خلات البوليمرات هو 3 أردي نوع البلاستيك الأكثر شيوعا عادة ما تحدد ( الشكل 7C ). الكريات المصنوعة من بس يمكن أيضا أن تكون موجودة في بعض الأحيان ( الشكل 7D ). ويرد في الجدول 2 مثال على تعريف نوع البلاستيك لتكرار 10 حبيبات. كما لوحظ، فإن العينة تتكون من 70٪ من قبل بي.
<بر /> الشكل 7 : الطيف فت-إر وأفضل النتائج ضرب بيليه التي حددت ( A ) بي (99.0٪)؛ ( ب ) ب (98.9٪)؛ ( ج ) كوبوليمر الإيثيلين / فينيل أسيتات (97.0٪)؛ و ( D ) بس (99.6٪). الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
| اسم العينة | نقاط البحث | البحث أفضل ضرب | البحث أفضل وصف هيت |
| عينة 1-1 | 0.990764 | P01034 | P1034.SP تأثير مقاومة أومو بوليثيلين رود |
| عينة 1-2 | 0.992768 | P00508 | P0508.SP بوليثيلين، من = 1100، 9002-88-4 |
| عينة 1-3 | P01037 | P1037.SP مقاوم للرطوبة البولي إثيلين المنخفض الكثافة بوليثيلين رود | |
| عينة 1-4 | 0.956303 | P00561 | P0561.SP بوليستيرين، مونوكاربوكسي إنهيكل، مو = 200000، 9003-53-6 |
| عينة 1-5 | 0.988493 | P00147 | P0147.SP إثيلين / فينيل أسيتات كوبوليمر، 18٪ فا بي وت.، 24937-78-8 |
| عينة 1-6 | 0.990185 | P01046 | P1046.SP جامدة هدب بوليثيلين رود |
| عينة 1-7 | 0.988167 | P01034 | P1034.SP تأثير مقاومة أومو بوليثيلين رود |
| عينة 1-8 | 0.969821 | P00546 | P0546.SP بوليبروبيلين، إيسوتاكتيك، تغ = -26، 9003-07-0 |
| عينة 1-9 | 0.991779 | P01036 | P1036.SP قضبان من البولي أمثيلين |
| عينة 1-10 0.988388 | P01046 | P1046.SP جامدة هدب بوليثيلين رود |
الجدول 2: نتائج تحديد البوليمر لمجموعة من 10 الكريات.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
وقد اعتمدت معظم الدراسات التي تركز على الملوثات العضوية المرتبطة الكريات البلاستيكية على أساليب استخراج الكلاسيكية من المواد الكيميائية كثف. جهاز سوكسليت هو أكثر التقنيات استخداما على نطاق واسع مع فترات استخلاص نموذجية تتراوح من 12 إلى 24 ساعة ومع استهلاك عالي من المذيبات العضوية ( أي من 100 إلى 250 مل لكل استخلاص) 23 . تتطلب عمليات الاستخلاص بالقطع فترة اتصال طويلة بين العينة والمذيب العضوي (على سبيل المثال، 6 أيام) 4 ويمكن تسريعها بإضافة خطوة أولتراسونيكاتيون. في المقابل، استخراج السوائل المضغوط، كما هو موضح في هذه الدراسة، هو وسيلة فعالة لاستخراج أناليتس بسرعة من المصفوفات الصلبة أو شبه الصلبة تحت الضغط العالي ودرجة الحرارة باستخدام كمية مخفضة من المذيبات (على سبيل المثال، 40 مل). على الرغم من أنه يستخدم عادة كبديل لطريقة سوكسليت، نادرا ما تم استخدام هذه التقنية في مجال اللدائن الدقيقة"كريف"> 14. واحدة من القيود المرتبطة بتطبيق هذه التقنية لتحليل شظايا البلاستيك هو ذوبان البوليمرات المحتملة، والتي هي ثم من الصعب إزالة من المستخلص وغالبا ما تجعل تحليلها مستحيلا. لا تواجه هذه المسألة عند استخراج المواد العضوية من المصفوفات متجانسة. في هذه الحالة، يتم تعيين درجة حرارة الاستخراج وفقا لنوع البوليمر من عينة من البلاستيك. تتكون عينات اللدائن الدقيقة من خليط غير متجانس من العناصر المصنوعة من أنواع بوليمرية مختلفة في حالات انحلال مختلفة، والتي غالبا ما تسبب الذوبان المبكر للبلاستيك. وبالتالي، يجب أن تكون درجة الحرارة في الخلية ب الأمثل للسماح لاستخراج أوكبس بغض النظر عن نوع البوليمر ودولة تدهورها. في هذا العمل، تم العثور على درجة حرارة 60 درجة مئوية جنبا إلى جنب مع فترة طويلة من الزمن ليكون حلا وسطا جيدا بين كفاءة الاستخراج والقضايا ذوبان. فقط البوليمرات المطاطية والإيثيلين / أسيتات الفينيل والمطاط عرضة للذوبان، بوعادة ما تكون هذه البوليمرات موجودة في مثل هذه الكميات المنخفضة في العينة أنها لا تؤثر على الاستخراج.
في العديد من الدراسات 4 ، 8 ، 13 ، 16 ، 18 ، يتم تحليل فقط الكريات بي الذين تتراوح أعمارهم بين ل كثف المحتوى الملوثات العضوية. ونظرا لخصائصها السطحية، فإن هذه الفئة من البوليمرات لديها تقارب أكبر لامتصاص الملوثات البيئية من الأنواع الأخرى من الكريات، وهي الطبقة السالبة للبوليمرات 4 . ومع ذلك، بعض مواقع أخذ العينات تقدم لمحة خاصة مع وفرة من الكريات أقل عمر ( أي أبيض أو شفاف) و / أو مجموعة متنوعة أعلى في أنواع البوليمر من وجدت عادة. وهكذا، يقترح نهج مختلف هنا لتجنب احتمال المبالغة في مستويات الملوثات العضوية. ويستند تصنيف الكريات البلاستيكية على الفئران اللونلها من على نوع البوليمر. وعلاوة على ذلك، لا يزال من الممكن تحديد نوع من البلاستيك بعد خطوة الاستخراج. من خلال المضي قدما في هذا النظام، يتم تقليل خطر تلوث العينات خلال التحليل الكيميائي البوليمر ويمكن تسهيل عملية تحديد البلاستيك عن طريق قطع الكريات، كما هو موضح سابقا. إن استخلاص الملوثات العضوية من العناصر المخطئة في الكريات البلاستيكية سيكون القيد الرئيسي لهذه المنهجية. ومع ذلك، يمكن التأكيد على أنه لا يظهر سوى جزء ضئيل ( أي أقل من 0.5٪) من الكريات عينات لا تكون مصنوعة من البوليمر البلاستيك بعد التحليل الكيميائي.
وقد تم تطوير هذا البروتوكول لتحديد أوكب كثف على الكريات البلاستيكية. ومع ذلك، يمكن تكييفها للكشف عن الفئات الأخرى من الملوثات العضوية التي توجد عادة المرتبطة باللدائن الدقيقة مثل ثنائي الفينيل متعدد الكلور أو الهيدروكربونات العطرية متعددة الحلقات (باهس)، فضلا عن بلالرقائق أو المواد المضافة. ولتحقيق هذه الغاية، ينبغي تحسين خطوة التنظيف إلى أقصى حد عن طريق إزالة المادة الماصة مع عدة مذيبات متعاقبة لأقطاب مختلفة 4 و 10 . إلى حد ما، يمكن أيضا تعديل تركيبة المذيب استخراج، بإضافة جزء من ثنائي كلورو ميثان و / أو الأسيتون إلى الهكسان، على سبيل المثال. وأخيرا، يجب تطوير أساليب تحليلية جديدة خصيصا للمركبات التي يتعين التحقيق فيها. على الرغم من الغاز اللوني الكترون القبض على كاشف (غ-إسد) هو تقنية حساسة، انتقائيتها للمركبات الهالوجينية يحد من تطبيقها على فئات أخرى من المركبات. وعلاوة على ذلك، لا يستند تحديد الذروة إلا على أوقات الاحتفاظ، والتي يمكن أن تؤدي إلى سوء تفسير الكروماتوغرام. لخفض خطر سوء التعرف، يتم قبول الانحراف عن أوقات الاحتفاظ حل القياسية من 0.1٪ فقط. اللوني الغاز مجهزة مطياف الكتلة (غ-مس) هو تكنيكو المناسبةه للتحقق من تحديد الذروة. ويمكن تشغيله بالتوازي مع غ-إسد أو استخدامها كطريقة تحليل واحد إذا حساسية لها يسمح الكمي للتركيزات أثر.
وتركز هذه المنهجية على الكريات الراتنج، ولكن يمكن أن يكون الأمثل إلى أقصى حد لتحليل فئات أخرى ميكروفلاستيك. ومع ذلك، فإن فرز الشظايا البلاستيكية من العينات البيئية (على سبيل المثال، سطح البحر، والرواسب، أو الكائنات الحية) هو أكثر تحديا من واحد من الكريات والتعرف البصري غير مناسب. وبالتالي، ينبغي إجراء التحليل الكيميائي للبوليمرات قبل الاستخراج. مع العلم أن الأحجام الدقيقة تتراوح من 5 ملم إلى بضع مئات من ميكرون (على سبيل المثال، 300 ميكرون)، وينبغي إجراء التحليل على مطياف أتر-فتير الصغير، والتي يتم تكييفها لقياسات الجسيمات الصغيرة 19،20. وعلاوة على ذلك، والفصل بين اللدائن الدقيقة من العينات البيئية لنا( مثل الإيثانول) و / أو الأحماض أو القواعد القوية ( مثل الهضم الحمضي للأنسجة)، والتي يمكن أن تمتص و / أو تتحلل الملوثات العضوية المرتبطة بالجزيئات. وبالتالي، ينبغي وضع تقنيات فصل بديلة، تحافظ على المواد الكيميائية. وبالإضافة إلى ذلك، ينبغي التأكيد على أن كمية اللدائن الدقيقة المكتشفة في سطح البحر والكائنات الحية غالبا ما تكون غير كافية لإجراء تحليلات كمية للمركبات العضوية. يتم تكييف هذا البروتوكول لمعالجة شظايا بلاستيكية مرئية للعين المجردة وجعلت من البوليمرات الصلبة. ومن غير المرجح أن تعمل على مواد لينة أو البنود الصغيرة للغاية ( أي <1 ملم). وبالتالي، ينبغي التخلص من فئات ميكروبلاستيك من الأفلام، خيوط، والرغاوي من العينات. ومع ذلك، يمكن تحليل قطع صغيرة من اللدائن الدقيقة لمحتواها من الملوثات العضوية ونوع البوليمر. في هذه الحالة، ينصح لقطع العناصر في جزيئات صغيرة من عدد قليلمم قبل استخراج أو تحليل فت-إر.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
الكتاب ليس لديهم ما يكشف.
Acknowledgments
تم تمويل هذا العمل من قبل برنامج التعاون الأدرياتيكي عبر الحدود 2007-2013، ضمن مشروع ديفيشجير (1 ° ستر / 00010).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Alpha–HCH | Dr. Ehrenstorfer, Augsburg, Germany | DRE-C14071000 | H301, H351, H400, H410, H312 |
| Beta–HCH | Fluka, Sigma-Aldrich, St. Louis, USA | 33376-100MG | H301, H312, H351, H410 |
| Lindane | Fluka, Sigma-Aldrich, St. Louis, USA | 45548-250MG | H301, H312, H332, H362, H410 |
| Endosufan I | Supleco, Sigma-Aldrich Bellefonte, PA, USA | 48576-25MG | H301, H410 |
| Endosulfan II | Supleco, Sigma-Aldrich, Bellefonte, PA, USA | 48578-25MG | H301, H410 |
| 2,4'–DDD | Fluka, Sigma-Aldrich, St. Louis, USA | 35485-250MG | H351 |
| 4,4’–DDD | Dr. Ehrenstorfer, Augsburg, Germany | DRE-C12031000 | H301, H351, H400, H410, H312 |
| 2,4’–DDE | Dr. Ehrenstorfer, Augsburg, Germany | DRE-C12040000 | H351, H400, H410, H302 |
| 4,4’-DDE | Fluka , Sigma-Aldrich, St. Louis, USA | 35487-250MG | H302, H351, H410 |
| 2,4’–DDT | Dr. Ehrenstorfer, Augsburg, Germany | DRE-C12081000 | H301, H311, H330, H351, H400, H410 |
| 4,4’–DDT | National Institute of Standards and Technology, Gaithersburg, USA | RM8469-4,4'-DDT | H301, H311, H351, H372, H410 |
| n-Hexane | VWR International GmbH, Graumanngasse, Viena, Austria | 83992.320 | H225, H315, H336, H373, H304, H411 |
| Acetone for HPLC | J.T.Baker, Avantor performance Materials B.V., Teugseweg, Netherlands | 8142 | H225, H319, H 336 |
| FL-PR Florisil 1000mg/6mL | Phenomenex, Torrance, CA, USA | 8B-S013-JCH | |
| Fat free quartz sand 0.3-0.9 mm | Buchi, Flawil, Switzerland | 37689 | |
| Gas chromatograph Hawlett Packard HP 6890 Series gas chromatograph with GERSTEL MultiPurpose Sampler MPS 2XL with ECD and FID detector | Agilent technologies, Santa Clara USA | ||
| Presure fluid extractor, Speed Extractor E-916 | Buchi, Flawil, Switzerland | ||
| Solid phase extractor | Supleco, Sigma-Aldrich Bellefonte, PA, USA | ||
| Concentrator miVac DUO | Genevac SP Scientific, Suffolk UK | ||
| GC capillary column Zebron ZB-XLB (30 x 0.25 x 0.25) | Phenomenex, Torrance, CA, USA | 122-1232 | |
| ATR FT-IR Spectrometer, Spectrum-Two | Perkin Elmer |
References
- Plastic Europe. Plastics - the Facts 2015. An analysis of European plastics production, demand and waste data. , Available on the website: http://www.plasticseurope.org (2017).
- Wang, J., Tan, Z., Peng, J., Qiu, Q., Li, M. The behaviors of microplastics in the marine environment. Mar Environ Res. 113, 7-17 (2016).
- UNEP. Marine plastic debris and microplastics - Global lessons and research to inspire action and guide policy change. , United Nations Environment Programme. Nairobi. Available on the website: http://www.unep.org (2016).
- Ogata, Y., et al. International Pellet Watch: Global monitoring of persistent organic pollutants (POPs) in coastal waters. 1. Initial phase data on PCBs, DDTs, and HCHs. Mar Pollut Bull. 58 (10), 1437-1446 (2009).
- Andrady, A. L. Microplastics in the marine environment. Mar Pollut Bull. 62 (8), 1596-1605 (2011).
- Antunes, J. C., Frias, J. G. L., Micaelo, A. C., Sobral, P. Resin pellets from beaches of the Portuguese coast and adsorbed persistent organic pollutants. Estuarine Coastal Shelf Sci. 130, 62-69 (2013).
- Cole, M., Lindeque, P., Halsband, C., Galloway, T. S. Microplastics as contaminants in the marine environment: A review. Mar Pollut Bull. 62 (12), 2588-2597 (2011).
- Takada, H. Call for pellets! International Pellet Watch Global Monitoring of POPs using beached plastic resin pellets. Mar Pollut Bull. 52 (12), 1547-1548 (2006).
- Teuten, E. L. Transport and release of chemicals from plastics to the environment and to wildlife. Phil Trans R Soc B. 364, 2027-2045 (2009).
- Heskett, M., et al. Measurement of persistent organic pollutants (POPs) in plastic resin pellets from remote islands: Toward establishment of background concentrations for International Pellet Watch. Mar Pollut Bull. 64 (2), 445-448 (2012).
- Besseling, E., Wegner, A., Foekema, E., Van Den Heuvel-Greve, M., Koelmans, A. A. Effects of microplastic on fitness and PCB bioaccumulation by the lugworm Arenicola marina (L.). Environ Sci Technol. 47 (1), 593-600 (2013).
- Rochman, C. M., Hoh, E., Kurobe, T. The SJ Ingested plastic transfers hazardous chemicals to fish and induces hepatic stress. Sci Rep. 3, 3263 (2013).
- Endo, S., et al. Concentration of polychlorinated biphenyls (PCBs) in beached resin pellets: Variability among individual particles and regional differences. Mar Pollut Bull. 50 (10), 1103-1114 (2005).
- Frias, J. P. G. L., Sobral, P., Ferreira, A. M. Organic pollutants in microplastics from two beaches of the Portuguese coast. Mar Pollut Bull. 60 (11), 1988-1992 (2010).
- Karapanagioti, H. K., Endo, S., Ogata, Y., Takada, H. Diffuse pollution by persistent organic pollutants as measured in plastic pellets sampled from various beaches in Greece. Mar Pollut Bull. 62 (2), 312-317 (2011).
- Mizukawa, K., et al. Monitoring of a wide range of organic micropollutants on the Portuguese coast using plastic resin pellets. Mar Pollut Bull. 70 (1-2), 296-302 (2013).
- Gauquie, J., Devriese, L., Robbens, J., De Witte, B. A qualitative screening and quantitative measurement of organic contaminants on different types of marine plastic debris. Chemosphere. 138, 348-356 (2015).
- Yeo, B. G., et al. POPs monitoring in Australia and New-Zealand using plastic resin pellets, and International Pellet Watch as a tool for education and raising public awareness on plastic debris and POPs. Mar Pollut Bull. 101 (1), 137-145 (2015).
- Kovač Viršek, M., Palatinus, A., Koren, Š, Peterlin, M., Horvat, P., Kržan, A. Protocol for microplastics sampling on the sea surface and sample analysis. J Vis Exp. (118), e55161 (2016).
- Löder, M. G. J., Kuczera, M., Mintenig, S., Lorenz, C., Gerdts, G. Focal plane array detector- based micro-Fourier-transform infrared imaging for the analysis of microplastics in environmental samples. Environ Chem. 12 (5), 563-581 (2015).
- Stockholm Convention on Persistent Organic Pollutants (POPs) as amended in 2009 . , available on the website: http://chm.pops.int/Home/tabid/2121/Default.aspx (2017).
- EPA - Environmental protection Agency. Method 3620C: Florisil Cleanup, part of Test Methods for Evaluating Solid Waste, Physical/Chemical Methods (2014). , available on the website: https://www.epa.gov (2017).
- Hirai, H., et al. Organic micropollutants in marine plastics debris from the open ocean and remote and urban beaches. Mar Pollut Bull. 62 (8), 1683-1692 (2011).
