Summary
Ein kompaktes Puls-Laser-Dioden-basiertes photoakustisches Tomographie-System (PLD-PAT) für die Hochgeschwindigkeits- In-vivo- Gehirn-Bildgebung bei kleinen Tieren wird gezeigt.
Abstract
In vivo spielt die Kleinbild-Bildgebung eine wichtige Rolle in präklinischen Studien. Photoakustische Tomographie (PAT) ist eine aufkommende Hybrid-Imaging-Modalität, die ein großes Potenzial für präklinische und klinische Anwendungen zeigt. Konventionelle optische parametrische Oszillator-basierte PAT (OPO-PAT) -Systeme sind sperrig und teuer und können keine Hochgeschwindigkeits-Bildgebung bereitstellen. In letzter Zeit wurden Pulslaserdioden (PLDs) als alternative Anregungsquelle für PAT erfolgreich nachgewiesen. Die Puls-Laserdiode PAT (PLD-PAT) wurde erfolgreich für die Hochgeschwindigkeits-Bildgebung auf photoakustischen Phantomen und biologischen Geweben demonstriert. Diese Arbeit liefert ein visualisiertes experimentelles Protokoll für die in vivo- Gehirn-Bildgebung mit PLD-PAT. Das Protokoll beinhaltet die kompakte PLD-PAT-Systemkonfiguration und deren Beschreibung, Tierpräparation für die Gehirn-Bildgebung und ein typisches experimentelles Verfahren für die 2D-Querschnittsrücken-Gehirn-Bildgebung. Das PLD-PAT-System ist kompakt und kostengünstigFective und kann High-Speed, qualitativ hochwertige Bildgebung. Gehirnbilder, die in vivo bei verschiedenen Scan-Geschwindigkeiten gesammelt wurden, werden präsentiert.
Introduction
Photoakustische Tomographie (PAT) ist eine hybride bildgebende Methode, die sowohl in der klinischen als auch in der präklinischen Studie 1 , 2 , 3 , 4 , 5 viele Anwendungen hat. In PAT bestrahlen Nanosekunden-Laserpulse biologisches Gewebe. Die Absorption von einfallendem Licht durch die Gewebe-Chromophore führt zu einem lokalen Temperaturanstieg, der dann Druckwellen ergibt, die in Form von Schallwellen emittiert werden. Ein Ultraschalldetektor sammelt die photoakustischen Signale an verschiedenen Positionen um die Probe herum. Die photoakustischen (PA) Signale werden unter Verwendung verschiedener Algorithmen (wie z. B. eines Verzögerungs- und Summenalgorithmus) 6 rekonstruiert, um das photoakustische Bild zu erzeugen.
Diese Hybrid-Bildgebungsmodalität bietet eine hochauflösende, tiefgewebte Bildgebung und einen hohen optischen Absorptionskontrast 7 ,Class = "xref"> 8 Vor kurzem wurde in Hühnerbrustgewebe mit Hilfe einer längeren Wellenlänge (~ 1.064 nm) und einem exogenen Kontrastmittel, Phosphorphthalocyanin genannt, eine ~ 12-cm-Bildtiefe 9 erreicht. Diese Tiefenempfindlichkeit ist viel höher als die Tiefenempfindlichkeit anderer optischer Methoden wie konfokale Fluoreszenzmikroskopie, Zwei-Photonen-Fluoreszenzmikroskopie, 10 optische Kohärenztomographie, 11 etc. Mit mehr als einer Wellenlänge kann PAT strukturelle und funktionelle Veränderungen in den Organen nachweisen . Für viele menschliche Krankheiten sind Kleintiermodelle gut etabliert 12 , 13 , 14 , 15 . Für die Bildgebung von kleinen Tieren wurden mehrere Modalitäten nachgewiesen. Aus all diesen Ansätzen hat sich die PA-Bildgebung aufgrund der oben genannten Vorteile sehr schnell bemerkbar gemacht. PAT hat sein Potenzial für die Bildgebung von Blutgefäßen in den Geweben und Organen ( dh Herz, Lunge, Leber, Augen, Milz, Gehirn, Haut, Rückenmark, Niere usw. ) von kleinen Tieren 4 , 16 , 17 , 18 gezeigt . PAT ist eine etablierte Modalität für kleine Tier-Gehirn-Bildgebung. PA-Wellen werden aufgrund der Lichtabsorption durch die Chromophore erzeugt, so dass die Mehrfachwellenlänge PAT die Abbildung der Gesamt-Hämoglobinkonzentration (HbT) und der Sauerstoffsättigung (SO 2 ) 19 , 20 , 21 , 22 ermöglicht . Die Hirnneurovaskuläre Bildgebung wurde mit Hilfe exogener Kontrastmittel 12 , 23 , 24 erreicht . PA-Modalität kann dazu beitragen, ein besseres Verständnis der Gehirn Gesundheit durchBereitstellung von Informationen auf molekularer und genetischer Ebene.
Für die Kleintier-Bildgebung werden Nd: YAG / OPO-Laser weithin als PAT-Anregungsquellen verwendet. Diese Laser liefern ~ 5 ns Nah-Infrarot-Impulse mit Energie (~ 100 mJ am OPO-Ausgangsfenster) bei einer ~ 10-Hz-Wiederholrate 25 . Das mit solchen Lasern ausgestattete PA-System ist kostspielig und sperrig und ermöglicht aufgrund der geringen Wiederholrate der Laserquelle eine Low-Speed-Bildgebung mit Einzelelement-Ultraschallwandlern (UST). Eine typische A-line-Erfassungszeit in solchen PA-Systemen beträgt ~ 5 min pro Querschnitt 25 . Ein Abbildungssystem mit einer so langen Messzeit ist für die Kleintier-Bildgebung nicht ideal, da es schwierig ist, die physiologischen Parameter für die Ganzkörper-Bildgebung, die zeitaufgelöste Funktionsabbildung usw. zu kontrollieren . Durch die Einführung mehrerer Einzelelement-USTs, Array -basierte USTs oder ein Laser mit hoher Wiederholrate, ist es möglich, die Abbildungsgeschwindigkeit von PA zu erhöhenSysteme Mit nur einem Einzelelement UST, um alle PA-Signale um die Probe zu sammeln, wird die Abbildungsgeschwindigkeit des Systems begrenzt. Mehrere Einzelelement-USTs, die in kreisförmiger oder halbkreisförmiger Geometrie angeordnet sind, werden für hochgeschwindigkeits-hochempfindliche bildgebende Verfahren demonstriert. Array-basierte USTs 26 , wie lineare, halbkreisförmige, kreisförmige und volumetrische Arrays, wurden erfolgreich für die Echtzeit-Bildgebung verwendet 1 . Diese Array-basierten USTs erhöhen die Abbildungsgeschwindigkeit und reduzieren die Messempfindlichkeit, aber sie sind teuer. Jedoch ist die Abbildungsgeschwindigkeit von PA-Systemen, die Array-basierte USTs verwenden, immer noch durch die Wiederholungsrate des Lasers begrenzt.
Die gepulste Lasertechnologie wurde entwickelt, um hochauflösende gepulste Laserdioden (PLDs) herzustellen. 7.000 Frames / s B-scan photoacoustic Imaging wurde mit PLDs mit einer klinischen Ultraschallplattform 27 demonstriert. Solche PLDs können die Abbildungsgeschwindigkeit von th verbessernE PAT-System, auch mit Single-Element UST kreisförmigen Scan-Geometrie. Single-Element USTs sind weniger teuer und hochempfindlich, im Gegensatz zu Array-basierten USTs. Im Laufe des letzten Jahrzehnts wurde wenig Forschung über die Verwendung von hochauflösenden PLDs als Anregungsquelle für die PA-Bildgebung berichtet. Für die PA-Abbildung von Phantomen 28 wurde eine faserbasierte Nah-Infrarot-PLD nachgewiesen. Die in vivo- Bildgebung von Blutgefäßen in einer Tiefe von 1 mm unterhalb der menschlichen Haut wurde mit Niedrigenergie-PLDs 29 demonstriert. Es wurde ein PLD-basiertes optisches Auflösungs-Fotoakustikmikroskop (ORPAM) berichtet. Mit PLDs wurde eine 1,5 cm tiefe Bildgebung mit einer Bildrate von 0,43 Hz nachgewiesen. Vor kurzem wurde ein PLD-PAT-System berichtet, das Bilder in so kurz wie ~ 3 s und bei einer ~ 2 cm Bildtiefe im biologischen Gewebe 25 , 31 lieferte. Diese Studie zeigte, dass solch ein kostengünstiges, kompaktes System High-Qua liefern kannLity Bilder, auch bei hohen Geschwindigkeiten. Das PLD-PAT-System kann für hochauflösende (7000 fps) photoakustische Bildgebung, Surf-Blutgefäß-Bildgebung, Fingergelenk-Bildgebung, 2 cm tiefe Gewebe-Bildgebung, Klein-Tier-Gehirn-Bildgebung, etc. verwendet werden. Die Ein-Wellenlänge und Tiefpuls-Energie-Impulse von PLD begrenzen ihre Anwendung auf Multispektral- und Tiefgewebe-Bildgebung. Experimente wurden an kleinen Tieren mit demselben PLD-PAT-System durchgeführt, das für präklinische Anwendungen verwendet wurde. Der Zweck dieser Arbeit ist es, die visualisierte experimentelle Demonstration des PLD-PAT-Systems für die in vivo- 2D-Querschnitts-Gehirn-Bildgebung von kleinen Tieren bereitzustellen.
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Protocol
Alle Tierversuche wurden nach den Richtlinien und Vorschriften durchgeführt, die vom Institutional Animal Care and Use Committee der Nanyang Technological University, Singapur (Tierprotokoll Nr. ARF-SBS / NIE-A0263) genehmigt wurden.
1. Systembeschreibung
- Montieren Sie die PLD in den kreisförmigen Scanner, wie in Abbildung 1a gezeigt . Verbinden Sie die PLD mit der Lasertreibereinheit (LDU).
HINWEIS: Die PLD liefert ~ 136-ns-Impulse bei einer Wellenlänge von ~ 803 nm mit einer maximalen Pulsenergie von ~ 1,42 mJ und einer Wiederholrate bis zu 7 kHz. Die Laserantriebseinheit (LDU) umfasst: einen Temperaturregler, eine variable Stromversorgung, eine Stromversorgung (12 V) und einen Funktionsgenerator; Siehe die Tabelle der Materialien. Die variable Stromversorgung dient zur Steuerung der Laserleistung und der Funktionsgenerator dient zur Änderung der Wiederholrate der PLD. - Schalte den PLD-Laser ein. Setzen Sie die PLD-Wiederholrate auf "7.000" HZ mit dem Funktionsgenerator in der LDU. Erhöhen Sie die Pulsenergie auf 1,42 mJ, indem Sie die Spannung der variablen Stromversorgung auf "3.1" V einstellen.
- Montieren Sie den optischen Diffusor (OD) vor dem PLD-Austrittsfenster, um den Ausgangsstrahl homogen zu machen, wie in Abbildung 1a gezeigt .
HINWEIS: Verwenden Sie einen Diffusor mit einem feinen Korn ( dh 1,500-Korn-Polnisch). - Montieren Sie das fokussierte UST auf dem UST-Halter, so dass es dem Zentrum des Scanbereichs zugewandt ist, wie in Abbildung 1a gezeigt .
HINWEIS: Die Mittenfrequenz des UST beträgt 2,25 MHz und die Brennweite beträgt 1,9 Zoll. - Legen Sie den Ultraschall-Detektor in den Acryl-Tank, wie in Abbildung 1a gezeigt . Füllen Sie den Tank mit Wasser, so dass die UST ist völlig eingetaucht.
HINWEIS: Ein Wassermedium wird verwendet, um das photoakustische Signal vom Gehirn (Probe) an das UST zu koppeln. Ein Acryl-Wasser-Tank (WT, siehe die Tabelle der Materialien) war benutzerdefiniert-designed für kleine Tier-Bildgebung. Der Schaltplan des Wassertankentwurfs ist in Abbildung 1b dargestellt . - Überprüfen Sie das PA-Signal aus der Probe mit einer Pulser / Empfänger-Einheit (PRU, siehe Tabelle der Materialien ).
HINWEIS: Diese Signale wurden durch eine 12-Bit-DAQ-Karte (siehe Tabelle der Materialien ) mit einer 100 MS / s-Abtastrate digitalisiert und auf einem Computer gespeichert.
2. Tiervorbereitung für Rattenhirnbildgebung
HINWEIS: Das oben beschriebene PLD-PAT-System wurde für die Bildgebung von kleinen Tierhirn demonstriert. Für diese Experimente wurden gesunde weibliche Ratten (siehe Tabelle der Materialien ) verwendet.
- Anästhesieren des Tieres durch intraperitoneale Injektion eines Cocktails aus 2 ml Ketamin, 1 ml Xylazin und 1 ml Kochsalzlösung (Dosierung von 0,2 ml / 100 g).
- Entfernen Sie das Fell auf der Kopfhaut des Tieres mit einem Haarschneider. Tragen Sie sanft Haare Entfernung Creme auf die rasierteBereich zur weiteren Erschöpfung des Fells
- Entfernen Sie die aufgetragene Creme nach 4-5 min mit einem Wattestäbchen.
- Tragen Sie künstliche Tränensalbe auf die Augen des Tieres, um die Trockenheit durch Anästhesie und Laserbeleuchtung zu verhindern.
- Montieren Sie den maßgeschneiderten Tierhalter (siehe die Tabelle der Materialien ), der mit einer Atemmaske (siehe Tabelle der Materialien ) auf einer Laborbuchse ausgestattet ist.
- Legen Sie das Tier in die anfällige Position auf den Halter. Sichern Sie es mit dem chirurgischen Band an den Halter, um eine Bewegung des Tieres während der Bildgebung zu vermeiden.
- Stellen Sie sicher, dass die Atemmaske die Nase und den Mund der Ratte bedeckt, um inhalierte Anästhesie zu liefern.
3. In vivo Ratte Brain Imaging
- Verbinden Sie die Atemmaske mit der Narkosemaschine. Schalten Sie die Anästhesie-Maschine ein und stellen Sie sie ein, um 1,0 l / min Sauerstoff mit 0,75% Isofluran zu liefern.
- Klemmen Sie das Pulsoximeter dazuS Schwanz zur Überwachung der physiologischen Zustand des Tieres.
- Tragen Sie eine Schicht aus farblosem Ultraschallgel auf die Kopfhaut der Ratte auf. Stellen Sie die Position des Labors in die Mitte des Scanners ein. Die Atemmaske ist auf das Bildgebungsfenster abgestimmt. 10% des handelsüblichen Nasenkonus geschnitten und dann mit einem Handschuh verbunden.
- Stellen Sie die Höhe der Laborbuchse manuell ein, so dass die Abbildungsebene im Fokus des UST steht.
- Setzen Sie die Parameter in der Datenerfassungssoftware (siehe Tabelle der Materialien) nach Bedarf ein. Führen Sie das Datenerfassungs-Softwareprogramm aus, um die Erfassung zu starten ( dh die Bildgebung).
HINWEIS: Das Programm wird verwendet, um die UST zu drehen und A-line PA-Signale zu sammeln. Die gesammelten A-Linien werden auf dem Computer gespeichert. - Beobachten Sie das Tier während der gesamten Bildgebung und fahren Sie mit der PAT-Rekonstruktion fort, nachdem die Bildgebung abgeschlossen ist.
- Nachdem die Datenerfassung vorbei ist,Rekonstruieren Sie das Querschnitts-Hirnbild von den A-Linien mit dem Rekonstruktionssoftware-Programm.
- Schalten Sie das Anästhesiesystem aus, entfernen Sie das Tier von der Bühne, bringen Sie es in den Käfig zurück und überwachen Sie es, bis es das Bewusstsein wiedererlangt.
HINWEIS: Wenn zum Beispiel der UST für 5 s gedreht wird, liefert der PLD 35.000 (= 5 x 7.000) Impulse und der UST sammelt 35.000 A-Linien. Die 35.000 A-Linien werden durch Mittelwertbildung über 70 Signale auf 500 reduziert (nach Mittelung von A-Linien = 35.000 / 70 = 500). Abbildung 1c zeigt die Beleuchtung der Laserpulse und der A-Zeilen-Sammlung. Es sollte ein Rekonstruktionsprogramm verwendet werden, das auf dem Verzögerungs-und-Summen-Rückprojektionsalgorithmus basiert.
Abbildung 1: Schematik des PLD-PAT-Systems. ( A ) Schema des PLD-PAT. PLD: gepulste Laserdiode, CSP: circuLDU: Lasertreiber-Einheit, PRU: Pulser / Empfänger-Einheit, UST: Ultraschall-Messumformer, WT: Wassertank, PF: Polymerfolie und DAQ: Datenerfassungskarte. ( B ) Schematik des Wassertanks, Draufsicht (1) und Querschnittsansicht (2) für in vivo kleine Tierhirnbildgebung. A: metrisch Schraube, B: Acryl Ringplatte, C: Silikon "O" Ring, D: 100 μm dicke, transparente Polyethylenabdeckung. Der Tank hatte an seinem Boden ein Loch von 9 cm Durchmesser und wurde mit einer ultraschall- und optisch transparenten 100 μm dicken Polyethylenmembran versiegelt. ( C ) Schema der Beleuchtung von Laserpulsen aus der PLD und A-Linie, Sammlung in einer 5 s kontinuierlichen Scan-Zeit. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Figur zu sehen.
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Representative Results
Die in vivo- Gehirn-Imaging-Ergebnisse, die die Fähigkeiten des beschriebenen PLD-PAT-Systems zeigen, werden in diesem Abschnitt gezeigt. Um die High-Speed-Imaging-Fähigkeiten des PLD-PAT-Systems zu demonstrieren, wurde die in vivo- Gehirn-Bildgebung von zwei verschiedenen gesunden Ratten durchgeführt. Fig. 2 zeigt die Gehirnbilder einer weiblichen Ratte (93 g) bei verschiedenen Abtastgeschwindigkeiten. Abbildung 2a und b zeigen die Fotografien des Rattenhirns vor und nach dem Entfernen der Kopfhaut über dem Gehirnbereich. Die PAT-Bildgebung erfolgte nicht-invasiv ( dh mit der Haut und dem Schädel intakt). PA-Signale aus dem Querschnitt des Gehirns wurden durch zirkuläres Drehen des UST für 5 s, 10 s, 20 s und 30 s gesammelt. Abbildung 2c -f zeigt die PAT-rekonstruierten Querschnittsbilder des Rattenhirns, die in 5 s, 10 s, 20 s und 30 s Scan-Zeiten erhalten wurden. In all diesen Hirnbildern, die Quer-Sinus (TS), überlegener Sagittal-Sinus (SS) und Zerebralvenen (CV), einschließlich Äste, sind deutlich sichtbar. Diese Merkmale sind auf dem in Abbildung 2f dargestellten Bild angegeben . Diese Ergebnisse versprechen, dass das System auch bei hohen Scan-Geschwindigkeiten qualitativ hochwertige In-vivo- Bilder bereitstellen kann.
Abbildung 2: Nicht-invasive In-vivo- PLD-PAT-Bilder. Nicht-invasive PLD-PAT-Bilder der Vaskulatur in einem 93 g weiblichen Rattenhirn. Foto des Rattenhirns vor ( a ) und nach ( b ) Entfernen der Kopfhaut. In vivo- Gehirnbilder zu verschiedenen Scan-Zeiten: ( c ) 5 s, ( d ) 10 s, ( e ) 20 s und ( f ) 30 s. SS: Sagittal Sinus, TS: Quer Sinus und CV: Zerebrale Venen. Les / ftp_upload / 55811 / 55811fig2large.jpg "target =" _ blank "> Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Figur zu sehen.
Ein ähnliches Bildgebungsexperiment wurde an einer anderen weiblichen Ratte (95 g) durchgeführt, und entsprechende Hirnbilder, die in 5 s, 10 s, 20 s und 30 s erhalten wurden, sind in 3 gezeigt .
Abbildung 3 : Nicht-invasive In-vivo- PLD-PAT-Bilder. Nicht-invasive PLD-PAT-Bilder der Vaskulatur in einem 95 g weiblichen Rattenhirn. Foto des Rattenhirns vor ( a ) und nach ( b ) Entfernen der Kopfhaut. In vivo- Gehirnbilder zu verschiedenen Scan-Zeiten: ( c ) 5 s, ( d ) 10 s, ( e ) 20 s und ( f ) 30 s.Rce.jove.com/files/ftp_upload/55811/55811fig3large.jpg "target =" _ blank "> Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Figur zu sehen.
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Discussion
Diese Arbeit stellt ein Protokoll für die Durchführung in vivo Gehirn-Bildgebung auf Ratten mit einem PLD-PAT-System. Das Protokoll enthält eine detaillierte Beschreibung des Bildgebungssystems und dessen Ausrichtung sowie eine Darstellung der Gehirnabbildung an Ratten. Die vorhandenen OPO-basierten PAT-Systeme sind teuer und sperrig und können in 5-10 min ein Querschnittsbild liefern. Das PLD-PAT-System ist kompakt, portabel und kostengünstig und kann in 3 s qualitativ hochwertige Bilder liefern. Die Leistung des Systems wurde zuvor in Phantomen untersucht und mit dem herkömmlichen PAT-System 25 verglichen. Hier wurde die gleiche PLD-PAT für die schnelle In-vivo- Gehirn-Bildgebung nachgewiesen. Das Ergebnis zeigt, dass das System auch in 5 s qualitativ hochwertige In-vivo- Bilder bereitstellen kann.
Während es mehrere Vorteile gibt, hat das PLD-PAT-System mehrere Nachteile. Die PLD, die in dieser Studie verwendet wird, liefert Impulse bei einer einzigen Wellenlänge, so dass sie nicht func bieten kannDie eine Mehrwellenlängenbeleuchtung erfordert. Für die funktionelle Bildgebung ist eine PLD mit mehrwellenlängenbeleuchtungsfähigkeiten erforderlich. Die niederenergetischen PLD-Impulse begrenzen die Bildtiefe. Unter Verwendung eines exogenen Kontrastmittels ist es jedoch möglich, die Abbildungstiefe des PLD-PAT-Systems zu verbessern.
Normalerweise ist der PLD-Laserstrahl nicht gleichmäßig, so dass ein geeigneter optischer Diffusor vor dem Laserfenster verwendet werden kann, um die Bildqualität zu verbessern. Stellen Sie sicher, dass die Mitte des Laserstrahls und die Mitte des Bildgebungsbereichs zusammenfallen. Beim Scannen der UST um das Gehirn, stellen Sie sicher, dass die UST immer die Scan-Center. Bei der Durchführung des Protokolls ist eine zusätzliche Sorgfalt erforderlich: (a) Die Menge an Anästhesiecocktail sollte nach dem Gewicht des Tieres verabreicht werden; (B) die Anästhesieinjektion muss genau sein, damit die Organe ( zB Harnblase, Darm und Niere) nicht betroffen sind; (C) während der Haare clIpping, stellen Sie sicher, dass die Kopfhaut des Tieres nicht zerkratzt wird; (D) der Druck des Wassertanks auf dem Tier muss so gering wie möglich sein; Und (e) während der Positionierung des Tieres unter dem Scanner, stellen Sie sicher, dass die bildgebende Querschnittsebene des Gehirns in der Mitte des UST ist. Zukünftige Anwendungen des Systems sind die Hirntumor-Bildgebung, die Bildgebung unterschiedlicher Organe bei kleinen Tieren, die Hochgeschwindigkeits-Bildgebung in weniger als 5 s, die Untersuchung von Biomaterialien für Kontrastmittel und Therapieanwendungen. Eine Fehlersuche kann erforderlich sein, wenn die Bildqualität niedrig ist.
Lasersicherheit für Kleintier- In-vivo- Bildgebung
Die maximal zulässige Exposition (MPE) für die Haut hängt von mehreren Parametern ab, wie zB Anregungswellenlänge, Pulsbreite, Belichtungszeit, Beleuchtungsfläche usw. Die MPE-Grenzwerte für die In-vivo- Bildgebung unterliegen dem American National StandardS Institut (ANSI) 32 . Im Wellenlängenbereich von 700 bis 1.050 nm sollte die von einem einzelnen Puls gelieferte Energiedichte auf der Haut weniger als 20 x 10 2 (λ-700) / 1.000 mJ / cm 2 (λ: Anregungswellenlänge in nm) betragen. Für die 803 nm PLD-Wellenlänge beträgt die Grenze ~ 31 mJ / cm 2 . Wenn der Laser kontinuierlich über einen Zeitraum von t = 5 s verwendet wird, wird das MPE 1,1 x 10 2 (λ-700) / 1000 × t 0,25 J / cm 2 (= 2,6 J / cm 2 ). In diesem Experiment wurde die PLD bei 7000 Hz betrieben. In einer 5-s-Abtastzeit wurden insgesamt 35.000 (5 × 7.000) Impulse an die Probe abgegeben, so dass pro Puls das MPE 0,07 mJ / cm 2 betrug. In dem beschriebenen Abbildungssystem liefert die PLD Impulse mit Energie bei ~ 1,05 mJ pro Impuls und der Laserstrahl wurde über einen Bereich von 12,6 cm 2 erweitert. Daher betrug die Laserenergiedichte ~ 0,08 mJ / cm 2 auf dem Gehirnbereich. Die ANSI-Lasersicherheitsgrenze des PAT-Systems kann chAnged durch Verringerung der Laserleistung, durch Expansion des Laserstrahls oder durch Verringerung der Pulswiederholrate.
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Disclosures
Die Autoren haben keine relevanten finanziellen Interessen im Manuskript und keine anderen potenziellen Interessenkonflikte zu offenbaren.
Acknowledgments
Die Forschung wird unterstützt durch die Tier-2-Förderung durch das Ministerium für Bildung in Singapur (ARC2 / 15: M4020238) und der Singapur Ministerium für Gesundheit National Medical Research Council (NMRC / OFIRG / 0005/2016: M4062012) gefördert. Die Autoren danken Herrn Chow Wai Hoong Bobby für den Maschinenladen helfen.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Pulsed laser diode | Quantel, France | QD-Q1910-SA-TEC | It is the excitation laser source with specifications 803 nm, 1.4 mJ per pulse, 136 ns pulse, 7 kHz maximum, dimentions : 11.0 x 6.0 x 3.6 cm, weight: ~150 gm |
| Stepper motor with gearbox | LIN Engineering (Servo Dynamics) | Motor: CO-5718-01P, Gearbox: DPL64/1, I = 10 for NEMA 23; power supply PW100-48 | To move the detector holder in a circular geometry. Torque: 2.08 N-m, Rotor inertia: 2.6 kg-cm2 |
| Ultrasonic pulser/receiver | Olympus | 5072PR | To receive, filter and ampligy the PA signal from UST. Its bandwidth is 35 MHz, and gain is ±59 dB. |
| Ultrasound Transducer | Olympus | V306-SU-NK-CF1.9IN/Q4200069 | Ultrasonic sensors used for photoacoustic detection. Central freqency 2.25 MHz, 0.5 in, Cylindrical focus 1.9 inch |
| PCIe DAQ (Data acquisition) Card | GaGe | CSE4227/ A6000610/B0E00610 | 12 bit, 100 Ms/s, 2 channels, 1 Gs on board memory, PCIe x16 interface |
| Rats | In Vivos Pte Ltd, Singapore | NTac:SD, Sprague Dawley / SD | Female, weight 100 ±10g |
| Acrylic water tank | NTU workshop | Custom-made | It contains the water that acts as an acoustic coupling medium between brain and detector |
| Circular Scanner | NTU workshop | Custom-made | Scanner is made out of Alluminum |
| Anesthetic Machine | medical plus pte ltd | Non-Rebreathing Anaesthesia machine with oxygen concentrator. | Supplies oxygen and isoflurane to animal |
| Pulse Oxymeter portable | Medtronic | PM10N with veterinary sensor | Monitors the pulse oxymetry of the animal |
| Ultrasound gel | Progress/parker acquasonic gel | PA-GEL-CLEA-5000 | Clear ultrasound gel |
| Data acqusison software | National Instruments Corporation,Austin,TX,USA) | NI LabVIEW 2015 SP1 | LabVIEW based program was developed in our laboratory for controlling the stepper motor and acquring the PA singnals from the detector |
| Data processing software | Matlab (Mathworks, Natick, MA, USA) | Matlab R2012b | Matlab code for reconstruction of PA images was developed in our lab |
| Temperature controller | LaridTech, MO,USA | MTTC1410 | It will constantly control temperature of the PLD |
| 12 V power supply | Voltcraft | PPS-11810 | To supply operating voltage for PLD |
| Variable power supply | BASETech | BT-153 | To change the laser output power |
| Funtion generator | Funktionsgenerator | FG250D | To change the repetetion rate of the PLD. It will provide TTL signal to synchronize the DAQ with the laser excitation. |
| Animal distributor | In Vivos Pte Ltd, Singapore | Animal distributor that supplies small animals for research purpose. | |
| Animal holder | NTU workshop | Custom-made | Used for holding the animal on its abdomen |
| Breathing mask | NTU workshop | Custom-made | Used along with animal holder to supply anesthesia mixture to the animal |
| Pentobarbital sodium | Valabarb | Used for euthanizing the animal after the expeirment. | |
| Optical diffuser | Thorlabs | DG10-1500 | Used to to make the laser beam homogeneous |
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